Taller

En un proceso de producción de ácido láctico empleando Lactobacillus paracasei a partir de

glucosa, se obtuvieron los siguientes datos experimentales:

Tiempo (h) Biomasa (g/L) Producto (g/L) Sustrato (g/L)

0 0.0137 0.0118 14.8523
1 0.0304 0.0255 14.6980
2 0.0673 0.0545 14.2431
3 0.1477 0.1156 13.3321
4 0.3191 0.2405 11.6952
5 0.6667 0.4812 9.2528
6 1.3059 0.8963 6.4456
7 2.2943 1.4925 4.0050
8 3.4768 2.1568 2.2927
9 4.5246 2.7167 1.2286
10 5.2332 3.0878 0.6186
11 5.6294 3.2962 0.2963
12 5.8276 3.4026 0.1375
13 5.9213 3.4542 0.0627
14 5.9644 3.4787 0.0284
15 5.9839 3.4901 0.0128
16 5.9928 3.4954 0.0058
17 5.9968 3.4979 0.0026
18 5.9985 3.4990 0.0012
19 5.9993 3.4995 0.0005
20 5.9997 3.4998 0.0002
21 5.9999 3.4999 0.0001
22 5.9999 3.5000 0.0000
23 6.0000 3.5000 0.0000
24 6.0000 3.5000 0.0000

Determine la ecuación que describe la velocidad de crecimiento en la fase exponencial con sus
parámetros cinéticos y calcule los rendimientos teóricos Yxs y Yps a partir de los balances de masa
para producto y sustrato. Tenga en cuenta que el ácido láctico es un metabolito primario y no
considere una posible inhibición por producto y por sustrato.

DESARROLLO

Primero graficamos los datos experimentales para realizar un mejor análisis del proceso:
 Figura 1 Datos experimentales de la producción de ácido láctico

Biomasa
Datos Experimentales Producto
Sustrato
7 16

Concentración de Biomasa y Producto 6 14

12
5

Sustrato (g/L)
10
4
8
(g/L)

3
6
2
4
1 2

0 0
0 5 10 15 20 25
Tiempo (h)

Se observa que efectivamente la producción de ácido láctico está relacionada con el crecimiento
microbiano. El inicio de la fase estacionaria coincide con el agotamiento de la fuente de carbono. Se
observa una fase de latencia de aproximadamente 3 horas.

Procedemos a calcular la velocidad específica de crecimiento observada, a partir de su definición:

𝑑𝑥 1 𝑑𝑥
= 𝜇𝑥 𝜇=
𝑑𝑡 𝑥 𝑑𝑡
La derivada la podemos calcular por ejemplo mediante diferencias finitas:

PUNTO INICIAL
𝑑𝑥 −3𝑥𝑜 + 4𝑥1 − 𝑥2
=
𝑑𝑡 2𝛥𝑡
PUNTOS INTERMEDIOS
𝑑𝑥 𝑥𝑖+1 − 𝑥𝑖−1
=
𝑑𝑡 2𝛥𝑡
ULTIMO PUNTO
𝑑𝑥 𝑥𝑛−2 − 4𝑥𝑛−1 + 3𝑥𝑛
=
𝑑𝑡 2𝛥𝑡
Obtenemos por lo tanto:
 Tiempo (h) dx/dt (1/x)*(dx/dt)
0 0.0066 0.8900
1 0.0268 0.8806
2 0.0586 0.8716
3 0.1259 0.8524
4 0.2595 0.8132
5 0.4934 0.7401
6 0.8138 0.6232
7 1.0854 0.4731
8 1.1151 0.3207
9 0.8782 0.1941
10 0.5524 0.1056
11 0.2972 0.0528
12 0.1460 0.0250
13 0.0684 0.0115
14 0.0313 0.0053
15 0.0142 0.0024
16 0.0064 0.0011
17 0.0029 0.0005
18 0.0013 0.0002
19 0.0006 0.0001
20 0.0003 0.0000
21 0.0001 0.0000
22 0.0001 0.0000
23 0.0000 0.0000
24 0.0000 0.0000

Debemos identificar ahora la fase exponencial de crecimiento, para eso nos ayudamos de una
gráfica semilog de la biomasa vs tiempo:
 Figura 2 Gráfica semilog de la concentración de biomasa vs tiempo

Biomasa vs Tiempo
10.00
Log [Biomasa]

1.00
0 5 10 15 20 25

0.10

0.01
Tiempo (h)

Se ve el inicio de la fase estacionaria a partir de las 10 horas de fermentación. Para efectos de cálculo
tomaremos la fase exponencial de crecimiento desde la hora 0 hasta la diez. Es de destacar que
aunque en la Figura 1 se observó una fase de latencia, la Figura 2 nos muestra que durante las
primeras cuatro horas el microorganismo tuvo un crecimiento exponencial.

