Una familia fúngica de reguladores transcripcionales: las proteínas del grupo de

zinc.
INTRODUCCIÓN

El elemento traza zinc es necesario para la función adecuada de una gran cantidad de proteínas, incluidas
varias enzimas. Sin embargo, la mayoría de las proteínas que contienen zinc son factores de transcripción
capaces de unirse al ADN y se denominan proteínas con dedos de zinc. Se clasifican en varias familias según
los motivos de unión al zinc. Por ejemplo, la familia Cys2His2 comprende cientos de proteínas con dedos
de zinc que se encuentran en los eucariotas que van desde la levadura hasta los humanos. En contraste, los
miembros de la familia de proteínas del grupo de zinc (o grupo binuclear) son exclusivamente fúngicos y
poseen el motivo bien conservado CysX2CysX6CysX5–12CysX2CysX6–8Cys. Los residuos de cisteína se unen
a dos átomos de zinc, que coordinan el plegamiento del dominio involucrado en la unión al ADN.

La familia de proteínas de racimo de zinc se caracteriza mejor por la levadura en ciernes, Saccharomyces
cerevisiae. El genoma de este organismo codifica más de 50 proteínas de cinc de zinc conocidas (o
supuestas). La primera y mejor estudiada proteína de racimo de zinc es Gal4p, un activador transcripcional
de los genes implicados en el ca- tabolismo de la galactosa. Las proteínas del racimo de zinc también se
encuentran en una variedad de otros organismos fúngicos, como Kluyveromyces lactis, la levadura de fisión
Schizosaccharomyces pombe y los patógenos humanos Candida albicans y Aspergillus nidulans. Esta
revisión tiene como objetivo describir los dominios estructurales y funcionales de las proteínas del racimo
de zinc y resumir sus funciones en la fisiología de los hongos, así como sus modos de acción en S. cerevisis
y otros hongos.

PROTEÍNAS DEL DEDO ZINC: UNA VISIÓN GENERAL

Las proteínas de unión al zinc forman una de las familias más grandes de reguladores transcripcionales en
los eucariotas, mostrando estructuras secundarias variables y una enorme diversidad funcional. Se agrupan
porque todos albergan al menos un motivo común, el dedo de zinc. Este motivo se identificó por primera
vez en el factor de transcripción de Xenopus TFIIIA hace 20 años (179), y la resolución de su estructura de
solución tridimensional unos años más tarde reveló su forma sobresaliente "similar a un dedo" (145). El
dedo consiste realmente en una hélice y un par de hebras antiparalelas (287). En general, uno o más átomos
de zinc están unidos por residuos de cisteína o histidina. Esto estabiliza el dominio y contribuye a la
estructura y función adecuadas de las proteínas (135, 287). La mayoría de las proteínas de los dedos de zinc
se unen al ADN (y también al ARN en el caso de TFIIIA), desempeñando así funciones importantes en los
procesos de transcripción y traducción (135). Sin embargo, debe tenerse en cuenta que esta superfamilia
de proteínas no se limita únicamente a la unión de ácidos nucleicos. Las proteínas con dedos de zinc
recientemente identificadas también participan en muchos otros roles fisiológicos, que incluyen la
mediación de interacciones proteína-proteína, remodelación de la cromatina, chaperón de proteínas, unión
a lípidos y detección de zinc (135). De la variedad de unión a ADN (o ARN), hasta la fecha se han establecido
tres clases principales de proteínas de dedos de zinc en eucariotas, en base a sus secuencias de aminoácidos
consenso únicas y altamente conservadas. Se resumen en la Tabla 1. Aunque se pueden agrupar como
factores de transcripción que se unen al zinc, cada clase tiene propiedades estructurales distintas.

Clases de proteínas de dedo de zinc

La clase I abarca las proteínas Cys2His2 (C2H2) y a menudo se la denomina dedo clásico de zinc (revisado
en la referencia 287). Es uno de los tipos más comunes de factores de transcripción que se encuentran en
los eucariotas, y estas proteínas contienen dos o más unidades de dedos de zinc que se repiten. Un ejemplo
bien conocido en humanos es el factor de transcripción Sp1 (152, 186). Las proteínas FOG (amigo de GATA)
son una subclase dentro de este grupo porque contienen dedos de zinc estándar (C2H2) junto con una
secuencia de consenso de C2HC (265). Cada unidad de repetición consiste en una secuencia de aminoácidos
conservada que interactúa con un átomo de zinc. Además, los miembros de esta clase se unen a los ácidos
nucleicos como monómeros (135, 155).

La clase II representa los dedos de zinc Cys4 (C4), que incluyen las proteínas GATA, LIM y receptor nuclear.
Los factores de transcripción GATA (GATA-1 a -6) se unen a una secuencia de ADN denominada motivo
GATA [(A / T) GATA (A / G)] en las regiones reguladoras de sus genes diana a través de dos dominios de
dedos de zinc (270 ). El receptor de glucocorticoides de mamíferos representa un excelente ejemplo dentro
de esta clase (39); Su estructura ha proporcionado mucha información sobre las capacidades de unión a
ADN de este grupo. A diferencia de la primera clase, estas proteínas usualmente

Ally contiene una unidad de dedo de zinc que se une al ADN como modimeros o heterodímeros (que
consiste en dos proteínas C4). Normalmente, los homodímeros reconocen las repeticiones invertidas
dentro de la secuencia de ácido nucleico diana, mientras que los heterodímeros se unen a las repeticiones
directas (135).

Las proteínas de dedos de zinc de clase III (C6) contienen un dominio de unión a ADN (DBD) que consta de
seis residuos de cisteína unidos a dos átomos de zinc y, por lo tanto, tienen los nombres de grupo de zinc,
grupo binuclear de zinc o Zn (II) 2Cys6 (Zn2C6 ) proteínas. Esta clase de factores de transcripción es única
porque estas proteínas contienen solo una unidad de dedo de zinc que se une a dos átomos de zinc. Pueden
interactuar con el ADN como monómeros, homodímeros o heterodímeros (156, 233, 260, 267). Además,
son proteínas estrictamente fúngicas. El factor de transcripción de Saccharomyces cerevisiae Gal4p es
posiblemente la proteína agrupada de zinc más conocida y estudiada. Su clasificación como una proteína
"agrupada" de zinc y la resolución de su estructura cristalina de rayos X hace una década (168, 199) se
convirtió en la fuerza impulsora detrás de los estudios que la caracterizaron más y otros miembros dentro
de esta superfamilia de factores de transcripción de hongos.

PROTEÍNAS DEL GRUPO ZINC

Como se indicó anteriormente, las proteínas del cúmulo binuclear de cinc (en lo sucesivo denominadas
proteínas del cúmulo de cinc) se han identificado exclusivamente en los hongos, aunque las otras clases de
dedos de cinc también están presentes en este reino. Por ejemplo, Msn2p, Msn4p y Adr1p son todos
factores de transcripción de levadura que contienen un motivo C2H2 de clase I (79). Las proteínas del
racimo de zinc parecen pertenecer predominantemente a la familia de los ascomicetos, ya que solo uno
(Lentinus edodes, proteína PRIB) se ha caracterizado hasta la fecha en la familia del basidio-mycete (61).
Hablando evolutivamente, una hipótesis sugiere que este motivo único Zn (II) 2Cys6 apareció antes de la
divergencia de estos dos grupos de hongos principales (260). Es importante destacar que se están
estudiando una multitud de proteínas de racimo de zinc recientemente identificadas en las especies
Aspergillus, Candida y Saccharomyces, así como Schizosaccharomyces pombe (ver Tablas 3 a 5). La lista de
proteínas de racimo de zinc conocidas está creciendo rápidamente, y la secuenciación de otros genomas
de hongos permitirá la identificación de más factores de transcripción dentro de esta superfamilia.

Dominios estructurales y funcionales

Como la mayoría de los factores de transcripción, las proteínas del grupo de zinc contienen varios dominios
funcionales aparte de la DBD rica en cisteína, incluidos los dominios de regulación y activación. En la Fig. 1
se muestra un modelo que describe dominios funcionales.
El DBD completo se divide en tres regiones: las regiones de dedo de zinc, conector y dimerización. El trabajo
pionero realizado en Gal4p (activador de genes GAL) y Ppr1p (activador de genes URA) ha dilucidado gran
parte de la biología estructural de estos factores de transcripción. La porción de unión a metal del DBD se
describe como que tiene dos subestructuras; cada una está formada por tres cisteínas que están rodeadas
por ambos lados con aminoácidos básicos y están separadas por un bucle (233). Juntos, forman un par de
hélices alfa cortas, entre las cuales se encuentran dos átomos de zinc unidos y puenteados por un total de
seis residuos de cisteína. Este DBD rico en cisteína se encuentra comúnmente en el extremo N. Sin embargo,
también existen al menos dos proteínas de racimo de zinc C-terminales caracterizadas. Incluyen S.
cerevisiae Ume6p, así como C. albicans Czf1p (283). Varios estudios mutagénicos demuestran la
importancia de los seis residuos de cisteína en la unión al ADN y la función de las proteínas (12, 50, 79, 111,
204, 205, 248, 260, 293). Otros residuos encontrados dentro del motivo de unión al metal son igualmente
importantes. Por ejemplo, una prolina conservada ubicada en el bucle entre las dos subestructuras
proporciona flexibilidad (168), mientras que un residuo de lisina altamente conservado (a veces
reemplazado por arginina, histidina o glutamina) se coloca entre la segunda y tercera cisteínas ( 168, 169,
233). Cristalografía de rayos X de las DBDs de S. cerevisiae Gal4p y Ppr1p realizadas por Marmorstein et al.
(168) confirmaron que estas proteínas se unen como homodímeros (Fig. 2). De hecho, las regiones ricas en
cisteína de estas dos proteínas son notablemente similares. Los grupos de zinc de los complejos
homodímeros reconocen un par de tripletes de nucleótidos CGG, que interactúan a través de majo.

