Propiedades físicas y ópticas.

La absorbancia se midió a una λ 35 UV/VIS o un espectrofotómetro Lambda XLS (Perkin Elmer)

utilizando cubetas con 1 cm de longitud de trayecto. La calorimetría diferencial de barrido se realizó
con un TA DSC Instrumento Q200. Un total de 10-20 mg de 10%(p/v) se colocaron soluciones
acuosas tensioactivas vacías o cargadas de fármacos en bandejas de aluminio herméticas. Tres veces
consecutivas se realizaron escaneos entre 0-60 °C a una velocidad de calentamiento/enfriamiento
de 1 °C/min usando un plato vacío como referencia. La muestra de prelavado contenía 5mg VK1 y
95mg F127 por gramo de muestra mientras que el control F127 tenía 100 mg de F127 por gramo de
muestra, equivalente al 10% (p/v) F127. La muestra de post-lavado tenía el F127 ajustada al 10%
(p/v). La microscopía electrónica de transmisión fue realizada utilizando un microscopio electrónico
JEM-2010 con acetato de uranilo al 1%. manchas. Las mediciones de tamaño se llevaron a cabo con
dispersión dinámica de la luz utilizando un Instrumento NanoBrook 90 plus PALS (Brookhaven
Instruments). Difracción de rayos X el patrón de polvo se midió con muestras liofilizadas en un
Rigaku Ultima IV con condiciones de funcionamiento de 40 KV, 44 mA y 1,76 kW. La fuente del
difractómetro utilizado fue Cu y K, una radiación a una longitud de onda de 1.54 Å con un
monocromador y analizado en modo Y/2Y a temperatura ambiente. El 2Y se recogieron datos de
escaneo en un intervalo de 0,030 y la velocidad de escaneo fue de 0,5 min. Para medir las
intensidades se usó el método del haz de enfoque. Registro P se evaluaron utilizando el algoritmo
ALOGPS 2.1. Para los medicamentos adicionales en la Tabla 1, el proceso de decapado con
tensoactivos se llevó a cabo como se indicó anteriormente. Para ss-InFroMs de concentrado, las
muestras se sometieron a filtración centrífuga a 3.500 g durante 2 horas o hasta que no se pudo
eliminar más filtrado. Las muestras concentradas fueron sometidas a centrifugación a 10.000 g
durante 5 minutos y sin pellets o residuos perceptibles fue observado. Los espectros 2D COSY y
NOESY fueron adquiridos en D2O en un Bruker AMX 600MHz y DOSY fue adquirido en D2O en un
Varian Inova 500MHz a temperatura ambiente. Se utilizó un tiempo de mezcla de 100 ms. La
viscosidad fue medida por viscosímetros de rutina de cañón-fenske. La viscosidad para el prelavado
fue de 10,7 cp, mientras que la muestra post-lavado fue de 0,98 cp, y estos valores fueron los que
se tuvieron en cuenta para el cálculo del coeficiente de difusión.

Transferencia de energía de resonancia Forster.

2,9,16,23-tetra-terc-butilo-29H, 31H, ftalocianina (BPc) y Zinc, 2,11,20,29-tetra-terc-butilbutil-2,3-

naftalocianina (ZnBNc) fueron usados como un nuevo par de donantes y aceptantes de
fluorescencia. Se hizo una solución donante disolviendo 0,5 mg de BPc, 49,5 mg de VK1 en 500 ml
de DCM. Se hizo una solución aceptora disolviendo 5 mg de ZnBNc y 45 mg de VK1 en 500 ml de
DCM. Se hizo una solución orgánica premezclada de donante y aceptante combinando 0,5 mg de
BPc, 5 mg de ZnBNc y 44,5 mg de VK1 en 500 ml de DCM. Las tres soluciones de DCM anteriores se
añadieron por separado a 5 ml F127 de concentración 10% (p/v), seguidas de una agitación hasta
que el disolvente orgánico se evaporó. Las InFroMs post mixtas de donante y aceptante se hicieron
combinando las soluciones de donante y aceptante InFroM en el mismo volumen, y esto es lo que
se necesita para el éxito de la operación. Se incubó durante la noche antes del análisis FRET. El FRET
se evaluó sobre la base de una disminución de las emisiones de los donantes de BPc. La fluorescencia
del donante se midió en un fluorómetro (Photon Technology International) con una excitación de
670 nm y una emisión de 710 nm. Se utilizó una cantidad constante de donante de BPc en todas las
muestras, con el aceptador ZnBNc añadido como se indica.
Cuantificaciones de la relación molar.

