Bolilla 3

Biotipos reproductivos, características determinantes. Biotipos bovino y porcino.

Ciclo estral en especies de interés veterinario.
Maduración espermática. Transporte de espermatozoides por el tracto reproductor
masculino.
La alimentación y su influencia sobre la pubertad y edad del primer servicio: efecto sobre
la fertilidad de los animales.
Fertilización in vitro: capacitación espermática, Maduración del ovocito y fertilización.

Biotipo

Un biotipo reproductivo comprende un conjunto de características morfológicas, fisiológicas y de

comportamiento que dan entidad a un animal o especie (en esta presentación se considerarán los biotipos
bovinos, equinos, caprinos - ovinos y porcino).

bovinos porcino
Patrón reproductivo •La hembra bovina es monotoca,
poliéstrica continua de ovulación
espontánea. La cerda es una hembra
•De acuerdo a su estado corporal politoca poliéstrca. anual de
o en condiciones ambientales ovulación espontánea
muy desfavorables, tiende a
convertirse en poliéstrica
estacional

Pubertad Alrededor de los 11 meses.

Rango: 9-18 meses; el inicio está
influenciado por la genética y
condiciones ambientales
externas.

Duración 21 (18 – 23) días. Duración: 18- 24 días, en

Ciclo estral
•Estro: día 0
Fases del ciclo estral: •Metaestro: 1 al 4 (ovulación en
el día 1, período de desarrollo de
CH )
•Diestro: 5 al 17. CL3 +
predominancia de progesterona
(P4)
•Proestro: 3 días (18 al 20;
promedio 19 - 21 días
Estro: 48 - 72 h.
•Ovulación: alrededor de
las 40 h después de
comenzado el celo.
Mejor momento: 12 h
antes de la ovulación. Si se
usa semen refrigerado, 12 y
24 h después de observada
 regresión del CL) en celo; 24 y 36 h si se usa
semen congelado,
asumiendo que se chequea
celo 2 veces al día

 La señal conductual  La señal conductual

definitiva de estro es
Conducta estral permanecer de pie para
ser montada.
 Los labios vulvares están
hinchados y enrojecidos
con una descarga delgada,
mucosa.
 En estro se manifiestan
atentas e inquietas. Con
montas a otras vacas.
Comportamiento
homosexual.
definitiva de estro es
permanecer de pie
para ser montada
por el padrillo.
 Las cerdas en estro a
menudo asumen la
posición rígida,
llamada reflejo de
lordosis, cuando se
aplica presión
manual en la anca.
 Los labios vulvares
están hinchados y
enrojecidos con una
descarga delgada,
mucosa.
 La cerda en
cautiverio busca al
padrillo
activamente.
 Otras señales de
estro incluyen:
apetito deprimido,
inquietud, vigilancia,
gruñido

Si la hembra ha quedado
Embrión preñada, el embrión arriba al
útero alrededor del día 3 ó 4 (90
horas) en el estado de mórula.

El embrión en desarrollo hacia el No mantendrá la preñez si

Reconocimiento maternal día 15-16 del ciclo dispara una
de la gestación señal antiluteolítica - Interferón
Tau - producida en el
trofoectodermo embrionario, el
cual inhibe la liberación de
PGF2a, manteniéndose el CL
funcional.
la camada es pequeña; los
embriones deberían ocupar
más del 50% del útero. Los
blastocitos en desarrollo
pueden señalar su
presencia secretando
estrógeno
Gestación
En promedio, la gestación dura Duración: 114 días (3
280 días (278-293), primera meses, 3 semanas y 3 días).
ovulación posparto luego de los
30 días, usualmente 45-60 en
vacas lecheras, por lo cual
tienden a un intervalo inter parto
de 12-14 meses

Macho
a. Volumen del eyaculado: 4 - 8 a. Volumen del eyaculado:
ml (raza de carne); 5 – 10 ml (raza 150 – 300 ml (libre de gel).
lecheras).
Espermatozoides /
Semen Espermatozoides / ml: 0,8 a 1.2 x eyaculado: 30 – 60 billones.
108/ml (billón) en razas
carniceras; 1-2 billón en razas Espermatozoides / ml: 200
lecheras. – 300 millones.

