Un estudio integral que incluye monitoreo, evaluación de los efectos en la

salud y el desarrollo de un método de remediación para la contaminación por

cromo.

Resumen
La contaminación por cromo (Cr) causada por las aguas residuales de las
curtiembres es un problema ambiental mundial. Para desarrollar una contramedida ,
realizamos un estudio exhaustivo utilizando Hazaribagh, el área de curtiduría en la
ciudad de Dhaka, Bangladesh, como modelo. Nuestro monitoreo ambiental indicó
que la forma soluble de Cr, pero no de bario o arsénico, en el río Buriganga se deriva
de Hazaribagh. Nuestro análisis químico mostró a continuación que Cr,
el contaminante primarioen el agua del canal en Hazaribagh, consistió en ≤0.7 μM
Cr hexavalente [Cr (VI)] y ≤1705 μM Cr [Cr (III)] trivalente. Nuestro estudio biológico
demostró que la coexposición a Cr (VI) y Cr (III) a posibles proporciones en el agua
del canal en Hazaribagh promueve sinérgicamente la actividad transformadora de
los queratinocitos HaCaT no tumorigénicos humanos con MEK / ERK y AKT
activados. Nuestro estudio de ingeniería ambiental finalmente indicó que un
compuesto similar a la hidrotalcita a base de hierro y magnesio (MF-HT), nuestro
depurativo original, puede adsorber al máximo 9.0 mg / g Cr (VI) y 1041 mg / g Cr
(III). Nuestros resultados sugirieron la importancia de la eliminación de Cr (III) y Cr
(VI) al mostrar que Cr (III), que generalmente se reconoce como una sustancia
química con baja toxicidad, promueve sinergísticamente la carcinogenicidadde un
bajo nivel de Cr (VI). Por lo tanto, proponemos el uso de nuestro depurativo original
de alta eficiencia y bajo costo como una contramedida para abordar el problema
mundial de la contaminación ambiental por Cr.
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Palabras clave
La contaminación del agua

Toxicidad cancerígena

Cromo
Depurativo

Residuos de curtiembres

Abreviaturas
MF-HT

compuestos similares a hidrotalcita basados en hierro (Mg)-magnesio (Mg)

