Revista Electrónica de Biotecnología 22 (2016) 31-37

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Revista Electrónica de Biotecnología

Artículo de investigación

La biosíntesis de exopolisacáridos por levadura Candida depende de las

fuentes de carbono.
Iwona Gientka, Anna Bzducha-Wróbel, Lidia Stasiak-Różunanorteska,
Aleksandra Agnieszka Bednarska, Stanisław Błunażejak
Departamento de Biotecnología, Microbiología y Evaluación de Alimentos, Universidad de Ciencias de la Vida de Varsovia - SGGW, Polonia

información del artículo resumen

Historia del articulo: Antecedentes: los exopolisacáridos (EPS) producidos por la levadura exhiben propiedades fisicoquímicas y reológicas, que
Recibido el 12 de octubre de son útiles en la producción de alimentos y también en las industrias cosmética y farmacéutica. Se investigó el efecto de
2015 Aceptado el 11 de marzo fuentes de carbono seleccionadas en la biosíntesis de EPS por cepas de Candida famata y Candida guilliermondii
de 2016 Disponible en línea el originalmente aisladas de kefirs.
27 de mayo de 2016
Resultados: los rendimientos de biomasa dependían de la fuente de carbono (sacarosa, maltosa, lactosa, glicerol, sorbitol) y
oscilaban entre 4,13 y 7,15 g / l. El mayor rendimiento de biomasa se informó para C. guilliermondii después del cultivo en
Palabras clave:
maltosa. La especificación máximafic la productividad de EPS durante el cultivo en maltosa fue de 0.505 y 0.321 para C.
Candida
guilliermondii y C. famata, respectivamente. El mayor rendimiento de EPS se encontró para la cepa C. guilliermondii. El EPS
Biosíntesis de exopolisacáridos
producido en estas condiciones contenía 65.4% y 61.5% de carbohidratos, respectivamente. El speci fic tasa de crecimiento (μ)
EPS
-1 -1
Maltosa de C. famata en medio que contenía EPS como única fuente de carbono fue de 0.0068 h y 0.0138 h para la cepa C.
guilliermondii.

Conclusiones: La fuente de carbono más preferida en la síntesis de EPS para ambas cepas de Candida fue la maltosa, en donde
la cepa C. guilliermondii mostró el mayor rendimiento de la biosíntesis de EPS. La fuente de carbono afectó la composición
química del EPS resultante y la contribución de carbohidratos en la preparación precipitada de polímeros fue mayor durante la
suplementación de maltosa en comparación con la sacarosa. También se descubrió que el EPS puede ser una fuente de
carbono para las cepas productoras.

© 2016 Pontificia Universidad Católica de Valparaíso. Producción y hospedaje por Elsevier BV Todos los derechos
reservados.

1. Introducción revestimientos [9]. Además, los exopolisacáridos producidos por otras

Los polisacáridos extracelulares (EPS) son producidos por especies de
levadura de los géneros Candida, Cryptococcus, Lipomyces, Pichia,
Rhodotorula y Sporobolomyces. [1,2,3,4]. Algunos de estos polisacáridos
exhiben especific propiedades fisicoquímicas y reológicas, que son útiles en la
producción de alimentos y también en las industrias cosmética y farmacéutica
[5]. Los EPS que contienen más del 50% de manosa en su composición se
caracterizan por su actividad biológica, por ejemplo, mananos lineales de
Rhodotorula mucilaginosa, que exhiben actividad antitumoral en animales de
experimentación.[6]o glucomanano de Candida utilis, que posee actividad
antioxidante [4]. Los polímeros de Rhodotorula glutinis exhiben actividad
antioxidante, antiviral y antitumoral.[7] y los mananos producidos por R.
glutinis AHU 3479 han demostrado servir como antígeno inmunorreactivo en
el diagnóstico serológico de leptospirosis [8].
Hasta ahora, el único polímero fúngico extracelular producido
comercialmente es el pullulan. Se utiliza como espesante y como componente
de comestibles.
Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico: iwona_gientka@sggw.pl (I. Gientka).
Revisión por pares bajo la responsabilidad de Pontificia Universidad Católica de
Valparaíso.
levaduras podrían constituir una alternativa a los similares pero sintetizados
químicamente. Las EPS son materias primas renovables y satisfacen los
estándares de protección ambiental para classificatión como bioproductos.
Para su producción industrial, efficepas de levadura productoras de
conocimiento, conocimiento de la regulación de las vías biosintéticas,
optimización de las condiciones de cultivo y effiSe necesitan métodos
eficaces para purificar el producto.
Los productores de EPS se buscan principalmente entre microorganismos
criófilos que habitan el suelo y en ecosistemas antárticos fríos. Efficepas
cientificas de Cryptococcus, Rhodotorula [10] y Sporobolomyces [11,12] los
géneros han sido aislados. Sin embargo, se sabe poco sobre la biosíntesis de
exopolisacáridos por levadura del ambiente alimentario.
La producción de exopolisacáridos está asociada con el metabolismo
secundario de la levadura, y su estructura y sus propiedades fisicoquímicas
dependen de muchos factores. Composición del medio de cultivo, en
particular la fuente de carbono y nitrógeno, y las condiciones de cultivo, el
grado de oxigenación y la temperatura.[11,13, 14], tener el mayor impacto en
la cantidad y características de polímeros producidos durante la fermentación.
La mayoría de las cepas estudiadas hasta ahora producen EPS en medios que
contienen fuentes de carbono como pentosas, hexosas, disacáridos y triosa.
Por ejemplo, cepas de

http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbt.2016.02.008
0717-3458 / © 2016 Pontificia Universidad Católica de Valparaíso. Producción y hospedaje por Elsevier BV Todos los derechos reservados.
32 I. Gientka y col. / Revista Electrónica de Biotecnología 22 (2016) 31-37
Glicerol 55 C3H8O3 92,09 0,543 46,1: 1: 0,54
Los géneros Sporobolomyces y Cryptococcus produjeron varias cantidades de
EPS en medios minerales que contienen, entre otros, glucosa, sacarosa, xilosa,
ribosa, arabinosa, galactosa, manosa, ramnosa, raffinariz y trehalosa [2,15].

