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Directora:
Ph. D. María Soledad Hernández Gómez
Instituto de Ciencia y Tecnología de alimentos ICTA
Codirector:
M. Sc. Rafael Humberto Gutiérrez Bravo
Universidad Central de Venezuela
DIRECTORA DE TESIS
CO-DIRECTOR DE TESIS
iii
TABLA DE CONTENIDO
iv
6.4.6 Contenido de ácido anhidrourónico (AUA) .....................................................24
6.4.7 Peso equivalente y acidez libre.......................................................................26
6.4.8 Contenido de metoxilo.....................................................................................27
6.4.9 Grado de esterificación....................................................................................27
6.4.10 Contenido de acetilo......................................................................................28
6.4.11 Viscosidad relativa.........................................................................................29
6.4.12 Tiempo de asentamiento y grado o poder de gelificación .............................30
6.4.13 Contenido de calcio, magnesio y hierro.........................................................30
6.4.14 Características microbiológicas.....................................................................31
7. RESULTADOS ESPERADOS..............................................................................32
8. ESTRATEGIAS DE COMUNICACIÓN ................................................................33
9. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES.....................................................................34
10. PRESUPUESTO Y RECURSOS DISPONIBLES ..............................................35
11. BIBLIOGRAFÍA...................................................................................................36
v
INDICE DE FIGURAS
vi
INDICE DE TABLAS
vii
1. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
Las cáscaras también se han propuesto como fuente de pectina; insumo con
diversas aplicaciones en la industria de alimentos, farmacéutica y cosmética. Para
su extracción se han utilizado métodos físico-químicos [2] [3] [4] [5] y enzimáticos
[6], que consumen mucho tiempo, tienen costos muy altos y producen efectos no
deseables en la calidad de las pectinas.
¿Qué condiciones de proceso son los más adecuados para obtener un mayor
rendimiento y mejor calidad de pectina?
viii
2. JUSTIFICACIÓN
ix
el contenido de ácido galacturónico y el grado de esterificación de la pectina
obtenida.
x
3. HIPÓTESIS
4. OBJETIVOS
xi
4.1 Objetivo general
5 REVISION DE LA LITERATURA
xii
5.1 PECTINAS
Fue descubierta por Vauquelin en 1790, pero hasta 1825 fue caracterizada por
Braconnot, quién la denomino Pectina de un vocablo griego que significa “Coagulo
duro” [29] y la describió como el principal agente gelificante de las frutas [28]. La
primera producción de extracto de pectina líquida fue realizada en 1908 en
Alemania, extendiéndose rápidamente a los Estados Unidos, a partir de pulpa de
manzana [29].
Hasta mediados de 1930, la pectina era considerada como una pequeña estructura
cíclica. En 1923, Smolenski fue el primero en sugerir que la pectina era un polímero
complejo, comparable en estructura al almidón, pero después de realizar un análisis
de rayos x, se indicó que era más lógico compararla con la estructura de la celulosa.
Su fórmula básica se estableció en 1937 por Bock y Schneider [29].
xiii
Este tipo de pectinas pueden subdividirse en dos grupos las de gelificación rápida,
que tienen una temperatura de gelificación más alta y un tiempo más corto de
gelificación que las denominadas de gelificación lenta.
xiv
requeridas para su uso industrial, otras potencialmente valiosas permanecen sin uso
debido a ciertas propiedades indeseables que afectan profundamente su
funcionalidad [37].
Otras fuentes han sido estudiadas, cáscara de plátano clon Hartón [38], melocotón
[39], ciruela japonesa [40], cacao [32] [41] [42] [43], mora de castilla, uchuvas,
residuos de industrialización de la piña [28], Repollo [44], Calabaza [45] [46] [47],
Cocona [48] cáscara de mango [3] [4] [6] [28], maracuyá [2] [5] [14] [35], entre otras.
5.1.2.1 Mango
El mango (Mangifera indica L.) es una deliciosa fruta que crece en casi todas las
regiones tropicales y subtropicales del mundo. Los mayores productores mundiales
de mango son en su orden, India con unos 11,4 millones de toneladas, China con
3,9 millones de toneladas, Tailandia con 1,9 millones de toneladas y Pakistán con
1,8 millones de toneladas, que representan el 64,18% del total de la producción
mundial en el 2007, estimada en 29,6 millones de toneladas. En el continente
Americano el mayor productor es México con 1,6 millones de toneladas, ocupando
el quinto puesto de la escala mundial [34].
