BIOTECNOLOGIA 1.

EJERCICIO CINETICA ENZIMATICA

Presentado por: Karla Ivanna Palacio M.

Prof. PhD. Ligia Luz Corrales.

Se hacen 5 mezclas de reacción que contienen concentraciones iguales de una enzima. A las
concentraciones de sustrato indicadas en la tabla se les mide la velocidad de reacción. El
experimento se repite luego con un inhibidor enzimático presente a una concentración de 2.2
x10-4 M en cada mezcla de reacción. Utilizando las gráficas de Lineweaver-Burk, determine
gráficamente la KM para el sustrato y la K M de la reacción en presencia del inhibidor. Calcula la
Vmax en presencia y ausencia del inhibidor. Determine qué tipo de inhibidor se tiene en la
reacción.

Tabla 1. Datos del ejercicio.

SUSTRATO (M) V (mmol/L*min) Vi (mmol/L*min)

1.0x10-4 28 18
1.5x10-4 36 24
2.0x10-4 43 30
5.0x10-4 63 49
7.5x10-4 74 63

ECUACION DE LINEWEAVER – BURK:

Tabla 2. Datos eje X y eje Y para el sustrato y la velocidad sin inhibidor.

1 1
S V
10000 0,03571429
6666,66667 0,02777778
5000 0,02325581
2000 0,01587302
1333,33333 0,01351351

Tabla 3. Datos eje X y eje Y para el sustrato y la velocidad con inhibidor.

1 1
S Vi
10000 0,05555556
6666,66667 0,04166667
5000 0,03333333
2000 0,02040816
1333,33333 0,01587302
 0.04

0.04 f(x) = 0 x + 0.01

R² = 1
0.03

0.03

0.02
1/V

0.02

0.01

0.01

0
0 2000 4000 6000 8000 10000 12000
1/S

Grafico 1. 1/S Vs 1/V

0.06

f(x) = 0 x + 0.01
0.05 R² = 1

0.04
1/Vi

0.03

0.02

0.01

0
0 2000 4000 6000 8000 10000 12000
1/S

Grafico 2. 1/S Vs 1/Vi

Para Lineweaver – Burk:

1 Km
Y= y m= ; reemplazando los datos obtenidos en el grafico 1 obtenemos:
Vmax Vmax
Vmax= 95,23809524

Km= 2,8571422857x10-4

Lo anterior es para la cinética de la enzima sin inhibidor.

Reemplazando los datos obtenidos en el grafico 2 obtenemos:

Vmax= 93,45794393

Km= 4,672897197x10-4

Lo anterior es para la cinética de la enzima con inhibidor.

CONCLUSION:

Tomando en cuenta los resultados obtenidos para Km y para Vmax sin y con inhibidor es difícil
establecer entre el inhibidor competitivo y el no competitivo, ya que el Km aumenta con
inhibidor siendo este una característica del competitivo mientras que el Vmax disminuye,
siendo este por el contrario una característica de un inhibidor no competitivo.

Observando la gráfica, la conducta de la recta es similar a como se comporta una para

inhibidor competitivos por lo que concluyo opinando que la actividad enzimática esta siendo
afectada por un inhibidor competitivo.