MEDIO CULTIVO UTILIDAD
1.-Agar EMB Aislamiento selectivo de bacilos
gramnegativos de rápido desarrollo y
escasa exigencia nutricional.
2.-Caldo Triptófano Empleado para la diferenciación de
enterobacterias, en base a la
fermentación de los hidratos de
carbono, glucosa, lactosa y sacarosa y a
la producción de ácido sulfhídrico.
3.-Agar Mac Conkey Es un medio de diferenciación selectivo
para el aislamiento y la diferenciación
de enterobacteriaceae y diversos otros
bacilos gram negativos a partir de
muestras clínicas.
COMPOSICION FUNDAMENTO
Peptona Las peptonas aportan los nutrientes
para el desarrollo bacteriano, la
Lactosa diferenciación entre organismos
capaces de utilizar lactosa y/o sacarosa,
Sacarosa y aquellos incapaces de hacerlo está
dada por los indicadores eosina y azul
Eosina de metileno; estos ejercen un efecto
inhibitorio sobre una amplia variedad
Azul de metileno
de bacterias grampositivas
Fosfato dipotásico
Extracto de carne El extracto de carne y la pluripeptona,
aportan los nutrientes adecuados para
Pluripeptona el desarrollo bacteriano. La lactosa,
sacarosa y glucosa son los hidratos de
Cloruro de sodio carbono fermentables. El tiosulfato de
sodio es el sustrato necesario para la
Lactosa producción de ácido sulfhídrico, el
sulfato de hierro y amonio, es la fuente
Sacarosa
de iones Fe3+. El rojo de fenol es el
indicador de pH y cloruro de sodio
Glucosa
mantiene el balance osmótico.
Sulfato de hierro
Tiosulfato de sodio
Rojo de fenol
Digerido pancreático de gelatina Las peptonas proporcionan los
nutrientes. Cristal violeta inhibe las
Digerido pancreático de caseína bacterias gram positivas, en especial los
enterococos y estafilococos. La
Digerido péptico de tejido animal diferenciación de los microorganismos
entéricos se logra mediante la
Lactosa combinación de lactosa y el indicador
de pH rojo neutro. Se producen
Sales biliares
colonias incoloras o de color de rosa a
rojo según la capacidad del aislado para
Cloruro sódico
fermentar carbohidratos.
Rojo neutro
PROCEDIMIENTO
Inocular en la superficie por estría o en
profundidad para favorecer el
desarrollo de clamidosporas. Incubar a
35-37°C por 18-24 horas. Aerobiosis.
Con aguja de inoculación inocular el
medio de cultivo, picando el fondo y
extendiendo sobre la superficie del
mismo. En aerobiosis a 35-37°C
durante 18 a 24 horas.
En superficie, inocular directamente la
muestra por estría. En aerobiosis, a 35-
37°C durante 18-48 horas.
EVALUACION
Microorganismos fermentadores de
lactosa/sacarosa. Color de las colonias
negro-azulado o amarronado. Pueden
tener centro oscuro y brillo metálico.
Microorganismos no fermentadores
de lactosa/sacarosa. Colonias del color
del medio, incoloras.
Microorganismo solamente fermenta
la glucosa. Pico rojo y fondo amarillo.
Microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y sacarosa. Pico amarillo y
fondo amarillo.
Microorganismo es no fermentador de
azúcares. Pico rojo y fondo rojo.
Microorganismos fermentadores de
lactosa. Colonias rosadas rojizas.
Microorganismos no fermentadores
de lactosa. Colonias del color del
medio, incoloras.
MICROORGANISMOS
E. coli y citrobacter. característico brillo
metálico.
Candida. Colonias rosadas-puntiformes
Enterococos. Transparentes-
puntiformes.
Acinetobacter y bacterias oxidativas.
Colonias azul-lavanda.
Proteus, Salmonella. Colonias
incoloras.
Proteus mirailis
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Salmonella tyhimurim
Shigella flexneri
Pseudomonas aeruginosa
Escherichia coli. Rosado-rojizo.
Klebsiella pneumoniae. Rosado-rojizo.
Salmonella typhimurium. Incoloro.
Shigella flexneri. Incoloro.
Proteus mirabilis. Incoloro.
 Cristal violeta