Colombia ocupa el puesto 24 en el mercado mundial con 158 mil toneladas, que
equivalen 0,5% de la producción mundial en el 2007, 22 de sus departamentos
cuentan con árboles de mango (variedades criollas o prototipos regionales que se
caracterizan por una alta estacionalidad de la cosecha), pero solo 16 son
significativos en su producción. La mayor área sembrada se concentra en los
departamentos de Cundinamarca 43,41%, Tolima 13,3%, Córdoba 4,19%, Antioquia
12,21%, Magdalena 8,86% y Bolívar 5,54%; Siendo el único país del mundo que
produce mango durante diez meses y medio del año [34].
xv
procesos de compostaje, para la alimentación pecuaria, o simplemente son
desechadas, sin que la empresa le pueda dar una adecuada y rentable utilización
que no afecte el medio ambiente.
5.1.2.2 Maracuyá
El maracuyá es uno de los frutos más apetecidos a nivel mundial debido a su sabor
particular y su alta acidez. Es muy aromático, rico en ácido cítrico y en contenido de
carotenos. Su jugo exótico es el tercero en importancia, después de los jugos de
mango y piña. A nivel internacional se comercializa en estado fresco y procesado,
como jugo a 14°Brix o concentrado a 50°Brix, que es utilizado para la elaboración
de pulpas, dulces, néctares, jaleas, mermeladas, cremas, helados, licores, confites y
refrescos [49].
Los precios más bajos en el mercado de la fruta fresca se presentan entre Julio y
Agosto y en Diciembre por su alto abastecimiento. Los precios más altos se
registran en marzo, abril, octubre y Noviembre [49].
xvi
yogures, como sustitutos de grasa en alimentos de bajo aporte calórico, entre otros
[32] [37].
EAM es una técnica que utiliza la irradiación de microondas para causar movimiento
de las moléculas por migración de iones y rotación de dipolo que permite una rápida
xvii
transferencia de energía al solvente y material vegetal. Ha sido utilizada para la
extracción de contaminantes orgánicos, pesticidas, fenoles, polímeros y otros
biocompuestos, causando interés por la reducción de disolvente utilizado y el tiempo
de proceso, por los bajos requerimiento de energía y por la alta eficiencia de la
extracción. [55]. El microondas trabaja con radiaciones electromagnéticas que se
encuentran en el rango de 0.3 a 300 GHz (λ = 1 hasta 0.001 m) [54].
Kratchanova et al. (2004) [55] reporto que esta técnica tiene una ventaja
considerable sobre los métodos convencionales de extracción, el rendimiento de la
pectina se puede aumentar hasta un 240%. El proceso es afectado con factores
como la potencia, el tiempo de irradiación, tipo de solvente, pH de la solución,
relación muestra:solvente. Prolongar el tiempo de irradiación disminuye la fuerza del
gel [22].
Assous et al. 2007 [56] reporto que 600W de potencia y 6minutos de calentamiento
eran los factores óptimos para extraer pectina de la cáscara de mango por
microondas. Fishman et al. 2006 [20], realizó la extracción por microondas con la
cáscara del limón y los valores óptimos obtenidos fueron 3minutos de calentamiento
a 140°C con una frecuencia de irradiación de 2450MHZ con 630W de potencia y en
una relación muestra solvente 1:25. Wang et al 2007 [22] reporto que para la
extracción de pectina de manzana seca por microondas se requeria 20,8min, pH
1,01, relación 0,069 sólido:líquido, potencia 499,4W.
6. METODOLOGIA
xviii
El procesamiento de las muestras y la extracción de pectina se harán en los
laboratorios del Instituto Amazónico de Investigaciones Científicas (SINCHI). Los
análisis fisicoquímicos y microbiológicos de la pectina obtenida se realizaran en los
laboratorios del Instituto de Ciencia y Tecnología de Alimentos (ICTA).