En nuestro estudio anterior, aislamos cepas de levadura Candida del ke

polacofirs [dieciséis]. La mayoría de las cepas pudieron sintetizar
polisacáridos extracelulares durante la incubación en medio mineral con
sacarosa. Las cepas de Candida famata y Candida guilliermondii fueron
seleccionadas como los mejores productores de EPS[17].

La levadura C. famata es un miembro del grupo de los llamados

"Floridalevaduras avinogénicas" que sobreproducen riboFloridaavin bajo
condiciones de limitación de hierro. Un modificepa acumulada hasta 16.4 g /
L de riboFloridaAvin en medio optimizado en un biorreactor de laboratorio
durante la fermentación de alimentación por lotes [18]. Algunas cepas de C.
famata se sobreproducenFloridadinucleótido de adenina de avin (FAD) [19].
C. famata es conocido por demostrar actividad de glucoamilasa [20]. Los
datos obtenidos indican el potencial probiótico de esta cepa.[21]. Por ejemplo,
las cepas de C. famata Y5 se han estudiado por su citotoxicidad, adhesión,
propiedades de superficie y actividad hemolítica, y su supervivencia en
entornos gástricos e intestinales simulados. La levadura C. guilliermondii FTI
20037 es conocida por su capacidad de producir xilitol a partir de xilosa.[22].

Puede utilizar y fermentar altas concentraciones de cada una de las

hexosas que se encuentran comúnmente en los hidrolizados lignocelulósicos.
El hidrolizado se convirtió en xilitol con un rendimiento de 0,48 g / g (53%
del máximo teórico)[23]. Poco se sabe sobre la biosíntesis de EPS por
levaduras del género Candida. C. utilis ATCC 42402 produce glucomanano
extracelular en una cantidad de 1,68 g / L. El EPS crudo contenía 98% de
carbohidratos que consistía en glucosa y manosa en la relación molar 5.7:
1[24].
El objetivo del estudio fue investigar elFloridaLa influencia de las fuentes
de carbono en la biosíntesis de exopolisacáridos por cepas de C. famata y C.
guilliermondii aisladas de kefirs.

2. Materiales y métodos

2.1. Condiciones de cepa y cultivo.

El material biológico consistió en dos cepas de levadura derivadas del

Museo de Culturas Puras, Departamento de Biotecnología y Microbiología de
los Alimentos WULS-SGGW: C. famata, C. guilliermondii, aislado del
polaco kefirs [dieciséis]. Las cepas se almacenaron en un refrigerador en
medio YPD (compuesto de 2% de glucosa, 2% de peptona, 1% de extracto de
levadura, pH 5.6) a una frecuencia de paso cada 3-4 semanas.

2.2. Condiciones de cultivo

Para estudiar la biosíntesis de EPS, el medio mineral (pH 5.6) estaba

compuesto por: 0.2% de (NH4 4)2ENTONCES4 4; 0.1% de KH2correos4 4;
0.05% de MgSO4 4× 7H2O 0.01% de CaCl2; 0.01% de NaCl y 0.1% de
extracto de levadura. Este medio se complementó con una fuente de carbono
apropiada a una concentración del 5% después de la esterilización. Se
utilizaron sacarosa, lactosa, maltosa, glicerol y sorbitol como fuente de
carbono. Las características de los medios respectivos se muestran entabla 1.
Todos los medios se esterilizaron en autoclave a 121 ° C durante 20 min.
Fuente de carbono

tabla 1
Características de los medios analizados según la fuente de carbono.

Fuente de
Carbón carbono Fórmula Masa molar Molar conc. C: N: P
fuente concentración de carbono de carbono de carbono
% fuente fuente g / mol fuente mol / l
C H O
Sacarosa 55 12 22 11 342,30 0,146 49,6: 1: 0,54
C H O
Lactosa 55 12 22 11 342,30 0,146 49,6: 1: 0,54
C H O
Maltosa 55 12 22 11 342,30 0,146 49,6: 1: 0,54
C H O
Sorbitol 55 66 14 66 182,17 0.274 46,6: 1: 0,54
Las soluciones se esterilizaron en autoclave a 117 ° C durante 20 min. Para
obtener el inóculo, el material biológico se transfirió de los sesgos a 100
3
cm. de medio YPD con el uso de un circuito de inoculación seguido de 48 h
de cultivo en un agitador alternativo (200 rpm) a 28 ° C. De tal cultura
3 3
preparada, 5 cm fue recolectado para inocular 100 cm de medio mineral. Los
cultivos asignados a la producción de EPS se llevaron a cabo en condiciones
aeróbicas en un agitador alternativo (200 rpm) a 28 ° C durante 96 h. Para
investigar el efecto del tiempo de incubación en la biosíntesis de EPS,
después de la selección de la fuente de carbono más preferida, el cultivo se
extendió a 120 h.

