Valoración del artículo “APLICACIONES DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO

PARA CARACTERIZAR RESPUESTAS FISIOLÓGICAS BACTERIAS”

Artículo escrito por: Verónica Ambriz-Aviña, Jorge A. Contreras-Garduño, and
Mario Pedraza-Reyes

En los últimos años, la necesidad de conocer más sobre las interacciones que
realizan los microorganismos con el medio en el que viven y como estos
pueden ser utilizados para el beneficio de la humanidad, ha promovido buscar
mejores técnicas para la identificación, caracterización y diagnóstico de
microorganismos[ CITATION Amb14 \l 12298 ] . En gran medida, a los avances
tecnológicos producidos por nuevos métodos cuantitativos de análisis celular
permiten una mejor caracterización microbiana, entre ellos se destaca la
citometría de flujo, que permite evaluar características físicas y químicas de
células en suspensión, entregando información sobre el tamaño celular, la
granularidad o complejidad interna, así como también de la intensidad de
fluorescencia relativa que posee las células en estudio, alcanzado así gran
relevancia ya que hace posible medir diversos parámetros celulares como
antígenos de superficie, citoplasmáticos y nucleares, contenido de ácidos
nucleicos, actividad enzimática entre otros, lo que permite identificar en una
muestra: subpoblaciones de células diferentes ante sus respuestas fisiológicas
[ CITATION Orf93 \l 3082 ].

Para el estudio de respuestas fisiológicas bacterianas usando enfoques que

tasan la respuesta demográfica total considerándolo como homogéneo ya no
son aceptadas ya que las pruebas experimentales corrientes indican que un
cultivo ordinario de laboratorio, que se considera como de isogénico realmente
se constituye de subpoblaciones heterogéneas que responden diferencialmente
a cambios de su ambiente y aunque una cantidad inestimable del conocimiento
se haya obtenido estudiando respuestas demográficas totales, hay que
considerar que la heterogeneidad intracelular y la interacción entre células
existen en un cultivo bacteriano isogénico. Por lo tanto los análisis se
concentran en subpoblaciones combinadas con técnicas de análisis de la célula
sola que ayuda al entendimiento del comportamiento subdemográfico
bacteriano en cultivos de laboratorio[ CITATION Amb14 \l 12298 ].

La citometría de flujo, al igual que otros métodos modernos, se convierte en

una herramienta fundamental en la microbiología combinando la detección
directa y rápida de microorganismos (o partes de éstos), el estudio de la
distribución de su tamaño (a través de los parámetros de FSC y SSC, tamaño y
complejidad respectivamente) al igual otras características bioquímicas y
fisiológicas de una población o de células individuales [ CITATION Amb14 \l 12298 ].
Es por ello que tenemos aplicaciones de esta técnica como [ CITATION Amb14 \l
12298 ]:
 El análisis de la respuesta bacteriana ante agentes antibióticos, en la
cual gracias a la técnica se estudió las infecciones polimicrobianas;
 además en otro estudio permitió determinar la MIC (concentración
inhibitoria mínima) de nueve antibióticos diferentes en Mycoplasma
hyopneumoniae lo que permite tasar la viabilidad y así la susceptibilidad
antibiótica.
 Medida de respuestas bacterianas a tensiones químicas y físicas, Uno
de tales enfoques emplea inactivation fotodinámico (PDI), que consiste
en el uso de fotosensibilizador no tóxico, además cambios de integridad
de la membrana usando propidium iodide y actividad esterasa con
carboxifluoresceína succinimidil de L. rhamnosus en respuesta a la
tensión osmótica.
 Interacción patógena por el anfitrión, permite estudiar interacciones
bacterianas con células del anfitrión entre los que se destacan los
estudios de Las bacterias Shigella flexneri patógenas son capaces de
causar la disentería invadiendo las células epiteliales del colon.
 Análisis de fisiología bacteriana a un nivel de la Célula Sola, existe un
amplio interés en estudiar la diferenciación bacteriana debido al impacto
de resistente esporas y resistencia de antibióticos relacionada con el
desarrollo de competencia sobre cuestiones clínicas, sanitarias, y
biotecnológicas

El factor principal que ha limitado el uso de FCM en el campo procarionte es el

tamaño pequeño de bacterias que los hace difíciles para el descubrimiento, Sin
embargo, las mejoras corrientes han permitido aplicar esta técnica para
caracterizar los acontecimientos fisiológicos que son la base de las respuestas
bacterianas como lo descrito anteriormemente [ CITATION Orf93 \l 12298 ].

Algunas de las técnicas más usadas para el diagnóstico o detección de

microorganismos incluyen el cultivo, inmunoensayos, aglutinación, microscopia
óptica y de fluorescencia y biología molecular [ CITATION Sha03 \l 12298 ]. Estas
técnicas se han utilizado a lo largo de los años por su sencillez de uso,
tradición, disponibilidad en el laboratorio y bajos costos. A pesar de esto,
muchos métodos tradicionales consumen tiempo durante la preparación de las
muestras, se basan en el examen visual por parte del operador, presentan
dificultades técnicas al momento de implementarlas o están limitadas a pocos
centros especializados[ CITATION Jos07 \l 12298 ].

En modo comparativo según el artículo y la literatura revisada es posible

establecer ventajas y desventajas bajo ciertas circunstancias.
Ventajas de utilizar la citometría de flujo:
 La velocidad con la cual se obtienen procesan los datos.
 la capacidad de separación (cell sorting) que tienen algunos citómetros
lo que permite el aislamiento de poblaciones específicas e incluso
células individuales para un posterior estudio físico, químico, biológico o
molecular.
 la adquisición rápida de múltiples datos para su posterior análisis.
 la posibilidad de ser una técnica tanto cualitativa como cuantitativa.
Desventajas de utilizar la citometría de flujo:
 Para clasificar subpoblaciones microbianas por citometria flujo es
necesario un compaginador de células el cual es preciso un alto nivel de
abundancia para poder clasificar.
 La citometría de flujo técnica requiere el paso de estas células a través
de un flujo de fluido, limitamos el análisis a sólo las soluciones de
suspensión de células.
 La calidad en el análisis de respuestas fisiológicas depende de la
sensibilidad del instrumento por lo que el precio varía en función de la
sensibilidad.
 La selectividad de fluorocromos representa una desventaja para la
aplicabilidad del método.
 Las VNBC presentan una desventaja en la determinación de respuestas
fisiológicas estableciendo así inconsistencia entre análisis citométrico y
crecimiento enfoques basados pueden ser explicadas por la existencia
de células metabólicamente activas pero no cultivable (VNBC) en un
cultivo celular.
Por ultimo cabe concluir que frente a otros métodos, este posee velocidad de
análisis ya que realiza mediciones simultáneas, lo que colabora en el ahorro de
tiempo de identificación y cuantificación de células presentes en una población
lo cual dictamina una comprensión eficaz de los mecanismos celulares y
moleculares que rigen la diferenciación celular en bacterias

Bibliografía
Ambriz A., V., Contreras G., J., & Pedraza R., M. (2014). Aplicacioes de la
citometria de flujo para caracterizar respuestas fisiologicas bacterianas.
Guanajuato: Hindawi Publishing Corporation.

HM., S. (2003). Practical Flow Cytometry. New York.: John Wiley & Sons Inc.

José Laguado, M. (2007). APLICACIONES DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO

EN MICROBIOLOGÍA, VETERINARIA Y AGRICULTURA. BD
Biosciences.

Orfao A, L. A.-B. (1993). La citometría de flujo en el diagnóstico clínico.

Servicio General de Citometría. Universidad de Salamanca.