INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA 2: FRACCIONAMIENTO DE PROTEÍNAS EN SEMILLAS DE

LEGUMINOSAS Y CEREALES POR SOLUBILIDAD

PRESENTADO POR

NELFY LORENA MARÍN

Cód: 31656561

ANDREA MARIBEL ESCOBAR

Cód: 27461657

VICTOR SERNA Cód: 1118288994

LEIDY ADRIANA CASTRILLON C.

Cód: 31322034

TUTORA:

CLAUDIA MARÍN

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD

INGENIERÍA DE ALIMENTOS- CEAD PALMIRA

NOVIEMBRE 2015
1. RESUMEN
Las proteínas son compuestos
constituidos por aminoácidos
unidos por enlaces peptídicos
y elevado peso molecular
tienen varios tipos de
clasificaciones y una de ellas
es de acuerdo a su solubilidad:
Albuminas: son proteínas
solubles en agua y en
soluciones salinas.
Globulinas: son insolubles en
agua y solubles en soluciones
salinas diluidas (NaCl 1%)
precipitan a concentraciones
medianas de sales (40 – 50%)
y se encuentran prácticamente
en todos los tipos de células y
tejidos.
Prolaminas: Insolubles en
agua y soluciones salinas, son
solubles en etanol 50 – 90% y
se encuentran solo en
vegetales.
Glutelinas: solo se solubilizan
en ácidos o bases diluidos,
están presentes en productos
vegetales
Como el método de Biuret se
basa en la formación de un
complejo coloreado entre el
Cu2+ y los grupos NH de los
enlaces peptídicos en medio
básico. 1Cu2+ se acompleja
con 4 NH. La intensidad de
coloración es directamente
proporcional a la cantidad de
proteínas (enlaces peptídicos)
y la reacción es bastante
específica, de manera que
pocas sustancias interfieren.
Por lo tanto, el método de
Biuret combinado con la
espectrofotometría se puede
obtener la concentración de
proteínas en una muestra
deseada.
Reacción de Biuret
2. OBJETIVO GENERAL
Comprobar la teoría con la
práctica en relación al
comportamiento según la
solubilidad de proteínas y
obtener las fracciones de
albúminas, globulinas,
prolaminas y glutelinas a partir
de tejidos biológicos. Calcular
mediante espectrofotometría,
la concentración de proteínas
en cada una de las fracciones
anteriores.
3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Que el estudiante
compruebe la teoría con la
práctica en relación al
comportamiento según la
solubilidad de proteínas.
- Que el estudiante obtenga
las fracciones de
albúminas, globulinas,
prolaminas y glutelinas a
partir de tejidos biológicos.
- Que el estudiante calcule
mediante
espectrofotometría, la
concentración de proteínas
en cada una de las
fracciones anteriores
 4. FLUJOGRAMA DEL PROCESO

Producto utilizado: lentejas (previamente molida)

Paso 1 obtención de la solución de albumina

en un tubo de ensayo pesar 2g

de muestra "Lentejas"

Adicionar 10ml de H2O destilada

Agitar manualmente x 10
minutos

Centrifugar x 3 minutos

Adicionar a la probeta de 25ml

Enrazar a 25ml con H2O y verter

al beaker identificado como
albuminas
Se obtuvo 15ml de la
solución
Paso 2 Obtención de la solución Globulinas

Utilizar el tubo de ensayo del paso

1 conservando la muestra

Adicionar 10ml NaCl 1%

Agitar manualmente x 10 minutos

Centrifugar x 3 minutos

Se obtuvo 17 ml
Adicionar a la probeta de 25ml de la solucion

Enrazar a 25ml con NaCl 1% y

verter al beaker identificado como
Globulinas
Paso 3 Obtención de la solución de Prolaminas

Utilizar el tubo del paso 2

conservando la muestra

Adicionar 10ml etanol 75%

previamente caliente a 60°C

Agitar manualmente x 10
minutos

Centrifugar x 3 minutos
Se obtuvo 16.5ml de
Adicionar a la probeta de la solución
25ml

Enrazar a 25ml con etanol al

75 % a 60°C y verter al beaker
identificado como Prolaminas

Paso 4 Obtención de la solución de glutelinas

Utilizar el tubo del paso 3

conservando la muestra
Adicionar 10ml de
solución NaOH 0.1N
Agitar manualmente x 10
minutos
Centrifugar x 3 minutos
Adicionar a la probeta de Solución obtenida
25ml 15.5ml
Enrazar a 25ml utilizando
el NaOH 0.1N y verter al
beaker identificado como
Glutelinas
Alistamiento de las muestras para lectura en el espectrofotómetro
 5. DESARROLLO

A partir de una muestra de semilla pulverizada se debe obtener las

fracción de albumina, globulina, Prolaminas y Glutelina, mediante
espectrofotometría calcular la concentración de cada una.