Total de células en el eyaculado: d. Espermatozoides por

5 – 10 billones (carne); 5-15 dosis de IA: 5 billones.
billones (leche). e. Volumen de la dosis: 50
d. Eyaculado en una sola fase. ml.
eyaculado en tres fases

Ciclo estral de las diferentes especies

Equino

Ciclo estral
Duración: 21 – 22 días.

Fases del Ciclo estral

Generalmente se divide en dos fases, ya que los cambios no son tan marcados como en otras especies:

 Fase de estro o folicular: de 3 a 7 días. La duración del estro decrece con el progreso de la estación.

 Fase de interestro o luteal: de 14 a 16 días.

Fase folicular
• Período de receptividad sexual; duración: 5 días (3 a 7), la misma decrece con el progreso de la
estación.
• Hacia la mitad de la fase se liberan cantidades significativas de FSH como también de pulsos de
LH, resultantes de la liberación de GnRH desde el hipotálamo.

Ovulación
• Tiene lugar 24 h antes del fin del estro a 24h después del fin del estro. En el día de la ovulación,
los pulsos de LH son altos: 1,75 a 2,0 pulsos/h. La amplitud de los pulsos también se incrementan desde ~
40 ng/ml a cerca de 200 ng/ml.
• Alrededor del 15% de las yeguas presenta un estro dividido o bifásico, con 1 o 2 días en el medio
sin receptividad sexual, con posterior retorno al celo.
• Un 5% presenta celo silente.

Signos del estro

 Tolera la monta
 Levanta la cola
 Palpitación vulvar
 Orina frecuentemente

Fase luteal:
• También llamada interestro, se extiende desde fin del estro hasta comienzo del siguiente, con una
duración de entre 14 y 16 días. Esta fase se inicia con la ovulación y la consecuente organización del CL;
dentro de las 24 a 48 h la yegua cesa de mostrar signos de estro.

• Durante la fase luteal de la yegua hay una significativa foliculogénesis. El folículo dominante es de
alrededor de 25 mm al momento de la luteólisis. Folículo ovulatorio: 45 a 50 mm.

Ovino y Caprino

Ciclo estral duración

 17 días en la oveja (rango 16,5-17,5).

 21 días en la cabra

Fase de estro
•24 - 36 h en la oveja.
•24 - 48 h en la cabra
Comportamiento: no muy aparente en la oveja, buscará al macho y puede tener descarga mucosa
por la vulva. La cabra se pone inquieta, menea la cola y busca al macho, puede observarse
comportamiento homosexual.
 •Ovulación: 24 - 27 h después del comienzo del estro.

Anestro estacional

•El anestro estacional se caracteriza por pulsos de LH regulares pero de baja frecuencia. Durante
este tiempo el sistema generador de pulsos es sensitivo al estradiol (producido por folículos pequeños o
intermedios) el cual tiende a mantener muy baja la frecuencia de pulsos de LH.

•El ciclo reproductivo en caprinos y ovinos es controlado por secreciones pulsátiles de LH, la cual es
inhibida durante las estaciones de días largos (anestro estacional) y esta inhibición tónica se pierde durante
las estaciones de días cortos.

Reinicio de la actividad reproductiva

•Al comienzo de la estación reproductiva, el hipotálamo se vuelve sensitivo al estradiol y es capaz

de producir GnRH, aún en presencia de grandes y sostenidos incrementos de estrógenos desde ovarios
más activos.

•Se piensa que la presencia del macho, la mejor nutrición y los días cortos, permiten al hipotálamo
ser menos sensible al feed-back negativo del estrógeno (efecto macho).

Inseminación

 Oveja: 10-20 h después del comienzo del estro.

 Cabra: 12-36 h después del comienzo del estro.

Servicio natural

 1 macho por cada 30 - 40 hembras.

