ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE

CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

GUÍA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL

PARALELO: B
PRÁCTICA No.4

TEMA: REACCIONES DE CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS.

DOCENTE: Dra. M. Sc. Mayra J. Espinoza M.
1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: (estudiante(s) CODIGO(S): (de estudiante(s)

Estudiantes del tercer semestre paralelo B.

GRUPOS No.: 8

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

16/12/2019 23/12/2019

2. OBJETIVOS:

Objetivo General.-
a. Identificar proteínas por medio de reacciones de caracterización
Objetivos Específicos.-
1. Establecer la presencia de carbono, hidrógeno, oxígeno, azufre y nitrógeno
utilizando pruebas sencillas.
2. Verificar la solubilidad de las proteínas utilizando diferentes soluciones.
3. Evidenciar la presencia de determinados aminoácidos en las proteínas utilizando
reacciones específicas de coloración.

3. INSTRUCCIONES

MATERIALES.- REACTIVOS

- Tubos de ensayo (5) - Caseína

- Gradilla - Sosa – cal (mezcla fundente)
- Reverbero - Sol. HCl 6 N
- Pinza para tubo - Sol. Acetato de plomo 0.1 M
- Pipeta de 10 mL - Sol. NaOH 6 N
- Espátula - Sol. de caseína al 1%
- Pera de succión - Sol. Na2CO3 al 0.5 %
- Varilla de agitación - Sol. HCl 0.2%
- Vaso de precipitación - HNO3
- H2SO4 1N
- Sol. NaOH 1%
- Sol. CH3COOH 1,5%
- Sol. NaOH 10%
- Agua
- Reactivo de Millon
- Reactivo Glioxílico
- H2SO4
- Sol. Acetato de plomo al 10%
- Sol. Sulfato de cobre al 1%

PROCEDIMIENTO.-

A. ANÁLISIS

1. PRESENCIA DE CARBONO, HIDRÓGENO, OXÍGENO

Se coloca 0,2 g de caseína en polvo en un tubo limpio y seco, se calienta
gradualmente hasta carbonizar la muestra. La carbonización indica la presencia de
oxígeno e hidrógeno.

2. PRESENCIA DE AZUFRE
Se calienta 0.2 g de caseína con 1 g de sosa – cal (mezcla fundente) en un tubo de
ensayo. Se deja enfriar el tubo, luego se añade de 5 mL de HCl 6N al residuo. Se
coloca un papel filtro impregnado de acetato de plomo 0.1 M sobre la boca del tubo.
Si hay aparición de una mancha café obscura de PbS formado, se determina la
presencia de azufre.
3. PRESENCIA DE NITRÓGENO
Se coloca 0.2 g de caseína en polvo en un tubo de ensayo y se añade 2 mL NaOH 6 N,
calentar cuidadosamente. Note el olor de amoníaco y el efecto que sus vapores
sobre el papel tornasol rojo.

B. SOLUBILIDAD DE LAS PROTEÍNAS

Se rotulan cuatro tubos de ensayo y se colocan en cada tubo 1 mL de solución de

caseína al 1%, se añade en orden respectivo 2 mL de: NaOH al 10%, Na2CO3 al
0.5%, HCl al 0.2% y agua. Observe y anote. La mayor solubilidad de las muestras se
señalan con: (-) insoluble; (±) parcialmente insoluble y (+) soluble.

C. REACCIONES DE COAGULACIÓN (DESNATURALIZACIÓN)

Se coloca en un tubo de ensayo, cerca de 2 mL de ácido nítrico concentrado y añadir

lentamente y con cuidado por las paredes, 2 mL de la solución de proteína, sin
mezclar. En la interfase aparece un anillo blanco. Esta es la reacción de Heller.

D. TERMO COAGULACIÓN

Se añade a un tubo de ensayo conteniendo 5 mL de solución proteica, 3 gotas de

solución de ácido sulfúrico 1 N y se calienta a ebullición. Se adiciona al líquido
todavía caliente, gota a gota, y agitando, hidróxido de sodio al 1%. En un momento
 dado se dará la coagulación de las proteínas. Se continúa la adición de la solución de
hidróxido de sodio, gota a gota y agitando hasta disolución completa del
precipitado. Se calienta nuevamente hasta ebullición, no habrá coagulación. Se
añade al líquido todavía caliente, gota a gota y agitando ácido acético al 1,5%. En un
momento dado aparecen coágulos de proteína.

E. REACCIONES DE COLORACIÓN

REACCIÓN XANTOPROTEICA
Se coloca en un tubo de ensayo 2 mL de solución proteíca y 10 gotas de ácido nítrico
concentrado. Se forma un precipitado blanco. Se hierve por 1 o 2 minutos; el
precipitado se vuelve amarillo o se disuelve, dando una solución amarilla.
Adicionando solución de NaOH al 10% gota a gota, y agitando hasta alcalinizar, el
color cambia para anaranjado.

REACCIÓN DE MILLON
Se coloca en un tubo de ensayo 2 mL de solución de proteína, y se añade 5 gotas del
reactivo de Millon. Se forma un precipitado blanco que al calentar se vuelve rojizo.
Evite realizar la reacción en medio fuertemente alcalino (hay la precipitación de
óxido mercúrico) o con exceso de reactivo (hay decoloración).

REACCIÓN GLIOXILICA
Se mezcla en un tubo de ensayo 1 mL de reactivo glioxílico y 2 mL de solución de
proteína; añadir cuidadosamente por las paredes, ácido sulfúrico concentrado, sin
mezclar. En el límite de separación de los líquidos, aparece un anillo violeta. La
reacción en general es muy lenta. La reacción no se da en presencia de nitratos,
nitritos, cloratos y exceso de cloruros. El ácido sulfúrico debe ser muy puro.

REACCIÓN DE BIURET
Se coloca en un tubo de ensayo 2 mL de una solución de proteína, añadir 5 gotas de
NaOH al 10% y 3 gotas de sulfato de cobre al 1%. La reacción es positiva cuando
aparece una coloración rosa, o, más, frecuentemente, violeta o lila.

4. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

 Observación y reconocimiento de instrumentos y equipos

 Manejo de instrumentos y equipos
 Toma y recolección de datos
 Resultados
 Análisis e interpretación de resultados
 Observaciones

5. RESULTADOS OBTENIDOS

- Identificación de la presencia de C, H, O; S y N en la caseína

- Verificación de la solubilidad de la caseína
- Reconocimiento del proceso de desnaturalización
- Identificación de la presencia de enlaces peptídicos y diferentes aminoácidos en
la caseína.
 6. CONCLUSIONES

- Se verificó la presencia de C, H, O; S y N en la caseína.

- Se confirmó la solubilidad de la caseína.
- Se reconoció el proceso de desnaturalización.
- Se identificó la presencia de enlaces peptídicos y diferentes aminoácidos en la
caseína.

7. RECOMENDACIONES

- Leer cuidadosamente la guía de laboratorio

- No descuidar el área de trabajo durante la práctica

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Dra. M. Sc. Mayra J. Espinoza M.
NOMBRE Y FIRMA DEL DOCENTE
DE LA ASIGNATURA