EXTRACCIÓN DE ADN

A. ASSIA, A. TORDECILLA.
Facultad de educación y ciencias
programa de biología
Universidad de Sucre, Sincelejo

RESUMEN
La técnica de extracción de Ácidos Nucleicos en eucariotas, está relacionada con su
ubicación en el núcleo celular y las propiedades físicas y químicas de todas las biomoléculas
celulares. Es preciso desorganizar la estructura de paredes y membranas para liberar los
Ácidos Nucleicos. Por mecanismos mecánicos y posteriormente químicos a través de la
solución de lisis, se actúa sobre las paredes y las estructuras lipoproteicas de las membranas.
Se extraen de la mezcla de fragmentos celulares con alcoholes específicos, en los que los
Ácidos Nucleicos no son solubles. En el presente informe se muestran los resultados
obtenidos en la practica sobre extracción de ADN y los respectivos análisis que permitirán
una mejor compresión sobre este proceso.
PALABRAS CLAVE: ADN, extracción, ácidos nucleicos,fibras,cromatina.
1.INTRODUCCIÓN
El Ácido Desoxirribonucleico o ADN (DNA) es la molécula que guarda el código genético
de todas las células. Sin importar que el organismo sea multicelular o unicelular, eucariota o
procariota, todos tienen el ADN como vehículo de su código genético. Muchas de las técnicas
de biología molecular incluyen algún tipo de manipulación del material genético. Estos
procedimientos han logrado adelantar hasta tal grado el conocimiento del código genético,
que ya es posible clonar organismos enteros. Los procedimientos iniciales eran largos y
tediosos y podían pasar varios días antes de saber con certeza que se había logrado obtener
ADN en calidad y cantidad suficiente para poder manipularlo. Además, algunos de los
reactivos usados para estos procesos eran tóxicos y mutagénicos. Actualmente, las técnicas
y los métodos han avanzado y especializado, de manera tal que, se puede realizar la
extracción de ADN de un tejido específico de una forma rápida y sencilla. Algunos métodos
son altamente técnicos y especiales; sin embargo, existe un patrón básico en las etapas del
procedimiento, este patrón fue el aplicado en la práctica.
Los Ácidos Nucleicos son grandes polímeros formados por la repetición de monómeros
denominados Nucleótidos, unidos mediante enlaces Fosfodiéster. Se forman, así, largas
cadenas; algunas moléculas de Ácidos Nucleicos llegan a alcanzar tamaños gigantescos, con
millones de Nucleótidos encadenados. Los Ácidos Nucleicos almacenan la información
genética de los organismos vivos y son los responsables de la transmisión hereditaria. Existen
dos tipos básicos, el ADN y el ARN.

El descubrimiento de los Ácidos Nucleicos se debe a Friedrich Miescher, quien en el año

1869 aisló de los núcleos de las células una sustancia ácida a la que llamó nucleína [1],
nombre que posteriormente se cambió a Ácido Nucleico. Posteriormente, en 1953, James
Watson y Francis Crick descubrieron la estructura del ADN, empleando la técnica de
difracción de rayos X.

Existen dos tipos de Ácidos Nucleicos: ADN (Ácido Desoxirribonucleico) y ARN (Ácido
Ribonucleico), que se diferencian:

- Por el Glúcido (la Pentosa es diferente en cada uno; Ribosa en el ARN y Desoxirribosa
en el ADN).
- Por las Bases Nitrogenadas: Adenina, Guanina, Citosina y Timina, en el ADN; Adenina,
Guanina, Citosina y Uracilo, en el ARN;
- En la inmensa mayoría de organismos del cuerpo humano, el ADN es bicatenario (dos
cadenas unidas formando una doble hélice), mientras que el ARN es monocatenario (una
sola cadena), aunque puede presentarse en forma extendida, como el ARNm, o en forma
plegada, como el ARNt y el ARNr;
- En la masa molecular: la del ADN es generalmente mayor que la del ARN.

Las unidades que forman los Ácidos Nucleicos son los Nucleótidos. Cada Nucleótido es una
molécula compuesta por la unión de tres unidades: un Monosacárido de cinco Carbonos (una
Pentosa, Ribosa en el ARN y Desoxirribosa en el ADN), una Base Nitrogenada Purínica
(Adenina, Guanina) o Pirimidínica (Citosina, Timina o Uracilo) y un grupo Fosfato (Ácido
Fosfórico). Tanto la Base Nitrogenada como los grupos Fosfato están unidos a la Pentosa.

La unidad formada por el enlace de la Pentosa y de la Base Nitrogenada se denomina

Nucleósido. El conjunto formado por un Nucleósido y uno o varios grupos Fosfato unidos al
carbono 5' de la Pentosa recibe el nombre de Nucleótido. Se denomina Nucleótido-
Monofosfato (como el AMP) cuando hay un solo grupo Fosfato, Nucleótido-Difosfato (como
el ADP) si lleva dos y Nucleótido-Trifosfato (como el ATP) si lleva tres.

