Desarrollo y validación del método para control

de calidad de clorhidrato de tiamina en tabletas

Maritza Coureaux Gonzalez1, María de los Ángeles Arada
Pérez2, Yania Suarez Pérez3, Jorge Marín Moran2
1
Laboratorio Farmacéutico Oriente, BioCubaFarma. Santiago de Cuba. Cuba. 2Facultad de Ciencias Naturales. Universidad
de Oriente. Santiago de Cuba. Cuba. 3Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de la Habana. La Habana. Cuba.

Development and validation of methods for quality control of hydrochloride thiamine tablets

Desenvolupament i validació del mètode pel control de qualitat de clorhidrat de tiamina en comprimits

Recibido: 25 febrero de 2014; revisado: 9 de mayo de 2014; aceptado: 16 de mayo de 2014

RESUMEN cialitzada per aquestes finalitats. Es va aplicar el mateix

Se propone un método espectrofotométrico diferencial
para la determinación de Clorhidrato de Tiamina en las ta-
bletas de Vitamina B1 50 mg, el cual es una modificación
del método fluorométrico establecido en la Farmacopea
USP 32 para este producto. Consiste en la determinación
espectrofotométrica a 369 nm del tiocromo producido por
oxidación de la tiamina en solución alcalina. La medida de
la absorción se realiza tanto en solución alcalina como en
las muestras oxidadas. El método resultó válido, ya que
los parámetros de linealidad, precisión, exactitud y espe-
cificidad cumplieron los criterios de aceptación propues-
tos en la literatura especializada para éstos fines. Se apli-
có el mismo método espectrofotométrico para el ensayo
de uniformidad de contenido, demostrando su adecuado
desempeño en el rango de 70 a 130% de la cantidad teó-
rica declarada en las tabletas.
Palabras clave: Clorhidrato de tiamina; tabletas; espec-
trofotometría; validación.
RESUM
Es proposa un mètode espectrofotomètric diferencial per
la determinació de clorhidrat de tiamina en els comprimits
de vitamina B1 50 mg, el qual és una modificació del mèto-
de fluorimètric establert en la Farmacopea USP 32 per
aquest producte. Consisteix en la determinació espectro-
fotomètrica a 369 nm del tiocrom produït per oxidació de
la tiamina en solució alcalina. La mesura de l’absorció es
realitza tant en solució alcalina com en les mostres oxi-
dades. El mètode va resultar vàlid, perquè els paràmetres
de linealitat, precisió, exactitud i especificitat van complir
els criteris d’acceptació proposats en la literatura espe-
mètode espectrofotomètric per l’assaig d’uniformitat de
contingut, i es va demostrar que en el interval entre el 70
i el 130% de la quantitat teòrica declarada en els compri-
mits el funcionament era el correcte.
Paraules clau: Clorhidrat de tiamina; comprimits; espec-
trofotometria; validació.
SUMMARY
A differential spectrophotometric method for the deter-
mination of thiamine hydrochloride in Vitamin B1 tablets
50 mg, which is a modification of the fluorometric method
specified in USP 32 Pharmacopoeia for this product is
proposed. Consists of spectrophotometric determination
to 369 nm of the thiochrome produced by oxidation of
thiamine in alkaline solution. The absorption measurement
is performed both in alkaline solution and in the oxidized
samples. The method was valid, since the parameters of li-
nearity, precision, accuracy and specificity met the accep-
tance criteria given in the literature for these purposes. The
same spectrophotometric method for content uniformity
test was applied, demonstrating adequate performance in
the range of 70 to 130% of the theoretical amount stated
in the tablets.
Keywords: Hydrochloride thiamine; tablets; spectropho-
tometric; validation.