Agar

4.-Agar TSI Medio universalmente empleado para
la diferenciación de enterobacterias, en
base a la fermentación de los hidratos
de carbono glucosa, lactosa y sacarosa
y a la producción de ácido sulfhídrico.
Extracto de carne En el medio de cultivo, el extracto de
carne y la pluripeptona, aportan los
Pluripeptona nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La lactosa, sacarosa y
Cloruro de sodio glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. El tiosulfato de sodio es
Lactosa el sustrato necesario para la
producción de ácido sulfhídrico, el
Sacarosa
sulfato de hierro y amonio, es la fuente
de iones Fe3+, los cuales se combinan
Sulfato de hierro y amonio
con el ácido sulfhídrico y producen
sulfuro de hierro, de color negro. El
Tiosulfato de sodio
rojo de fenol es el indicador de pH, y el
Rojo de fenol cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico. El agar es el agente
solidificante.
con aguja de inoculación inocular el
medio de cultivo, picando el fondo y
extendiendo sobre la superficie del
mismo. En aerobiosis, a 35-37°C
durante 18 a 24 horas.
El microorganismo solamente Escherichia coli
fermenta la glucosa. Pico rojo y fondo
Klebsiella pneumoniae
amarillo.
Proteus mirabilis
El microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y sacarosa. Pico amarillo y Salmonella typhimurium
fondo amarillo.
Shigella flexneri
El microorganismo es no fermentador
de azúcares. Pico rojo y fondo Pseudomonas aeruginosa
Rojo.
La presencia de burbujas o la ruptura
del medio de cultivo indican que el
microorganismo produce gas.

El ennegrecimiento del medio indica

que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.

5.-Agar citrato

6.-Agar LISINA-HIERRO (LIA)

7.-Agar Urea Diferenciación de bacterias por medio
de la utilización de la urea como única
fuente carbono.
Tripteína La tripteína y la glucosa aportan
nutrientes para el desarrollo de
Glucosa microorganismos. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico, y el rojo
Cloruro de sodio de fenol es el indicador de pH. Algunas
bacterias hidrolizan la urea por medio
Fosfato de mono potásico de la enzima ureasa liberando
amoníaco y dióxido de carbono.
Rojo de fenol
La siembra se realiza con asa de punta
tanto en profundidad como en la
superficie. Incubar 24 horas a 35°C.
Microorganismos que hidrolizan la
urea. Color rosado-rojizo.
Microorganismo que no hidrolizan la
urea. Permanece de color amarillo.
Proteus mirabilis. Rojo rosado.
Klebsiella pneumoniae. Rojo rosado.
Escherichia coli. Amarillo.
Salmonella typhimurium. Amarillo.

Agar

8.-Caldo Nitrato
El uso que se le dá al caldo nitrato es
para determinar la capacidad de un
microorganismo para reducir los
nitratos a nitritos o gas nitrógeno libre
por bacilos gran positivos de fácil
desarrollo.
Peptona de carne La peptona y el extracto de carne
aportan nutrientes para el desarrollo
Cloruro de sodio bacteriano. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico, la
Extracto de carne glucosa es la fuente de energía y el azul
de bromotimol es el indicador de pH. El
Glucosa nitrato de potasio es el sustrato de la
enzima nitrato reductasa. El bajo
La siembra se realiza por punción en
profundidad con asa recta. Incubar a 35
a 37°C durante 48 horas. Algunos
microorganismos requieren hasta 4
días y otros hasta 14 días de
incubación.
Microorganismos oxidativos. Color
amarillo en la parte superficie del
medio de cultivo.
Microorganismo fermentadores. Color
amarillo en todo el medio del cultivo.
Escherichia coli. Amarillo.
Enterobacter cloacae. Amarillo.
Klebsiella pneumoniae. Amarillo.
Pseudomonas aeruginosa. Amarillo en