Perras

Etapas que componen el ciclo sexual, en donde por alguna manifestación diferencial (visible o no)
se dividen en:

PROESTRO

Tiene una duración de entre 4 y 15 días. Va desde que comienza el sangrado hasta que la hembra se
deja servir. Se observan perdidas sanguinolentas por la vulva los labios vulvares se agrandan y endurecen.
La hembra atrae a los machos debido a la presencia de feromonas.
 ESTRO

La duración de esta etapa es variable entre 5 y 10 días. Marca la aceptación del macho por parte de
la hembra. La vulva se presenta con mayor edema y más blanda, lateraliza la cola y eleva el periné para
permitir la copula. La hembra es fértil.

DIESTRO

Es el periodo sucesivo al celo y dura de 56 a 58 días en hembras preñadas y de 60 a 100 días en

hembras vacías.

ANESTRO

La duración es de 2 a 10 meses. Es el periodo en que el endometrio sufre un proceso de reparación,

preparándose para el próximo celo.

Gatas

Ciclo estral

El ciclo estral felino se divide en proestro, estro, diestro, interestro y anestro.

El proestro, es el período del ciclo estral cuya duración puede ser tan breve (24 h) que pasa
inadvertido o durar 1 a 2 días. Es el momento de actividad folicular (síntesis y secreción de estrógenos),
cambios en la citología vaginal y preparación para el apareamiento y preñez.
El aumento de las concentraciones séricas de estrógeno se relaciona con el comportamiento
afectuoso de la hembra, y las características conductales (fricciones, pisoteo con los miembros posteriores,
vocalizaciones y menor hostilidad hacia el macho) presentes en esta etapa del ciclo estral. En este período
si bien la hembra atrae al macho, no permite la monta.

El estro es el momento en que la hembra acepta el servicio, y la síntesis y concentración sérica de

Estrógenos llega a los niveles más altos. La duración promedio de este período es de 6 a 10 días. Debido a
las altas concentraciones de estrógeno plasmático, la gata aumenta las vocalizaciones, presenta lordosis,
mantiene la cola hacia un lado y acepta la cópula .Este aumento de estrógeno, no solo produce un cambio
del comportamiento, sino que también actúa sobre el epitelio vaginal produciendo la cornificación del
mismo). En consecuencia, la citología vaginal de la fase folicular (proestro y estro) presentará células
superficiales nucleadas y anucleadas. Las células superficiales son grandes, de bordes irregulares, núcleo
oval y picnótico o sin núcleo.

Una particularidad de las hembras felinas es que la ovulación es inducida por el coito. La
estimulación vaginal durante la cópula produce un aumento de las señales neurales hacia la zona
Medio ventral del hipotálamo con la consecuente liberación de GnRH. Esta última estimula la liberación de
LH. La probabilidad de que ocurra ovulación está directamente relacionada con la amplitud de la
Onda de LH, la que a su vez está asociada al número e intervalo entre las cópulas. Se ha informado que
muchas cópulas en un breve período de tiempo se correlacionan con mayor probabilidad de ovulación
 En ausencia de apareamiento u ovulación espontánea comienza la etapa llamada interestro, la cual
es definida como la etapa que le sigue a un estro y precede al estro siguiente. La duración de este período
varía de 8 a 10 días promedio. Mediante citología vaginal puede observarse un predominio de
Células intermedias, células superficiales en menor proporción y ocasionalmente pueden visualizarse
neutrófilos. Las células intermedias son más pequeñas que las células superficiales, con contornos celulares
regulares y núcleo redondo u oval, el cual puede estar picnótico (Prats, 1992).

Se denomina diestro a la fase en la cual existe un cuerpo lúteo funcional con la consiguiente
secreción de progesterona. Si ocurre ovulación pero los ovocito no son fertilizados, los folículos se
luteinizan y se forman cuerpos lúteos que secretan progesterona. La fase luteal es más corta que la
gestación, y se denomina pseudogestación. En esta etapa, la concentración de progesterona sérica llega a
niveles de más altos. La vida media de los cuerpos lúteos es de 25 a 35 días y al final de esta fase un
período breve de interestro precede al siguiente estro, siempre y cuando las gatas estén en etapa
reproductiva .En consecuencia la duración del período de pseudogestación es aproximadamente de 40
días. En esta fase la citología vaginal presenta las mismas características que la citología de interestro.