El ADN es bicatenario, está constituido por dos cadenas polinucleotídicas unidas entre sí en
toda su longitud. Esta doble cadena puede disponerse en forma lineal (ADN del núcleo de
las células eucarióticas) o en forma circular (ADN de las células procarióticas, así como de
las mitocondrias y cloroplastos eucarióticos). La molécula de ADN porta la información
necesaria para el desarrollo de las características biológicas de un individuo y contiene los
mensajes e instrucciones para que las células realicen sus funciones. Dependiendo de la
composición del ADN (refiriéndose a composición como la secuencia particular de bases),
puede desnaturalizarse o romperse los puentes de Hidrógeno entre bases pasando a ADN de
cadena simple o ADNsc abreviadamente. Excepcionalmente, el ADN de algunos virus es
monocatenario.

El ADN posee varias estructuras, a saber:

- Estructura primaria: una cadena de Desoxirribonucleótidos (Monocatenario) es decir,
está formado por un solo Polinucleótido, sin cadena complementaria. No es funcional,
excepto en algunos virus.
- Estructura secundaria: doble hélice, estructura Bicatenaria, dos cadenas de Nucleótidos
complementarias, antiparalelas, unidas entre sí por las bases nitrogenadas por medio de
puentes de Hidrógeno. Está enrollada helicoidalmente en torno a un eje imaginario. Hay
tres tipos:

• Doble hélice A, con giro dextrógiro, pero las vueltas se encuentran en un plano
inclinado (ADN no codificante).
• Doble hélice B, con giro dextrógiro, vueltas perpendiculares (ADN funcional).
• Doble hélice Z, con giro levógiro, vueltas perpendiculares (no funcional); se
encuentra presente en los parvovirus.

Hoy día se puede obtener suficiente ADN de buena calidad en unas horas, para lo cual existen
diversos procedimientos y métodos; sin embargo, la extracción de ADN requiere hacer varias
series de etapas básicas. En primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana
plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último, hay que proteger el ADN de enzimas
que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es
soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface
entre el alcohol y el agua. Además de permitir ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de
las proteínas al ADN.
2.MATERIALES Y MÉTODOS
Se trituró medio hígado de pollo en un mortero, al cual se añadió arena para que al triturar se
pudieran romper las membranas y los núcleos quedasen sueltos. Luego se añadió al triturado
50 cm3 de agua y se removió hasta hacer una especie de papilla o puré. Se filtró varias veces
sobre una tela para separar los restos de tejidos que quedaron sin romper.
Se midió el volumen filtrado con una probeta y se añadió un volumen igual de NaCl 2M.
Esto con el fin de producir un estallido de los núcleos y que las fibras de cromatina pudiesen
quedar libres. Seguido a esto se añadió 1 cm3 de SDS. Luego se añadió mediante una pipeta
50 centímetros cúbicos de alcohol al 96 %, por las paredes del vaso. Por último, se introdujo
una varilla de vidrio y se fue removiendo en la misma dirección, con el fin de que se fueran
adhiriendo unas fibras blancas visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación
de muchas fibras de ADN.
3.RESULTADOS

Alcohol

Interfase

Sedimentado

Fotografía 1. Fases formadas en el contenido del vaso al agregar el Etanol comercial.

Tómese en cuenta la primera fase como el Alcohol, mientras que la segunda como el filtrado
obtenido del tejido estudiado (hígado), en la interfase entre estas dos fases se encontraba el
precipitado correspondiente al ADN.

Fotografía 2. Fibras de ADN en presencia de luz ultravioleta.