De hecho, las regiones ricas en cisteína de estas dos proteínas son notablemente similares. Los grupos de
cinc de los complejos de homodímeros reconocen un par de tripletes de nucleótidos CGG, que interactúan
a través de los contactos del surco mayor. Esto no solo refleja el alto grado de homología entre los
miembros de esta clase de proteínas, sino que también sugiere que otros dominios / factores deben influir
en la identificación del ADN por parte de estos reguladores de la transcripción (ver más abajo).

Al menos dos proteínas de racimo de zinc conocidas no requieren la DBD rica en cisteína. Las proteínas
TamAp de S. cerevisiae Dal81p y Aspergus nidulans aparecen completamente funcionales cuando sus
grupos de zinc se eliminan o se rompen (25, 49).

Otros tres miembros de esta superfamilia en S. cerevisiae no se unen directamente al ADN. Los genes RSC3
y RSC30 codifican proteínas que forman parte del complejo RSC modelado de la cromatina (remodela la
estructura del croma- tin) (8), mientras que Cep3p es un componente importante del complejo kinetochore
(143, 250).

Con algunas excepciones, el requisito de zinc en el plegamiento de la proteína estabilizadora y la función

en esta clase de factor de transcripción es obvio. Sin embargo, varios experimentos clave realizados hace
más de una década ilustran que el zinc puede ser reemplazado por otros iones metálicos, a la vez que
permite una función adecuada de la proteína. Al determinar la estructura cristalina de rayos X de Gal4p,
Marmorstein et al. mostraron que los cristales que contenían Cd2 eran de mejor calidad que los que
contenían iones Zn2 (168). Además, la estructura de la solución de resonancia magnética nuclear (RMN) de
Ume6p se resolvió demostrando que el zinc también podría reemplazarse con cadmio (7). Es importante
destacar que ambos grupos mostraron que estas proteínas se unen al ADN de una manera dependiente de
los iones metálicos.

La región enlazadora está localizada en el extremo C al motivo del grupo de zinc. Puede tomar formas muy
diferentes, y los alineamientos de secuencia no muestran similitudes entre los enlazadores en varias
proteínas de cúmulo de zinc. Por ejemplo, la región enlazadora para Gal4p se extiende a lo largo de una
hebra de ADN, en contacto con el esqueleto fosfodiéster (168). En Ppr1p, la región del enlazador está
formada por hojas antiparalelas (169). Además, el DBP de Hap1p también se enfoca en dos tripletes CGG,
pero en una orientación de repetición directa, a diferencia del caso de Gal4p, Put3p y Ppr1p, donde los
tripletes CGG están invertidos (Fig. 2). La estructura cristalina de Hap1p muestra que el dímero proteico es
asimétrico y que las regiones de enlace de ambos monómeros interactúan exclusivamente con diferentes
residuos, ocupando dos ambientes muy diferentes (124). Varias regiones enlazadoras entre las proteínas
del racimo de zinc que reconocen nucleótidos similares pueden explicar el papel de esta región para
contribuir a la especificidad de unión al ADN. Reemplazar el motivo de agrupación de zinc de una proteína
por otra no afecta la orientación al ADN, aunque sí lo hace la conmutación de regiones enlazadoras (166,
214). Además, las mutaciones en las regiones de enlace Gal4p y Ppr1p también afectan la unión al ADN y la
función adecuada de la proteína (111). Por lo tanto, se propone que la región enlazadora proporcione un
andamio rígido, que medie la unión del ADN a una secuencia preferida y evite la unión a cualquier sitio
alternativo (166). La región de dimerización es el último elemento dentro del DBD y generalmente se coloca
en el terminal C al enlazador. La mayoría de las proteínas de zinc contienen esta región, que se compone
de repeticiones de heptadas similares a las que se encuentran en las cremalleras de leucina (233). Estas
repeticiones de heptada forman una estructura enrollada en espiral altamente conservada que es muy
probablemente responsable de la dimerización y las interacciones proteína-proteína. Es importante
destacar que este elemento de bobina enrollada está ausente en S. cerevisiae Ume6p, que es una de las
dos proteínas de racimo de zinc caracterizadas que contienen una DBD C-terminal. Esta evidencia sugiere
que Ume6p probablemente actúe como un monómero (202, 260).

El dominio regulador contiene una región importante que muestra una homología menor entre la mayoría
de los miembros dentro de esta clase de proteínas, y se denomina región de homología media. Esta región
es la que separa la DBD de la región ácida C-terminal. Aunque no siempre está presente en todas las
proteínas del racimo de zinc, se cree que esta región, que abarca unos 80 aminoácidos, desempeña un
papel en la regulación de la actividad transcripcional de estos factores (233, 267). Este modelo se basa en
varios estudios en los que la eliminación de esta región a menudo hace que las proteínas del cúmulo de zinc
sean constitutivamente activas. Por ejemplo, la eliminación de una región que abarca la región de
homología media en S. cerevisiae Hap1p da como resultado la activación transcripcional incluso en ausencia
de la molécula inductora, hemo; esto sugiere también un papel adicional de detección de oxígeno para esta
región en Hap1p (205).

Cuando se elimina una región similar en S. cerevisiae Leu3p, la proteína se activa permanentemente (76,
297). Otros ejemplos incluyen los mutantes Pdr1p y Pdr3p que contienen mutaciones de ganancia de
función dentro de esta región, lo que implica que posee un papel inhibitorio (53, 128).

En la mayoría de los casos, localizados en el extremo C, el dominio ácido actúa como un dominio de
activación (233, 267). Este no es un dominio conservado, y su función / estructura dentro de esta
superfamilia de reguladores transcripcionales es variada y no está bien definida. Tanto en Pdr1p como en
Pdr3p, también se han encontrado mutaciones de ganancia de función en este motivo (29, 196).
Curiosamente, varios motivos transmembrana predichos se encuentran en el dominio de activación de
Upc2p de C. albicans (163, 243). Esto apoya la hipótesis de que este factor de transcripción puede estar
anclado a la membrana en el citoplasma antes de la escisión y la translocación al núcleo (243).
Extrañamente, la eliminación de solo los últimos 10 aminoácidos del terminal C de Uga3p da como resultado
una forma totalmente inactiva del factor de transcripción (M.-A. Sylvain y B. Turcotte, datos no publicados).
Claramente, este dominio desempeña un papel importante pero individualizado en cada proteína de grupo
de zinc.

Elementos de unión y especificidad de unión a ADN

Muchos estudios muestran que las proteínas de racimo de zinc reconocen elementos altamente
relacionados que contienen secuencias de trinucleótidos en formas simples o repetidas, ya sea en formato
simétrico o asimétrico. Los tripletes de CGG son comunes, aunque también se han informado variaciones
dentro de estos elementos de unión (Tabla 2). Debido a que estos reguladores transcripcionales altamente
conservados se dirigen a secuencias muy similares, se necesitan varias estrategias para generar un amplio
repertorio de sitios de unión. Esto garantiza que la proteína requerida pueda realizar su propia tarea
regulatoria específica (156, 233, 260, 267). Como se indicó anteriormente, muchos factores influyen en la
orientación y la unión del ADN por las proteínas del racimo de zinc. En términos de la estructura de la
proteína, muchos componentes del DBD contribuyen sustancialmente en la unión al ADN objetivo. Además,
los nucleótidos que rodean a los tripletes CGG también determinan las afinidades de unión al ADN en cierta
medida (195). Sin embargo, dos determinantes muy importantes de la especificidad de unión al ADN son la
orientación de los tripletes CGG y la separación entre estos tripletes.

Las proteínas del racimo de zinc pueden unirse como homodímeros a los tripletes de CGG que están
orientados en repeticiones invertidas, invertidas o directas. Gal4p, Put3p y Ppr1p se unen a repeticiones
invertidas, por lo que los grupos de zinc de cada monómero se enfrentan entre sí (Fig. 2). Leu3p y Pdr3p
ejemplifican cómo un enlace de homodímero a una repetición evertida consiste en dos grupos de zinc
enfrentados uno contra el otro, mientras que un homodímero Hap1p contiene dos grupos de zinc
orientados en la misma dirección para unirse a una repetición directa (Fig. 2) . La figura 3 representa un
modelo que ilustra esta unión diferencial. El espaciado entre las secuencias de trinucleótidos es crítico para
las proteínas del racimo de zinc que se unen a los tripletes CGG en la misma conformación. Por ejemplo,
Gal4p se une a tripletes CGG invertidos espaciados por 11 pb (CGG-N11-CCG), mientras que Put3p se une a
CGG separados por 10 pb (CGG-N10-CCG) (11, 242, 272).

A medida que se caracterizan más proteínas de racimo de zinc, la presencia de monómeros y heterodímeros
predice que, de manera realista, es probable que ocurran muchas variaciones y combinaciones de este
paradigma. Una posibilidad es que los heterodímeros formados por miembros de esta familia se unan
preferentemente a elementos combinatorios ligeramente diferentes, lo que aumenta el número de
posibles sitios de unión para esta clase de proteínas. La presencia fisiológica de los homodímeros Pdr1p y
Pdr3p y los heterodímeros Pdr1p / Pdr3p en levaduras proporciona evidencia que apoya esta teoría (167).