Tanto en caninos como en felinos la síntesis de progesterona por parte del cuerpo lúteo es
necesaria
Durante toda la gestación, de esta manera las concentraciones séricas de esta hormona se mantienen
estables en valores de 15 a 30 ng/ml, hasta aproximadamente el día 60, momento en que la concentración
de progesterona disminuye abruptamente, coincidiendo con el día del parto. A diferencia de los cuerpos
lúteos de la pseudogestación, los cuerpos lúteos de la gestación pueden mantenerse más allá de 25 días
gracias a factores luteotróficos específicos como los de la pituitaria.

El anestro es el período caracterizado por la ausencia de ciclos estrales. Esta fase ocurre cuando
disminuyen las horas luz con el consiguiente aumento de melatonina y prolactina. Las concentraciones
séricas de melatonina y prolactina son sincrónicas, se elevan durante los períodos de oscuridad y
disminuyen durante los períodos de gran intensidad lumínica. Por lo tanto, el anestro felino se caracteriza
por niveles elevados de prolactina y melatonina, y niveles basales de estrógeno y progesterona. En esta
etapa, la citología vaginal presenta contenido mucoso, predominio de células
Stornelli. Particularidades fisiológicas de la reproducción en felinos.

Pubertad

Adquisición de la habilidad para lograr una reproducción exitosa. Etapa a partir de la cual un animal
produce gametos fértiles y comienza a manifestar comportamiento reproductivo

Pubertad en la Hembra

 Edad al primer estro (celo): comportamiento reproductivo. Puede no haber ovulación.

 Edad a la primera ovulación: palpación rectal, ecografía. Puede no haber estro.
 Edad a la cual la hembra puede soportar una preñez: umbral metabólico.
 Pubertad en el Macho

•Edad cuando el comportamiento trata de ser expresado: monta y erección, sin producción de
espermatozoides
•Edad a la primera eyaculación: fluido seminal
•Edad cuando aparecen los primeros espermatozoides en el eyaculado
•Edad cuando aparecen los primeros espermatozoides en la orina: ocurrencia de la espermatogénesis.
•Edad cuando el eyaculado contiene un número umbral de espermatozoides: 10 o 15 %.

Factores afectan el inicio de la pubertad

Hormonales
•Cambio en el hipotálamo a la sensibilidad de los esteroides
• Aumento de amplitud y frecuencia en la secreción de GnRH

Ambientales
•Temporada durante la cual nacen y se desarrollan
•Fotoperiodo
•Planos nutricionales
•Estrés

Sociales
•Presencia o ausencia del sexo opuesto
•Numero de hembras alojadas juntas
•Exposición al macho

Genéticas
•Especie
•Raza

Factores nutricionales que influyen en el inicio de la pubertad

Cambio en la disposición de uso de la energía.

Cierto grado de “adiposidad” es necesario para el inicio de la pubertad

•La prioridad durante las primeras semanas de vida es el crecimiento y desarrollo.

•Al aumentar el consumo energético, aumenta también la masa corporal.

•Se produce un cambio en el gasto metabólico, comienza a “sobrar” energía y las funciones no vitales se desarrollan.

•Ese “excedente” de energía es convertida en grasa, el hipotálamo reconoce el incremento de ácidos grasos y
glucosa en sangre y se inicia el proceso de la pubertad.

•El inicio de los pulsos de alta frecuencia de la GnRH está bajo la influencia de los niveles sanguíneos de glucosa y
ácidos grasos libres.
 La leptina y la reproducción

 Esta es la hormona responsable del control del apetito, cuando aumenta el nivel de grasa en el organismo, la
leptina actúa sobre el hipotálamo para disminuir el apetito y aumentar el metabolismo basal.

 La leptina también tiene un rol importante en la reproducción, actuando a diferentes niveles del eje
hipotálamo – hipófisis – gónada.

 La leptina es un factor necesario pero no suficiente para el inicio de la pubertad.

 La leptina es la señal más temprana de comienzo de la pubertad, contribuyendo a la activación del eje
hipotálamo – hipófisis – gónadal.