9.-Caldo RMVP
El MR-VP es un medio diferencial
para Enterobacterias, basado en la
reacción del Rojo Metilo (MR) y del
Acetilmetilcarbinol ( VP, Voges-
Proskauer)
10.-MEDIO DE S medio SIM es un agar semisólido y
diferencial, especialmente diseñado
para ayudar a la identificación de al
Azul de bromotimol contenido de agar otorga la propiedad
de ser un medio semisólido que
Nitrato de potasio permite determinar la movilidad
bacteriana y también la distribución de
Agar los productos ácidos en la superficie,
profundidad o en todo el medio de
cultivo.
Mezclas de peptonas En el medio de cultivo, la
pluripeptona aporta los nutrientes
Fosfato dipotásico necesarios para el desarrollo
bacteriano y la glucosa es el hidrato
Dextrosa de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada
por los microorganismos, a través
Medio de cultivo preparado: color de distintas vías metabólicas.
ámbar claro, transparente sin
precipitado.
El color del medio es beige claro.
Tripteína. la tripteína y la peptona aportan
nutrien-
Peptona............................................
........... tes para el desarrollo microbiano. El
triptófano es un aminoácido
Sulfato de hierro y
amonio............................................. constituyente de muchas peptonas y
............................0.2. particularmente de la tripteína
Inocula el caldo RMVP con un
cultivo puro de no más de 24horas
del microorganismo en estudio.
Incubar a 35°C durante 24 horas.
Luego de finalizado el tiempo de
incubación transferir 1ml del caldo
RM/VP a un tubo limpio y agregar
0,6ml de alfa-naftol al 5% y 0,2ml de
KOH al 40%
Medir 100ml de agua destilada en
un matraz Erlenmeyer y agregar 3g
del medio. Tapar el matraz con
algodón envuelto en gasa y dejar
reposar de 10 a 15m.
Microorganismos que no fermentan y
no oxidan la glucosa. El medio
permanece verde o adquiere un color
azulado.
Prueba del rojo de metilo:
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo:color amarillo.
Prueba de Voges proskauer:
Resultado positivo: desarrollo de un
color rojo en pocos minutos
después de una completa agitación
del tubo.
Resultado negativo: ausencia de
color rojo.
Movilidad:
Resultado positivo: presencia de
turbidez o crecimiento mas allá de
la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento
la superficie y azul verdoso en el fondo.
Acinetobacter baumannii. Amarillo en
la superficie y azul verdoso en el fondo.
E.coli: reacción rojo metilo:
Positiva(roja)
prueba de voges proskauer
negativa
Klebsiella pneumoniae:
reacción rojo metilo: Positiva(roja)
prueba de voges proskauer
negativa
Enterobacter aerogenes:
reacción rojo metilo:
negativa (amarillo)
prueba de voges proskauer
positiva(roja)
Escherichia coli
ATCC 25922
Escherichia coli
ATCC 35218
Tiosulfato de y puede ser metabolizado por algunas Calentar agitando hasta su punto de solamente en la línea de siembra. Escherichia coli
sodio................................................ bacterias para formar indol. ebullición y dejar enfriar.
...................................................0.2. Producción de SH2 ATCC 8739
En el proceso interviene un conjunto de Distribuir 4ml del medio en un tubo
Agar.................................................. enzimas llamadas tripto- de ensayo y esterilizar en autoclave : Salmonella typhimurium
.......................................................... a 121° durante 15m. Dejar que el
......................................3.5. fanasa. medio se solidifique en posición Resultado positivo: ennegrecimiento ATCC 14028
vertical. del medio de cultivo a lo largo
Shigella flexneri
de la línea de siembra o en todo el
medio. ATCC 12022

Resultado negativo: el medio Klebsiella pneumoniae

permanece sin cambio de color.
ATCC 700603

Proteus mirabilis

ATCC 43071