Queda por verse si otras estructuras / motivos / elementos de unión también pueden ser importantes en
el reconocimiento del ADN, pero aún no se han caracterizado. Un estudio reciente a gran escala que emplea
una estrategia poderosa para el análisis de la localización de todo el genoma demuestra que muchas
proteínas de racimo de zinc pueden regular otros genes diana a través de elementos diferentes de los
identificados inicialmente. La técnica combinó la inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) de
aproximadamente 200 reguladores transcripcionales marcados en S. cerevisiae (incluidas muchas proteínas
de racimo de zinc) con micromatrices de ADN que consisten en todas las secuencias intergénicas dentro del
genoma de la levadura. Este enfoque es útil cuando se identifican objetivos adicionales para un regulador
transcripcional, así como nuevos sitios de reconocimiento de ADN (Tabla 2). Sin embargo, también
demuestra cómo algunos elementos de unión no se ajustan al modelo estándar para las proteínas de
agrupación de zinc, lo que implica que otros factores que determinan la especificidad de unión al ADN
pueden pasar desapercibidos y aún no se han dilucidado.

Las proteínas de tipo importina o importina se han caracterizado en células de mamíferos y levaduras.
Aunque no se ha descifrado ninguna estrategia general para la importación de proteínas del grupo de zinc,
se han identificado algunos NLS en Aspergillus PrnA y AlcR, así como en S. cerevisiae Gal4p y Pdr1p. Gal4p
interactúa directamente (sin la ayuda de la subunidad) con el complejo Rsl1p / Kap95p, homólogo de
levadura del receptor de importina, así como con otra importina llamada Nmd5p (32, 33). Pdr1p usa el
complejo Pse1p / Kap121p, que es otro miembro de la familia relacionada con la importación de levadura
(52). AlcR requiere tres proteínas relacionadas con la importación: Kap104p, Sxm1p y Nmd5p. Además, los
NLS de estas proteínas mencionadas anteriormente se encuentran en el extremo N, dentro o muy cerca del
DBD (192). Por lo tanto, las diferencias en la importación nuclear de unas pocas proteínas de racimo de zinc
reflejan los muchos mecanismos diferentes requeridos para cumplir esta tarea, como en los eucariotas
superiores.

Un proyecto de localización de proteínas a gran escala realizado por Huh et al. ha proporcionado mucha
información sobre las proteínas del cúmulo de zinc y otras con respecto a su ubicación dentro del entorno
celular.

ración (106). Sus hallazgos, así como los de otros estudios basados en la localización de proteínas en racimo
de zinc, se resumen en la Tabla 3. Las ubicaciones de otras proteínas caracterizadas se asumen en función
de sus funciones; Cep3p forma parte del complejo kinetochore y, por lo tanto, debe estar localizado en los
microtúbulos y el centrómero (106, 143, 250), mientras que Rsc3p y Rsc30p comparten una función de
remodelación de la cromatina y lo más probable es que también desempeñen sus funciones únicamente
en el núcleo ( 8).

Activación por fosforilación

Varias proteínas del racimo de zinc se activan por un evento de fosforilación o desfosforilación. Por ejemplo,
Gal4p se activa en la fosforilación. En ausencia de galactosa, Gal80p reprime la actividad de Gal4p al cubrir
su dominio de activación (161; revisado en las referencias 236 y 263). Gal4p se fosforila en múltiples sitios
(184, 185, 228, 229). En condiciones no inductoras, se observan una forma no fosforilada y una forma
fosforilada de Gal4p. La presencia del inductor galactosa da como resultado la aparición de una segunda
forma fosforilada asociada con Gal4p transcripcionalmente activa. La fosforilación en un solo residuo de
serina (Ser699) en el dominio de activación C-terminal parece ser necesaria para la activación (228). Sin
embargo, la fosforilación de Ser699 no es absolutamente necesaria para la actividad de Gal4p, ya que un
mutante de Ser699-Ala Gal4p muestra actividad transcripcional en células que carecen de Gal80p o en
presencia de niveles altos de galactosa (219). A partir de estas observaciones, Rohde et al. (219) sugirió un
modelo en el que se requiere la fosforilación de Gal4p para una respuesta aguda a la galactosa.

Otras dos proteínas de racimo de zinc, Pdr1p y Pdr3p, también se han identificado como fosfoproteínas,
aunque las distintas funciones desempeñadas por las isoformas fosforiladas aún no se han dilucidado (167).
Mamnun et al. eliminó varias posibilidades para la forma de Pdr3p fosforilada en el extremo C, incluida la
localización nuclear, la formación de dímeros y el cambio proteolítico (167). Además, Cat8p y Sip4p son
otros dos miembros de esta familia que se caracterizan por fosfoproteínas y son activadores de genes
implicados en la gluconeogénesis. Ambos se fosforilan durante la desrepresión de genes diana (34, 212,
276). Del mismo modo, la capacidad de unión al ADN de Rgt1p también está regulada por la fosforilación.
Cuando las células se cultivan en glucosa, Rgt1p se fosforila. Esto inhibe su unión a sus promotores diana,
evitando así su represión transcripcional de los genes del transportador de hexosa (74, 123, 182).

Al menos dos proteínas de racimo de zinc se fosforilan en respuesta a un estrés externo. War1p es
responsable de la regulación positiva del gen que codifica el transportador ABC Pdr12p en respuesta a un
estrés ácido débil. Los datos sugieren que War1p se fosforila rápidamente en presencia de sorbato,
benzoato y propionato, muy probablemente para activar la transcripción (131). De manera similar, Put3p
se fosforila diferencialmente en la respuesta de las células a diferentes fuentes de nitrógeno (105).

Ocupación del promotor

La ocupación del promotor de algunas proteínas del grupo de zinc está influenciada por factores externos
que conducen a la variación en la unión en los sitios objetivo. Por ejemplo, la unión de Upc2p y Ecm22p,
dos reguladores de los genes de biosíntesis de ergosterol, está influenciada por el tratamiento con
lovastatina, un inhibidor de la vía del ergosterol. Mientras que el nivel de Upc2p se incrementa en ERG3, el
nivel de la proteína Ecm22p del grupo de zinc estrechamente relacionado se reduce en este mismo
promotor (48). De manera similar, el análisis de la ubicación del genoma (ChIP-chip) reveló que la unión de
Stb5p se potencia en algunos genes diana cuando las células se tratan con la diamida del agente oxidante.
Este tratamiento también conduce a la unión de Stb5p a genes diana adicionales no ocupados por Stb5p en
células no tratadas (138).

Reclutamiento de remodeladores de cromatina, histona

Modificaciones, y Cofactores.

El ADN eucariótico se empaqueta estrechamente en cromatina, lo que dificulta la transcripción al limitar la

accesibilidad del ADN a los activadores de la transcripción y otros factores que conforman la maquinaria de
transcripción. Las proteínas del racimo de zinc a veces requieren la ayuda de complejos de remodelación
de cromatina, enzimas modificadoras de histonas y / o cofactores transcripcionales para superar la
naturaleza represiva de la cromatina y facilitar la transcripción del gen. Esta sección describe algunas de las
relaciones conocidas entre las proteínas del racimo de zinc y los remodeladores / cofactores de cromatina
que reclutan en sus promotores objetivo.

Una histona acetiltransferasa bien caracterizada en S. cerevisiae es el complejo Spt-Ada-Gcn5-

acetiltransferasa (SAGA). Está altamente conservado a lo largo de la evolución (complejo P / CAF en
humanos) (125). Las proteínas Spt y Ada tienen funciones separadas aparte de la actividad acetiltransferasa
de la subunidad Gcn5p (125). Un número de genes de levadura, incluidos GAL1-10 y PDR5, son
dependientes de SAGA (19, 77, 139, 170). El dominio de activación de Gal4p es responsable de reclutar el
complejo SAGA para el promotor GAL1-10, aunque la transcripción no depende de la subunidad Gcn5p
(139).

Como se describió anteriormente, al menos tres proteínas de agrupamiento de zinc (Pdr1p, Pdr3p y Rdr1p)
regulan la transcripción de PDR5 a través de PDRE dispersos en todo el promotor (3, 4, 97, 119,120, 125).
Una interacción entre Pdr1p y el complejo SAGA se detectó mediante un ensayo de dos híbridos hace varios
años, y la evidencia sugiere que tal vez esta interacción en realidad causó un efecto inhibitorio en la
expresión de PDR5 (170). Desde entonces se ha aclarado que SAGA es necesaria para activar la transcripción
de PDR5 (77). Las subunidades Spt3p y Spt20p / Ada5p, pero no Gcn5p, son necesarias para activar la
transcripción (77). El promotor PDR5 también está ocupado por otros coactivadores, incluido el complejo
mediador y el complejo SWI / SNF de remodelación de cromatina (77).

Muchos genes de levadura están regulados negativamente por las histonas deacetilasas (HDAC). Al menos
seis HDACs existen en levadura. Los genes de levadura RPD3, HDA1, HOS1, HOS2, HOS3 y SIR2 codifican
HDAC (18). Un complejo HDAC bien caracterizado en levadura es el complejo Rpd3p / Sin3p. El componente
Rpd3p ejerce la actividad de la histona desacetilasa (259), mientras que Sin3p se caracteriza como un
corepressor que depende de Rpd3p para coordinar su efecto represivo (114, 279). El complejo Rpd3 / Sin3p
HDAC regula negativamente una variedad de genes implicados en numerosos procesos celulares. Kadosh y
Struhl (114) demostraron que la proteína Ume6p zinc cluster se basa en este complejo modificador de
histonas para reprimir sus genes objetivo. Además, mostraron que solo se necesita una pequeña región
dentro de la proteína Ume6p para reclutar este complejo a un nivel específico promotor (114).
Curiosamente, dos proteínas de agrupamiento de zinc adicionales, codificadas por los genes STB4 y STB5,
interactúan con el corepressor Sin3p en un ensayo de dos híbridos (118), aunque no se ha encontrado una
relación entre estas interacciones y la actividad transcripcional inhibitoria. establecido. Rgt1p es otra
proteína de grupo de zinc que depende de un corepressor para ejercer su efecto represivo. Interactúa
físicamente con el pulsador central Ssn6p para regular negativamente los genes HXT cuando se agotan las
fuentes de glucosa (197, 208). El complejo Ssn6p-Tup1p se caracterizó por primera vez como un represor
general de la transcripción en levadura (121). Desde entonces, su asociación funcional con múltiples HDAC
se ha dilucidado (47, 281, 291).
Como sus nombres lo indican, los complejos de modelado de cromatina dependientes de ATP requieren
hidrólisis de ATP para llevar a cabo su función disruptiva de la cromatina. Por lo general, se componen de
varias subunidades de proteínas. Un estudio de todo el genoma ha revelado que aproximadamente el 5%
de todos los genes de levadura son SWI / SNF dependientes (103). Al menos dos proteínas de racimo de
zinc necesitan el complejo SWI / SNF en los promotores diana. Coˆt´e et al. mostró que la unión de Gal4p
se facilita y estimula mediante el complejo SWI / SNF (42). La orientación de SWI / SNF a GAL1 después de
la inducción de galactosa requirió la presencia de Gal4p (146). Hap1p (un activador de los genes de la
respiración, incluidos CYC1 y CYC7) también se basa en un remodelador de cromatina SWI / SNF funcional
para la actividad transcripcional (88).