286 AFINIDAD LXXI, 568, Octubre - Diciembre 2014

INTRODUCCIÓN
En el establecimiento oficial de un método analítico se
prevé la necesidad de demostrar que éste se pueda apli-
car con resultados satisfactorios. Con el fin de crear con-
fianza en los resultados analíticos reportados por un labo-
ratorio, el método utilizado debe cumplir ciertos requisitos
de calidad, los cuales se determinan mediante el proceso
de validación /1/.
Se entiende por validación de un método analítico a las
mediciones realizadas para comprobar y describir que el
mismo opera en todo momento de acuerdo con las expec-
tativas y los requisitos impuestos respecto a su exactitud,
uso, implantación y fuentes de error /2/.
En la actualidad, las Buenas Prácticas de Laboratorio, así
como un extenso trabajo que ha puesto en evidencia fa-
llas en el desarrollo analítico, imponen un creciente control
de los parámetros a evaluar y mayor rigor en lo referente
al procesamiento estadístico de los resultados. De ahí la
importancia que reviste la validación de los métodos ana-
líticos en la evaluación del control de calidad de un medi-
camento. La exigencia en el cumplimiento de la validación
de los procesos y de los métodos analíticos es de aplica-
ción general por todos los productores de medicamentos.
Para las tabletas Clorhidrato de Tiamina se reporta un mé-
todo fluorométrico en la Farmacopea de los Estados Uni-
dos (USP 32) /3/ que se basa en la oxidación de la Tiamina
a tiocromo con el ferricianuro de potasio, que tiene lugar
en medio alcalino, obteniéndose el tiocromo que tiene
una intensa fluorescencia azul y en Farmacopea Británica
(BP 2009) /4/, se propone uno por cromatografía líquida de
alta resolución para el control de calidad.
El objetivo de este trabajo es validar el método utilizado
en la determinación de Clorhidrato de Tiamina en tabletas
de Vitamina B1 50 mg de producción nacional, según las
exigencias establecidas para los métodos de la categoría
I de la USP /3/.
MATERIALES Y MÉTODOS
Los reactivos utilizados en esta investigación fueron de
calidad puro para análisis (PA). Todas las soluciones utili-
zadas fueron de clasificación R según USP 32 /3/. La cris-
talería utilizada está certificada por el Comité Estatal de
Normalización (CEN).
Muestras: Se preparó un placebo a nivel de laboratorio,
siguiendo la formulación tecnológica establecida para las
tabletas de Vitamina B1 50 mg /5/.
Soluciones utilizadas en la determinación de la con-
centración del ingrediente farmacéutico activo en las
tabletas de Vitamina B1.
• Reactivo Oxidante: Se añadieron 2,0 mL de ferricia-
nuro de potasio 1% m/v en un matraz de 50 mL. Se
añadió hidróxido de sodio 3,5 mol/L y se enrasó a
volumen. La solución se puede usar solamente hasta
4 horas después de preparada.
• Solución P (Concentración = 100 mg/mL): Se pe-
saron con exactitud 50 mg de S.R de Clorhidrato
de Tiamina y se transfirieron a un matraz aforado de
100 mL, se añadió solución de ácido clorhídrico 0,2
mol/L y se agitó hasta disolución. Se enrasó a volu-
men con la misma solución y se mezcló. Se midieron
AFINIDAD LXXI, 568, Octubre - Diciembre 2014
cuantitativamente 10 mL de la solución anterior y se
transfirieron a un matraz de 50 mL. Se adicionó ácido
clorhídrico 0,2 mol/L, se enrasó con la solución de
HCl 0,2 mol/L y se mezcló.
• Solución madre de Clorhidrato de Tiamina: Se trans-
firieron a un matraz aforado de 100 mL, 50 mg de
Clorhidrato de Tiamina materia prima y 170 mg de
placebo exactamente pesados, se añadieron 70 mL
de ácido clorhídrico 0,2 mol/L, se agitó por 10 mi-
nutos, se llevó a volumen con la misma solución y
se mezcló. Se centrifugó un volumen aproximado de
60 mL durante 10 minutos a una velocidad de 2000
r.p.m. Se transfirió la solución sobrenadante a un re-
cipiente adecuado.
A partir de la solución madre se prepararon soluciones de
Clorhidrato de Tiamina (M) , añadiendo volúmenes medi-
dos cuantitativamente a matraces de 50 mL, los cuales
fueron enrasados con ácido clorhídrico 0,2 mol/L. Poste-
riormente se realizó la mezcla. Las soluciones M resultan-
tes corresponden a 5 niveles de concentración en el rango
de 70 a 130 mg/ml equivalentes al 70 -130% del Ingredien-
te farmacéutico Activo (IFA).
• Solución Placebo de Clorhidrato de Tiamina (Solu-
ción Pb): Se pesaron con exactitud 170 mg de Pla-
cebo y se transfirieron a un matraz de 100 mL. Luego
se añadieron 70 mL de ácido clorhídrico 0,2 mol/L;
se agitó por 10 minutos y se enrasó a volumen con la
misma solución. Una vez realizada la mezcla, se cen-
trifugó un volumen aproximado de 35 mL durante 10
minutos a una velocidad de 2000 r.p.m y se transfirió
la solución sobrenadante a un recipiente adecuado.
Método analítico para la valoración del Clorhidrato de
Tiamina.
Procedimiento: Se midieron cuantitativamente 2 alícuo-
tas de 2 mL de cada una de las siguientes soluciones P,
M1, M2, M3, M4, M5, Pb y se transfirieron separadamente
a 2 tubos Nessler con tapa de 50 mL. Los tubos se rotula-
ron con los subíndices “O” y “B” equivalentes a “oxidado”
y “sin oxidar,” respectivamente.
A cada tubo con el rotulado “B” (PB, M1B, M2B, M3B, M4B,
M5B y PbB) se le añadió 2,0 mL de hidróxido de sodio
3,5 mol/L y se mezcló. Pasado un minuto se adicionaron
cuantitativamente 15 mL de alcohol isobutílico desecado.
Se mezcló vigorosamente durante 90 segundos agitando
los tubos manualmente. Posteriormente se adicionó cuan-
titativamente a cada tubo 5 mL de alcohol etílico absoluto.
Se invirtieron los tubos 2 veces suavemente para separar
las fases, para decantar o extraer aproximadamente 10
mL de la solución sobrenadante clara.
Para los rotulados “O” (P0, M10, M20, M30, M40, M50 y Pb0),
se repitió el mismo procedimiento anterior, pero sustitu-
yendo los 2,0 mL de hidróxido de sodio 3,5 mol/L por 2,0
mL de reactivo oxidante.
Se ajustó el espectrofotómetro como se establece en la
instructiva operacional del equipo (Espectrofotómetro UV-
visible, SPECORD 50). Posteriormente se determinaron las
absorbancias de las soluciones sin oxidar (PB, M1B, M2B,
M3B, M4B, M5B, PbB) y las de las soluciones oxidadas (P0,
M10, M20, M30, M40, M50, Pb0) a una longitud de onda de
369 nm, utilizando celdas 1 cm de paso de luz y como
blanco alcohol isobutílico. El valor de absorbancia a utili-
zar fue la diferencia de (0 – B).
287
 onda de de
las absorbancias las 369 nm,
soluciones utilizando
oxidadas (P celdas 1 M2 cmPosteriormente
,de
B paso Bde luz B y como B blanco
B B alcoholB
equipo (Espectrofotómetro
onda de 369 UV-
nm, visible,
utilizando SPECORD 0, sin
celdas M1oxidar01,50). M3 , M4,de , M5 ,determinaron
yPbcomo
se, 0M3 0) a una longitud
PbB) de
las
onda
las de de las 369 nm,
soluciones
de las soluciones
utilizando
oxidadas (P celdas 1 cm cm0,(P de
de paso
B,paso
0M1
B de
0M2 luz
luz
B y como
blanco
B, M4Bblanco, M5 alcohol
B, alcohol y
isobutílico. El valor de absorbancia 0, a M1 0, M20fue
utilizar M3 la , M4
0diferencia 0, M5de 0, Pb(0 0– ) B).
a una longitud de
las absorbanciasonda dede
isobutílico.
las de
laslas369 El
solucionesnm, de
soluciones
valor utilizando
sin oxidar
absorbancia
oxidadas (Pceldas, (P a
M1 , M1 1, M2
Butilizar cm
B, fue
,M2 de
M3 Bpaso
la, ,diferencia
M3 M4 Bde, ,M4M5 luz yPb
,, M5
Bde (0como
B)–, B).
Pb
a Bblanco
una) ylongitud alcohol de
isobutílico.
onda de 369 nm, utilizando celdas El valor de absorbancia 0 a utilizar
0 fue
1 cm0 de paso la 0 diferencia 0
de de
0 (0 0 – B).
Rluz y como blanco alcohol
Cálculos:
isobutílico.
las de las soluciones
onda
Cálculos: de 369 Se
Se Elcalculó
oxidadas valor(P
nm,
calculó dela absorbancia
0, absorbancia
M1
utilizando
la 0, M2
absorbancia 0, M3
celdas acorregida
utilizar
01, M4
corregida cm0fue ,depromedio
M5 lapaso
promedio 0,diferencia
Pb0de )AA aPRRluzdedeyla
una
de la solución
(0como
longitud
solución dede
– B).blancode referencia
alcohol
referencia
Cálculos:
isobutílico.Se Elcalculó
valor delaabsorbancia
absorbanciaacorregida utilizar fue promedio
la diferencia AP dedela(0solución
P
– B). de referencia
onda de 369 de
Cálculos:nm,
la
isobutílico. utilizando
siguiente Se
El forma:
calculó
valor celdas
de la 1 cm de
absorbancia
absorbancia a paso de
corregida
utilizar fue luz
promedio
la y como
diferencia A R blanco
de
de la(0 alcohol
solución
– B). de referencia
de
de la
la siguientesiguientecalculó forma:
forma: la absorbancia corregida promedio A R de la solución de referencia
P
isobutílico. El Cálculos:valor deSe absorbancia a utilizar fue la diferencia de (0 – B).
de la siguiente forma: A . p . V RP
Cálculos: Se calculó la absorbancia A R
R = A
corregida
A P.
P
. p
p ..V
tpromedio
t
V AP de la solución de referencia
decalculó la siguiente forma: corregida A P = p R. 100
R
Cálculos: Se la absorbancia APP promedio = A p
P t R
At P.Vde la solución de referencia
R.. 100
p
pPcorregida (1)
de la siguiente
Cálculos: Seforma:calculó la absorbancia APR = A R .100 (1)
promedio-
(1) los placebos cargados no difieren significativamente de la
Donde: R p . p
P .100 t .V
de la siguiente de forma:
Donde: la solución de referencia A deP la=siguiente A . pt .V
R forma: (1) solución de referencia.
Donde: APR = pPR .100 (1)