2.3. Determinación de biomasa

Para determinar el rendimiento de biomasa después de la finalización de

la incubación, post-cultivo FloridaEl fluido se transfirió a un dedal de
extracción seco y pesado y se centrifugó a 2000 × g, 20 min (Eppendorf
Centrifuge 5804R). El sobrenadante se decantó y el precipitado de biomasa se
lavó dos veces con agua destilada estéril, seguido de secado hasta peso
constante a 105 ° C (secador SML 32/250 Zelmed, Polonia). El resultado del
rendimiento de biomasa se dio en gramos de sustancia seca por litro de medio
(g / L).

2.4. Determinación de la densidad óptica.

La densidad óptica (DO) del cultivo se determinó después de una

3
centrifugación de 2 cm. de cultivo a 1610 × g, 5 min (Eppendorf mini Spin
plus). El sobrenadante se decantó y el precipitado de biomasa se suspendió en
3
2 cm. de agua destilada El valor de OD se midió espectrofotométricamente a
una longitud de onda de 600 nm contra agua destilada (UV- 1800 UV / VIS,
instrumento analítico RayLeigh).

2.5. Determinación del contenido de exopolisacárido

La cantidad de EPS se determinó de acuerdo con Pavlova [25]. Volumen

3
total de 50 cm. del medio de cultivo se transfirió a dedales de extracción de
3
masa conocida y se centrifugó a 6000 × g durante 30 min. Entonces, 15 cm
3
de sobrenadante se recogió y 30 cm de etanol (grado analítico, 96%) se
añadió. Las muestras se dejaron a 4 ° C durante 24 h para obtener precipitado
EPS. El precipitado se centrifugó durante 30 minutos a 6000 × g, se lavó con
etanol y se volvió a centrifugar en condiciones idénticas. El EPS precipitado
se secó a 80 ° C durante 2 h, y luego se pesó (RADWAG PS 750 / X,
Polonia). La cantidad bruta de EPS se dio como g / L. El valor de pH durante
el cultivo se determinó usando un medidor de pH Conbest CP50.

2.6. Determinación del contenido de azúcar en medio y en exopolisacáridos.

El contenido de maltosa en el medio, como carbohidratos reductores, se

analizó utilizando el método colorimétrico (λ = 540 nm) con ácido 3,5-
dinitrosalicílico [26]. La cantidad de azúcares totales en exopolisacáridos se
determinó después de la hidrólisis ácida (72% de H 2ENTONCES4 4) según la
metodología descrita por Bzducha-Wróbel et al. [27].

2.7. El cálculo del parámetro cinético.

Los parámetros cinéticos para rendimientos promedio de exopolisacárido

(YPD) effieficiencia de biomasa (Yx / s) y especific producción (Yp / x) se
calcularon mediante las ecuaciones:

Ypag=X ¼ PAG=X
Ypag=s ¼ PAG= ðM0-METROÞ ½Ecuación 1Y
YX=s ¼ X= ðM0-METROÞ

donde x: rendimiento de biomasa seca (g / L); P: exopolisacárido máximo

concentración (g / L); METRO0 0: concentración inicial de maltosa (g / L);
METRO:
concentración residual de maltosa (g / L).
 I. Gientka y col. / Revista Electrónica de Biotecnología 22 (2016) 31-37

2.8. Condiciones de cultivo en medio mineral con EPS crudo como fuente de signifiCantidades significativamente mayores (superiores a 2 g / L) de
carbono. polímeros se encontraron en el cultivo de C. guilliermondii. En estudios de
otros autores.[2,14,15], la sacarosa se consideró la fuente de carbono más
Después del cultivo en medio mineral con maltosa (5%), las biomasas de adecuada para la producción de EPS por productor
ambas cepas se centrifugaron estéril a 2000 × g, 20 min (centrifugadora
Eppendorf 5804R), se lavaron dos veces y se diluyeron en solución salina
5 5 3
estéril para obtener 10 células / cm aproximadamente. Las células de C.
guilliermondii se tomaron después de 72 h de cultivo, y las células de C.
famata a las 96 h, que eran adictas al contenido máximo de EPS en el medio
de cultivo. Las suspensiones celulares formaron el inóculo para el cultivo en
medio mineral que contenía EPS crudo (1%) como fuente de carbono. El EPS
bruto se precipitó del medio mineral que contenía maltosa al mismo tiempo
que las células de levadura también se precipitaron (según el método descrito
anteriormente). El crecimiento en un sustrato con un EPS adecuado se realizó
usando placas Honeycomb en Bioscreen C (Oy Growth Curves Ab. Ltd,
Helsinki, Finlandia) y unFloridapreguntar en una coctelera recíproca. Los
cultivos de control fueron cultivos en medio mineral sin una fuente de
carbono. Además, se incubó medio mineral estéril que contenía EPS como
fuente de carbono. El objetivo era investigar los cambios en la densidad del
medio durante la incubación. Placas de panal fueronfilleno con 250 μL de
medio e inoculado con 25 μL de suspensión de células de levadura. Frascos
3 3
fueronfilled con 50 cm de medio adecuado e inoculado con 5 cm de
suspensión de células de levadura. Los cultivos se cultivaron durante 96 ha 28
° C con agitación media durante la incubación en Bioscreen C y 200 rpm en
un agitador. Según las recomendaciones del productor, una banda anchafilter
(λ = 420-580 nm) se seleccionó para mediciones de OD. La DO del cultivo se
midió cada 15 min. El número de células de levadura se analizó cada 24 h
duranteFloridapreguntar cultura usando el método de la placa.