Otros remodeladores de cromatina dependientes de ATP en levaduras incluyen la familia basada en ISWI
(interruptor de imitación) y el complejo RSC (remodela la estructura de la cromatina). Se sabe que los
complejos ISWI organizan o desplazan los nucleosomas al deslizarlos a lo largo de un tramo de ADN, y esto
puede llevar a la represión o activación de genes diana (125). El complejo RSC es similar al complejo SWI /
SNF en que también contiene un gran número de subunidades. Ume6p es otro ejemplo más de una proteína
de agrupación de zinc que recluta a la subunidad Isw2p para llevar a cabo la represión de sus genes objetivo,
mientras colabora con el complejo HDAC mencionado anteriormente (66, 81). También se ha demostrado
que la activación transcripcional por las proteínas de fusión Gal4p requiere miembros de la familia basada
en ISW (148, 180). Como se indicó anteriormente, los genes RSC3 y RSC30 codifican proteínas de agrupación
de zinc que forman parte del megacomplejo RSC. Los grupos de zinc de ambas proteínas son necesarios
para la función adecuada del complejo de proteínas (8). Ya sea que interactúen o no directamente con el
ADN mediante la unión a una secuencia de consenso o si su motivo DBD ayuda a dirigir el complejo a
promotores dependientes de RSC aún no se ha dilucidado.

PROTEINAS DEL GRUPO ZINC EN

SACAROMICAS CEREVISIAE

El estudio de las proteínas de racimo de zinc en levaduras en ciernes ha proporcionado gran parte del marco
para comprender los reguladores transcripcionales fúngicos y sus funciones dentro de la célula. La
secuenciación del genoma de Saccharomyces cerevisiae ha permitido la identificación de 55 miembros
dentro de esta familia (5, 233, 260, 267), basado en la secuencia de aminoácidos consenso bien conservada
del motivo Zn (II) 2Cys6. Esto lo convierte en una de las mayores familias de factores de transcripción en la
levadura. Además, pueden actuar como represores, como activadores, o como activadores y represores de
ciertos genes (267). Por ejemplo, Rgt1p y Ume6p son activadores y represores del transporte de glucosa y
los genes meióticos tempranos, respectivamente (110, 198). También se ha demostrado recientemente
que Stb5p actúa como un activador y represor en presencia de estrés oxidativo (138).

Roles

Una gran cantidad de procesos celulares está orquestada por miembros de la superfamilia Gal4p. Estos
procesos incluyen el metabolismo del azúcar, la gluconeogénesis y la respiración, el metabolismo de los
aminoácidos y la síntesis de vitaminas, la mitosis, la meiosis, la reprogramación de la cromatina, la
utilización de nitrógeno y la proliferación de peroxisomas, así como la respuesta al estrés y el PDR (ver más
abajo). La Tabla 3 clasifica sus funciones caracterizadas inicialmente en varias categorías amplias y es una
compilación de varias obras (106, 156, 194, 260, 267). Muchos de estos reguladores transcripcionales no
solo tienen más de una función distinta, sino que también pueden tener funciones superpuestas. A menudo
coordinan la regulación de genes de diferentes subconjuntos de genes juntos o en diferentes momentos.
Por ejemplo, Ume6p desempeña un papel en el metabolismo no fermentativo (234), pero sus funciones
primarias parecen ser la regulación de los genes meióticos tempranos y la expresión represiva de las
enzimas de síntesis biológica de arginina (7, 22, 110, 125, 202, 224, 248). Otro ejemplo es Upc2p, cuya
función principal es activar los genes de biosíntesis de ergosterol, pero que también desempeña funciones
secundarias en la captación de esteroles anaeróbicos y en la expresión de genes de manoproteína DAN /
TIR (2, 38, 284). De manera similar, las proteínas de agrupación de zinc Pdr1p y Pdr3p son conocidas por
sus funciones principales en la regulación de los genes PDR, pero también regulan los genes de transporte
de hexosa HXT9 y HXT11, además de estar implicadas recientemente en el control transcripcional de los
genes de biosíntesis de esfingolípidos (91, 129 ). Además, Pdr3p tiene otras funciones que no incluyen
Pdr1p, como la señalización retrógrada, así como un nuevo papel en el control de los genes MAG1 y DDI1
inducibles por daños en el ADN (298).

Dos proteínas de racimo de zinc son esenciales. Cep3p es parte del complejo kinetochore necesario durante
la mitosis (143, 250), y Rsc3p es una subunidad dentro de la remodelación de la cromatina de tipo SWI /
SNF RSC. El RSC es bastante abundante en las células y se requiere para la activación de varios genes (125).
Por último, Stb5p también es esencial pero solo en ciertos antecedentes genéticos (4, 191, 197).

Metabolismo de aminoácidos

Varias proteínas del grupo de zinc están involucradas en el control de la expresión de los genes necesarios
para el metabolismo de los aminoácidos. Por ejemplo, Leu3p participa en la regulación de la síntesis de
aminoácidos ramificados (para una revisión detallada, consulte la referencia 127). Cha4p controla la
expresión de los genes para el catabolismo de la serina y la treonina, mientras que el activador Lys14p es
específico para la síntesis de lisina. Aro80p, otra proteína de grupo de zinc, controla la expresión de genes
involucrados en el catabolismo de los aminoácidos aromáticos (triptófano, fenilalanina y tirosina). Estos
aminoácidos pueden metabolizarse a alcoholes (por ejemplo, triptofol) para usar como fuente de
nitrógeno. ARO9 codifica una aminotransferasa aromática involucrada en la primera etapa catabólica de
los aminoácidos aromáticos. La expresión de ARO9 aumenta en presencia de ácidos aromáticos y se reprime
en presencia de una fuente rica de nitrógeno como el amoníaco (108). Aro80p regula positivamente la
expresión de ARO9 a través de un elemento de ADN llamado UASaro que se encuentra en su región
promotora (108). Las células de levadura diploides pueden cambiar a una forma filamentosa invasiva
cuando se privan de nitrógeno (164). Curiosamente, algunos alcoholes aromáticos, como el triptofol,
promueven la morfogénesis (36). La expresión de ARO9 y ARO10 (otro gen clave para la producción de
alcoholes aromáticos) depende de la densidad celular o baja concentración de amoníaco y está sujeta a la
autorregulación por triptofol, un proceso que requiere Aro80p (36). Por lo tanto, la proteína de racimo de
zinc Aro80p es parte de un sistema de detección de quórum que une las condiciones ambientales con la
morfogénesis (245).

Al igual que muchas otras proteínas de racimo de zinc, Cha4p activa la transcripción de genes diana de una
manera clásica al unirse a secuencias específicas que se encuentran en sus regiones promotoras. Por
ejemplo, la expresión de CHA1 dependiente de Cha4p (que codifica una L-serina / L-treonina desaminasa)
se induce en presencia de serina o treonina para su utilización como fuentes de nitrógeno. El promotor
CHA1 contiene dos UASCHA que confieren serina o treonina cuando se colocan frente a un promotor
heterólogo (21, 102). Curiosamente, Cha4p también controla la expresión del gen SER3 biosintético SER3
indirectamente a través de SRG1 (171, 172). El gen SRG1, que no codifica una proteína, se encuentra justo
corriente arriba del gen SER3. La expresión de SRG1 causa interferencia transcripcional que resulta en la
represión de SER3. Cha4p se une al promotor SRG1 y se activa en presencia de serina, lo que resulta en la
transcripción de SRG1 y, indirectamente, en la represión de SER3 (172).