R A . p .V
A
Donde:
A R - AbsorbanciaA R
P =
corregida P
de cada t p R .100
solución (1) de de referencia.
(1) Linealidad del sistema. Cumplimiento de la ley de Lam-
APPPRR -- Absorbancia
Donde: Absorbancia corregida corregida p Rde de.100 cada
cada solución
solución (1) de referencia.
referencia.
bert-Beer.
A
Donde:
A APpR.-.--Absorbancia Absorbanciadel patrón.
corregida de cada solución de referencia.
Donde: A
Donde:ARPpp .--AbsorbanciaAbsorbancia del
del patrón.
patrón.
Absorbancia corregida de cada solución de referencia.
Para evaluar el cumplimiento de la ley de Lambert-Beer
Ap APp.- .-Pesada
ppAtt p.-.- .-Pesada --Absorbancia
Absorbanciadel
teórica
corregida
del patrón.
corregida
patrón. de de cada cada solución
solución de de referencia.
referencia. se construyó una curva de calibración de absorbancia vs
APR - Absorbancia t Pesada - Absorbanciateórica
Absorbancia
teóricadedel
corregida
del
del patrón.
patrón.
del
cada patrón.
patrón.
solución de referencia. concentración, utilizando las soluciones modelos corres-
A pptpR .-.- -Pesada Absorbancia
-Pesada
Pesada teórica del
teórica
del patrón.
del
patrón. patrón. pondientes al 80, 90, 100, 110 y 120 µg/mL. Estas dilu-
A p .- Absorbancia pppt RR.- --Pesada -Pesada
Pesada
Pesada
real
real
del patrón.
teórica
realreal
del
del
deldel
patrón.
patrón.
del patrón.
patrón. patrón. ciones correspondieron a las concentraciones de 80, 90,
V
Vppt --.-RValoración
Pesada
Valoración
- -Pesada
Valoración
del
teórica
del
real
patrón.
del
patrón.
deldel patrón.
patrón.
patrón. 100, 110 y 120 % del IFA en relación con el contenido
p t .- Pesada100
Vp- Valoración del patrón.
teórica
Posteriormente --- Factor
RValoración -Pesada
del patrón.
Factor real sedel
matemático patrón.
calculó
matemático para la para el cálculo.
concentraciónel cálculo. real de las soluciones modelo (M) a en
nominal cada las tabletas. Los resultados se procesaron por
V
V
p R- Valoración
100
100
-
Posteriormente
Factor
- Factor
Pesadamatemático
real
del
matemático
se del
patrón.
patrón.
calculó
para
para la
el
el cálculo.
decálculo.
concentración
Se determinó del
el patrón.
lapromedio lareal de lasreal
absorbancia de de las las soluciones
solu- (M) modelo (M)
a regresión aa cada
Rlineal y se aplicaron los criterios de aceptación
p R - PesadaVSe
Posteriormente
Posteriormente
concentración
100 determinó
Posteriormente
Se real - Factor
- Valoración
determinó
se calculó
delde
se
aplicando
el
matemático
patrón. del
el
concentración
calculó
sepromedio
calculó
patrón.
sepromedio
la
para la
siguiente
R lade
,de
concentración
el la
cálculo.
concentración
la
expresión:
absorbancia real
real
soluciones
dede
de las las modelo
soluciones
las soluciones
soluciones modelo
de
cada (M)
(M) aA
referencia
modelo cada
Acada
PR ,
ciones
Posteriormente referencia calculó Apara la siemprela absorbancia
concentración que la real dede las
diferencia
de las soluciones
las entre de
soluciones referencia
modelo siguientes:
(M)
(M) aaAcada PR r ,, ≥ 0,99; r ≥ 0,98; prueba de proporcionalidad
2
concentraciónPosteriormente
Se determinó
concentración
100
concentración -aplicando
Factor matemático lase
el
aplicandocalculó
promedio
siguiente
aplicando la la de
siguiente
P expresión:
la concentración
el
siguiente cálculo. absorbancia
expresión:
expresión: real de las soluciones
soluciones modelo
de referencia cada
VPosteriormente
- ValoraciónPosteriormente
estos del
concentración patrón.
no fuera se
la aplicando calculó la la
siguienteconcentración expresión: real de las soluciones modelo (M) a cada
P
ellamayor de 0,010. del método APR analítico (se empleó la prueba estadística t de
R
siempre
Se
100
concentración
siempre - se
determinóFactorque
calculó
que diferencia
matemático concentración
promedio
aplicando entre
para
la elestos
de
siguiente lareal
cálculo. no defuera
absorbancia
expresión:las mayor
soluciones
de las de 0,010.
modelo (M)dea referencia
soluciones cada ,
concentración
siempre
Posteriormente
Se
concentracióndeterminó que la diferencia
la aplicando
diferencia
el el secálculo.
promedio
aplicando
entre
la
calculó
la
siguiente
entre (de
siguiente
estos
estos
Amo
no
lala −concentración
fuera
expresión:
no fuera
absorbancia
expresión:
Am ) * pmt
mayor
mayor de real
de
de 0,010.
las 0,010.de las de referencia
soluciones Student Apara , n-2 grados de libertad siendo n el número
100 - Factor
concentración matemático
aplicando para
lael siguiente expresión: P
deµ0,010.
R
siempre
Se determinó que la diferencia C(M)
promedio mentre
a=Am de estos B
no fuera mayor * 200 gsoluciones
/ ml la(2)de referencia total de A
R
soluciones
siempre que
modelo
la ( Amo
R diferencia R −
R mentre
cada Amo
((((AmoAPo )la* concentración
Bestos
−absorbancia
pmt
− Am
APBfuera
Am
no B)) pmtde aplicando
)*** pmr
pmtmayor
las
de 0,010.
P , de valores; donde t experimental < t teórica);
pares
Se determinó el promedio C m =de la C
C m = Amo − Am * )
B200 * µ
pmt g / *
ml 200 µ g
(2) /
µggde// ml ml (2) R
APprueba
siguiente
siempre que la diferencia
expresión: C RRRabsorbancia
( APo
=
m−entre
=AP (((Amo
APo
) * pmr
estos
Amo
BAPo
−
− no
de Blas
Am
AP
Am
AP ) * soluciones
pmt
BB))** pmr
fuera mayor
pmt
** 200
deµ0,010.
200 mlreferencia
(2)
(2) , de la hipótesis nula de la pendiente b = 0 (se deter-
Donde: C
C R−m mAm = ((((Amo
= APo − Am APBBBB)))*** pmr pmt ** 200
pmr 200 µ µ gg // ml ml (2) (2) minó a partir de una prueba ANOVA de la regresión, o sea,
siempre que la diferencia ( Amo
entre estos C mno= fuera APo
) *
(B APomayorpmt −
− APAP )
B de* pmr
*µ0,010.
pmr * 200 µg / ml (2)
Donde: Donde: C R m = de la solución ( APo muestra − AP * 200 B) g / ml (2)
pmr (2)
Donde:
Am O - Absorbancia B ) *oxidada. la probabilidad (p) asociada con el valor de la pendiente:
Donde: ( APo − APB ) * pmr
Donde:
Donde:
Am si la p< 0,05 el valor de “b” difiere significativamente de
AmO - Absorbancia
Am O -- Absorbancia
Absorbancia
de la solución de
de lablanco
solución
muestra lamuestra
deoxidada. oxidada.
Donde:
Donde:
Am
Donde: B - Absorbancia del
O
O de lala solución
solución muestra
muestra.
muestra oxidada.
oxidada. cero). Además se calcularon los factores respuesta para
Am
AmBO -- Absorbancia
O - Absorbancia de
de
del la solución
lablanco
solución de lamuestra
muestra
muestra. oxidada.
oxidada.
AmB - Absorbancia
AP del blancode
Absorbancia dede
del lasolución
muestra.
lablanco de la muestra.
AmOBOB-- -Absorbancia
Am
AmO - Absorbancia Absorbancia
Absorbancia
de la solución
de
del la solución
la
blanco
muestra soluciónde de
la
oxidada.
referencia
muestra muestra
muestra. oxidada. oxidada.
oxidada. cada punto y el CV que debe ser menor que 5%.
Am
Am B - Absorbancia
Absorbancia de dellablanco
blanco de la la muestra.
AP
APO - Absorbancia
AP OB-----Absorbancia
Absorbancia
de la
Absorbancia
Absorbancia de solución del
de del
la solución
de referencia
blanco
solución
dellablanco
de
de la de
de de muestra.
referencia
oxidada.
la muestra.
referencia oxidada.
oxidada.
AmBOOB- Absorbancia
AP
AmB - Absorbancia del blanco de de dela solución
muestra. desustancia
referenciadeoxidada.
muestra. referencia.
AP O ----Absorbancia
Absorbancia
Absorbancia la solución
la solución de referencia
de referencia oxidada. oxidada. Linealidad del método:
AP
APB - Absorbancia
AP B --Concentración del blancode
Absorbancia
Absorbancia del
de
del lablanco
lasolución
blancosustancia de
de dede
la
la referencia
sustancia
referencia.
sustancia de
de oxidada.
referencia.
de referencia.
O
pmt.-
APB --Absorbancia
B
O Absorbancia de teórica
la
deldel blanco de
solución la
de de muestra.
de referencia
la sustancia oxidada.
referencia.
APO - Absorbancia
AP Absorbancia
de la solución
- Absorbancia del de blanco
referencia
blanco de la la sustancia
oxidada.
sustancia de de referencia.
referencia. Para la evaluación de éste parámetro se utilizaron las
APB -Concentración
pmt.-
pmt.- Concentración
pmt.-
B Absorbancia
teórica dedel
Concentración lablanco
teórica
teóricamuestra.de
de de
la
la la sustancia de referencia.
muestra.
muestra.
pmr
AP -
pmt.- Concentración -- Absorbancia
Concentración real
del de
blanco
teórica la muestra.
de dela sustancia
la muestra. de referencia. muestras obtenidas de los placebos cargados con IFA en
APB - Absorbancia
pmt.-
B
del blanco deteórica la sustanciade la muestra. de referencia.
pmt.-
pmr
pmr - Concentración
pmr
200
pmt.- -- -Concentración
Concentración
real de la teórica
Concentración
Concentración
Concentración
teórica
real
muestra.
real
teórica de
real
de
teórica
de
de
la
la
de de
la
lalamuestra.
muestra.
muestra.
dela
muestra.
la muestra.
solución
muestra. de Vitamina B1 al 100 % las mismasenconcentraciones descritas para la evaluación
expresada
pmr - Concentración
pmt.- Concentración teórica de lareal de la muestra.
muestra.
pmr
200
pmr
200 -- -Concentración
Concentración
Concentración
Concentración real
real de
de
teórica la
teórica
la muestra.
muestra.
de dede
la laVitamina
solución solución de dealVitamina
Vitamina B1 al 100 % de la linealidad
expresada en del sistema; de manera que se construyó
200 - Concentración
200 teórica
Concentración de la
teórica solución
de lade la solución B1 100 % expresada en