El coefficliente de specific tasa de crecimiento (μ) en el tiempo (t) se

calculó a partir de la fórmula:

μðt Þ ¼ ð lnODF - lnODyoÞ = ðt F -tyoÞ ½Ecuación 2Y

donde ODF: fiOD final en la fase de registro; sobredosisyo: OD inicial en la

fase de registro; tF:
tiempo de terminación de la fase logarítmica; y Tyo: tiempo de inicio de la
fase logarítmica.

2.9. análisis estadístico

El análisis estadístico se realizó utilizando Statistica Ver 10. El análisis

multivariado de varianza se utilizó en el análisis. Los grupos homogéneos se
determinaron utilizando la prueba de Tukey, a un significadofinivel de
cancelación de α ≤0,05. Los resultados se presentaron como promedios de
tres series experimentales independientes.

3. Resultados y discusión

3.1. EnFloridaLa influencia de las fuentes de carbono en el crecimiento y

síntesis de exopolisacáridos

La cepa de C. famata mostró crecimiento en todos los medios

experimentales, mientras que el rendimiento de biomasa y la densidad óptica
fueron independientes de la fuente de carbono (Tabla 2) El mayor
rendimiento de biomasa para la cepa C. famata (6.60 g / L) se encontró en
medio con sorbitol. En el medio con sacarosa y lactosa, la misma cepa se
caracterizó por el contenido más bajo de biomasa, que no superó los 5 g / L.
La cepa C. guilliermondii no mostró crecimiento en el medio con lactosa
como la única fuente de carbono, lo que confiresolvió la incapacidad de
asimilar azúcar [28,29]. El mayor rendimiento de biomasa (7,15 g / L) para la
cepa C. guilliermondii se informó después de 96 h de cultivo en medio que
contiene maltosa.

En el medio con sacarosa, las cepas de C. famata y C. guilliermondii

produjeron cantidades similares de EPS hasta 72 h, es decir, 1.65 g / L y 1.72
g / L, respectivamente. Durante las siguientes 24 h de cultivo,
Tabla 2 2) En presencia de sorbitol, las levaduras produjeron no más de 0,99 g de EPS
El efecto de la fuente de carbono y el tiempo de cultivo sobre la densidad óptica, los cambios de / L, y aproximadamente 1,31 g de EPS / L en presencia de glicerol (Figura 1)
pH, el rendimiento de biomasa y la producción de exopolisacáridos por las cepas de Candida en La cantidad de exopolisacáridos fue significativafiligeramente inferior que en
medio mineral.
medio
sobredo
Fuente de carbono / sis pH Biomasa g / L EPSg / L
tiempo de incubación

C. famata
a, b ab re
Sacarosa 72 h 2,77 2,59 4.73 ± 0,40 1,65 ± 0,11
a, b una re
96 h 2,92 2,44 4.13 ± 0,11 1,75 ± 0,12
a, b a, b a, b
Lactosa 72 h 2,85 2,35 4.20 ± 0.21 0,72 ± 0,11
a, b a, b si
96 h 2,85 2,23 4.61 ± 0.21 1.04 ± 0.09
± 0,12
a, b a, b Delaware
Maltosa 72 h 3.00 2,54 6.37 ± 0,51 1,89
±
a, b a, b Delaware
96 h 3.12 2,33 6.54 ± 0,19 2.10 0.23
a, b a, b una
Sorbitol 72 h 2,76 2,18 6.05 ± 0.25 0,42 ± 0.08
a, b a, b si
96 h 2,95 2,08 6.60 ± 0.05 0,99 ± 0.06
a, b a, b una
Glicerol 72 h 2,76 2,29 4.69 ± 0.25 0,56 ± 0.07
a, b a, b C
96 h 3,05 2.11 5,43 ± 0.24 1.20 ± 0.02
C. guilliermondii
a, b a, b re
Sacarosa 72 h 2,86 2,35 5.82 ± 0,11 1,72 ± 0.07
a, b si mi
96 h 2,94 2,32 7.00 ± 0.23 2.10 ± 0.02
N/ N/
Lactosa 72 h N/A N/A A A
N/ N/
96 h N/A N/A A A
a, b a, b F
Maltosa 72 h 2,99 2,28 5.90 ± 0.21 2,98 ± 0,39
una si re
96 h 2,98 1,92 7.15 ± 0,19 1,74 ± 0.27
si a, b a, b
Sorbitol 72 h 2,64 2,78 4.67 ± 0,18 0,81 ± 0.02
a, b a, b una
96 h 2,81 2,22 5.29 ± 0,18 0,44 ± 0.08
a, b si C
Glicerol 72 h 2,85 2,26 6,94 ± 0,15 1,31 ± 0.02
a, b a, b a, b
96 h 2,94 2,18 6.27 ± 0.22 0,76 ± 0,11
Los valores representan la media ± DE de los ensayos de tres muestras. Los mismos índices de
letras indican una falta de signifiNo puede haber diferencia entre los resultados de ambas cepas,
presentados en columnas.

cepas de levadura En medio que contiene 4% de sacarosa, Cryptococcus

laurentii AL62Sporobolomyces salmonicolor AL1y Sporobolomyces
salmicolor AL36 Las cepas produjeron más de 5 g de EPS / L [2,10]. A
diferencia de la sacarosa, C. utilis ATCC 42402 produjo glucomananos
extracelulares en medios que contienen glucosa al 5%[24]. Debe enfatizarse
que hasta el momento no se han publicado otras publicaciones que evalúen el
impacto de diferentes fuentes de carbono en la síntesis de EPS por cepas no
patógenas del género Candida.

