ELEARNING TOTAL Curos de Introducción a la MG – Unidad 2

Calor húmedo

El calor húmedo destruye a los microorganismos, como ya se dijo, sobre todo por la
coagulación de las proteínas (desnaturalización), que es causada por la rotura de los
enlaces de hidrógeno que mantienen la estructura tridimensional. Este proceso de
coagulación es familiar para cualquiera que haya observado cómo se cocina la clara
del huevo.
Un tipo de esterilización por calor húmedo es la ebullición, que causa la muerte de
las formas vegetativas de las bacterias patógenas, de casi todos los virus y de los
hongos y sus esporas en unos 10 minutos, por lo general mucho antes. El vapor
fluyente (sin presión) tiene una temperatura equivalente a la del agua hirviendo. En
cambio, las endosporas y algunos virus no se destruyen con tanta facilidad. Algunos
de los virus de la hepatitis, por ejemplo, pueden sobrevivir hasta 30 minutos con la
ebullición y algunas endosporas bacterianas pueden resistir a las temperaturas de
ebullición durante más de 20 horas. Por consiguiente, la ebullición no siempre es un
método de esterilización confiable. Sin embargo, unos pocos minutos de ebullición
causan la muerte de la mayoría de los patógenos. El empleo de la ebullición para
higienizar los biberones es un ejemplo familiar.
La esterilización confiable con calor húmedo requiere temperaturas superiores a la
de la ebullición del agua. Estas temperaturas elevadas se alcanzan con más
frecuencia mediante vapor bajo presión en una autoclave. La colocación en autoclave
es el método preferido de esterilización, a menos que el material que se desea
esterilizar pueda ser dañado por el calor o la humedad.
Cuanto mayor sea la presión en la autoclave mayor será la temperatura. Por ejemplo,
cuando el vapor que fluye libremente a una temperatura de 100 °C se encuentra a
una presión de 1 atmósfera por encima de la presión a nivel del mar, con una presión
de 1.05 kg/cm² la temperatura se eleva a 121 °C
La esterilización en una autoclave es más eficaz cuando los miroorganismos se hallan
en contacto directo con el vapor o están contenidos en un volumen pequeño de
líquido acuoso. En estas condiciones el vapor a una presión de 1,05 kg/cm² (1,05
kg/cm²; 121 °C) causará la muerte de todos los microorganismos y sus endosporas en
alrededor de 15 minutos.
La autoclave se utiliza para esterilizar medios de cultivo, instrumentos, ropas,
instrumental de uso intravenoso, aplicadores, soluciones, jeringas, equipos de
transfusión y muchos otros artículos que pueden soportar temperaturas y presiones
altas. Las autoclaves industriales de gran tamaño o retortas utilizan el mismo
principio de la olla de presión en la elaboración de conservas caseras.
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El calor necesita más tiempo para alcanzar el centro de los materiales sólidos, como
las carnes enlatadas, porque en estos materiales no se forman las corrientes de
convección para la distribución eficaz del calor como en los líquidos. También se
necesita más tiempo para el calentamiento de grandes recipientes.
Para esterilizar recipientes de vidrio secos, apósitos y otros elementos similares debe
tenerse el cuidado de asegurar que el vapor entre en contacto con todas las
superficies.
Por ejemplo, el papel de aluminio es impermeable para el vapor y no se debe usar
para envolver los materiales secos que se van a esterilizar; en su lugar debe utilizarse
papel especial para autoclave.
También se debe tener cuidado y evitar que quede aire atrapado en el fondo de un
recipiente seco porque el aire atrapado no será reemplazado por el vapor, que es
más liviano que el aire. El aire atrapado es el equivalente de un pequeño horno de
aire caliente que, como veremos en seguida, requiere mayor temperatura y un
tiempo más prolongado para esterilizar materiales.
Los recipientes que pueden atrapar aire deben colocarse en una posición inclinada
para que el vapor empuje el aire hacia afuera. Los productos que no permiten la
penetración del agua, como la vaselina o la parafina, no se esterilizan con los mismos
métodos utilizados para las soluciones acuosas.

Autoclave

Relación entre presión, volumen y temperatura

El volumen del autoclave es limitado por las paredes del aparato, al no poder
aumentarse, se produce un aumento de la presión, luego de aplicar una fuente de
calor externa.
Esta serie de situaciones se puede repetir hasta un momento en que la presión
rompería las paredes del autoclave, lo que se evita por una válvula que cuando llega
a cierta presión deja escapar el vapor.
Por medio del calor que le aplicamos al autoclave podemos controlar la presión, ya
que al llegar a cierta presión se necesita más calor para llegar al estado gaseoso y
como resultado tiene un equilibrio que relaciona la presión y la temperatura, si el
volumen ha de permanecer constante. Esta relación es muy importante pues nos
permitirá corregir el funcionamiento del autoclave.
Condiciones ideales de un autoclave:
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1. Absoluta uniformidad de temperatura dentro del autoclave en cualquier

momento
2. Control completo de la relación tiempo temperatura

Relación presión temperatura

Presión en Kg/cm² Temperatura °C

0 ……………………………………….. 100
1,05 …………………………………….121
2 .………………………………………..135

Elementos del autoclave

El modelo más utilizado es el Chamberland, siendo uno de los más sencillos y

eficientes. Existen modelos verticales y horizontales de diferentes tamaños.
Está constituido por una caldera metálica en su interior, sostenido por una camisa
también metálica. En su parte inferior lleva una fuente calórica, la que puede ser a
gas o eléctrica. La parte superior lleva una tapa de bronce que posee los siguientes
elementos:
1. Termómetro
2. Manómetro
3. Espita: sirve para eliminar el aire durante el calentamiento, proceso
denominado “purgado”
4. Válvula de seguridad: permite el escape de vapor cuando la presión interior
excede al correspondiente.