pmr
200 --B1
µg/ml.
pmr - Concentración
Concentración
Concentración
al
real100 de %
la
real
teórica
expresada
muestra.
muestra.
de en solución de
la mg/ml. de Vitamina
Vitamina B1 B1 al al 100
100 % %laexpresada
expresada
curva de
en
en
calibración de concentración experimental (en
200
200 - Concentración teórica de la solución de Vitamina B1 al 100 % expresada en
R - Concentración teórica de la solución de Vitamina B1 al 100 % expresada en
µg/ml. µg/ml.µg/ml.
200
C m.- - - Concentración
Concentración teórica
real realde de
las
de la
soluciones
las solución
soluciones de
modelo. Vitamina
modelo. B1 al 100 % expresada
porcentaje) envs concentración teórica (en porcentaje) y se
µg/ml.
200R - Concentración teórica de la solución de Vitamina B1 al 100 % expresada en
µg/ml.
CRRRm.-
µg/ml. m.- Concentración
Concentración real de las las soluciones
soluciones modelo. aplicó el mismo procesamiento estadístico y los mismos
C m.- Concentración
C
µg/ml. real de lasreal soluciones
de modelo. modelo.
µg/ml. CRRm.- Concentración
Validación del método real deanalítico las soluciones modelo.
desarrollado para la criterios de aceptación descritos para la linealidad del sis-
CRm.-
C m.- Concentración
Concentración real
real de de las las soluciones
soluciones modelo.
modelo.
Validación
C
valoración m.- del
Concentración método
dedelas real analítico
de las desarrollado
soluciones modelo. para la valoración de lastema. tabletas.
CRm.- Concentración real las tabletas.
soluciones modelo.
Validación Validación
del
Validación método del
del método
analítico analítico
desarrollado desarrollado
para la para
valoración la valoración
de las de
tabletas. las tabletas.
El
El
Validación procesamiento
procesamiento del método
método analítico
estadístico
estadístico
analítico dede desarrollado
loslos
desarrollado resultados
resultados para
para se la sevaloración
realizó
la realizó
valoración con ayuda de
de las tabletas.
las del programa
tabletas.
Validación
Validación
con
El ayuda
procesamiento del
deldel método
método
programa analítico
analítico
estadístico desarrollado
desarrollado
STATGRAPICS
de los resultados para
para se la
la valoración
valoración
Windows
realizó con de
de
ayuda las
las tabletas.
tabletas.
Exactitud:
del programa
El procesamiento
El procesamiento estadístico de
estadísticolos resultados de los se realizó
resultados se conrealizóayuda con delayuda programadel
STATGRAPICS
Validación
El
Validaciónversión delprocesamiento
método 5.1
del
analítico
del
para
método
año
Windows
analítico
estadístico
desarrollado
2001. El de versión
desarrollado
método lospara 5.1
resultadosdel
la valoración
para la
año
para 2001.
la
se realizó
valoración de lasde
El
valoración método
con depara
las
ayuda Para
tabletas. del programa
la valoración
tabletas.
programa
la evaluación de éste parámetro se utilizaron las so-
El
El procesamiento
procesamiento estadístico
estadístico de
deversión los
los año resultados
resultados se realizó con ayuda del programa
STATGRAPICS STATGRAPICS
STATGRAPICS
de
El las
procesamiento para
tabletas Windows para
para
de Windows
versión 5.1
Windows
Vitamina
estadístico B
de del
versióndesarrollado
los 5.1
5.1
resultadosdel
2001.
del Else
año
año
en se métodorealizó
2001.
2001.
el El
El
laboratorio
realizó
conlaayuda
método
para
método
con para
valoración
para
requirió
ayuda
del
la
la
del
programa
valoración
valoración
validación
programa
STATGRAPICS
las
El procesamiento tabletas estadísticode para Vitamina
de Windows
los B1 desarrollado
resultados versiónse5.1realizó
1 del enaño elcon 2001.
laboratorio
ayuda El método
del paraluciones
programa la valoración placebos cargados con IFA equivalentes al 80,
STATGRAPICS
STATGRAPICS para WindowsBversión
paraVitamina 5.1
5.1eldel año 2001. El
El método para la
la valoración
de
de las tabletas
requirió
de
exhaustiva
STATGRAPICS las
las tabletas
de Vitamina
validación
tabletas
considerando de
de BWindows
paraVitamina desarrollado
exhaustiva
1 los
Windows B
parámetros
versióndesarrollado
1 considerando
1 desarrollado
versión ende
5.1 la
del
del
año
Categoríaen
laboratorio
en
año los 2001.
el
el
2001. Ilaboratorio
paráme- requirió
laboratorio
/3/: El
método
método
para100
requirió
validación
requirió
para la
valoración
validación
y 120% de Clorhidrato de Tiamina, realizando diez
validación
valoración
STATGRAPICS de las tabletas
para Windows de Vitamina B
versión 5.1B11deldesarrollado desarrollado
año 2001. Elenmétodo en el laboratorio
para la valoración requirió validación
de las de tabletas de Vitamina en el el laboratorio requirió
réplicasvalidación
para cada concentración. Se construyó la curva
exhaustivatros
de
exhaustiva
de
las
considerando
exhaustiva la Categoría
tabletas
•las Especificidad. losde
considerando
considerando
tabletas
I /3/:
Vitamina
deparámetros
Vitaminalos
los de B1la desarrollado
parámetros
parámetros Categoría
B1 desarrollado de
de la
la Categoría
I /3/:
Categoría laboratorio
en el IIIlaboratorio /3/:
/3/: requirió validación
requirió validación
de las tabletasexhaustiva
• Especificidad. considerando
de Vitamina los
B1 desarrollado parámetros de la Categoría
en deellalaboratorio /3/:
requirió validación de recuperación que incluyó los valores obtenidos para 3
exhaustiva
exhaustiva •• Especificidad. considerando los parámetros
considerando los parámetros de la Categoría I /3/: Categoría I /3/:
• Especificidad.
exhaustiva Especificidad.
considerando los parámetroscon de respecto
larespecto
Categoría aI los/3/:
exhaustiva considerando • SeSe determinó
determinó
Especificidad.
los lala especificidad
parámetros
especificidad
de la Categoría con I /3/:
a los excipientes.
ex- Seniveles
evaluaron depor concentración: bajo (80 %), medio (100 %) y
•• Especificidad.
Especificidad.
Se determinó la especificidad con
Se determinó • cipientes.Se la especificidad
determinó Se evaluaron
la con porrespectotriplicado arespecto
los con solucionesaala los
excipientes. excipientes.
Seprima
pla- evaluaron Se evaluaron
por(120 %).
alto por
deAdemás se calculó el porcentaje de recobra-
• Especificidad.
triplicado
Especificidad.
Se determinó la especificidad
soluciones especificidad placebo con
con respecto
cargadas respecto a los materia
los excipientes.
excipientes. Se
de evaluaron
evaluaron por
Se Clorhidrato por
ceboSe
Se determinó
cargadas
determinó
triplicado la
con
la
soluciones especificidad
la
especificidad materia
placebo con
prima
con
cargadas respecto
de
respecto aala los
Clorhidrato
con los
materiaexcipientes.
de
excipientes. prima Se
Se
de evaluaron
do (R),
evaluaron
Clorhidrato el por
recobrado
por
de medio ( R ) y del coeficiente de varia-
triplicado Tiamina soluciones
triplicado
Se determinó placebo
soluciones
correspondiente cargadas
la especificidad placebo al con con larespecto
cargadas
100% materia
decon alaprima
concentración,materia de prima
Clorhidrato de dela técnica
Se Clorhidrato
utilizando de
Se determinó triplicado
Tiamina soluciones
la especificidad
correspondiente con placebo
respecto
al 100% cargadas
a los con
deexcipientes. la los
concentración, materiaexcipientes. prima
Se evaluaron de evaluaron
Clorhidrato
por totalde(CV).
ción
Criterios
por
de
aceptación: R : 97 – 103% y CV ≤ 3,0%
triplicado
triplicado soluciones
soluciones placebo
placebo cargadas con la materia prima de Clorhidrato de
Tiaminautilizando Tiamina
correspondiente
Tiamina
propuesta.
triplicado correspondiente
la Se
soluciones
técnica al propuesta.
correspondiente
calculó 100% el
placebo al
aldecargadas
100%
100%
porcentaje
cargadas
Se
de
concentración,
de
calculó
con
de
con
la materia
concentración,
concentración,
recuperación
lael utilizando
materia
porcen-
prima
prima vs
detécnica
utilizando
la la
utilizando
de
Clorhidrato
materia la
la
Clorhidrato
Criterios
técnica
técnica
prima
de
de
deaceptación: R : 97 – 103% y CV ≤ 3,0%
triplicado soluciones Tiamina correspondiente
placebo cargadasal con 100% la materia de concentración,
prima de Clorhidrato utilizando de la técnica
Tiamina
Tiamina
propuesta. correspondiente
correspondiente
Se calculó el al 100%
alporcentaje
100% de
dede concentración,
concentración,
recuperación utilizando
utilizando
vs la materia la
la técnica
técnica
prima
propuesta. taje Se
de
propuesta.
certificada calculó
recuperación
Se
aSe
Tiamina correspondiente el
través porcentaje
calculó vs
de la fórmula: la
el de
materia
porcentaje recuperación
prima
al 100% dedeconcentración, de certificada
recuperaciónvs la materia
a vs la
utilizando prima
materia prima
la técnica
Tiamina través propuesta.
correspondiente calculó
al 100%el deporcentaje
concentración, recuperación
utilizando vs la Además,
la técnica materia prima
seserealizó la prueba G deGCochran, para determinar si el factor concentració
propuesta. Se
de ladeafórmula: calculó el
el porcentaje
porcentaje de de recuperación
recuperación vs vs la la materia
Además,prima realizó la prueba de Cochran, para deter-
certificadapropuesta. certificada
a través
certificada
propuesta. aSe
Setravés
la
travéscalculó
fórmula:
calculóde
de la
la fórmula:
fórmula:
el porcentaje M de recuperación vs la
materia
materia
prima
prima

