UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Laboratorio de Bioquímica
Práctica 2: CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS

I. Objetivos

1. El estudiante conocerá los instrumentos y reactivos necesarios para ejecutar una

cromatografía de aminoácidos

2. El estudiante separará y reconocerá, de una mezcla, por cromatografía en papel al

aminoácido esencial Lisina (K).

3. El estudiante detectará en muestras, de zumos de frutas, al aminoácido fenilalanina.

II. Procedimientos
Preparación del papel Cromatográfico y aplicación de las muestras: usar en todo el procedimiento
guantes. Cortar el papel Watman Num.1 de acuerdo a las dimensiones de la cámara cromatografíca.
Con lápiz marcar de acuerdo al siguiente esquema. Luego aplicar con un tip aprox 1l de cada
estándar y de la mezcla de aminoácidos, secar al ambiente.

1. Fen
2. Lis
3. Z. uva
4. Z. plátano
5. Superton

__o___o___o___o___o__ 1 2 3
1 2 3 4 5

JQI 110501 14Hs 4 5

Preparación de la cámara Cromatografíca: usar un beacker de 1 litro, con cinta adhesiva y con un
pabilo grueso armar la cámara como se esquematiza a continuación, luego verter el solvente
compuesto de:
Butanol 4
Acido acético glacial 1
Agua 1
 Tapar la cámara con una placa de vidrio o un petri. Dejar que la cámara se sature con el solvente,
dos a tres horas antes de la corrida cromatográfica.

solvente

Corrida cromatográfica: después de aplicar las muestras y de haberse saturado la cámara

cromatográfica con el solvente instalar la tira de papel.

Doblar el papel
1 cm para que cuel-
gue y permitir
que penetre 1
cm en el sol-
vente

__o___o___o___o___o_
1 2 3 4 5

JQI 110501 14Hs

La corrida comienza cuando el solvente asciende por capilaridad y termina cuando el solvente llega hasta
aproximadamente 1 cm del borde superior. ¡Durante la corrida la cámara no puede ser movida¡
Terminada la corrida, retirar el papel y secar en estufa a 80 oC (brevemente) luego revelar los aminoácidos,
sumergiendo (o asperjando) el papel con ninhidrina, e inmediatamente secar a 80oC; apenas aparezcan las
manchas Retirar el papel de la estufa. Calcular los Rf como a continuación se indica:
III. Resultados
Frente del solvente
(Fs)

Distancia
del Fs

___ ___ ___ ___ ___ __

1 2 3 4 5

JQI 110501 14Hs

En el superton se observan 8 manchas que corresponden a los 8 aminoácidos

esenciales. La muestra de zumo de uva se observan dos aminoácidos, mientras
que en la del plátano uno.
Ninguno de los zumos de frutas contiene el aminoácido fenilalanina

Cuestionario
1. Qué aminoácidos esenciales contienen la carne de pollo, cerdo, pavo,
gallineta, huevo de gallina, carne de res, leche de vaca?
2. Cuál es la composición de aminoácidos de una dieta balanceada para
jóvenes?
3. Explique brevemente lo siguiente: para aminoácidos
Cromatografía de capa fina
Cromatografía de intercambio iónico
Cromatografía HPLC