Cuantificación de F127. El tiocianato de cobalto se preparó disolviendo 0,3 g de nitrato de cobalto

hexahidratado y 1,2 g de tiocianato de amonio en 3 ml de agua. 100 ml de solución de tiocianato de
cobalto, 40 ml de solución de F127 en el rango de concentración de 0-7,5 % de peso (las soluciones
de F127 más concentradas se diluyeron para ajustarse a ese rango), 200 ml de acetato de etilo y 80
ml de etanol fueron combinados. La mezcla se agitó suavemente y se centrifugó a 14.000 g durante
1 minuto. Se eliminó el sobrenadante azul y el sedimento azul se lavó con acetato de etilo varias
veces (B5) hasta que el sobrenadante se tornó incoloro. El gránulo se disolvió en 1 ml de acetona
para medir la absorbancia a 623 nm. La concentración de drogas fue cuantificada por hasta cuatro
métodos independientes: (1) método de congelación en seco: cargado de drogas la solución acuosa
de micelles fue liofilizada para eliminar el agua y se volvió a suspender en disolvente orgánico (DCM).

Se midió la absorbancia para la cuantificación del fármaco. (2) método de disolvente: una pequeña
cantidad (B10 ml) de micelas cargadas de droga en se añadió una solución acuosa a un disolvente
orgánico miscible en agua (etanol, ~ 1ml) a disociar las micelas y liberar el medicamento. Luego se
midió la absorbancia para la cuantificación de la droga. (3) Método de RMN: se prepararon las
micelas cargadas de droga utilizando el mismo método de preparación de rutina, pero utilizando
espectros de D2O y RMN. reunidos en un Varian Inova-500MHz o Bruker 600 MHz. VK1 fue
cuantificado por los tres métodos anteriores. 4) Método CLAR (para CsA y CTX). Un total de 10 ml
de los InFroMs se diluyeron en 190 ml de DMSO y luego se centrifugaron (5.000 g durante 1 minuto),
y el sobrenadante se sometió a análisis HPLC con un Waters Alliance 2790 instrumento. La fase móvil
fue de acetonitrilo y la fase estacionaria fue del 0,1%. trifluoroacético en el agua. La longitud de
onda de detección era de 204 nm (para CsA) y 231nm (para CTX). Las proporciones molares para las
formulaciones clínicas se tomaron de la publicación monografías de productos disponibles. En el
caso de las formulaciones clínicas que las contengan, el etanol y el aceite se incluyeron en los
cálculos de la relación molar.

Rendimiento inducido de micelas congeladas en función de la concentración de sal.

Para la ciclosporina A (CsA), se disolvieron 10 mg de CsA en 1 ml de DCM y se añadieron a 10 ml de

solución de F127 al 10% (p/v) con 0, 1, 2 ó 3M NaCl. Después de agitar durante 3 h, la solución se
sometió a filtración centrífuga a 0 C (para 0 y 1M NaCl) o 10 C (para 2 y 3M NaCl) hasta que se
retuvieron 200 ml de solución o se mantuvo el volumen del retentado, se añadieron las soluciones
salinas correspondientes al concentrado y se realizó el procedimiento de lavado tres veces. Los
retenidos se pasaron a través de un filtro de jeringa de 0,45 mm y se utilizó HPLC para cuantificar la
concentración de CsA. Para cuantificar el porcentaje de eliminación F127 en forma de función de la
concentración de sal a diferentes temperaturas, los filtrados fueron guardados y para la detección
se utilizó el método del tiocianato de cobalto, tal como se ha descrito anteriormente. Para T-undec
y CTX, 10 mg de la droga se disolvió en 100 ml de DCM y se agregó en 1 ml. 10% (p/v) de solución
acuosa F127 con 0, 1, 2, 3 y 4M NaCl, seguido de agitación durante 3 horas hasta que el DCM se
evaporó completamente. La solución se sometió a centrifugación a 5.000 g durante 10 min. El
gránulo se disolvió en 1 ml de etanol, y la absorbancia a 240 nm (para T-undec) y 230 nm (para CTX)
se midió en cuantificar los medicamentos no incorporados.
Efectos de co-carga.