propuesta. certificada
Se calculó a través
el de la fórmula:
porcentaje de R= recuperación * 100 (3) vs la materia minar
prima si el factor concentración tiene alguna influencia en
tiene alguna influencia en la variabilidad de la concentración en todos los niveles d
certificada
certificada aa través través de de la la fórmula:
fórmula:
certificada a través de la fórmula: M R=M MP (3) la variabilidad de la concentración en todos los niveles de
certificada a través de la fórmula:R = P * 100 R = M(3)*
(3) * 100
100 (3) concentración.
Donde: M: porcentaje de IFA recuperado R=M MP
P * 100 en (3)
las muestras ensayadas. concentración.
R
R=M = * 100
P * 100 (3) (3)
MIFA Ren= las P * 100
P (3) Si G exp < Gtab las

Donde: M:Donde:
Donde: porcentaje
Donde: M:
M:
P: porcentaje
M:porcentaje
porcentaje
de IFA Rrecuperado
porcentaje =
dede
de de
IFA
IFA * 100recuperado
IFA (3)
recuperado
teórico recuperado
P de muestras
la en
en las
las
materia muestras
en
ensayadas.
muestras
prima lasde ensayadas.
ensayadas. Si
referencia. varianzasde
las varianzas delas
lastres
tresconcentraciones
concentraciones son son
equivalentes, o lo que e
Donde: M:
muestras porcentaje dePIFA recuperado en las muestras ensayadas.
ensayadas. equivalentes, o lo que es igual, el factor concentración no
Donde: M: porcentaje de IFA recuperado en las muestras ensayadas.
P:Donde:
porcentaje M:
P:
P: porcentaje
porcentaje
de IFA
porcentaje teórico de
dede
deIFA
IFA
IFA de recuperado
teórico
la
teórico materia de
de la en
prima las
materia muestras
de prima
referencia. ensayadas.
de referencia.
igual, el factor concentración no influye en la variabilidad de los resultados.

