Los grandes eventos moleculares de la replicación del ADN

Arthur Kornberg comparó al ADN con una cinta de grabación llena de instrucciones que puede ser
copiada una y otra vez. ¿Cómo estas células pueden hacer estas copias casi perfectas?¿este
proceso varía?

INTRO

La organización molecular de la replicación de ADN bacterial

Una típica celula bacteriana tiene cerca de 1 a 4 millones de pares de bases de ADN, comparados a
los 3 billones de pares de bases en el genoma de un ratón de casa (Mus musculus). Incluso en las
bacterias, con sus genomas pequeños, la replicación del ADN implica unas increíbles, sofisticadas y
altamente coordinadas series de eventos moleculares. Estos eventos se dividen en 4 grandes
etapas: iniciación, desenrollado, síntesis del primer o cebador, y elongación.

Iniciación y desenrollado

Durante la iniciación, las llamadas proteínas iniciadoras se unen al origen de la replicación, una
secuencias par-base de nucleótidos conocidos como oriC. Esta unión desencadena eventos que
desenrollan la doble hélice del ADN en 2 moléculas nonocatenarias de ADN. Muchos grupos de
proteínas estan implicadas en este desenrollado. Por ejemplo, las ADN helicasas son responsables
de romper los enlaces de hidrógeno que unen las bases de nucleótidos complementarias, estos
enlaces de hidrógeno son la característica esencial del modelo tridimensional de James Watson y
Francis Crick. Debido a que las recientes hebras desenredadas tienden a unirse, otro grupo de
proteínas, las SSB, mantienen estas hebras estables hasta que la elongación comience. Una tercera
familia de proteínas, las topoisomerasas, reducen algunas torsiones causadas por el desenrollo de
la doble hélice.
 Fig. 1 Durante la replicación del ADN, varias proteínas facilitan el desenrollo de la doble
hélice de ADN en 2 hebras.

Las Topoisomerasas (de rojo) reducen la presión a la torsión causada por el desenrollo de
la doble hélice; la ADN helicasa (de amarillo) rompe los enlaces de hidrógeno entre las
bases-pares complementarias; las SSB estabilizan las hebras separadas y previenen que se
vuelva a unir.

Como se mencionó antes, la ubicación en la cual las hebras de ADN comienzan a separarse es
conocida como el origen de la replicación. Tal y como se muestra en la figura 1, una vez que la
doble hélice se desenrolla, la replicación se lleva a cabo en las 2 hebras al mismo tiempo pero en
direcciones opuestas. Esto forma 2 horquillas de replicación que se mueven a lo largo del ADN.

Síntesis del primer o cebador

La síntesis del primer marca el inicio de la real síntesis de la nueva molécula de ADN. Los primer
(llamado también partidor, cebador o iniciador) son una cadena corta de nucleótidos (de 10 a 12
bases = oligonucleotido) sintetizados por una ARN polimerasa llamada primasa. Los primers son
requeridos porque la ADN polimerasa solo pueden añadir desoxiribonucleotidos en el 3er grupo
OH de una cadena existente y no pueden comenzar la síntesis en algo nuevo. Por otro lado, la
primasa si puede añadir ribonucleotidos de algo nuevo. Luego de que la elongación es completa, el
primer es movido y reemplazado con nucleótido de ADN.

Elongación

Por último, la elongación comienza luego de que el primer ha sido añadido. El crecimiento de la
nueva hebra implica la adición de nucleótidos, uno por uno, en el orden exacto especificado por la
cadena original. Recordar que una de las características claves del modelo Watson-Crick es que la
Adenina siempre se empareja con Timina y la Citosina con la Guanina. Por ejemplo, si la cadena
original es A-G-C-T, la nueva será T-C-G-A.