6.2 MATRICES
6.2.1 Muestreo
Las actividades de muestreo están sujetas a los cronogramas de producción de las
empresas mencionadas, los cuales se basan en los meses de mayor cosecha que
representan un bajo costo de la fruta en el mercado.
La extracción de pectina se realizara por el método descrito por Wang et al. 2007,
que se puede observar en la figura 4 [22]. Para lo cual se utilizara un horno
microondas doméstico modificado (figura 5).
xix
Figura 4. Diagrama de flujo proceso de extracción de pectina por microondas
xx
Figura 5. Horno microondas doméstico modificado para la extracción de pectina por
microondas
xxi
Tabla 1. Matriz ortogonal L25
Experimento F1 F2 F3 F4
1 n1 n1 n1 n1
2 n1 n2 n2 n2
3 n1 n3 n3 n3
4 n1 n4 n4 n4
5 n1 n5 n5 n5
6 n2 n1 n2 n3
7 n2 n2 n3 n4
8 n2 n3 n4 n5
9 n2 n4 n5 n1
10 n2 n5 n1 n2
11 n3 n1 n3 n5
12 n3 n2 n4 n1
13 n3 n3 n5 n2
14 n3 n4 n1 n3
15 n3 n5 n2 n4
16 n4 n1 n4 n2
17 n4 n2 n5 n3
18 n4 n3 n1 n4
19 n4 n4 n2 n5
20 n4 n5 n3 n1
21 n5 n1 n5 n4
22 n5 n2 n1 n5
23 n5 n3 n2 n1
24 n5 n4 n3 n2
25 n5 n5 n4 n3
xxii
prueba de comparación múltiple para comprobar la existencia de diferencias
significativas.
6.4 CARACTERIZACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE LAS PECTINAS
EXTRAIDAS
6.4.1 Rendimiento
El rendimiento de la pectina obtenida en cada uno de los ensayos se calculara por
medio de la siguiente ecuación [35]:
xxiii
Si las cenizas son muy negras, se les agregara 0,5 – 1ml de agua destilada, y luego
se evaporara el agua en baño de maría y posteriormente se llevara nuevamente a la
mufla.
Dónde:
- CI son las cenizas insolubles en ácido (g/100g de pectina)
- PC es el peso de las cenizas totales (gramos/100g de pectina)
- C es el contenido de carbonato (CO3⁼) en g/100g de pectina
xxiv
lentamente, se agregara 4g de zinc en polvo y 4g de hidróxido de potasio (R.A.) y se
destilara nuevamente. Luego se envasara en un recipiente bien cerrado y se
rotulara como etanol purificado.
3. Reactivo de carbazol
Se prepara el reactivo de carbazol de manera que contenga 0,150g de carbazol por
cada 100ml de reactivo, empleando como solvente el etanol purificado obtenido. Se
agitara con varilla de vidrio hasta disolución completa del carbazol.
Después de media hora, se acidificara la mezcla con ácido acético glacial hasta pH
5,0-5,5. Se trasladara cuidadosamente la mezcla fría a un balón aforado de 500ml y
se llevara a volumen con agua destilada. Se filtrara con papel de filtro cualitativo y
se descartara los primeros 10 ml del filtrado. Luego 2,0ml del filtrado claro se diluye
con agua destilada hasta 100ml en balón aforado, se mezclara muy bien el líquido y
se tomara 2,0ml de esta solución para la determinación colorimétrica.
Para el desarrollo de color, se tomara con una pipeta aforada de 2,0ml de la última
dilución del desesterificado en medio acético, y se colocara en un tubo de ensayo
de 25 x 200mm. Se dejara enfriar el tubo con su contenido en hielo picado a unos
3°C, se adicionara lenta y exactamente 12,0ml de ácido sulfúrico concentrado
(R.A.). Se agitara perfectamente el tubo y se colocara de nuevo en el baño de hielo.
Luego se calentara el tubo en un baño de agua en ebullición por 10 minutos, y se
enfriara hasta 20°C, con una pipeta, se agregara 1,0ml del reactivo de carbazol al
0,15% p/v n etanol purificado. Se mezclara muy bien y se dejara enfriar a
xxv
temperatura ambiente por 25±5 minutos, contados a partir del momento en el cual
se terminara de agregar el reactivo de carbazol.
xxvi
Se agregara 6 gotas de solución indicadora de rojo de fenol y se titulara lentamente
con solución de hidróxido de sodio 0,1N hasta aparición de color rojizo estable por lo
menos por 20 segundos o hasta pH 7,5. Se guardara esta solución para la
determinación del contenido de metoxilo.