La maltosa parecía ser la fuente de carbono preferida para la síntesis de

EPS por las cepas de Candida probadas en el medio mineral (tabla 1) Después
de 96 h de cultivo de C. famata en medio que contiene este azúcar, se informó
la cantidad máxima de EPS (2,10 g / L). De manera similar, la levadura C.
guilliermondii produjo la mayor cantidad de exopolisacáridos durante la
utilización de maltosa como fuente de carbono. El contenido de EPS alcanzó
casi 3 g / L, lo que representó aproximadamente un 73% más que la cantidad
de EPS producida durante el mismo período de tiempo en medio con
sacarosa. Cuando se utilizó maltosa como la única fuente de carbono, el
tiempo de cultivo signifipuede afectar significativamente la cantidad de
exopolisacáridos dependiendo de la cepa. Para la cepa C. guilliermondii, la
cantidad de EPS determinada disminuyó casi a la mitad al cuarto día de
cultivo en relación con la tercera, mientras que el contenido de
exopolisacáridos producidos por C. famata aumentó.

No se encontró que la lactosa fuera la fuente de carbono preferida para la

síntesis de EPS por C. famata. La cantidad máxima de polisacáridos
extracelulares fue ligeramente superior a 1 g / L, y esto fue inferior a la
cantidad de EPS en medio con sacarosa. La cepa C. guilliermondii no asimiló
la lactosa; por lo tanto, no se determinó el contenido de exopolisacárido en
medio con este azúcar.
La capacidad de las cepas de Candida para producir EPS a partir de
fuentes de carbono distintas de los no carbohidratos no se ha estudiado hasta
ahora. En el presente estudio, se utilizaron sorbitol y glicerol. EffiSe observó
crecimiento de levadura en medios suplementados con estos alcoholes, ya que
los rendimientos de biomasa de ambas cepas no diferían
significativamente.fiCantly de los obtenidos en medios con disacáridos (Tabla
34 I. Gientka y col. / Revista Electrónica de Biotecnología 22 (2016) 31-37
con sacarosa; por lo tanto, el sorbitol y el glicerol deben considerarse fuentes
de carbono desfavorables en la síntesis de EPS.
3.2. EnFloridaLa influencia de la relación C: N en la síntesis de EPS
Aparte de enFloridaDebido a la fuente de carbono, la fuente y la
concentración de nitrógeno juegan un papel importante en la biosíntesis de
EPS. El sulfato de amonio se considera una fuente preferida de N, y una
concentración óptima del 0,2% en el medio es su dosis óptima.[13,14].
Algunos datos de la literatura indican[13] que las levaduras del género
Rhodotorula pueden producir la mayoría de los exopolisacáridos cuando la
relación C: N en el medio es 15: 1. Estos autores sugirieron que una relación
C: N más alta provoca la activación del mecanismo de acumulación de otras
sustancias de almacenamiento celular, incluidas las grasas.[30]. Cabe señalar
que las relaciones C: N en medios minerales con sacarosa, maltosa o lactosa
fueron idénticas (C: N 49,6: 1) en términos de la composición elemental de
estos sacáridos (tabla 1) Sin embargo, la cantidad de EPS producida varía
significativamentefiCantly dependiendo de la fuente de carbono. Por lo tanto,
la relación C: N no podría tener un efecto directo sobre la biosíntesis de EPS.
Las levaduras del género Candida producen enzimas hidrolíticas, maltasa y
sacarasa.[31]. La falta de cualquier signifiNo hay diferencias en el
rendimiento de biomasa y la densidad óptica de las cepas analizadas (Tabla 2)
puede evidenciar que la tasa de asimilación de azúcar (determinada por la
actividad de las enzimas hidrolíticas) no afecta la síntesis de EPS.
La biosíntesis de EPS dependía de la cepa, la fuente de carbono y también
del tiempo de cultivo. Las células de C. famata produjeron signifimucho más
EPS después de 96 h que después de 72 h, independientemente de la fuente de
carbono analizada. Sin embargo, durante el cultivo de C. guilliermondii, en
medios que contienen maltosa, glicerol y sorbitol, la cantidad de
exopolímeros determinada al cuarto día en relación con 72 h disminuyó. Sin
embargo, se encontraron más EPS en el cuarto día, en el caso del uso de
sacarosa como fuente de carbono.
3.3. Fenómeno de acidificatión durante la biosíntesis de EPS
En cada medio de poscultivo, un significadofiNo se informó aumento de
la acidez activa del ambiente de cultivo. Después de 3 días, el pH de los
medios varió entre 2,18 y 2,78, dependiendo de la cepa y la fuente de
carbono, pero al cuarto día la variación no fue significativa.fihipocresía. El pH
más bajo para un medio se determinó en medio con maltosa en la que se
incubaron células C. guilliermondii (pH 1,92). Es de destacar que al mismo
tiempo se observó un aumento adicional en la densidad óptica (Tabla 2) Esto
demuestra la capacidad de desarrollar células a pesar de un pH tan bajo.
Figura 1. Curso de tiempo de síntesis de EPS, pH, crecimiento celular y consumo de maltosa
durante Cultivo de Candida famata. Los valores representan la media ± DE de los ensayos de
tres muestras.
Acidos fuertesfiEl catión de medio durante la síntesis de exopolisacáridos
por otros géneros de levadura se ha observado en varios estudios. [2,11], en