FRACCIÓN
SOLVENTE
EXTRAÍDA
Agua destilada Albúminas
NaCl 1% Globulinas
Etanol Prolaminas
NaOH 0.1N Glutelinas

Alistamiento de las muestras para la determinación proteica por el método de

Biuret

Albuminas Globulinas Prolaminas Glutelinas

Muestra 0.5ml 1ml 0.5ml 1ml 0.5ml 1ml 0.5ml 1ml

H20 1.5ml 1ml 1.5ml 1ml 1.5ml 1ml 1.5ml 1ml

Solución de Biuret (4ml)

Sulfato de
2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
cobre 1%
NaOH 20% 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
CURVA DE CALIBRACIÓN

Se realizó utilizando como muestra patrón una solución de albumina de Huevo.

Solución patrón 214.6 mg / ml

DATOS CURVA DE CALIBRACION

Abs 540 nm
Concentración [ ]
# Tubo mL Abs
mg/mL

TB 0 0 0
T1 0.1 1 0.29
T2 0.3 3 0.436
T3 0.5 5 0.707
T4 0.7 7 0.935
T5 0.9 9 1.384
T6 1.2 12 1.807

Cada tubo se somete en baño maría a 30°C para desarrollo del color por un
tiempo de 10 minutos a 540nm en transmitancia

CURVA DE CALIBRACIÓN
2
1.8
1.6 y = 0.1449x + 0.0283
1.4 R² = 0.9863
ABSORBANCIA

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 2 4 6 8 10
CONCENTRACIÓN (mg/mL)
TABLA DE DATOS

% %
MUESTRA CONCENTRACIÓN
TRANSMITANCIA ABSORBANCIA
Albúminas
0.519 2.284 15.43
0.5 mL
Albúminas
0.756 2.121 14.32
1 mL
Globulinas 0.5
0.103 2.987 20.21
mL
Globulinas
0.099 3.004 20.33
1 mL
Prolamina
0.049 3.309 22.40
0.5 mL
Prolamina
0.08 3.096 20.95
1 mL
Glutelinas
0.213 2.671 18.06
0.5 mL
Glutelinas
0,296 2.528 17.09
1 mL
6. ANÁLISIS DE RESULTADOS
La determinación de la
cantidad de proteína en cada
una de las muestras se pudo
obtener con el valor de la
absorbancia y mediante la
interpolación de los valores en
la curva de calibración y
haciendo el despeje respectivo
de la ecuación obtenida en
Excel de la forma ( y=mx+b )
donde,
y=0.0438 x +1.5305.
En el siguiente cuadro se hace
una comparación de los
parámetros normales según la
teoría en relación con los
valores de proteínas obtenidos
en el extracto de lentejas
realizado en la práctica:

Valores Valores
PROTEÍNAS Análisis
Normales Obtenidos
Totales 20% - Bien

Globulinas 70% 14.32- 15.43 Muy bajo

Albúmina 10- 20 % 20.21- 20.33 Bien

Glutelina 10 - 15 % 22.40-20.95 Alto

Prolamina 5- 10% 18.06 - 17-09 Alto

1
Valores Normales

De acuerdo a los resultados de globulinas tendría que ser

obtenidos en la práctica mayor que las demás
realizada no tuvieron los proteínas buscadas pero se
valores esperados ya que la mantuvo entre el mismo rango
concentración en porcentaje de las otras.
7. CONCLUSIONES respectivos valores
porcentuales.
8. REFERENCIAS
- Durante el desarrollo de la BIBLIOGRÁFICAS
práctica se siguieron los
pasos uno a uno, sin
embargo, en la - David, N y M,M. 2009
centrifugación empezamos Lehninger Principios de
a notar que el tubo de Bioquímica. 5 ta Ed.
ensayo se fracturó y parte Barcelona. Editorial
de la muestra se perdía en Omega.
cada centrifugación - Herrera, C. Bolaños. N.
realizada por lo que Lutz G. 2003. Química de
podemos decir que una de Alimentos: Manual de
las posibles causas en la laboratorio. 1 era Ed.
obtención fue la pérdida de Universidad de Costa Rica.
la muestra en el proceso. - Pérez, G. (1992). Ciclo de
- Con método de Biuret se krebs. En G. Pérez,
puede hacer la BIOQUIMICA (pág. 163).
cuantificación de proteínas Bogotá DC: Unisur.
totales y de albúmina - Rawn, J (2005).
presente en la muestra en Bioquímica. Madrid:
la que de forma Interamericana-
McGraw_Hill.
colorimétrica se puede
diferenciar según la - 1
Tomado de:
intensidad de color de la http://helvia.uco.es/xmlui/bit
reacción obtenida y de stream/handle/10396/3797/
forma cualitativa se puede 03-1991-07.pdf?
decir que hay más o menos sequence=1
cantidad de proteínas
presentes en la muestra.
- El espectrofotómetro nos
ayuda a cuantificar los
valores de absorbancia que
se usan para determinar los
gramos, % de albúmina y
proteínas con sus