Donde:
Donde: M:
M: porcentaje P:
P: porcentaje
porcentaje
deporcentaje
IFA de
recuperado
IFAIFA
IFA
de recuperado
teórico
en teórico
las de la
muestras la enmateria
de las
materia la prima
prima de
muestras
materia
ensayadas.
referencia.
ensayadas.
de referencia.
influye en la variabilidad de los resultados.
P: porcentaje
porcentaje de
P:referencia. de IFA IFA teóricoteórico de de la la materia
materia prima prima de de referencia.
referencia.
Se utilizó primaelde programa
P: porcentaje estadísticode IFA teórico antes mencionadode la materiapara primarealizar el Por
de referencia. Por último
último
cálculo dese selaaplicó
aplicólalaprueba
pruebat det deStudent
Studentpara demostrar
para que no existen diferencia
demostrar
P: porcentaje de IFA teórico de la materia prima de referencia.
Se
Se utilizómedia, utilizó
el utilizó programa el programa
estadístico estadístico
antesy mencionado antes mencionadopara de realizar para realizar
elrealizar
cálculo el que
cálculo
decálculono
lalaprueba existen
de la diferencias significativas entre el valor me-
Se
Se utilizó
Se utilizó el
la desviación programa
el programa
el programa estadístico
estándar
estadístico
estadístico
el antes
coeficiente
antes mencionado
antesmencionado
mencionado
para
variación.
para para
Se
realizar el significativas
el
realizó cálculo
dio de
de
de de
recobrado laentre elobtenido
la valor medio de recobrado obtenido y el 100%.
y el 100%.
Se
Se utilizó el
el programa
programa estadístico
estadístico antes
antes mencionado
mencionado para
para realizar
realizar el
el cálculo
cálculo de
de la
la
media, la media,
media,desviación la
la desviación
estándar yestándar
el coeficientey el coeficiente
de variación. de variación.
Se realizó Sela realizó
prueba lade prueba de
Se
media,
Se utilizó realizar
el
utilizó
programa lael desviación
el programa
desviación
cálculo
estadísticodeestándar
la estadístico
estándarmedia,
antes
yy la el
mencionado
coeficiente
el antes
coeficiente
desviación mencionado
para
de
de
estándar variación.
paray realizar
variación.
realizar el elSe
Se realizó
cálculo realizó
de
la
la prueba
el cálculo
la prueba de de la
de
media,
media, la la desviación
desviación estándar
estándar y el el coeficiente de variación. Se realizó
realizó la la• prueba
Precisión. de
de Se evaluó en función de la repetibilidad y la precisión intermedia.
coeficiente
media, la desviación de variación. estándar Se yyrealizó coeficiente
la prueba
el coeficiente
dede variación.
de variación. normali-Se Se realizó• Precisión.
prueba
la prueba de Se evaluó en función de la repetibilidad y
media, la desviación estándar y el coeficiente de variación. Se realizó la prueba- de Repetibilidad: Se analizaron 10 réplicas de los 3 niveles de concentració
dad a través del test de Kolmogorov- Smirnov y una prue- la precisión intermedia.
ba de hipótesis de comparación de medias a través de la - Repetibilidad:
utilizados para evaluar Se analizaron
la exactitud.10 Se réplicas de cada
calculó para los 3punto el coeficiente d
t de Student. Las desviaciones típicas se compararon a niveles de concentración utilizados para evaluar la
variación (CV). Estas determinaciones se realizaron por el mismo analista en la
través de una prueba de contraste F. exactitud. Se calculó para cada punto el coeficiente
Criterio: El método se consideró específico si la respuesta mismas
de variación condiciones (CV).deEstas
trabajo.determinaciones
CV ≤ 2,0 %. se realiza-
del placebo no difiere significativamente del blanco y si - Precisión intermedia. Se prepararon nuevas soluciones modelo con las mism
materias primas e iguales concentraciones. Participaron 2 analistas en 2 dí
diferentes. Los resultados se evaluaron estadísticamente mediante un análisis d

288 varianza para la LXXI,

AFINIDAD que se 568,
realizó la prueba
Octubre de Tukey o2014
- Diciembre de diferencias francamen
significativas y se calculó el CV, el cual debe ser ≤ 2,0 %.
 ron por el mismo analista en las mismas condiciones
de trabajo. CV ≤ 2,0 %.
- Precisión intermedia. Se prepararon nuevas so-
luciones modelo con las mismas materias primas e
iguales concentraciones. Participaron 2 analistas en
2 días diferentes. Los resultados se evaluaron esta-
dísticamente mediante un análisis de varianza para
la que se realizó la prueba de Tukey o de diferencias
francamente significativas y se calculó el CV, el cual
debe ser ≤ 2,0 %.
• Rango.
Se definió como el intervalo entre los niveles superio-
res e inferiores en que se cumplieron los requerimien-
tos de precisión, exactitud y linealidad del método.
La Fig. 1 muestra las curvas de calibración correspondien-
tes a la determinación de la linealidad del sistema (Fig.1A)
y del método (Fig. 1B). En la Tabla 2 se resumen los re-
sultados del procesamiento estadístico aplicado, lo cual
refleja el cumplimiento de todos los criterios establecidos,
demostrando la proporcionalidad existente entre concen-
tración de analito y la respuesta medida en cada caso.
Tal es el caso de los valores de r y r2 muy próximos a la
unidad; los coeficientes de variación de los factores res-
puesta menores de 5 % y los intervalos que incluyeron el
cero, cumpliendo con la condición de proporcionalidad.

Evaluación de la linealidad del sistema para aplicación

del método al ensayo de uniformidad de contenido.
Se utilizaron las soluciones modelos considerando el in-
tervalo de concentraciones desde 70 - 130%. Se verificó
el cumplimiento de la linealidad del sistema, teniendo en
cuenta los mismos criterios de aceptación descritos con
anterioridad.
Aplicación de los métodos analíticos al control de cali- A
dad de tabletas de Vitamina B1 50 mg.
Se evaluaron lotes producidos de tabletas de Vitamina B1
50 mg elaborados en la Empresa Laboratorio Farmacéu-
tico Oriente, durante 12 meses. Se aplicaron los ensayos
de valoración y uniformidad de contenido. Los criterios de
aceptación fueron los establecidos en la Farmacopea USP
32 /3,6/.