 Además de la leptina , los altos niveles de glucosa y de ácidos grasos en sangre constituyen los factores en la
alimentación que desensibilizan el hipotálamo con las gonotrophinas

Nutrición sobre la edad de servicio

•Al destete puede hacerse la proyección a fin de determinar el AMD necesario para alcanzar el peso de entore a
determinada edad

•DESTETE = 160 Kg. •ENTORE = 280 Kg.

15 meses 240 días 0,500 g/día
22 meses 450 días 0,270 g/día
27 meses 600 días 0,200 g/día

PRODUCCIÓN IN VITRO DE EMBRIONES

Las técnicas para producir embriones, mediante la maduración de ovocitos y su posterior

fertilización in vitro, ofrece la posibilidad de obtener embriones a bajo costo para ser utilizados con fines
de estudio o con propósitos comerciales. Los embriones se producen a partir de óvulos recuperados de
ovarios provenientes de animales faenados o por aspiración folicular en vacas vivas Luego de una
maduración in vitro, serán fecundados con espermatozoides. La fertilización in vitro puede realizarse por
cocultivo de los espermatozoides con los ovocitos maduros o inyectando el espermatozoide en el espacio
perivitelino (ICSI). Los embriones obtenidos son cultivados en estufas en condiciones atmosféricas
especiales durante 7-8 días. Finalizado este periodo los embriones están en condiciones de ser transferidos
a una receptora o criopreservados en termos de nitrógeno líquido para posterior transferencia.

ALGUNAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA PRODUCCIÓN IN VITRO DE EMBRIONES BOVINOS.

Ventajas:

 Evaluación eficiente de la capacidad fertilizante de espermatozoides y ovocitos.

 Difusión del uso de semen valioso y escaso. –
 Prolongación de la vida reproductiva de animales genéticamente valiosos, inmaduros o muy viejos.
 Creación de bancos de gametos provenientes de animales seleccionados por excelencia productiva
y/o adaptabilidad
  Determinación y selección del sexo de embriones.
 Control de enfermedades de la esfera reproductiva.
 Aplicación de la transferencia de embriones en especies exóticas y en peligro de extinción.
 Permite obtener descendientes de hembras de elevada calidad genética que deban ser sacrificadas
por padecer enfermedades, infertilidad, por su avanzada edad o durante los programas de
erradicación de enfermedades infecciosas (tuberculosis, brucelosis, leucosis).
 Permite el aprovechamiento de animales con determinadas formas de infertilidad: machos
oligospermias severas, hembras con alteraciones estructurales o funcionales del tracto genital.

Desventajas.

 Bajo rendimiento, el porcentaje de ovocitos capaces de transformarse en embriones transferibles

se encuentra estancado entre el 30 y 40%.
 Los embriones producidos in vitro son de menor calidad que los obtenidos in vivo.
 Reducción del potencial de desarrollo pre y postimplantacional, ocasionando bajos porcentajes de
gestación (30 a 40%).
 Existe una escasa resistencia a la Criopreservación, dificultando su conservación a largo plazo.

Fertilización in vitro

Fecundación de los ovocitos. Consiste en incubar los óvulos madurados (producto de la maduración
in vitro) con espermatozoides vivos y móviles durante un periodo de 6 a 24 horas, luego de un proceso de
selección y capacitación espermática que nos permitirá a su vez deshacernos de componentes del plasma
seminal, crioprotectores y espermatozoides muertos o con escasa vitalidad. La capacitación espermática
generalmente se logra exponiendo los espermatozoides vivos a concentraciones de heparina y cafeína,
entre otras. Estas sustancias logran estimular el proceso de capacitación del espermatozoide que lo
prepara para interaccionar y fecundar el óvulo. Una vez que disponemos de ovocitos maduros, el siguiente
objetivo es la fecundación, para ello se incuban junto con espermatozoides capacitados en un medio
suplementado con fuentes energéticas (piruvato, lactato) y albúmina sérica en un ambiente controlado por
estufas de cultivo por un tiempo comprendido entre 5- 24 hs dependiendo del protocolo, la concentración
de espermatozoides y la calidad del semen utilizado. Habitualmente una dosis inseminante es de 1-6
millones de espermatozoides por ml de medio de fecundación dependiendo del protocolo utilizado.