Resistencia a múltiples fármacos

Una gran proporción de proteínas de racimo de zinc (al menos 12 en S. cerevisiae) se han implicado en la
respuesta de la célula al estrés y la resistencia a múltiples fármacos. Claramente, la célula fúngica debe
confiar en este grupo de reguladores para comunicar las presiones ambientales externas o internas. La
resistencia a múltiples fármacos, o PDR, es un fenómeno generalizado que está altamente conservado. Se
encuentra a lo largo de la evolución en organismos que van desde bacterias hasta humanos y se define
como la capacidad de la célula para volverse resistente a una multitud de compuestos citotóxicos
estructuralmente y funcionalmente diferentes (113, 183, 230). La PDR es causada por la sobreexpresión de
las bombas de proteínas asociadas a la membrana y, en consecuencia, la expulsión de una amplia gama de
moléculas, incluidos los fármacos antimicrobianos (246). En bacterias y otros microorganismos como los
hongos, la resistencia a múltiples fármacos es un mecanismo evolutivo y evasivo que presenta un obstáculo
importante en la prevención de enfermedades infecciosas. También plantea muchos problemas en la
preparación de alimentos y las industrias agrícolas. En los seres humanos, la resistencia a múltiples
fármacos adquirida en las células tumorales dificulta la quimioterapia efectiva. Aunque la mayoría de los
medicamentos se usan contra enfermedades humanas (cáncer) o microorganismos patógenos (bacterias,
pro- tozoos u hongos), muchos de los mecanismos subyacentes en la tolerancia adquirida a los
medicamentos parecen estar muy conservados, incluso entre organismos muy distantes (227). ). Por lo
tanto, Sac-charomyces cerevisiae es un excelente modelo eucariota para proporcionar información sobre
el fenómeno de la resistencia pleiotrópica. Se han caracterizado muchas estrategias distintas en levaduras,
en relación con la forma en que las células responden a diferentes estreses o moléculas dañinas que pueden
constituir un entorno celular en constante cambio. Abarcan desde vías reguladoras muy específicas hasta
reacciones generalizadas y se caracterizan en general en dos redes interconectadas: la respuesta al estrés
y la red PDR. Las vías inducidas en respuesta al estrés pueden amortiguar factores externos como el choque
térmico, el pH bajo, los ácidos débiles y la alta osmolaridad (288). Como se mencionó anteriormente, la PDR
suele estar mediada por la regulación ascendente de las bombas de flujo de múltiples fármacos o los
transportadores de proteínas, de los cuales existen dos tipos: los transportadores ABC y los miembros de
la superfamilia facilitadora principal. Dos familias prominentes de reguladores transcripcionales son
factores contribuyentes igualmente significativos en cualquiera de estas redes o en ambas. Son la familia
de proteínas bZip (revisada en la referencia 183) y las proteínas de racimo de zinc.

Reguladores transcripcionales implicados

Las proteínas del grupo de zinc están implicadas en la PDR porque muchas de ellas regulan positivamente
los genes que codifican las bombas de salida de medicamentos, lo que confiere resistencia a los
medicamentos (Fig. 4). Además, la tolerancia al fármaco y la resistencia adquirida al fármaco en
Saccharomyces cerevisiae a menudo se remontan a mutaciones hiperactivas o de ganancia de función
albergadas en algunos de estos reguladores transcripcionales. Pdr1p y Pdr3p son dos proteínas agrupadas
de zinc que han sido nombradas los reguladores maestros de la resistencia a los medicamentos en la
levadura en ciernes (revisada en la referencia 183). Pdr1p se caracterizó por primera vez por una serie de
alelos multirresistentes dominantes que se asignaron a la ubicación de su gen (213, 232). Pdr3p se identificó
inicialmente como un gen que confiere resistencia al inhibidor mitocondrial mucidina (252). Juntos, Pdr1p
y Pdr3p son responsables de la regulación, tanto positiva como negativa, de múltiples genes relacionados
con la RDP. Actúan sobre los genes diana uniéndose a los PDRE en los promotores de los genes diana (119,
120, 240). Los genes diana ligados directamente al fenómeno PDR incluyen los transportadores ABC
codificados por los genes PDR5, SNQ2 y YOR1. Los promotores de estos genes albergan uno o varios PDRE.
Un elemento regulador PDRE perfecto contiene la secuencia de consenso TCCGCGGA, que muestra los
tripletes CGG en una orientación repetida evertida. Es importante destacar que el promotor PDR3 también
contiene dos PDRE, y estos elementos no solo constituyen un componente crítico de un bucle
autorregulador positivo sino que también están controlados por Pdr1p (51).
Como se indicó anteriormente, las mutaciones de ganancia de función en Pdr1p y Pdr3p pueden dar como
resultado una resistencia al fármaco debido a un aumento de la producción de las bombas de flujo de
múltiples medicamentos. Más específicamente, al menos siete mutaciones adquiridas en el gen PDR1 se
consideran mutaciones de resistencia a múltiples fármacos. Tres de estas mutaciones puntuales (pdr1-2,
pdr1-6 y pdr1-7) están dentro de 10 aminoácidos entre sí, ubicadas dentro de los motivos estructurales I y
II que se encuentran en el dominio regulador de Pdr1p, apoyando su papel como Un dominio inhibitorio.
Otras dos mutaciones, pdr1-3 y pdr1-8, se encuentran dentro o justo fuera del dominio de activación C-
terminal (29). Los niveles de ARNm de PDR5 y SNQ2 son más altos en un mutante pdr1-3, pero también
están elevados en el mutante pdr1-8 también. Los pdr1-12 y pdr1-33 mutantes de Pdr1p recientemente
identificados median la resistencia al compuesto antimicrobiano diazaborine al sobreexpresar los
transportadores ABC Pdr5p, Snq2p y Ycf1p, así como al miembro de la superfamilia del facilitador principal
Flr1p (282). El mismo estudio mostró que el aumento de los niveles de ARNm de PDR3 también es causado
por el alelo pdr1-12. Muchos mutantes hiperactivos de Pdr3p también inducen una mayor expresión de
PDR5 y SNQ2, así como PDR3 (196). Cinco mutantes caracterizados por Nourani et al. (196) también se
ubican en un segmento proteico corto dentro de los motivos estructurales I y II del dominio regulador.

La identificación de otra proteína del grupo de zinc, Yrr1p (resistencia a la reveromicina A de la levadura),
como un regulador adicional de los genes de la PDR proporcionó algunas de las primeras pruebas de
interferencia entre los reguladores de la PDR en S. cerevisiae (296). También demostró que muchos de los
objetivos de Pdr1p, Pdr3p y Yrr1p se superponen (45, 46). Yrr1p (inicialmente denominado Pdr2p) se
implicó originalmente en la RDP porque otorgaba resistencia al metil sulfo-meturon (un inhibidor de la
acetolactato sintasa) (64). Ahora se sabe que Yrr1p también confiere resistencia al reveromycin A del
inhibidor del ciclo celular, a la oligomicina y a la 4-nitroquino-línea-1-óxido al unirse al promotor YOR1 y
regular positivamente la expresión del transportador ABC (45, 64 ). El flujo de salida de estos compuestos
a través de Yor1p resulta en resistencia a estos compuestos tóxicos. Curiosamente, Yrr1p también parece
ser autorregulado; contiene un elemento de respuesta putativo Yrr1p (YRRE) y un PDRE en su promotor
(296). Como se indicó anteriormente, la expresión de YRR1 está aún más regulada por otra proteína de cinc,
Yrm1p (158). Experimentos recientes en microarrays realizados por Le Crom et al. proporcionar evidencia
de que Yrr1p regula positivamente los genes a través de YRRE que contienen la secuencia de consenso T /
ACCGC / TG / TG / TA / TA / T (144). Se postula que los objetivos Yrr1p probablemente se superponen con
los objetivos Pdr1p / Pdr3p porque las secuencias YRRE y PDRE están estrechamente relacionadas. Un
mutante de ganancia de función, el mutante yrr1-1, proporciona más información sobre cómo funciona
este regulador transcripcional. La mutación es una duplicación de 12 aminoácidos localizada cerca del
extremo C, y produce una resistencia marcada a la 4-nitro-quinolina-1-óxido en comparación con la de la
cepa de tipo salvaje (46). Los análisis de transferencia Northern muestran que los niveles de ARNm de SNQ2
están constitutivamente elevados en un mutante yrr1-1 (46).

Otros reguladores de la resistencia farmacológica incluyen las proteínas de cúmulo de zinc Pdr8p, Stb5p,
Rds1p y Rds2p. Pdr8p se une a los promotores de ciertos genes implicados en PDR, como YOR1, Como se
indicó anteriormente, las mutaciones de ganancia de función en Pdr1p y Pdr3p pueden dar como resultado
una resistencia al fármaco debido a un aumento de la producción de las bombas de flujo de múltiples
medicamentos. Más específicamente, al menos siete mutaciones adquiridas en el gen PDR1 se consideran
mutaciones de resistencia a múltiples fármacos. Tres de estas mutaciones puntuales (pdr1-2, pdr1-6 y pdr1-
7) están dentro de 10 aminoácidos entre sí, ubicadas dentro de los motivos estructurales I y II que se
encuentran en el dominio regulador de Pdr1p, apoyando su papel como Un dominio inhibitorio. Otras dos
mutaciones, pdr1-3 y pdr1-8, se encuentran dentro o justo fuera del dominio de activación C-terminal (29).
Los niveles de ARNm de PDR5 y SNQ2 son más altos en un mutante pdr1-3, pero también están elevados
en el mutante pdr1-8 también. Los pdr1-12 y pdr1-33 mutantes de Pdr1p recientemente identificados
median la resistencia al compuesto antimicrobiano diazaborine al sobreexpresar los transportadores ABC
Pdr5p, Snq2p y Ycf1p, así como al miembro de la superfamilia del facilitador principal Flr1p (282). El mismo
estudio mostró que el aumento de los niveles de ARNm de PDR3 también es causado por el alelo pdr1-12.
Muchos mutantes hiperactivos de Pdr3p también inducen una mayor expresión de PDR5 y SNQ2, así como
PDR3 (196). Cinco mutantes caracterizados por Nourani et al. (196) también se ubican en un segmento
proteico corto dentro de los motivos estructurales I y II del dominio regulador.