DISCUSIÓN Y RESULTADOS

En la Tabla 1 se resumen los valores promedios obtenidos

en el ensayo de especificidad para el método espectro- B
fotométrico. Como se puede observar ni el placebo ni el Fig 1: Curvas de calibración para la lineali-
blanco dieron respuesta analítica cuantificable en el rango dad del sistema (A) y del método (B).
de interés analítico para el Clorhidrato de Tiamina. Al com-
parar los resultados del análisis del Clorhidrato de Tiamina Tabla 2: Resumen estadístico de los resultados obtenidos
al 100% de concentración, con el placebo cargado con el en el ensayo de linealidad del sistema y del método.
analito en esta misma concentración, los valores fueron
concordantes. Al comparar las medias se obtuvo que el Parámetro Linealidad del sistema Linealidad del método
p-valor calculado es mayor que 0,05 lo cual indica que Ecuación de la recta Absorbancia = 0,001275 Conc real = 0,680124 +
no hay diferencias entre las medias obtenidas para un ni- + 0,003702*Conc 0,993913*Conc teórica
vel de confianza del 95,0%. Al comparar el radio de las Coeficiente de 0,9999 0,9988
correlación lineal (r)
desviaciones típicas de las poblaciones de las que proce-
Coeficiente de 0,9998 0,9976
den las dos muestras, el p-valor calculado no fue inferior determinación (r2)
a 0,05 por lo que no hay diferencias significativas entre Error absoluto 0,0004 0,5288
las desviaciones típicas de las muestras para un nivel de de la media
confianza del 95,0%. Los placebos cargados no difieren Estadístico 2,0889 (P=0,3256) 2,5020 (P=0,0641)
significativamente de la solución de referencia por lo que Durbin-Watson
el método se consideró suficientemente específico para Significación P valor Experi- P valor experi-
del intercepto mental=0,2653 mental=0,5468
control de calidad. para α = 0,05 texp=-0342< t tab =2,07 texp= 0,61 < t tab =2,07
Intervalo de confianza (-0,001; 0,004) (-1,690; 2,980)
Tabla 1: Resultados del estudio de la especificidad. del intercepto
Concentración Recobrado Coeficiente de varia- 2,200 % 0,670 %
Muestra a evaluar Media (%) medio (%) ción de los factores
respuesta (CVf)
Clorhidrato de Tiamina MP 100,02 100,02
Clorhidrato de Tiami- *Conc: concentración
100,04 100,04
na MP + Placebo
*exp: experimental
Placebo 0,0020 0,00
*tab: tabulada
Blanco de reactivo 0,0005 0,00
Prueba t t = -0,239 p-valor = 0,817
Igualmente para la exactitud los resultados fueron satis-
Prueba F F = 0,9444 p-valor = 0,957
factorios, ya que se observa que todos los por cientos de
MP: materia prima

AFINIDAD LXXI, 568, Octubre - Diciembre 2014 289

 Tabla 3: Resultados del ensayo de exactitud para las concentraciones estudiadas.

Concentración 80% Concentración 100% Concentración 120%

R R R Conc R Conc R Conc R
Conc (%) Conc (%) Conc (%)
(%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%)
80,2 100,2 80,8 101,0 100,1 101,1 100,0 100,0 119,0 100,0 119,2 99,33
79,9 99,88 79,4 99,25 99,7 99,7 101,6 101,6 120,1 100,2 119,0 100,0
80,2 100,2 80,2 100,2 99,7 99,7 99,7 99,7 120,3 100,5 120,1 100,2
78,6 98,25 80,2 100,2 101,6 101,6 101,1 101,1 120,6 99,33 120,3 100,5
80,8 101,0 79,9 99,88 100,0 100,0 99,7 99,7 100,0 100,0 100,0 100,0
R medio = 100,02% R medio =100,3% R medio = 99,69%
C.V = 0,81% C.V = 0,79% C.V = 0,52%
t= 0,10 t= 1,61 t= 0,25
Valor-P= 0,92 Valor-P= 0,14 Valor-P=0,82
IC = 99,45-100,60 IC = 99,83-101,01 IC =99,65-100,43
%R medio global = 100,03% Criterio = 97-103%
Intervalo de Confianza= 99,74 -100,32%
CV global = 0,70% Criterio ≤ 3,0%
Resultados del ANOVA: Razón F = 0,89 ; Valor-P= 0,42 (entre e inter grupos)
Contraste %rec 100 - % rec 120 Diferencia=0,38; Límite=0,72
Contraste %rec 100 - % rec 80 Diferencia=0,39; Límite=0,72
Contraste %rec 100 - % rec 80 Diferencia=0,38; Límite=0,72
G de Cochran Prueba =0,445 Valor-P =0,632
t de Students: H0: media= 100 t exp = 0,242
H alternativa: media <> 100 P-Valor = 0,81 > 0,05
No se puede rechazar la hipótesis nula (H0)
*Conc: concentración
*Abs: absorbancia
*R: Recobrado
*CV: Coeficiente de variación
*IC: Intervalo de confianza

Tabla 4: Resultados de la precisión del método.

Ensayo Parámetro/ Prueba 80% 100% 120%

Repetibilidad CV (%) 1,31 0,62 0,54
Precisión ANOVA Cociente F= 0,85 Cociente F= 0,19 Cociente F= 2,64
intermedia (Varianza) P-valor=0,50 P-valor= 0,90 P-valor= 0,12
Contraste G de Cochran= 0,50 G de Cochran= 0,41 G de Cochran = 0,48
p-valor =0,49 p-valor = 0,83 p-valor= 0,55

recobrados y los CV cumplieron con los criterios de acep-
tación establecidos (Tabla 3). Se comprobó que los datos
de % de recuperación responden a una distribución nor-
mal con un nivel de confianza mayor o igual al 95%, cal-
culada por el estadígrafo de Kolmogorov- Smirnov donde
el p-valor más pequeño fue mayor de 0,10. Se aplicó el
Test de Cochran para determinar si el factor concentra-
ción influyó en los resultados y se obtuvo un valor de G
de 0,445 y el p-valor de 0,632 lo que demuestra que las
varianzas de las tres concentraciones fueron equivalentes,
o sea, que el factor concentración no influyó en la variabili-
dad de los resultados. Al realizar la prueba de significación
de Student para los resultados obtenidos, t experimental
fue de 0,242 y el p-valor de 0,811 por lo que no existieron
diferencias significativas entre la recuperación media y el
100%, confirmando la buena exactitud del método.
El análisis de la repetibilidad se realizó siguiendo fielmen-
te las condiciones exigidas en el desarrollo de la técni-
ca analítica. En la Tabla 4 se resumen los resultados del
análisis estadístico realizado, los cuáles muestran que el
coeficiente de variación fue menor de 2% en cada nivel de
concentración estudiado para la repetibilidad.
El procedimiento empleado demostró que las varianzas
fueron homogéneas y se puede afirmar que no hay di-
ferencias significativas entre las muestras evaluadas para
cada nivel de concentración. Con la prueba de Cochran
se comprobó que no hay diferencias significativas entre
las desviaciones típicas dentro de cada una de las con-
centraciones estudiadas ya que el menor de los p-valores
fue superior a 0,05.
Para la linealidad del sistema, las desviaciones estándares
relativas fueron menores del 2% para cada una de las
concentraciones evaluadas (70, 90, 100, 110 y 130%).
Además se construyó la curva de calibración correspon-
diente y los resultados de los 50 puntos experimentales
(5 concentraciones con 10 réplicas cada uno) fueron pro-
cesados estadísticamente por regresión lineal. El cumpli-
miento satisfactorio de todos los criterios avaló la lineali-
dad del método en el rango deseado para su aplicación
en el ensayo de uniformidad de contenido. Se obtuvo la
siguiente ecuación de la recta:
Y = 0,9917x + 0,7090, siendo r = 0,9975 y r2 = 0,9949, el
intercepto no difiere significativamente de cero ya que t
experimental = 0,6895 fue inferior a la tabulada (2,0107)
para 48 grados de libertad. La pendiente es próxima a la