Titular con solución de hidróxidos de sodio 0,1N hasta pH 7,5 o color rojizo
permanente por 20 segundos.
xxvii
Dónde: Carboxilos totales = carboxilos libres + carboxilos estrificados
De la solución anterior se tomara 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 y 7.0ml, se llevara a un balón
aforado de 50ml y se completara el volumen con agua destilada. Cada 5,0ml de
estas soluciones contendrán 120, 180, 240, 300, 360 y 420mcg de acetilo,
respectivamente.
xxviii
La técnica de determinación que se utilizara es la siguiente:
Se usara como blanco para ajustar el 100%T una solución preparada mezclando
5,0ml de agua destilada, 2ml de la mezcla 1:1 de la solución del reactivo de
hidroxilamina y solución reactivo de hidróxido de sodio, 5,0 ml de metanol ácido y
suficiente reactivo de perclorato de hierro para completar a 25ml un balón aforado.
xxix
Se transferirá el líquido cuidadosamente con ayuda de agua destilada. Se agitara
rápidamente por un minuto. Se centrifugara utilizando tubos de centrífuga de 15 ml,
tapados con tapa de rosca o tapones de corcho cubiertos con papel celofán, por 20
minutos a 1.700 r.p.m. Cuidadosamente se tomara con una pipeta aforada 10 ml de
líquido sobrenadante y se determinara la viscosidad en un viscosímetro de Ostwald-
Cannon-Fenske No. 50, sumergido en un baño de agua destilada a 25 ± 1ºC. La
determinación se hará dentro de la hora siguiente al último ajuste de pH.
El viscosímetro se colocara una media hora antes de la determinación en el baño de
agua y una vez colocado el líquido en el viscosímetro se dejara transcurrir 10
minutos para que el líquido en estudio adquiera una temperatura estable igual a la
del baño.
Se elaboraran curvas de calibración para calcio (0,5 – 8,0 ppm), magnesio (0,2 –
1,6ppm) agregando a estas soluciones 1.000ppm de estroncio, y hierro (0,4 -4,5)
xxx
Condiciones Calcio Magnesio Hierro
Zona del espectro visible Ultravioleta
Longitud de onda 212 m 285 m 249 m
Corriente 10ma 20ma 30ma
Flujo (aire, acetileno) 5:5
Las soluciones a analizar se diluyen hasta el volumen adecuado para obtener una
lectura localizada dentro de los valores de la curva patrón. El resultado se expresará
como concentración del elemento por 100gramos de pectina libre de humedad,
utilizando cenizas para su determinación [28].
xxxi
7. RESULTADOS ESPERADOS
xxxii
8. ESTRATEGIAS DE COMUNICACIÓN
xxxiii
9. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Actividades/Mes 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Revisión bibliográfica X x x x X x x x X x X X
Ensayos preliminares X x
Ejecución del diseño experimental
para la extracción de pectina del x x
residuo de maracuyá
Ejecución del diseño experimental X x
para la extracción de pectina del
residuo de mango
Caracterización de la pectina obtenida x x x x
Análisis de resultados X x x
Elaboración del documento escrito x x X
xxxiv
10. PRESUPUESTO Y RECURSOS DISPONIBLES
En la tabla 5 se relacionan los recursos físicos con los que se cuenta para
desarrollar el proyecto de investigación y en la tabla 6 el presupuesto requerido.
xxxv
11. BIBLIOGRAFIA
[4] KOUBALA, B. B.; KANSCI, G.; MBOME, L. I.; CRÉPEAU, M. –J.; THIBAULT, J.
F. and RALET, M. –C. Effect of extraction conditions on some physicochemical
characteristics of pectins from “Améliorée” and “Mango” mango peels. Food
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[5] PINHEIRO, E. R.; SILVA, I. M.; GONZAGA, L. V.; AMANTE, E. R.; TEÓFILO, R.
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xli