La identificación de otra proteína del grupo de zinc, Yrr1p (resistencia a la reveromicina A de la levadura),
como un regulador adicional de los genes de la PDR proporcionó algunas de las primeras pruebas de
interferencia entre los reguladores de la PDR en S. cerevisiae (296). También demostró que muchos de los
objetivos de Pdr1p, Pdr3p y Yrr1p se superponen (45, 46). Yrr1p (inicialmente denominado Pdr2p) se
implicó originalmente en la RDP porque otorgaba resistencia al metil sulfo-meturon (un inhibidor de la
acetolactato sintasa) (64). Ahora se sabe que Yrr1p también confiere resistencia al reveromycin A del
inhibidor del ciclo celular, a la oligomicina y a la 4-nitroquino-línea-1-óxido al unirse al promotor YOR1 y
regular positivamente la expresión del transportador ABC (45, 64 ). El flujo de salida de estos compuestos
a través de Yor1p resulta en resistencia a estos compuestos tóxicos. Curiosamente, Yrr1p también parece
ser autorregulado; contiene un elemento de respuesta putativo Yrr1p (YRRE) y un PDRE en su promotor
(296). Como se indicó anteriormente, la expresión de YRR1 está aún más regulada por otra proteína de cinc,
Yrm1p (158). Experimentos recientes en microarrays realizados por Le Crom et al. proporcionar evidencia
de que Yrr1p regula positivamente los genes a través de YRRE que contienen la secuencia de consenso T /
ACCGC / TG / TG / TA / TA / T (144). Se postula que los objetivos Yrr1p probablemente se superponen con
los objetivos Pdr1p / Pdr3p porque las secuencias YRRE y PDRE están estrechamente relacionadas. Un
mutante de ganancia de función, el mutante yrr1-1, proporciona más información sobre cómo funciona
este regulador transcripcional. La mutación es una duplicación de 12 aminoácidos localizada cerca del
extremo C, y produce una resistencia marcada a la 4-nitro-quinolina-1-óxido en comparación con la de la
cepa de tipo salvaje (46). Los análisis de transferencia Northern muestran que los niveles de ARNm de SNQ2
están constitutivamente elevados en un mutante yrr1-1 (46).

Otros reguladores de la resistencia farmacológica incluyen las proteínas de cúmulo de zinc Pdr8p, Stb5p,
Rds1p y Rds2p. Pdr8p se une a los promotores de ciertos genes implicados en PDR, como YOR1, PDR15 y
AZR1. Sin embargo, esta unión se demostró utilizando un Pdr8p quimérico; por lo tanto, el papel exacto de
la proteína de tipo salvaje en la RDP no está claro (100). Stb5p se seleccionó originalmente de una pantalla
de dos híbridos de levadura porque interactuaba con el corepresor Sin3p (118), mientras que las cepas de
eliminación rds1 y rds2 exhiben interesantes fenotipos de fármacos que también pueden implicarlas en el
PDR. Las cepas de deleción rds1 y stb5 son hipersensibles a la cicloheximida, y una cepa de deleción rds2
presenta un deterioro severo del crecimiento en presencia del antifúngico azole ketoconazol (4). El mismo
estudio muestra que las células que carecen de STB5 tienen niveles reducidos de ARNm de SNQ2, PDR16 y
PDR5. Se demuestra evidencia adicional de que Stb5p es un regulador positivo directo de la transcripción
de SNQ2 mediante la unión de Stb5p al promotor de SNQ2 in vivo (138). Además, en presencia de diamida,
Stb5p es un activador directo de otros dos genes que codifican las bombas de fármaco Atr1p y Pdr12p (138).

Por último, la proteína de racimo de zinc Rdr1p (el represor de la resistencia al fármaco) se caracteriza como
un regulador negativo de los genes PDR (97). Una cepa rdr1 es resistente a la cicloheximida (4, 97). Rdr1p
se confirmó como un represor transcripcional en experimentos de micromatrices que mostraron que los
niveles de ARNm aumentaron significativamente para cinco genes en la cepa de eliminación en
comparación con la cepa de tipo salvaje (97). Curiosamente, los cinco de estos genes.

Como se indicó anteriormente, las mutaciones de ganancia de función en Pdr1p y Pdr3p pueden dar como
resultado una resistencia al fármaco debido a un aumento de la producción de las bombas de flujo de
múltiples medicamentos. Más específicamente, al menos siete mutaciones adquiridas en el gen PDR1 se
consideran mutaciones de resistencia a múltiples fármacos. Tres de estas mutaciones puntuales (pdr1-2,
pdr1-6 y pdr1-7) están dentro de 10 aminoácidos entre sí, ubicadas dentro de los motivos estructurales I y
II que se encuentran en el dominio regulador de Pdr1p, apoyando su papel como Un dominio inhibitorio.
Otras dos mutaciones, pdr1-3 y pdr1-8, se encuentran dentro o justo fuera del dominio de activación C-
terminal (29). Los niveles de ARNm de PDR5 y SNQ2 son más altos en un mutante pdr1-3, pero también
están elevados en el mutante pdr1-8 también. Los pdr1-12 y pdr1-33 mutantes de Pdr1p recientemente
identificados median la resistencia al compuesto antimicrobiano diazaborine al sobreexpresar los
transportadores ABC Pdr5p, Snq2p y Ycf1p, así como al miembro de la superfamilia del facilitador principal
Flr1p (282). El mismo estudio mostró que el aumento de los niveles de ARNm de PDR3 también es causado
por el alelo pdr1-12. Muchos mutantes hiperactivos de Pdr3p también inducen una mayor expresión de
PDR5 y SNQ2, así como PDR3 (196). Cinco mutantes caracterizados por Nourani et al. (196) también se
ubican en un segmento proteico corto dentro de los motivos estructurales I y II del dominio regulador.

La identificación de otra proteína del grupo de zinc, Yrr1p (resistencia a la reveromicina A de la levadura),
como un regulador adicional de los genes de la PDR proporcionó algunas de las primeras pruebas de
interferencia entre los reguladores de la PDR en S. cerevisiae (296). También demostró que muchos de los
objetivos de Pdr1p, Pdr3p y Yrr1p se superponen (45, 46). Yrr1p (inicialmente denominado Pdr2p) se
implicó originalmente en la RDP porque otorgaba resistencia al metil sulfo-meturon (un inhibidor de la
acetolactato sintasa) (64). Ahora se sabe que Yrr1p también confiere resistencia al reveromycin A del
inhibidor del ciclo celular, a la oligomicina y a la 4-nitroquino-línea-1-óxido al unirse al promotor YOR1 y
regular positivamente la expresión del transportador ABC (45, 64 ). El flujo de salida de estos compuestos
a través de Yor1p resulta en resistencia a estos compuestos tóxicos. Curiosamente, Yrr1p también parece
ser autorregulado; contiene un elemento de respuesta putativo Yrr1p (YRRE) y un PDRE en su promotor
(296). Como se indicó anteriormente, la expresión de YRR1 está aún más regulada por otra proteína de cinc,
Yrm1p (158). Experimentos recientes en microarrays realizados por Le Crom et al. proporcionar evidencia
de que Yrr1p regula positivamente los genes a través de YRRE que contienen la secuencia de consenso T /
ACCGC / TG / TG / TA / TA / T (144). Se postula que los objetivos Yrr1p probablemente se superponen con
los objetivos Pdr1p / Pdr3p porque las secuencias YRRE y PDRE están estrechamente relacionadas. Un
mutante de ganancia de función, el mutante yrr1-1, proporciona más información sobre cómo funciona
este regulador transcripcional. La mutación es una duplicación de 12 aminoácidos localizada cerca del
extremo C, y produce una resistencia marcada a la 4-nitro-quinolina-1-óxido en comparación con la de la
cepa de tipo salvaje (46). Los análisis de transferencia Northern muestran que los niveles de ARNm de SNQ2
están constitutivamente elevados en un mutante yrr1-1 (46).

Otros reguladores de la resistencia farmacológica incluyen las proteínas de cúmulo de zinc Pdr8p, Stb5p,
Rds1p y Rds2p. Pdr8p se une a los promotores de ciertos genes implicados en PDR, como YOR1, PDR15 y
AZR1. Sin embargo, esta unión se demostró utilizando un Pdr8p quimérico; por lo tanto, el papel exacto de
la proteína de tipo salvaje en la RDP no está claro (100). Stb5p se seleccionó originalmente de una pantalla
de dos híbridos de levadura porque interactuaba con el corepresor Sin3p (118), mientras que las cepas de
eliminación rds1 y rds2 exhiben interesantes fenotipos de fármacos que también pueden implicarlas en el
PDR. Las cepas de deleción rds1 y stb5 son hipersensibles a la cicloheximida, y una cepa de deleción rds2
presenta un deterioro severo del crecimiento en presencia del antifúngico azole ketoconazol (4). El mismo
estudio muestra que las células que carecen de STB5 tienen niveles reducidos de ARNm de SNQ2, PDR16 y
PDR5. Se demuestra evidencia adicional de que Stb5p es un regulador positivo directo de la transcripción
de SNQ2 mediante la unión de Stb5p al promotor de SNQ2 in vivo (138). Además, en presencia de diamida,
Stb5p es un activador directo de otros dos genes que codifican las bombas de fármaco Atr1p y Pdr12p (138).

Por último, la proteína de racimo de zinc Rdr1p (el represor de la resistencia al fármaco) se caracteriza como
un regulador negativo de los genes PDR (97). Una cepa rdr1 es resistente a la cicloheximida (4, 97). Rdr1p
se confirmó como un represor transcripcional en experimentos de micromatrices que mostraron que los
niveles de ARNm aumentaron significativamente para cinco genes en la cepa de eliminación en
comparación con la cepa de tipo salvaje (97). Curiosamente, estos cinco genes (PDR5, PDR15, PDR16, RSB1
y PHO84) codifican proteínas asociadas a la membrana o membrana, y cuatro de estos genes (con la
excepción de PHO84) en realidad contienen PDRE en sus promotores. Además, la resistencia a la
cicloheximida exhibida en una cepa rdr1 está mediada por el transportador ABC Pdr5p, y Rdr1p parece
actuar negativamente en PDR5 a través de los mismos PDREs utilizados por Pdr1p / Pdr3p para activar la
transcripción (97). Aún no se ha determinado si Rdr1p reprime sus genes diana mediante la unión directa a
PDRE.