Al introducir la varilla de vidrio en el contenido del vaso e ir removiendo el ADN en la misma
dirección, se observó que sobre esta se iban adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple
vista, las cuales correspondían a la agrupación de muchas fibras de ADN. La presencia de
ADN extraído fue confirmada mediante la observación de la fluorescencia, al exponer a la
lámpara de luz ultravioleta con onda larga.
4. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La extracción de ADN es un proceso vital con muchas aplicaciones científicas. En la
investigación y la medicina, sus usos incluyen secuenciación del ADN, la detección de los
virus y las bacterias, y la investigación de enfermedades y trastornos con base genética. En
el campo de la ciencia forense, es utilizado para la identificación de los muertos y los vivos,
así como el análisis de la escena de crimen. A pesar de sus resultados sofisticados, la
extracción de ADN es en realidad muy simple, y las técnicas de extracción básicas funcionan
igual de bien en un laboratorio de investigación o en casa. La extracción de ADN comienza
con la obtención de una muestra de ADN. Dado que todos los organismos vivos contienen
ADN, las opciones disponibles para la muestra son prácticamente infinitas, y la elección por
lo general se relaciona directamente con el tema del objeto de estudio. El ADN humano es
fácil de obtener por pequeños toques en el interior de la mejilla con un hisopo de algodón.
Las muestras de plantas pueden ser adquiridas cortando una sección del material de origen
[2]. El uso de hígado de pollo como tejido animal de estudio en la práctica fue por su
disponibilidad y facilidad de empleo. El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular,
disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina, por lo cual, la
extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar, tienen que romperse
la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A
continuación, debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por
último, hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que
hacer que precipite en alcohol [3].
En la práctica, triturar en frío la muestra de hígado en el mortero junto con arena o mediante
la batidora permitió homogeneizar el tejido. Este procedimiento también debió romper
muchas células liberando su contenido. Algunos autores afirman que parece ser más eficaz
el empleo de una batidora, con la que se obtiene una mezcla más homogénea y fácil de filtrar
después. Filtrar varias veces del resultado a través de un pedazo de tela, aunque lento y difícil,
permitió retener en el pañuelo restos de tejido, que, si hubiesen quedado en el vaso, no
hubiesen permitido un buen resultado final. Agregar solución de Cloruro de Sodio (2 M) tuvo
varios efectos por su alta concentración. En primer lugar, provocó un choque osmótico capaz
de romper algunas membranas no afectadas por el tratamiento anterior. Además, las cargas
positivas de los iones Sodio funcionaron como elemento de atracción a las cargas negativas
del ADN, manteniéndolo en la disolución. Por otra parte, el Dodecilsulfato Sódico o SDS,
contenido también detergentes (tipo Mistol o Woolite) completó la rotura de las membranas
al disolver y separar los Lípidos de las mismas. También intervino en la separación de las
Proteínas que rodean al ADN. Con el procedimiento anterior se consiguió tener el ADN libre
en la disolución acuosa (la cual contenía también diversos restos tisulares y celulares en
función de la bondad del filtrado). Sin embargo, no se encontraba el ADN separado, por lo
cual fue necesario precipitarlo añadiendo alcohol muy frío, para formar una capa sobre la
solución anterior. Fue muy importante evitar que se mezclaran ambas soluciones, pues fue
en la interfase donde precipitó el ADN. El uso de alcohol para precipitación se debe a una
razón muy simple: a menor temperatura menor solubilidad. El ADN es muy poco soluble en
Etanol (por polaridad), y menos aún en Etanol frío, por lo que precipitó más rápido. El ADN
apareció poco a poco en la interfase agua-alcohol en forma de grumos blancos, estas hebras
blancas y largas correspondían a la agrupación de muchas fibras de ADN. La recolección del
ADN desde la interfase se realizó con la varilla de vidrio, pues, el ADN presenta mucha
afinidad por el vidrio, así se fueron pegando en la varilla unas hebras blancas que
correspondían a miles de fibras de ADN [4].
Si bien, el producto filamentoso obtenido de la extracción no fue ADN puro, ya que,
entremezclado con él, debían fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza
añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene Lauril Sulfato de Sodio,
el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el
protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (Lípidos) y las Proteínas que
constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas
se han roto, el ADN es liberado.
Este ADN extraído pudo ser corroborado con la luz ultravioleta de la lámpara UV a onda
larga. La radiación ultravioleta, al iluminar ciertos materiales, se hace visible debido al
fenómeno denominado fluorescencia. Este método es usado comúnmente para autenticar
antigüedades y billetes, pues es un método de examen no invasivo y no destructivo. En
estructuras metálicas, se suele aplicar líquidos fluorescentes para después iluminarla con una
luz negra, y así detectar grietas y otros defectos. En ciencia forense, la luz negra se usa para
detectar rastros de sangre, orina, semen y saliva (entre otras sustancias que contengan ADN),
causando que estos líquidos adquieran fluorescencia.
5.CONCLUSIONES
• El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado,
unido a proteínas para formar la Cromatina. Así, para extraerlo es necesario
homogeneizar el tejido y romper las células para separar el núcleo, romper también
la envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las proteínas
que lo protegen y, por último, precipitarlo para extraerlo de la solución.
• El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto como
la interfase entre la fase de Alcohol y la del filtrado.
• Las sales caotrópicas como el Cloruro de Sodio ayudan a romper la estructura
tridimensional de los Ácidos Nucleicos, consiguiendo su desnaturalización.
• La adición de un detergente como el SDS es necesaria para eliminar las
membranas.
• Además de permitir ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes
celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.
• El ADN extraído aparece como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren
a la varilla de vidrio por afinidad.
• El producto filamentoso obtenido de la extracción no fue ADN puro, ya que,
entremezclado con él, debía haber fragmentos de ARN.

6.BIBLIOGRAFÍA
[1] Dahm, R. (2008); Discovering DNA: Friedrich Miescher and the early years of nucleic
acid research, págs. 565–581; Human Genetics; Estados Unidos.
[2] Tomado de la página oficial de eHOW en Español (http://www.ehowenespanol.com/pasos-
extraccion-adn-como_143739/), el día 18 de octubre de 2014, a las 10:25 a.m.

[3] Noriega, J. (2014); Extracción de ADN; Instituto de Educación secundaria “Juana de

Pimentel”; España.
[4] Desconocido (2014); Extracción de ADN; Ministerio de Educación, Cultura y Deporte –
Instituto Nacional de Tecnologías Educativas y de Formación del Profesorado; España.
Tomado de la página de educaLAB
(http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/bio/ADN/adn/ppal.htm).