Graficamos ahora la velocidad específica de crecimiento vs la concentración de sustrato para

determinar la forma de la función:
Figura 3 Velocidad específica de crecimiento vs sustrato para la fase exponencial de crecimiento

μ vs S
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
μ

0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Sustrato (g/L)

En la Figura 3 se observa que a medida que aumenta la concentración de sustrato, incrementa la

velocidad de crecimiento microbiano. Este aumento es más pronunciado para bajas
concentraciones, lo cual está acorde con una velocidad de crecimiento tipo Monod.
𝜇𝑚 𝑠
𝜇=
𝑘𝑠 + 𝑠
Para calcular los parámetros podemos aplicar una linealización a la ecuación de Monod:
1 𝑘𝑠 + 𝑠 1 𝑘𝑠 1 1
= = ∗ +
𝜇 𝜇𝑚 𝑠 𝜇 𝜇𝑚 𝑠 𝜇𝑚
Si graficamos el inverso de la velocidad de crecimiento vs el inverso de la concentración de sustrato,
obtendremos una línea recta que nos permitirá estimar los parámetros.
Figura 4 Linealización de la velocidad de crecimiento en función de la concentración de sustrato

Linealización Monod en fase exponencial

10
9 y = 5.3846x + 0.7692
8 R² = 1
7
6
1/μ

5
4
Series1
3
2
Lineal (Series1)
1
0
0 1 1 2 2
1/S

Una vez calculados la pendiente y el intercepto de la recta, procedemos a calcular 𝜇𝑚 y 𝑘𝑠 .

𝜇𝑚 = 1.3 𝑘𝑠 = 7
Para calcular los rendimiento teóricos empleamos la linealización de los balances de masa de
producto y sustrato:

Para producto:
𝑑𝑃 1 𝑑𝑃
= (𝑌𝑝⁄ 𝜇 + 𝑚𝑝 ) 𝑥 = 𝑌𝑝⁄ 𝜇 + 𝑚𝑝
𝑑𝑡 𝑥 𝑥 𝑑𝑡 𝑥

Realizamos la gráfica:
 Figura 5 Linealización del balance de producto

Linealización de balance de producto

0.8
0.7 y = 0.7448x - 0.0107
0.6 R² = 0.9847

0.5
(1/x)(dP/dt)

0.4
0.3 Linealización de balance de
0.2 producto

0.1 Lineal (Linealización de

balance de producto)
0.0
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
-0.1
μ

Obtenemos directamente los valores de:

𝑌𝑝⁄ = 0.7448 𝑚𝑝 = 0.0001

𝑥

Para sustrato:

−𝑑𝑆 𝜇 1 𝑑𝑆 𝜇
=( + 𝑚𝑠 ) 𝑥 − = + 𝑚𝑠
𝑑𝑡 𝑌𝑥⁄𝑠 𝑥 𝑑𝑡 𝑌𝑥⁄𝑠

Graficamos los datos y obtenemos. Para mejorar la linealidad de la gráfica se toman los puntos de
las horas 0 hasta la 8. Esto puede ser debido a que de la hora 8 a 10 se tiene una fase de
desaceleración de crecimiento.
Figura 6 Linealización del balance de sustrato

Linealización balance de sustrato

12.0
Series1
10.0 Lineal (Series1)
y = 12.628x - 3.1478
8.0
R² = 0.7972
6.0
1/x*dS/dt

4.0

2.0

0.0
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0
-2.0

-4.0
μ
Obtenemos un 𝑚𝑠 = 0.0001 y 𝑌𝑥⁄𝑠 = 0.0792

Una vez estimados los parámetros podemos escribir el modelo cinético del proceso:

𝑑𝑥 𝑑𝑠 𝜇 𝑑𝑃
= 𝜇𝑥 = −( + 𝑚𝑠 ) ∗ 𝑥 = (𝑌𝑝⁄ 𝜇 + 𝑚𝑝 ) 𝑥
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑌𝑥⁄𝑠 𝑑𝑡 𝑥

𝜇𝑚 𝑠
𝜇=
𝑘𝑠 + 𝑠
Con los parámetros:

Parámetro Valor
𝜇𝑚 1.3
𝑘𝑠 7
𝑌𝑥⁄𝑠 0.0792
𝑚𝑠 0.0001
𝑌𝑝⁄ 0.7448
𝑥
𝑚𝑝 0.0001
Graficamos el modelo

Figura 7 Simulación del modelo con los parámetros estimados gráficamente

Debemos emplear por lo tanto, técnicas para mejorar el ajuste del modelo a los datos
experimentales. Una de ellas es la optimización de parámetros empleando el software MATLAB.
(Mostrar el código). El rápido consumo de la fuente de carbono, es señal de un rendimiento Yxs
bajo, por lo que este será el primer parámetro que se optimizará:

El nuevo valor calculado fue 𝑌𝑥⁄𝑠 = 0.1947

 Figura 8 Simulación del proceso optimizando Yxs

Se logra una mejoría al optimizar un parámetro. Ahora se dejará variar todos al mismo tiempo.

Figura 9 Simulación del proceso de producción de ácido láctico.

Los valores obtenidos para los parámetros tras la simulación, son:

Parámetro Valor Inicial Valor Final
𝜇𝑚 1.3 1.2582
𝑘𝑠 7 8.8052
𝑌𝑥⁄𝑠 0.0792 0.2557
𝑚𝑠 0.0001 0.0033
𝑌𝑝⁄ 0.7448 0.7121
𝑥
𝑚𝑝 0.0001 0.0051