Los estudios mencionados anteriormente afirman que al menos tres proteínas de agrupamiento de zinc
diferentes (Pdr1p, Pdr3p y Rdr1p) modulan la transcripción del gen PDR5 actuando sobre los mismos PDRE
(4, 97, 120). Por lo tanto, estos tres reguladores deben cooperar de alguna manera juntos para regular este
gen transportador de medicamentos. Curiosamente, Pdr1p y Pdr3p son capaces de heterodimerizarse in
vivo (167). Stb5p se encuentra predominantemente como un heterodímero Pdr1p / Stb5p, mientras que la
proteína de racimo de zinc Yrr1p, que regula el SNQ2, prefiere formar homodímeros (3). Estas interacciones
describen una interacción compleja entre los reguladores de los genes PDR (Fig. 5). Además, se plantea la
hipótesis de que Pdr1p actúa como el regulador maestro de la resistencia a los medicamentos, ya que es la
única proteína de cinc en esta red que puede heterodimerizar con más de un compañero. Lo más probable
es que lo haga para responder a diferentes condiciones o cambios en el entorno extracelular o intercelular
de la célula, coordinando así una vía reguladora efectiva (3).

Regulación De La Biosíntesis De Ergosterol

La levadura también puede volverse resistente a ciertos medicamentos al usar otra estrategia, que implica
efectuar cambios en la ruta biosintética del ergosterol. Varias proteínas del racimo de zinc están
involucradas en la regulación de los genes en este proceso. El ergosterol se considera el esterol de consenso
en los hongos porque es el componente principal de la membrana celular fúngica. Desempeña muchas
funciones cruciales dentro de la célula, incluido el mantenimiento de la fluidez y la integridad de la
membrana al permitir que los lípidos, las proteínas que se extienden por la membrana o las proteínas
asociadas a la membrana funcionen correctamente (159). El ergosterol también contribuye
específicamente a la regulación del crecimiento y la proliferación celular (206, 211,

217, 218). Muchos fármacos desarrollados para inhibir específicamente el crecimiento de hongos tienen
como objetivo su biosíntesis (ver más abajo).

La vía biosintética del ergosterol se puede dividir en dos partes: la conversión bioquímica de la acetil
coenzima A en escualeno y la transformación del escualeno en ergosterol (203). Sin embargo, su síntesis es
energéticamente costosa y depende del oxígeno (203). Además, la levadura puede acumular esteroles
exógenos del ambiente solo en condiciones anaeróbicas (exclusión de esteroles aeróbicos). Por lo tanto, la
biosíntesis de ergosterol, sus compuestos intermedios y / o sus subproductos deben realizar otras funciones
críticas dentro de la célula de levadura, además de modular la estructura de la membrana (203). El
organismo modelo S. cerevisiae proporciona una base excelente para estudiar la resistencia adquirida a los
medicamentos antifúngicos, así como a otros compuestos tóxicos. Por ejemplo, la sobreexpresión de la
diana del fármaco azol único, una lanosterol 14-dimetilasa codificada por el gen ERG11, confiere resistencia
al fluconazol (130).

Upc2p y Ecm22p son dos proteínas de racimo de zinc altamente homólogas en S. cerevisiae que regulan la
expresión de los genes ERG dentro de la ruta biosintética del ergosterol, incluidos ERG2 y ERG3 (274).
Regulan positivamente la transcripción actuando sobre los elementos de respuesta de esterol en los
promotores de sus genes objetivo. De hecho, al menos 11 genes ERG que codifican enzimas que participan
en la biosíntesis de ergosterol contienen elementos de respuesta de esterol putativos en sus promotores
(274). Esto sugiere que la regulación por Upc2p / Ecm22p está mucho más extendida. Upc2p también
desempeña un papel importante en la acumulación de esteroles exógenos anaeróbicos, así como en el
control de los genes DAN / TIR que codifican manoproteínas implicadas en la reestructuración anaeróbica
de la pared celular (2). Upc2p (control de captación) se caracterizó inicialmente por una mutación de
ganancia de función en el gen UPC2 que permitía a las células captar esteroles exógenos incluso cuando se
cultivaban en presencia de oxígeno (44). También se ha descrito una mutación idéntica en el locus ECM22
(241). Este mutante upc2-1 contiene un solo cambio de aminoácido (Gly888Asp) dentro del dominio de
activación de esta proteína (44). Curiosamente, recientemente se demostró que el mutante upc2-1 puede
regular la transcripción de los genes transportadores ABC AUS1 y PDR11, los genes DAN / TIR y el propio
gen UPC2 en condiciones aeróbicas (284). Esto respalda la evidencia previa de otro bucle au- torregulador
dentro de la superfamilia Gal4p de proteínas agrupadas de zinc (2). También alude a un papel menor en la
regulación de los transportadores de membrana que pueden estar involucrados en la PDR.

Upc2p y Ecm22p (inicialmente caracterizadas como un mutante extracelular [160]) son idénticas en un 45%
según la secuencia de aminoácidos y tienen muchas funciones superpuestas (241). Más específicamente,
ambas proteínas de agrupación de zinc tienen DBD y dominios de activación C-terminales muy similares,
pero sus regiones medias son bastante diferentes (48). Se plantea la hipótesis de que deben realizar alguna
función esencial, como un doble nocaut

La cepa upc2 ecm22 es inviable en algunos fondos (241). Sin embargo, un análisis fenotípico de sus cepas
de eliminación sostiene que también deben tener roles distintos dentro de la célula que pueden incluir PDR.
Una cepa upc2 es sensible al antimicótico azole ketoconazol, mientras que una cepa ecm22 es sensible a la
cicloheximida (4). Además, un estudio reciente muestra que Upc2p y Ecm22p responden de manera
diferente tras la inducción de la vía biosintética de ergosterol por lovastatina. En células no tratadas, los
niveles de Ecm22p son significativamente más altos que los niveles de Upc2p (48). Davies et al. (48)
mostraron que en las células tratadas con lovastatina, Upc2p se sobreexpresa y se presenta en cantidades
copiosas en el promotor ERG3, mientras que Ecm22p está regulado a la baja y casi inexistente en el mismo
lugar.

Hap1p es otra proteína de grupo de zinc que regula la expresión del gen ERG11 (codifica la diana del fármaco
azol) de una manera dependiente de hemo y oxígeno (268, 273). El gen HAP1 también está regulado al alza
en una cepa upc2-1, y se postula que podría existir una interacción reguladora entre estas dos proteínas
del racimo de zinc (284). Aún no se ha establecido un vínculo claro entre Hap1p y la resistencia a los
medicamentos. Además, Stb5p fue identificado recientemente como un nuevo regulador de la síntesis de
ergosterol, ya que es un activador directo de ERG5, ERG11 y ERG25 en presencia de estrés oxidativo (138).

Reguladores transcripcionales de PDR

Un gran número de factores de transcripción en levaduras en ciernes coordinan el control de varios genes
involucrados en la resistencia a fármacos. Dado que la manipulación genética y el estudio de C. albicans son
lentos en comparación, solo dos proteínas de cinc de cinc están vinculadas hasta ahora a la RDP en esta
especie. FCR1 codifica una proteína de agrupación de zinc que se clonó de una biblioteca como un gen que
pudo complementar un fenotipo pdr1 pdr3. La sobreexpresión de FCR1 (resistencia al fluconazol 1) en
levaduras en ciernes produjo un aumento de la resistencia a fluconazol y cicloheximida, así como un
aumento en la expresión de PDR5 (256). Sorprendentemente, ese estudio también demostró que una cepa
de eliminación homocigótica de C. albicans fcr1 / fcr1 es en realidad hiperresistente al fluconazol y otros
fármacos antimicóticos. Los autores concluyeron que Fcr1p debe ser un regulador negativo de los genes de
resistencia a fármacos. Aún no se han identificado los promotores específicos a los que apunta Fcr1p y su
mecanismo de acción.

Tac1p (activador transcripcional de los genes de resistencia al fármaco por Candida) es la segunda proteína
agrupada de zinc de C. albicans directamente asociada con la regulación de los genes PDR (41). Inicialmente,
de Micheli et al. mostró que un elemento de respuesta farmacológica común (DRE) encontrado en los
promotores de CDR1 (DREI) y CDR2 (DREII) fue responsable de la regulación positiva inducida por fármacos
de estos dos genes transportadores ABC (54). Observaron que estos DRE podrían ser sitios de unión de cinc
de supuestos porque contenían tripletes CGG en una orientación de repetición directa. Años-

la búsqueda de proteínas putativas que contienen el motivo Zn (II) 2Cys6 altamente conservado mapeó el
gen TAC1 en una región cerca del lugar de apareamiento que se vinculó previamente a la resistencia al azol
en algunos aislados clínicos (225). Una eliminación heterocigótica del gen TAC1 causó una pérdida en la
regulación positiva de CDR1 y CDR2 en respuesta a la flufenazina, mientras que una proteína de fusión
glutatión S-transferasa-Tac1 puede unirse a estos DRE in vitro (41). Además, un mutante TAC1-2 recuperado
de una cepa resistente a azoles es responsable de la sobreexpresión constitutiva de estos dos
transportadores ABC (41). Esta evidencia proporciona pruebas sustanciales de que Tac1p es un regulador
auténtico de resistencia a múltiples fármacos.

