PRÁCTICA Nº 2

CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

Método Enzimático Colorimétrico

MÉTODO
La Diabetes Mellitus (DM) es una enfermedad crónica-degenerativa, no infecto-
contagiosa, incurable, pero que puede controlarse ; afecta al 15% de la población mundial
de esta proporción, la Diabetes Mellitus tipo I (DMI) le corresponde el 10%, mientras que
la Diabetes Mellitus tipo II (DMII), el 85%.
La prueba de tolerancia a la glucosa en ayunas es la forma más simple y rápida de medir
la glucosa en sangre y diagnosticar la diabetes.
El paciente no debe haber comido ni bebido nada durante 8 a 12 horas antes del examen
(excepto agua). Durante la prueba se examina la presencia de glucosa cuyos niveles están
por encima de 200 mg/dL que indican un diagnóstico de Diabetes Mellitus.
MUESTRA
 Suero o plasma.
 La primera muestra debe recolectarse en ayuno.
REACTIVOS Y MATERIAL
REACTIVOS:
Monoreactivo : Tampon fosfato 100 mmol/L pH7.5, Glucosa oxidasa > 10
KU/L, peroxidase > 2 KU/l, 4-aminoantipirina, 0.5 mmol/L, fenol 5 mmol/L.
Estandar: Concentración 100 mg/dL.
MATERIAL.
 Tubos de ensayo de 13 X100mm.
 Micropipeta de 10, 500 y 1000 uL.
 Tips o punteras.
 Vacutainers sin anticoagulante con aguja / jeringa.
 Gradilla.
EQUIPO.
 Analizador bioquímico semiautomático/automático para lecturas 505-510 nm.
 Centrifuga.
 Baño María

PROCEDIMIENTO
 Preparar 75 gr de glucosa (azúcar impalpable) disuelta en 200 ml de jugo de
naranja (1.75 gr. De glucosa por kilogramo de peso corporal, máximo hasta 75
gr.)
 Se toma una muestra de sangre venosa en ayunas.
 Posteriormente se le hace tomar al paciente la solución preparada para luego
tomar la muestra de sangre a intervalos de:
- 30 minutos
- 01 hora.
- 01 hora 30 minutos.
- 02 horas (en total 05 muestras)
  Trazar la curva y entregar resultado para su interpretación médica.
RESULTADOS
 MÉTODO

Esta prueba sirve para medir la capacidad de los riñones para depurar la sangre de los
productos de desecho o materiales extraños.
La creatinina se filtra a nivel de glomérulo en condiciones normales la depuración de la
creatinina endógena se acerca a la taza de filtración glomerular.

MUESTRA
Obtener la muestra de manera usual (suero o plasma libre de hemólisis).
Orina de 24 horas.
DATOS DEL PACIENTE:
Peso del paciente en Kg.
Talla en cm.
Superficie corporal (SC) Hallar con la tabla de Numograma.
1.73 m2 Estándar Panamericano
1.50 m2 Estándar Perú
Volumen litro (orina) Considerar solo 2 cifras.
Volumen > de 2 litros no tomar en cuenta el EXEDENTE.
REACTIVOS Y MATERIALES
EQUIPO:
Analizador Bioquímico Semiautomático
MATERIAL:
1 Micropipeta de 500 µL
1 Micropipeta de 50 µL.
1 Piseta con agua desionizada o destilada.
1 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta
Gradilla.
PROCEDIMIENTO
Hallar creatinina en suero mg/dl (Cr.S.)
Hallar creatinina en orina 24 hrs mg/dl (Cr.O.)

REALIZAR PREVIAMENTE UNA DE LAS SIGUIENTES DILUCIONES:

ORINA + H2O DESTILADA
0.1 ml ó 4.9 ml
100 ul ó 4,900 ul
10 ul ó 490 ul

Tomar (50 ul método cinético) o (1.5 ul método colorímetro) de esta dilución procesar
como si fuera creatinina en suero sanguíneo y LEER
EJEMPLO:
Cr.O = 1.48 mg/dl
Fórmula:
Creatinina en orina (24 hrs) = mg/dl multiplicar x dilución.
Creatinina en orina = mg/dl x 50 (dilución)
 Ejemplo:
Creatinina en orina = 1.48 mg/dl multiplicar x dilución.
(24 hrs. o al azar)
Creatinina en orina = 1.48 mg/dl x 50 (dilución)
Creatinina en orina = 74 mg/dl
CALCULAR CON LOS DATOS:
Ejemplo:
Creatinina en suero (Cr.S) : 1.4 mg/dl
Creatinina en orina (Cr.O) : 74 mg/dl
Peso : 64 Kg.
Talla : 160 Cm.
Superficie Corporal : 1.53 (con la ayuda del Nomograma)
Volumen Litro (V litro) : 2 litros y 50 ml
Entonces: Volumen Litro = 2.05
FORMULA DE DEPURACIÓN DE CREATININA ENDOGENA O R1
DCE(R1) = Cr.O x V litro x factor
100
Factor = 0.7
Reemplazando:
DCE(R1) = 74 mg/dl x 2.05 x 0.7
100
DCE(R1) = 106.19 mg/dl
100
DCE(R1) = 1.06
(R1) = 1.06

DEPURACIÓN DE CREATININA CORREGIDA

DCC = R1 x 100 x 1.53 (sc)
Cr.S.
Reemplazando:
DCC = 1.06 x 100 x 1.53
1.4
DCC = 115.8 ml/min.
VALORES NORMALES.
50-150 ml/min

DETERMINACIÓN DE LA SUPERFICIE CORPORAL APLICANDO LA

SIGUIENTE FÓRMULA
SC = log P x 0.425 + log H x 0.725 + 1.8564
SC : Superficie corporal
P : Peso en kg.
H : Talla en cm.
NOMOGRAMA PARA LA DETERMINACION DEL AREA DE LA SUPERFICIE
CORPORAL
 MÉTODO RÁPIDO SEPARACIÓN DE RESINA DE INTERCAMBIO IÓNICO
MÉTODO

La HbA1 se forma irreversible y progresiva,ente en los eritrocitos durante los 120 didas
de su vida normal. Dado que la concentración de HbA1 en el eritrocito refleja el promdeio
de glucosa en la sangre de 4-6 semanas anteriores siendo estable por la vida de los
eritrocitos cuya medición proporciona una prueba de granvalor para evaluar el control a
largo plazo de los diabeticos

MUESTRA
SANGRE TOTAL con EDTA

PROCEDIMIENTO
Colocar en un CUP 500 ul de LYSE LISANTE
Agregar al CUP 100 ul de sangre c/EDTA
Incubar por 5’ a temperatura 20-25º C (Hemolisis completa)
Pipetear del CUP 100 ul al tubo con reactivo RGT
Introducir el SEP un cm. Por encima del líquido y rotar por 10’ a 900 r.p.m.
Empujar el SEP hasta el fondo del tubo RGT y vaciar el sobrenadante a otro tubo y
LEER (utilizando agua destilada como BLANCO)
RESULTADO = A
 Agregar 20 ul del preparado CUP (Paso Nº 3) En un tubo que contiene 5 ml de
agua destilada y mezclar.
 LEER (utilizando agua destilada como BLANCO)
RESULTADO = B
CALCULAR:
FORMULA

% HbA1 = A X FACTOR
B

FACTOR = 2.86
Ejemplo:
% HbA1 = 0.322 = 051 x 2.86
2.631
 Resultado: 1.45
VALORES NORMALES

Normal o diabéticos estables : 4.5 – 7.0 % HbA1

Mal controlados o desequilibrio metabólico : >= 8.5 % HbA1