290 AFINIDAD LXXI, 568, Octubre - Diciembre 2014

 unidad, avalado por un valor de p = 0,0000 < 0,05 y el CVf determinación del analito, lo cual concuerda con otros es-
= 0,60 no superó el 5% establecido como límite. tudios realizados donde se plantean que la mayoría de los
En la Fig. 2 se presenta el comportamiento del parámetro excipientes que se utilizan en producción de tabletas, no
concentración de analito, obtenido por el método desarro- interfieren en la determinación de Tiamina por el método
llado y validado para el control de calidad de las tabletas del tiocromo /10/.
de Clorhidrato de Tiamina. Todos los lotes del producto El conjunto de resultados alcanzados para los ensayos de
terminado evaluados respondieron satisfactoriamente a linealidad demuestran que los puntos experimentales se
las especificaciones de calidad establecidas / 6/. encontraban cercanos a la ecuación calculada al consi-
derar el modelo de regresión lineal como el mejor ajuste a
estos puntos. Este mismo comportamiento obtenido para
la curva de recuperación del ensayo de exactitud avala la
ausencia de errores sistemáticos.
El análisis de la precisión permite afirmar que los errores
aleatorios no tienen un impacto directo en los resultados
experimentales derivados de la aplicación del método de-
sarrollado.
A Las tabletas de Vitamina B1 que se producen en el Labo-
A ratorio Farmacéutico Oriente tienen como masa promedio
220 mg y 50 mg de dosis por lo que se aplica para el
15 UCL = 13,6
ensayo de uniformidad de contenido el mismo método es-
MR(2)
12 CTR = 4,2 pectrofotométrico que se utiliza en el ensayo de valoración
9
LCL = 0,0 /11/.
6 La ausencia de síntomas de falta de aleatoriedad debidos
3 a la incidencia de causas asignables, demuestra que el
0
parámetro analizado muestra un patrón bajo control es-
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
tadístico, debido solo a la variabilidad natural inherente al
proceso.
*MR(2):
*MR(2): medianadel
mediana del rango
rango
B
B
Fig 2: Gráfico de control de datos individuales para la concentración de Clorhidrato de CONCLUSIONES
Tiamina en las tabletas obtenida al aplicar el método desarrollado y validado para
control deFig 2: Gráfico
calidad a 20 lotesde controlGráfico
industriales. de datos individuales
de media (A) y gráficopara la del
de mediana
rango (B)concentración de Clorhidrato de Tiamina en las table- El método espectrofotométrico desarrollado para la valo-
tas obtenida al aplicar el método desarrollado y validado ración de las tabletas de Vitamina B1 50 mg, resultó válido,
Además para control
de encontrar delos
todos calidad
puntos a 20 lotes
dentro de losindustriales. Gráfico
límites de control, tanto para la ya que los parámetros de linealidad, precisión, exactitud y
de media
tendencia central (A) y gráfico
(concentración) de mediana
como para deldispersión
el gráfico de rango (B) (Mediana del especificidad cumplieron los criterios de aceptación pro-
rango = MR(2)), no se detectan signos de falta de aleatoriedad. Estos resultados puestos en la literatura especializada para éstos fines.
Además
corroboran de encontrar
la consistencia todos
del proceso los
estudiado. puntos dentro de los lí-
mites de
La Tiamina control,
presenta tantoabsorción
una marcada para laentendencia central
la región ultravioleta del(concen-
espectro, que
tración)
depende del pHcomo para Ésta
de la solución. el gráfico de dispersión
propiedad puede (Mediana
aplicarse al análisis delde
cuantitativo BIBLIOGRAFÍA
rango = MR(2)), no se detectan signos de falta de alea-
Tiamina en soluciones puras /7/ ya que éste método de análisis no es selectivo, porque
toriedad. Estos resultados corroboran la consistencia del 1. OMS. Guía de la Organización Mundial de la Salud
existen muchos compuestos que absorben en la misma región del ultravioleta. Como las
proceso estudiado. sobre los requisitos de las prácticas adecuadas de
La Tiamina presenta una marcada absorción en la región fabricación (PAF).Segunda parte. Validación. Ginebra.
ultravioleta del espectro, que depende del pH de la so- Suiza. 1998.
lución. Ésta propiedad puede aplicarse al análisis cuan- 2. Guía para la validación de métodos de ensayos quí-
titativo de Tiamina en soluciones puras /7/ ya que éste micos para alimentos. NC- TS- 368: 2004. 1ra Edición.
método de análisis no es selectivo, porque existen mu- Abril. 2004.
chos compuestos que absorben en la misma región del 3. United States Pharmacopoeia. United Stated Phar-
ultravioleta. Como las tabletas de vitamina B1 tienen en su macopoeia Convention Edition 32. USA. 2009.
composición un solo ingrediente farmacéutico activo (IFA). USP32–NF27. p 3719.
La medida de la absorción del tiocromo se puede realizar 4. British Pharmacopoeia (BP). Her Majesty Stationary
tanto en solución acuosa alcalina, como en extracto iso- Office. London; UK 2009. p10149 (Mark electronic).
butanólico de la misma /8- 10/. 5. Expediente Maestro de fabricación de tabletas de Vi-
El método espectrofotométrico seleccionado aunque es tamina B1. EM 01. 009. Edición 01. Laboratorio Far-
mucho menos sensible que el fluorométrico reportado macéutico Oriente. 2010.
como método oficial /3,4/ tiene como ventaja que es una 6. Especificaciones de Calidad, Tabletas de Vitamina B 1
técnica diferencial, lo que le aporta una cierta especifici- 50 mg. Esp. 11 .003T. Edición. 01. Laboratorio. Orien-
dad frente a los excipientes y productos de degradación, te. Junio, 2011.
fundamentalmente debido al producto formado por oxi- 7. Doherty, J.J.; Cane, N. F. “Thiamine Hydrochloride
dación (tiocromo). Éste complejo formado absorbe en la Injection”. Workes Pharmacy Pharmacol. 1955,7,
región UV, lo que permite que se pueda determinar el con- p1053.
tenido del principio activo con facilidad en las tabletas de 8. Departamento de la Agricultura. Análisis de Vitami-
Vitamina B1 50 mg. na en Alimentos - FAO [citado el 20 de octubre del
A partir del análisis estadístico del ensayo de especifici- 2010]. Disponible en: http://www.fao.org
dad se confirmó que los excipientes no interfirieron en la

AFINIDAD LXXI, 568, Octubre - Diciembre 2014 291

9. Jansen B. “Determinación de Tiamina”. Anal.
Chim.1980, 52, p 2177-2184.
10. Connors K. A.; Godon L. A. Chemical Stability of
Pharmaceuticals. Text Book for pharmacists. New
York: A Wiley –Intersciencie. Publication 1979, 318 p.
11. Uniformidad de contenido de Clorhidrato de Tiamina
para Tabletas de Vitamina B1. INS 03.97T. Edición.
01. Laboratorio. Oriente. Julio, 2011.

292 AFINIDAD LXXI, 568, Octubre - Diciembre 2014