donde el grado de acidifiEl catión dependía de la fuente de nitrógeno, y esto
aumentaba cuando se usaban sales inorgánicas. Cho y col.[13] sugirió que la
rápida utilización de iones de amonio, que resulta en la expulsión de protones
de las células de levadura, puede ser una explicación para el ácidoficatión del
ambiente cultural. Debe enfatizarse que el pH bajo es una condición necesaria
para la biosíntesis de EPS. Durante el cultivo de Rh. glutinis KCTC 7989, se
aplicó neutralización continua a pH 4.0. Bajo tales condiciones, se logró un
alto rendimiento de biomasa (49% más que en condiciones de cultivo sin
ningún control de pH), mientras que el rendimiento de la síntesis de EPS fue
muy bajo[13].
En presencia de sacarosa y fuentes de nitrógeno orgánico (extracto de
levadura de peptona) en el medio de cultivo, las cepas probadas de Candida
famata y C. guilliermondii no redujeron el signo de acidez.ficantly (pH
mínimo 5.4), y simultáneamente produjo varias veces menos EPS que en el
medio mineral [dieciséis]. También se ha observado un efecto desfavorable de
las fuentes de nitrógeno orgánico en la síntesis de exopolímeros durante el
cultivo de otras levaduras, entre otras, del género Rhodotorula.[13].
3.4. El curso de la biosíntesis de EPS en medio con maltosa como la única
fuente de carbono
Según los resultados obtenidos de este estudio, la maltosa se consideró la
fuente de carbono más preferible para la producción de EPS por las cepas de
C. guilliermondii y C. famata. Las características de los cambios en la
cantidad de EPS dependiendo de la duración del cultivo en medios con
maltosa con el objetivo de optimizar el tiempo de cultivo. En esta etapa del
estudio, el tiempo de incubación para ambas cepas se extendió a 120 h.
Durante el cultivo de C. famata en medio con maltosa, la cantidad de
exopolímeros aumentó hasta las 96 h de incubación (Figura 1) La
concentración más alta de polisacáridos extracelulares (por encima de 2,10 g /
L) se obtuvo en el cuarto día de incubación. En días posteriores, la
concentración de EPS disminuyó a 1.00 g / L. El rendimiento de biomasa
alcanzó un valor máximo en las 96 h de cultivo (6.54 g / L). Posteriormente,
se observó una ligera disminución en el rendimiento de biomasa. Los
resultados de la determinación del rendimiento de biomasa se correlacionaron
con el número de células determinado por el método de la placa y por la
densidad óptica (datos no mostrados). Durante el cultivo, acidi rápidoficatión
del medio ambiente se observó durante el filas primeras 24 h. Esto se
evidenció por la reducción del pH del valor inicial de 5.6 a 2.86.
Durante el cultivo, las células de C. famata no asimilaron la maltosa total
disponible. Después de 120 h de cultivo, elfiLa concentración final de
azúcares todavía estaba por encima del 1%. Pavlova y col.[2] observó el
fenómeno de la falta de uso del conjunto general de azúcares disponibles por
S. salmonicolor AL1 cepa durante la biosíntesis de EPS en medio mineral.
El mayor aumento en la biomasa de levadura C. guilliermondii en medio
con maltosa se observó durante el fiprimeras 24 h de cultivo (Figura 2), y esto
se correlacionó con OD y el número de células (ufc / ml) (resultados no
mostrados). Durante los días siguientes, el rendimiento de biomasa aumentó y
en las 120 h de cultivo alcanzó 7,43 g / L. Se observó una disminución del pH
en elfiprimero d del valor inicial de 5.60 a 2.86. El contenido máximo de EPS
(2.98 g / L) se informó en las 72 h de cultivo. Posteriormente, la cantidad de
polisacáridos redujo el significadoficantly, de modo que en el fiel quinto día se
estimó en solo 1.0 g / L. Rusinova-Videva et al.[15] observó un fenómeno
similar de reducción de la cantidad de EPS durante el cultivo de C. laurentii.
Es probable que la reducción en la concentración del producto de biosíntesis
pueda ser el resultado de la despolimerización de las moléculas de EPS y la
inclusión de productos en el metabolismo celular. Posible estafafiLa
explicación de esta hipótesis puede explicarse aumentando el rendimiento de
biomasa después de 3 días de cultivo, en el que se encontró la cantidad
máxima de EPS.
 I. Gientka y col. / Revista Electrónica de Biotecnología 22 (2016) 31-37

120 h 0.145 29,30 0,037 0.253

Figura 2. Curso de tiempo de síntesis de EPS, pH, crecimiento celular y consumo de maltosa
durante Cultivo de Candida guilliermondii. Los valores representan la media ± DE de los
ensayos de tres muestras.

Se descubrió que la cepa C. guilliermondii produjo más EPS en un tiempo

más corto que en el caso de la cepa C. famata. Especificaciones máximasfic
productividad Yp / x de C. guilliermondii biomasa fue 0.505 después
72 h, y fue solo 0.321 para C. famata (Tabla 3) Del mismo modo, el mayor
rendimiento de EPS YPDSe encontró 1 g de maltosa para la cepa C.
guilliermondii. Cabe señalar que el rendimiento de EPS fue inversamente
proporcional al effieficiencia del rendimiento de biomasa Y x / s. El valor
máximo de rendimiento de EPS (YPD) se calculó para el mismo período de
cultivo, en el que el rendimiento de biomasa más bajo (Yx / s) fue observado.