Para la fertilización in vitro se utilizan las masas celulares pluripotentes, lo cual son, los embriones
de aprox 7 días, previos a la implantación. Estos blastocitos cuentan con una masa celular interna que es el
embrión y una capa externa llamada trofoblasto que será la placenta. Una vez extraído este ovocito
pluripotentes, se llevan a cultivo para pasar del estadio inmaduro al maduro para que completen la meiosis
II.

Maduración de ovocitos. “La maduración ovocitaria es un fenómeno complejo, durante el cual el

ovocito progresa desde el estadio de profase de MI hasta el de MII (maduración nuclear). El ovocito
completa la meiosis en respuesta al pico ovulatorio de LH, o bien, cuando es retirado del folículo para
llevar a cabo la maduración in vitro. Un periodo de 24h de cultivo es necesario para que el ovocito bovino
complete la maduración nuclear, es decir, alcance el estadio de MII, en el que permanece hasta el
momento en que es fertilizado, que es cuando completa la meiosis y se forma los pronúcleos. Además de
la maduración nuclear, también es importante que exista una maduración citoplasmática ya que prepara al
ovocito para soportar la fertilización y aportar los nutrientes requeridos para el desarrollo embrionario
temprano. Cuando los ovocitos son aspirados desde los folículos terciarios reanudan espontáneamente la
meiosis y al ser cultivados in vitro continúan con los procesos de maduración. De este modo la composición
de los medios y el ambiente controlado por estufas de cultivo, deben brindar un ambiente adecuado para
que la maduración ocurra en 21-24hs de un modo similar a lo que sucede in vivo. Las condiciones utilizadas
en la mayoría de los laboratorios para lograr este ambiente, involucra el uso de medios de cultivo tales
como el TCM-199 suplementado con hormonas (LH, FSH, estradiol, etc.), antioxidantes (glutatión,
cisteamina, cistina), factores de crecimiento y macromoléculas ( suero, albumina), en una atmósfera de 5%
CO2 a 38,5°C y humedad a saturación.

A)- De animales que se envían a faena. Miles de animales de alta genética van al matadero por
Año y esta genética podría ser recuperada por esta técnica

b)- De hembras castradas. Por cada vaca castrada o que va a matadero (2 ovarios
Recuperados) se pueden obtener entre 15 a 20 óvulos, lo que permitirá obtener de 4 a 6
Embriones para transferir

C)- De hembras vivas. Por punción ovárica transvaginal (ultrasonografía y bomba de

Vacío). La cantidad de será inferior que la obtenida de ovarios de matadero o castración
(5 a 10 vs 15 a 20). Pero resulta más eficiente para producir embriones que la
Superovulación, en un determinado período

Principales eventos moleculares vinculados a la capacitación espermática.

_ Eliminación de los Factores decapacitantes: se añadieron en epidídimo o durante la eyaculación e inhiben

la unión a la Zona Pelúcida.
_ Extracción del colesterol de la Membrana plasmática y redistribución de proteinas, lípidos y azucares.
_ Ingreso de Ca++ y HCO3 al citosol
_ Aumento de fosforilación de residuos de tirosina de las proteínas citosólicas: marcador de capacitación.
_ Translocación de proteínas a la zona ecuatorial
_ Aumento del metabolismo y movilidad espermáticos: Hiperactivación

ELIMINACION DE FACTORES DECAPACTANTES

Epididimarios: Plasma Seminal y/o Secreciones Epididimaria

La membrana plasmática del espermatozoide epididimario contiene un complemento de moléculas
superficiales (proteínas y carbohidratos).

Eyaculados:
Durante la eyaculación, estos complementos se cubren con proteínas seminales, que las
enmascaran.

Capacitados:
Cuando el esperma es expuesto a las condiciones ambientales del tracto genital femenino, está
cubierta de proteínas seminales son removidas junto con algunas moléculas de superficie, tornándose el
espermatozoide capaz de ligarse al ovocito.