Para CTX, 10 mg de CTX con diferentes relaciones de masa de coenzima Q10 (CTX:CoQ¼10:0; 10:0.5;
10:1; 10:2; mg:mg) se disolvieron en 100 ml DCM y se añade a 1 ml de solución acuosa al 10% (p/v)
de F127 con 3,5M NaCl seguido de removiendo durante 5 h y las soluciones se hicieron claras. Las
soluciones fueron entonces diluidas 1 en 15 en agua a temperatura ambiente. En diferentes
momentos, las soluciones fueron sometidas a centrifugación a 5.000 g durante 5 minutos y el
sobrenadante fue desechado y 1 ml se añadió agua para enjuagar el gránulo y se repitió el proceso
de centrifugado. Después desechando el sobrenadante, CTX en el precipitado se disolvió en 1ml de
etanol y para cuantificar la cantidad de fármaco precipitado. 3mg de docetaxel (DTX) o paclitaxel
(PTX) con diferente relación de masa del co-cargador (CoQ o Vitamina E) se disolvieron en 100 ml
de DCM y se añadieron a 1 ml 10% (p/v) de F127 solución acuosa con 4M NaCl seguido de agitación
durante 5 horas. se diluyó 1 en 15 en agua, y se incubó a temperatura ambiente para 1,5 h Las
soluciones se sometieron a centrifugación a 5.000 g durante 5 min. El sobrenadante y se utilizó 1 ml
de agua para enjuagar el gránulo blanco y el hilado. se repitió el proceso. La droga en el gránulo fue
disuelta en 1ml de etanol y se midió la absorbancia para cuantificar la cantidad de fármaco
agregado.

Estudios en animales y análisis de sangre humana.

Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con el Comité Institucional de Cuidado y
Uso de Animales de la Universidad de Búfalo. La sangre se obtuvo de voluntarios humanos adultos
tras el consentimiento informado. La extracción de sangre humana fue de acuerdo con la Junta de
Revisión Institucional de la Universidad de Buffalo.

Vitamina K1 (VK1). Para estudios funcionales, se preparó una solución acuosa de warfarina sódica
(Ark Pharm Inc. #AK-48919) a una concentración de 16 mg /L. A las hembras de ratones ICR de seis
semanas de edad (Harlan) se les dio acceso gratuito a la warfarina sódica durante 24 horas antes de
la inyección intravenosa VK1 ss-InFroM. Los ratones (n¼6) fueron inyectados por vía intravenosa
con una dosis de VK1 ss-InFroM de 0,1,2, o 5mg kg1. El grupo restante se utilizó como control sin
alimentar con warfarina ni inyecciones. Los valores INR de los ratones fueron leídos por el sistema
Coagucheck XS (Roche) 24 horas después de la administración de VK1. Para la hemólisis, se
recogieron eritrocitos humanos frescos en citrato de 4 voluntarios humanos sanos. Se obtuvo una
suspensión de eritrocitos por centrifugación a 420 g durante 10 minutos y se agregó solución salina
amortiguadora de fosfato isotónico (PBS). La centrifugación se realizó de nuevo a 3.000 g durante
10 minutos. El sobrenadante fue desechado y se repitió el proceso de lavado. A continuación, la
solución madre se suspendió en PBS a una densidad de células B8109 por ml. 100 mg ml1 VK1 ss-
InFroMs se preparó como se describe anteriormente y para una formulación Tween-80, 200 mg VK1
se disolvió directamente en 500 ml de Tween-80, y posteriormente se diluyó 1 en 4 en PBS. VK1 se
mezcló con 20 ml de suspensión de eritrocitos humanos (con un volumen final de 1 ml). Se realizaron
un control de PBS y un 100% de muestras de hemólisis añadiendo 20 ml de suspensión de eritrocitos
humanos a 980 ml de PBS o agua destilada respectivamente. Las soluciones se incubaron a 37 C
durante 1 hora, seguidas de una centrifugación a 2.000 g durante 5 minutos. Los sobrenadantes se
transfirieron a 200 ml de DCM, se agitaron durante 5 minutos para su extracción a fin de eliminar la
interferencia de la absorbancia por parte de VK1, y posteriormente se centrifugaron a 2.000 g
durante 5 minutos. Los porcentajes de hemólisis se determinaron mediante mediciones de
absorbancia de la fase acuosa a 540 nm.

Ciclosporina A (CsA). Se adaptó un ensayo de inmunosupresión de un método previamente