Por lo tanto, se puede concluir que, en ese momento particular, el

metabolismo de la levadura estaba claramente dirigido hacia la producción
extracelular de polisacáridos, y no hacia la síntesis de componentes
intracelulares y la producción de biomasa.
La productividad de la cepa C. guilliermondii fue de 0.041 g / L / h. Este
valor es comparable a la productividad de la cepa de S. salmonicolor obtenida
en condiciones optimizadas en medio con sacarosa, es decir, 0,049 g de EPS
L / h, estimado a partir de los datos publicados por Pavlova et al.[2].

3.5. Contenido de carbohidratos en el EPS crudo

Para el análisis de azúcares totales en EPS, se seleccionaron los que se

precipitaron después del cultivo de ambas cepas en medio con maltosa y
sacarosa. Los exopolisacáridos crudos son polvos blancos solubles en agua.
Exopolisacáridos de ambas cepas obtenidas en medio con

Tabla 3
El efecto del tiempo de cultivo en las especificaciones EPSfic producción, rendimiento de EPS y
rendimiento de biomasa por cepas de Candida en medio mineral que contiene maltosa.

Rendimient Efficompetencia
Tensión / tiempo SpecifiC Consumado o EPS de
rendimiento de
de cultivo producción maltosa g / L (YPD) biomasa
(Yp / x) (Yx / s)
C. famata 24 h 0.259 15.00 0,064 0.246
48 h 0,301 22,10 0,063 0,208
72 h 0.296 34,00 0,056 0,187
96 h 0.321 36,10 0,058 0,181
120 h 0,154 37,00 0,027 0,176
C. guilliermondii 24 h 0.148 13,80 0,040 0.269
48 h 0,235 25,50 0,045 0,191
72 h 0,505 36,00 0,083 0,164
96 h 0.243 30,20 0,058 0,237
la sacarosa se caracterizó por un contenido similar de carbohidratos: 49.7 ±
5.9 g en 100 g de EPS de C. famata y 49.3 ± 2.2 g en 100 g de EPS de C.
guilliermondii. Un benefiSe observó un efecto especial de maltosa sobre el
contenido de azúcar en el EPS. El EPS producido por C. famata contenía 61.5
± 4.3% de carbohidratos. La mayoría de los azúcares, por encima de 65.4 ±
4.3%, se encontraron en EPS producidos por C. guilliermondii. Se había
mostrado previamente[2,15] que las proteínas y minerales constituyen los
componentes restantes de las preparaciones. Más del 12% de las proteínas y
aproximadamente el 4% de las sales minerales están contenidas en EPS
producido por C. laurentii AL62, y la preparación obtenida después de S.
salmonicolor Al1 el cultivo contiene 5.3% de proteínas y 4.54% de sales
minerales [2].

La fuente de carbono signifiAfectó significativamente el contenido de

carbohidratos en los polisacáridos extracelulares derivados de las cepas
analizadas. Sin embargo, el contenido de azúcares fue menor que su contenido
celular en los polímeros extracelulares obtenidos después del cultivo de otras
cepas. Más del 83% y 85% de los azúcares estaban contenidos en EPS
derivados de Cr. laurentii AL1 [15] y cultivo de Rhodotorula acheniorum [14],
respectivamente. El mayor contenido de sacáridos, superior al 90%, se
determinó en la preparación bruta de EPS producida por S. salmonicolor AL 1
(por encima del 90%) [2].

3.6. EPS crudo como fuente de carbono para la cepa del productor

Durante las últimas horas de incubación se observó una reducción de las

cantidades brutas de EPS para ambas cepas. Al mismo tiempo, se redujo el
contenido de azúcares reductores, lo que es una prueba indirecta de la
aparición de la despolimerización de EPS. Esto puede deberse a la actividad
de las enzimas liberadas en el medio de cultivo. Durante la fase estacionaria,
las células sufren lisis y se produce una fuga del citoplasma. Puede incluir
enzimas de corte EPS. Sin embargo, la autólisis de las células puede no
explicar el fenómeno de una disminución en el contenido de EPS, ya que los
siguientes días de incubación mostraron un aumento en la biomasa. Sin
embargo, la asimilación de exopolímeros como fuente de carbono por la
levadura debe ir precedida de la actividad de enzimas que degradan el EPS
crudo a azúcares. Esto debería constituir evidencia indirecta de la presencia de
la actividad enzimática correspondiente. Por lo tanto, Se intentó comprobar la
posibilidad del uso de exopolisacáridos crudos como fuentes de carbono por
las células C. famata y C. guilliermondii. Las condiciones de este experimento
se presentan en elmateriales y métodos sección.

Durante Bioscreen C y FloridaPregunte a los cultivos, se observó un

aumento en las células de la cepa de Candida. Los cultivos se distinguieron
por la larga duración de la fase de retraso. En promedio, se observó el inicio
de la fase logarítmica en 42 h de incubación para la cepa C. famata y cuatro
horas después para la cepa C. guilliermondii (Tabla 4) El specific tasa de
crecimiento (μ) de C. famata en medio que contenía EPS crudo como única
-1
fuente de carbono fue 0.0068 h . Para la última cepa, el valor de este
-1
parámetro promedió 0.0138 h .