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Autoclave tipo Chaberland

Manejo de autoclave

1. Colocar agua dentro del autoclave hasta llegar al nivel de la rejilla o lamina
cribada.
2. Sobre la rejilla se colocan en forma ordenada los elementos a esterilizar. Este
paso es muy importante dado que no se deben compactar los materiales para
permitir la circulación de vapor de agua entre ellos. Los recipientes con
líquidos deben ir en posición vertical para evitar que se vuelquen, las botellas
frascos y tubos van con la boca hacia arriba.
3. Colocar la tapa y ajustar las mariposas de a pares, diametralmente opuestas.

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4. Abrir la espita y controlar la movilidad de la válvula de seguridad.

5. Conectar la fuente calórica. El agua que está en el interior comenzara a hervir
transformándose en vapor de agua que ira dejando el aire que estaba dentro
del autoclave, el agua saldrá por la espita. Cuando el vapor desaloja totalmente
el aire comenzara a salir un chorro de vapor constante, lo que significara que el
autoclave esta “purgado”.
6. Una vez purgado se cierra la espita. Este proceso es muy importante ya que la
temperatura indicada el en termómetro no expresaría la temperatura real
existente en el interior si se sumase la presión de aire a la presión de vapor.
7. Se deja que la temperatura siga aumentando hasta llegar a 121°C (temperatura
utilizada en forma standard por los laboratorios). En este momento se reduce
la intensidad de la fuente calórica para mantener la temperatura constante y a
partir de este momento se cuentan 20 minutos que llevará el proceso de
utilización.
8. Cumplido ese tiempo, se suprime la fuente calórica y se deja enfriar
totalmente el autoclave. De no ser así la descompresión rápida provocaría la
ebullición de los medios de cultivo y probables fisuras del material de vidrio.

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9. Abrir la espita para que entre aire al autoclave y por ultimo abrir la tapa.
10. Retirar el material con cuidado
11. El material estéril debe identificarse como tal con “cinta testigo para
autoclave”. Esta cinta vira de color luego de un proceso de esterilización por
calor húmedo (las hay también para calor seco).
12. Nunca debe dejar el autoclave con materiales dentro. Luego de cada proceso
autoclavado se deben sacar indefectiblemente todos los materiales.

Mantenimiento del autoclave

Como todo equipo de laboratorio se debe mantener correctamente para un

funcionamiento normal. La válvula de seguridad el manómetro el termómetro y la
espita deberán probarse frecuentemente. La caldera se debe vaciar y enjuagar en su
totalidad periódicamente.

Control de esterilización

Hay métodos para controlar que el proceso de esterilización en autoclave ha sido

correcta.
-Método químico: existen en el mercado tiras reactivas (tales como las cintas testigo)
(fig 1) que indican con un cambio de color de la misma que el equipo ha llegado a la
temperatura deseada. Tiene el inconveniente de que este viraje de color solo indica
la temperatura, pero no el tiempo en que se mantuvo la misma.
-Método biológico: se denominan “indicadores biológicos” y consisten en un papel de
filtro embebido en un cultivo de un microorganismo esporulado que tiene como
característica una gran resistencia a las temperaturas altas (fig 3 y 4). Comúnmente
se emplea un cultivo de Bacillus stearithermophylus. Este se encuentra en diferentes
formatos en el mercado (dentro de ampollas o envuelto en papel). De cualquier
forma lo que se hace es introducir este cultivo dentro del autoclave, junto con los
elementos a esterilizar. Luego del ciclo de esterilización se procede a la incubación
del indicador biológico. El desarrollo del microorganismo luego de la incubación
indicará un incorrecto proceso de esterilización. Por el contrario, el no desarrollo
indicara que el proceso de esterilización se realizó correctamente. Este método tiene
el inconveniente de tener que esperar el periodo de incubación para poder usar los
materiales.

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fig 1

fig 3 fig 4

Sin presión

Ebullición
El agua en estado de ebullición alcanza una temperatura de 100 °C, temperatura a la
cual puede matar en 10 minutos las formas vegetativas de la mayoría de las
bacterias, algunos virus y hongos. Las esporas bacterianas y algunos virus no se
inactivan con este tipo de tratamiento. Por lo tanto la ebullición no es de los métodos
más efectivos para la esterilización, así mismo causa la muerte de la mayoría de los
patógenos.
Este método se utiliza para higienizar en forma rápida elementos sencillos como
jeringas o utensilios varios.

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Pasteurización

Es un método de higienización mediante el cual se reduce considerablemente la

carga bacteriana en productos en los que el calor interfiere negativamente sobre sus
características organolépticas. El ejemplo más común es la leche. También se aplica
en productos como el vino y la cerveza. En este proceso solo se eliminan las formas
vegetativas, y no las esporas. Por lo tanto no se considera un proceso de
esterilización.
Para establecer una temperatura y tiempo adecuados, se tiene en cuenta la
resistencia que toleran los patógenos más frecuentes que se encuentran en el
producto.

Tipos de pasteurización:

Baja: 62 °C por 30 minutos

Alta: 72 °C por 15 segundos
Ultrapasteurización: es un tratamiento a temperatura ultra elevada y comprende:
Calentamiento rápido (en 6-10 segundos) a 135-150 °C luego de esto pasa
por un rápido enfriamiento hasta 74 °C.

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