reportado. El glutaraldehído se utilizó para fijar los glóbulos rojos ovinos (GBR) a las placas ELISA.
SRBCs (Innovative Research, Inc. # IR1-020ND) conteniendo 5106 células en 0.1 ml de PBS fueron
agregadas a cada pocillo de un fondo plano de 96 pocillos de placas de micro titulación ELISA
(Thermo Scientific # 267312) y las placas fueron incubadas durante la noche a 4 C. 20 ml de
glutaraldehído al 1,8% (AMRESCO, # 0904C089) se añadieron suavemente a los pocillos que
contenían glóbulos rojos y la placa se incubó durante 3 minutos a 25 C. La concentración final del
glutaraldehído fue del 0,3%. Los glóbulos rojos SRBC se lavaron con solución salina tres veces por
centrifugación antes de su uso. Los ratones fueron inyectados intra-peritonealmente con 5108
SRBCs en 0.5 ml de solución salina. Cuatro de cada cinco grupos de ratones (n¼5) fueron inyectados
y el grupo restante se utilizó como control negativo. Los CsA ss-InFroMs se inyectaron por vía
intravenosa 2 días antes y 2 días después de la inyección intraperitoneal única de SRBC, con dosis
de CsA de 0, 1, 3 y 10 mg kg1 por inyección. La sangre fue recolectada 10 días después de la última
inyección de CsA. Las placas ELISA se lavaron 4 veces con 200 ml de PBS y los sitios de unión no
específicos se bloquearon con leche descremada al 1% en PBS durante 1,5 h. La dilución del suero
comenzó con 1:50 en triplicado a las placas y la placa fue incubada durante 1.5 h a 37 C. El anticuerpo
secundario, IgM anti-ratón conjugado con HRP (Santa Cruz Biotechnology, # SC-2064, fue luego
agregado e incubado durante otra hora a 37 C. Se agregó sustrato líquido de TMB (Sigma # T0440)
a cada pozo y se incubó la placa por otros 30 minutos a 25 C antes de determinar el grado de
formación de color en cada pozo midiendo la absorbancia a 450 nm con un lector de placas TECAN
Safire 2. Los títulos se definieron como la dilución recíproca del suero que proporciona una
absorbancia de 40,2.

Testosterona undecanoato (T-undec). Para los estudios de rastreo, 2 mg de BPc y 100 mgT-undec
se utilizaron para preparar T-undec ss-InFroMs como se describió anteriormente. y ss-InFroMs se
concentraron en 60 mg/ml T-undec. Un aceite la formulación que contenía la misma cantidad de
BPc se hizo disolviendo 1,2 mg BPc y 60 mg de T-undec en 1 ml de aceite de ricino. Una cantidad de
100 ml de ss-InFroMs o la formulación del aceite de ricino se inyectó por vía intravenosa a través de
la vena de la cola y los ratones murieron 2min después de la inyección. Los órganos fueron
recolectados para la obtención de imágenes de fluorescencia usando un El sistema IVIS Lumina II y
los órganos y suero fueron recolectados para su biodistribución y cuantificación de BPc. Los órganos
se homogeneizaron en 2 ml de cloroformo y posteriormente centrifugado a 3.000 g durante 3
minutos. El suero fue extraído por cloroformo de la noche a la mañana. Luego se midió la
absorbancia de los sobrenadantes a 700 nm para o la fase de disolvente orgánico para el suero. Para
estudios funcionales, 5 semanas de edad se obtuvieron ratones macho CD-1 castrados y ratones CD-
1 de control no castrados directamente de Charles River y se mantuvieron durante 2 meses antes
de evaluar niveles de testosterona por ELISA (Cayman Chemical # 582701) según el fabricante ss-
InFroMs se administraron con administración subcutánea. y la testosterona fue monitoreada como
se indica.

Cabazitaxel (CTX). Para los estudios tumorales, se inyectaron 5.106 células MIA PaCa-2 (ATCC) en
la ingle derecha de ratones desnudos femeninos (laboratorios Jackson) y el tratamiento comenzó
cuando los volúmenes tumorales alcanzaron los 100 mm3. Los InFroMs de CTX ss se prepararon tal
y como se ha descrito anteriormente. Se preparó una formulación de Tween-80 similar a una
formulación comercial disolviendo 60 mg de CTX en 1.560 mg (1,5 ml) de Tween-80, seguido de una
vorágine hasta que el medicamento se disolvió completamente. Antes de la inyección, se añadieron
4,5 ml de solución acuosa de etanol al 13% (peso/peso) para formar una solución CTX de 10mgml1,
que se diluyó en solución salina a la concentración requerida antes de la inyección. El CTX se
administró por vía intravenosa a través de la vena de la cola, como se indica. Tumor El tamaño del
ratón fue monitoreado tres veces por semana y el peso del ratón fue medido diariamente. Los
ratones murieron cuando el tamaño del tumor alcanzó 10 veces el volumen original. Para hemólisis,
las mediciones de eritrocitos humanos fueron similares a las de la VK1, pero sin el paso de extracción
por solvente orgánico, ya que no hubo una diafonía de absorbancia significativa. con hemoglobina.
Para la medición de la activación del complemento, recién recogida se centrifugó plasma humano a
3.000 g durante 10 minutos. Se mezclaron 15 ml de plasma con 5 ml de CTX con las concentraciones
indicadas y se incubaron a 37 C para 30 min. Las reacciones del complemento se interrumpieron con
un diluyente para muestras de 980 ml. proporcionada por el proveedor. Las cantidades de Scb5-9
fueron cuantificadas por un kit ELISA (Quidel # A020) según las instrucciones del fabricante.

Disponibilidad de los datos.

Los datos brutos utilizados para generar las figuras y tablas de este manuscrito están disponibles a
petición del autor correspondiente.