El número de células viables de C. guilliermondii (determinado por

métodos de placa) durante 96 h de incubación aumentó desde un valor inicial
3 7 7
de 1.7 × 10 ufc / ml a 3.85 × 10 ufc / ml. El aumento en el número de
células de C. famata durante el período de cultivo también fue
significativofihipocresía. Las células de C. famata también pueden utilizar
EPS de producción propia.

Tabla 4
El impacto del EPS como fuente de carbono en medio mineral para el curso del cultivo de cepas
de C. famata y C. guilliermondii.

Tipo de cultura Parámetros de crecimiento C. guilliermondii C. famata

Cultura Bioscreen C Duración de la fase de retraso h 46 ± 1 42 ± 0.5
Duración de la fase logarítmica h 24 ± 1 28,5 ± 1
sobredosisyo en fase de registro 0.810 ± 0.056 0.918 ± 0.044
sobredosisF en fase de registro 1.129 ± 0.048 1.117 ± 0.038
-1
Cultura del matraz μ(t) h 0,0138 ± 0,0007 0.0068 ± 0,0005
log CFUyo/ mL 3.23 ± 0,11 3.10 ± 0.09
log CFUF/ mL 7.58 ± 0.09 7.59 ± 0,10
fi log UFC / mL 4.35 ± 0,10 4.49 ± 0.09
36 I. Gientka y col. / Revista Electrónica de Biotecnología 22 (2016) 31-37
El experimento mostró que el EPS crudo (derivado del medio mineral con
maltosa) puede ser una fuente de carbono para las cepas que lo producen. Se
puede concluir que las cepas de C. famata y C. guilliermondii pueden
sintetizar enzimas apropiadas que degradan el EPS en monosacáridos
asimilados. Los exopolisacáridos crudos examinados son un depósito de
alimento para las células de levadura.
De los datos de la literatura existe una actividad conocida de glucoamilasa
para C. famata [20]. La glucoamilasa (EC 3.2.1.3) se hidroliza
consecutivamenteα-1,4 enlaces glucosídicos de los extremos no reductores
del almidón, lo que resulta en la producción de glucosa. Esto puede sugerir la
presencia deα-1,4 enlaces glucosídicos en EPS producidos por C. famata.
Estudios futuros debe involucrar el análisis de la composición o estructura de
los exopolisacáridos.
4. Conclusión
Cepas de C. famata y C. guilliermondii aisladas de kefiLos rs exhibieron
la capacidad de biosintetizar polímeros extracelulares.
La cantidad de exopolisacáridos crudos varía significativamentefiCantly
dependiendo de la fuente de carbono. La maltosa fue la fuente de carbono
preferida para la síntesis de EPS por ambas cepas de Candida, en contraste
con la sacarosa, que fue considerada por otros autores como la fuente de
carbono más adecuada para la producción de EPS por las cepas Rhodotorula y
Cryptococcus. En un medio mineral que contiene varios carbohidratos, pero
las mismas proporciones de carbono a nitrógeno,
biosíntesis de polímeros variados; por lo tanto, C: N no tuvo un efecto directo
sobre la biosíntesis de EPS. El mayor rendimiento de EPS, Y PD(0.083), de 1 g
de maltosa se encontró para la cepa C. guilliermondii. El sorbitol y el glicerol
se consideraron fuentes de carbono desfavorables en la síntesis de EPS.
Los exopolisacáridos crudos de ambas cepas obtenidos en medio con
sacarosa se caracterizaron por un contenido similar (superior al 49%) de
carbohidratos. La contribución de los carbohidratos en la preparación
precipitada de EPS fue mayor durante la suplementación de maltosa en
comparación con la sacarosa. El contenido de azúcar en EPS de C. famata
aumentó en un 24% y de la cepa de C. guilliermondii en un 33%.
El fenómeno de los ácidos fuertes.ficatión de medio mineral durante la
síntesis de EPS fue confirmed para ambas cepas. En cada medio de
poscultivo, un significadofiNo se informó un aumento en la acidez activa del
ambiente de cultivo y se determinó el pH más bajo del medio (pH 1.92) en
medio C. guilliermondii con maltosa. Se observó un aumento adicional en la
densidad óptica, lo que demuestra la capacidad de las células desarrolladas a
pesar de un pH tan bajo.
Los contenidos máximos de EPS se informaron en el tercer día de cultivo
de C. guilliermondii y en el cuarto día de cultivo de C. famata en medio
mineral con maltosa. Posteriormente, la cantidad de polisacáridos redujo el
significadofiCantly. Al mismo tiempo, se aumentó el contenido de azúcares
reductores, lo que es una prueba indirecta de la aparición de la
despolimerización de EPS. Por lo tanto, se intentó comprobar la posibilidad
del uso de exopolisacáridos crudos como fuentes de carbono por las células C.
famata y C. guilliermondii. En el experimento separado mostramos que el
EPS crudo puede ser solo una fuente de carbono para las cepas que lo
producen. Los exopolisacáridos crudos examinados son un depósito de
alimento para las células de levadura. La duración del cultivo en medio
mineral es un
signifino puede factorizar la biosíntesis de exopolisacáridos por cepas de C.
guilliermondii y C. famata aisladas de kefirs.
Conflicto de intereses
No conFloridaITS de interés entre los investigadores en este tema de
investigación.
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