El ADN siempre es sintetizado en la dirección de 5’ a 3’, lo que significa que los nucleotidos son
añadidos solo al final del 3’. Como se muestra en la Figura 2, el grupo 5’-fosfato del nuevo
nucleótido se une al grupo 3’-OH del último nuecleotido de la hebra creciente. Los científicos aún
tienen que identificar una polimerasa que pueda añadir bases al final 5’ de las hebras de ADN.
 Fig. 2 – Un nuevo ADn es sintetizado a partir del desoxiribonucleotido trifosfato (dNTP)

El descubrimiento de la DNA polimerasa

Mientras estudiaba la batería E.Coli, Arthur Kornberg descubrió que las ADN polimerasas
catalizaban la síntesis de ADN. El experimento de Kornberg incluía mezclar todos los “ingredientes
básicos” necesarios para la síntesis de ADN de E.Coli en un tubo de ensayo: nucleótidos, extracto
de E.Coli y ATP, para luego purificar y probar las enzimas implicadas en el proceso. Usando este
método, Kornberg no solo descubrió las ADN polimerasas, sino que también realizó algo del
trabajo inicial demostrando como las enzimas añaden nuevos nucleótidos a las cadenas crecientes
de ADN.

Los científicos han identificado un total de 5 diferentes ADN polimerasas en la E.Coli, cada una con
un rol específico. Por ejemplo, la ADN polimerasa III hace la mayor parte del trabajo de elongacón,
añadiendo nucleótidos uno por uno al final del 3’ y la hebra en crecimiento. Otras enzimas,
incluyendo la ADN polimerasa I y la RNasa H, son responsables de quitar el AR-primer luego de que
la ADN polimerasa III ha comenzado su trabajo, reemplazándolo con nucleótidos de ADN. (Ogawa
& Okazaki, 1984). Cuando estas enzimas terminan, dejan un corte entre la sección de ADN que fue
primer y la sección elongada de ADN. Luego, otra enzima llamada ADN ligasa actúa para sellar la
unión entre los 2 nucleótidos adyacentes.

La ADN polimerasa solo se mueve en una dirección

Luego de que un primer es sintetizado en una hebra de ADN y estas se desenrollan, la síntesis y la
elongación solo pueden ocurrir en una sola dirección. Como se mencionó previamente, la ADN
polimerasa solo puede añadir al final del 3’, así que el final del 5’ del primer se mantiene
inalterado. En consecuencia, la síntesis comienza inmediatamente solo en la llamada “hebra
adelantada”. Esta replicación inmediata es conocida como “replicación continua”. La otra hebra
(en la dirección 5’ desde el primer) es llamada “hebra rezagada o retrasada” y la replicación que
parte de esta se llama “replicación discontinua”. La doble hélice debe de desenrollarse un poco
antes de la síntesis de otro primer pueda comenzar más arriba en la hebra rezagada. La síntesis
puede ocurrir desde el final de 3’ del nuevo primer. Luego, la doble hélice se desenrolla un poco
más y otro arrancón de replicación comienza. Como resultado, la replicación a lo largo de la hebra
rezagada solo puede darse en pequeños y discontinuos arrancones. (Figura 3)
 Figura 3: La replicación de la hebra adelantada de ADN es continua, mientras que la
replicación en la hebra rezagada es discontinua. Luego de que un pequeño pedazo de ADN
ha sido desenrollado, la síntesis debe proceder en la dirección de 5’ a 3’; es decir, en la
dirección opuesta al desenrollado.

Los fragmentos de reciente sintetizado ADN junto con la hebra rezagada son llamados
“fragmentos de Okazaki”.

RESUMEN

El estudio de la replicación del ADN comenzó casi tan pronto como la estructura del ADN fue
descifrada, y continua hasta estos días.

Actualmente, las etapas de iniciación, desenrollado, síntesis del primer y elongación son
entendidas como lo más básico, pero aún quedan muchas preguntas sin resolver, particularmente
cuando se refiere a la replicación del genoma eucariotico. Los científicos han dedicado décadas de
estudio a la replicación, e investigadores como Kornberg y Okazaki han hecho numerosos
descubrimientos. No obstante, queda mucho por aprender acerca de la replicación, incluyendo
como los erros en este proceso contribuyen a las enfermedades humanas.