PROTEÍNAS DE ZINC CLUSTER EN CANDIDA ALBICANOS

Candida albicans es un organismo comensal que habita los revestimientos mucosos de la mayoría de los
animales de sangre caliente, pero también es el principal culpable de las infecciones fúngicas humanas
(231). Este hongo se consideró asexual durante muchos años, hasta que estudios recientes demostraron lo
contrario (revisado en la referencia 17). C. albi- latas también es dimórfico (207). Puede cambiar entre un
modo de levadura o hifal dependiendo de las alteraciones específicas en las condiciones ambientales. Estos
pueden incluir cambios en la temperatura y el pH o la exposición a diferentes compuestos como suero, N-
acetilglucosamina o prolina (207). La transición a las hifas está implicada en la virulencia y la patogénesis
(142, 154).

De la secuencia diploide completa del genoma de C. albicans, 77 ORFs putativos codifican proteínas de
agrupación de zinc, en base al DBD altamente conservado elucidado en S. cerevisiae (23). La comparación
de secuencias con los reguladores transcripcionales conocidos en levaduras en ciernes revela muchos
ortólogos cercanos. La identificación y caracterización de las proteínas de racimo de zinc en esta especie de
hongos acaba de comenzar, y solo unas pocas han sido designadas para funciones específicas. Las proteínas
de racimo de zinc conocidas y sus funciones dentro de la célula se resumen en la Tabla 4. Las funciones
incluyen el metabolismo del azúcar, la biosíntesis de ergosterol, la regulación del crecimiento de hifas y la
RDP. Se puede especular que a medida que se aclaran las funciones de más proteínas de cúmulo de zinc en
esta especie, muchas de las proteínas estarán implicadas en una variedad de funciones fisiológicas similares
a las mostradas en la levadura en ciernes.

Biosíntesis De Ergosterol En C. Albicans

Numerosos y extensos estudios abarcan la ruta biosintética del ergosterol en este patógeno oportunista.
Solo un ortólogo de proteína de racimo de zinc claro corresponde tanto a Upc2p como a Ecm22p en Candida
albicans (163, 243). Las células que carecen de UPC2 son susceptibles a varios compuestos antifúngicos que
se dirigen a las enzimas dentro de la vía y la formación de la pared celular (incluidos azoles, terbinafina,
fenpropimorf y lovastatina) (163, 243), mientras que la sobreexpresión del gen UPC2 de C. albicans hace
que las células sean resistentes a las células a fluconazol, ketoconazol y flufenazina (163). El ortólogo de
Upc2p es igualmente importante para la captación de esterol aeróbica en C. albicans, como lo demuestra
una reducción perceptible de la acumulación de colesterol [14C] en una cepa upc2 (243).

PROTEÍNAS DEL GRUPO ZINC EN OTRAS ESPECIES

Las proteínas del racimo de zinc también se encuentran en otras especies de levaduras, así como en otros
hongos. Estos organismos no están tan bien estudiados, pero muchos reguladores Zn (II) 2Cys6 se han
caracterizado, y se enumeran en la Tabla 5. Algunas de estas proteínas de racimo de zinc tienen ortólogos
claros en S. cerevisiae. Por ejemplo, el regulador Gal4p del catabolismo de galactosa en S. cerevisiae es
Lac9p en Kluyveromyces lactis. El gen LAC9 es capaz de complementar una cepa gal4 (290). Además, el
regulador de la utilización de purinas en Aspergillus nidulans, UaY, está estrechamente relacionado con
Ppr1p en S. cerevisiae y es capaz de reconocer un motivo de ADN idéntico (251).

Una de las proteínas de racimo de zinc mejor estudiadas en hongos filamentosos es AlcR de Aspergillus
nidulans y su papel en el catabolismo del etanol (revisado en la referencia 67). En resumen, el activador
transcripcional AlcR es esencial (junto con el acetaldehído co-ductor) para la utilización de etanol como
fuente de carbono en esta especie. Controla la expresión de los genes alcA y aldA (133, 200), que codifican
un alcohol deshidrogenasa y una aldehído deshidrogenasa, respectivamente. Estas enzimas convierten el
alcohol en acetaldehído y, en segundo lugar, el acetaldehído en acetato. El activador AlcR también se
somete a la autorregulación (133, 177). En presencia de glucosa, la transcripción de estos genes se detiene
mediante la unión del represor CreA directamente a los promotores alcR y alcA (176, 201). Como se indicó
anteriormente, AlcR se une como un monómero a repeticiones invertidas, evertidas y directas que se
encuentran en los promotores de alcR, alcA y aldA (ver Fig. 2). Una característica importante de los hongos
filamentosos es la producción de una amplia gama de metabolitos secundarios. Muchos de estos
compuestos naturales son importantes en el campo médico y / o agrícola. Las aflatoxinas son metabolitos
secundarios producidos por varias especies de Aspergillus. Estos compuestos son altamente tóxicos y
cancerígenos en animales y humanos (292). De hecho, los estudios epidemiológicos han establecido que la
exposición a la aflatoxina es un factor de riesgo importante para el cáncer de hígado (292). Curiosamente,
la vía de producción de aflatoxinas está regulada por la proteína de agrupación de zinc AflR. Los genes que
codifican las enzimas de esta vía se encuentran en un grupo de genes de 70 kb tanto en el genoma de
Aspergillus flavus como en el de Aspergillus parasiticus (292). AflR regula positivamente la expresión de
estos genes al unirse al motivo de consenso TCGSWNNSCGR que se encuentra en los promotores de los
genes diana (58).

Colletotrichum lagenarium es un patógeno para las plantas que causa la antracnosis de los pepinos. La
infección de las plantas huésped por este hongo requiere la producción de melanina para una exitosa
ingestión mediante la formación de una estructura de infección llamada apresorio (132). Cmr1p, una
proteína Zn (II) 2Cys6, es un regulador positivo de la expresión de los genes estructurales biosintéticos de
melanina SCD1 y THR1 en esta especie (266). ZFR1 es otro ejemplo de un gen que codifica una proteína de
grupo de zinc involucrada en la producción de metabolitos secundarios. En el hongo fitopatógeno Fusarium
verticillioides, la biosíntesis de la fumonisina B1, una micotoxina que causa leucoencefalomalacia en
équidos y edema pulmonar en cerdos (220), está gravemente dañada en los mutantes zfr1 (73).
Curiosamente, el hongo Penicillium citrinum produce ML-263B (compactina), que puede actuar como un
sustrato para la producción de pravastatina sódica, un compuesto utilizado en la terapia de
hipercolesterolemia (1, 239). La proteína de clúster de zinc MlcRp es un regulador transcripcional de P.
citrinum que es importante en su producción (1). Las funciones cruciales de los metabolitos secundarios de
los hongos en diversos campos biológicos implican que muchas otras proteínas del cúmulo de zinc y sus
funciones clave probablemente serán investigadas en un futuro próximo.

CONCLUSIÓN
Desde su aislamiento en 1982 (112, 140), el gen GAL4 se ha convertido en el foco de numerosos estudios,
lo que lleva a un conocimiento profundo de su mecanismo de acción. Gal4p fue uno de los primeros factores
de transcripción eucarióticos que se caracterizaron, y ahora se considera un modelo clásico para la
transcripción eucariótica. A lo largo de los años, muchas otras proteínas de racimo de zinc se han
caracterizado, y como resultado, ahora se pueden derivar reglas generales para estos factores de
transcripción (y otros).

Las regiones de dedos de zinc de los miembros de la familia Gal4p tienen una estructura específica que es
exclusiva de los hongos. Los análisis de rayos X y RMN de los dominios de unión al ADN de algunos miembros
de la familia muestran que la región rica en cisteína tiene una estructura notablemente similar que
comúnmente reconoce los tripletes de CGG. Los residuos que flanquean la región rica en cisteína son
responsables de las diferencias en la especificidad de unión al ADN. Por ejemplo, cambiar la orientación
relativa de los dos grupos de cinc de un homodímero permite el reconocimiento de repeticiones invertidas,
directas o invertidas. Además, la alteración de la distancia relativa entre los dos grupos de zinc aumenta
aún más el repertorio de los sitios de unión al permitir la unión de un homodímero a tripletes de CGG con
diferentes espaciamientos. También se han descrito modos alternativos de reconocimiento de ADN, como
la unión monomérica o heterodimérica. Las proteínas del racimo de zinc funcionan en una amplia gama de
procesos, que incluyen síntesis de aminoácidos y vitaminas, carbono y nitrógeno.

gen metabolismo, meiosis y morfogénesis. Otras funciones incluyen la regulación de los genes implicados
en la respuesta al estrés y la resistencia a los fármacos pleiotrópicos, como se demuestra en la levadura en
ciernes y en los patógenos fúngicos humanos. Si bien Gal4p parece actuar únicamente como un activador,
se ha demostrado que un número creciente de proteínas de racimo de zinc tienen capacidades tanto de
activador como de represor. Los estudios de todo el genoma también muestran que muchas proteínas de
racimo de zinc tienen funciones distintas y superpuestas. Además, la autorregulación y la regulación
cruzada de la expresión de las proteínas del racimo de zinc se están convirtiendo en un tema cada vez más
común. Los mecanismos que regulan la actividad de las proteínas del grupo de zinc incluyen la fosforilación
(por ejemplo, Cat8p y Sip4p), la unión de una pequeña molécula inductora al factor (por ejemplo, la unión
de la prolina a Put3p) y la interacción con un intermediario metabólico (por ejemplo, Leu3p). Con el número
de proteínas de racimo de zinc caracterizadas creciendo rápidamente, cada vez es más evidente que son
reguladores cruciales de la fisiología fúngica. Además, su importancia potencial se extiende hacia las
enfermedades infecciosas y la industria agrícola. Desde sus inicios como modelo pionero para la
transcripción eucariótica, el estudio de esta familia de reguladores transcripcionales ha evolucionado
claramente y ha alcanzado un significado mucho más amplio.