HPLC

cromatografía líquida de alta presión

ICP-MS

por inducción de plasma espectrometría de masas

1 . Introducción
Las enfermedades causadas por la contaminación ambiental en Japón incluyen la
enfermedad de Itai-Itai, que fue causada por la contaminación por cadmio (Cd) en
el río Jinzu ( Maruzeni et al., 2014 ) y la enfermedad de Niigata Minamata, causada
por la contaminación por mercurio (Hg) en Agano River ( Hara et al., 2013 ). La
arsenicosis fue causada por la contaminación por arsénico (As) en el río Mekong en
Camboya ( Sampson et al., 2008 ). Se ha sugerido que varias enfermedades,
incluidos los cánceres y las enfermedades cardiovasculares, son causadas por la
contaminación por plomo (Pb) y Cd en el río Hengshine en China ( Wang et al.,
2011 ). Por lo tanto, la presencia de contaminantes metálicos tóxicos en el agua del
río es un peligro mundial para la salud humana.
Se requieren más de 120 L de agua para la producción de 1 kg de cuero en
curtiembres ( Farenzena et al., 2005 ). Si se usan elementos tóxicos en las
curtiembres, las aguas residuales de las curtiembres sin
una depuración adecuada podrían causar una enorme contaminación del agua. La
contaminación ambiental causada por las aguas residuales de las industrias de
curtiembres es, de hecho, un problema mundial ( Belay, 2010 ; Bharagava y Mishra,
2018 ; Saxena et al., 2016 ).
Se ha informado de contaminación ambiental en un área urbanizada de curtiembres
en Hazaribagh en la ciudad de Dhaka, Bangladesh ( Anawar et al., 2000 ). Se ha
sugerido que 7.7 millones de litros de desechos líquidos por día de las curtiembres
( Azom et al., 2012 ) podrían ser una fuente contaminante del río Buriganga y los
canales en Hazaribagh. Dado que también se han informado los riesgos para la
salud de los trabajadores de las curtiembres en Hazaribagh ( Tinni et al., 2014 ), el
agua del canal que contiene aguas residuales de las curtiembres y el agua del río
Buriganga, que se utiliza como suministro de agua doméstica ( Rahman y Al Bakri,
2010), debe ser un peligro para la salud de los residentes. Sin embargo, hay una
falta de información sobre la contaminación con elementos tóxicos de Hazaribagh y
la contaminación con elementos tóxicos de otras fuentes en el río Buriganga.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) sugiere 50 μg / L de Cr como el valor
de referencia basado en la salud para el agua potable ( OMS, 2017 ). El cromo (Cr)
generalmente existe en el medio ambiente como Cr hexavalente [Cr (VI)] o Cr [Cr
(III)] trivalente. Cr (VI) tiene efectos tóxicos, genotóxicos, mutagénicos y
carcinogénicos, causando problemas de salud negativos como lesiones cutáneas ,
ulceración y perforación del tabique nasal , perforación del tímpano , disminución
de la espermatogénesis y carcinoma pulmonar. ( Bharagava y Mishra,
2018 ; Mishra y Bharagava, 2016) Por el contrario, el Cr (III) generalmente se
considera no tóxico, aunque varios estudios recientes han sugerido posibles riesgos
para la salud del Cr (III) ( Fan et al., 2015 ). La Agencia Internacional para la
Investigación del Cáncer (IARC) clasificó Cr (VI) y Cr (III) como un carcinógeno del
Grupo 1 (carcinógeno para los humanos) y un carcinógeno del Grupo 3 (no
clasificable en cuanto a su carcinogenicidad para los humanos), respectivamente
( Field y Withers, 2012 ). Por lo tanto, se cree que la toxicidad carcinogénica de la
exposición única al Cr (III) es limitada ( Biedermann y Landolph, 1990 ; IARC,
2016) Por lo tanto, hay más interés en la eliminación de Cr (VI) que en la eliminación
de Cr (III). Además, no se ha realizado ningún estudio que muestre la proporción de
Cr (VI) y Cr (III) en el agua del canal de las curtiembres y en el agua del río
Buriganga. Si se detectan Cr (VI) y Cr (III) en el agua, se debe considerar la relación,
especialmente al estimar riesgos potenciales para la salud debido a la coexposición
a Cr (VI) y Cr (III).
Se ha informado de la contaminación ambiental y los riesgos para la salud del
arsénico (As) y el bario (Ba) en las zonas rurales de Bangladesh ( Kato et al.,
2013 ; Kumasaka et al., 2013 ; Ohgami et al., 2016 ; Thang et al., 2011 ; Yajima et
al., 2018 , 2015 , 2012 ). Se ha informado que la exposición excesiva al As aumenta
varios riesgos para la salud, incluidos los riesgos de piel hiperpigmentada ( Yajima
et al., 2018 , 2017 ), diabetes ( Drobná et al., 2013 ), pérdida auditiva ( Li et al.,
2017 ) y cánceres de la vejiga ( Chen et al., 2003), pulmón ( Putila y Guo, 2011 ) y
piel ( Yajima et al., 2015 ). La OMS sugiere que el valor de referencia basado en la
salud para As en el agua potable sea de 10 μg / L ( OMS, 2017 ). Aumentos de
diversos problemas de salud relacionados con la toxicidad, incluida la hipertensión
( Perry et al., 1989 ), disfunción renal ( Dietz et al., 1992 ), pérdida de audición
( Ohgami et al., 2012 ) y carcinogénesis ( Thang et al., 2011 , 2015b ) causado por
el exceso de exposición a Ba se han reportado. La OMS sugiere que el valor de
referencia basado en la salud para el Ba en el agua potable sea de 1300 μg / L
( OMS, 2017 ).En este estudio, As y Ba, así como Cr, fueron investigados en el agua
del canal que contiene aguas residuales de las curtiembres en Hazaribagh y en el
río Buriganga en la ciudad de Dhaka, Bangladesh. Después de enfocarnos en Cr,
el contaminante con el nivel más alto, nuestro estudio integral consistió en 1)
monitoreo ambiental, 2) evaluación de riesgos para la salud y 3) desarrollo de un
depurativo para establecer contramedidas para la contaminación ambiental y los
riesgos para la salud humana. Nuestra contramedida propuesta para la
contaminación por Cr causada por las aguas residuales de las curtiembres en
Hazaribagh en la ciudad de Dhaka podría ser un modelo útil para abordar la
contaminación ambiental generada por las curtiembres en diversas áreas del
mundo.
2 . materiales y métodos
2.1 . Muestreo y análisis de elementos.
Las áreas para el muestreo del agua del río Buriganga y el agua del canal que
contiene aguas residuales de las curtiembres en Hazaribagh en la ciudad de Dhaka,
Bangladesh ( Anawar et al., 2000 ) se muestran en la Fig. 1 A. Las botellas de
muestreo se llenaron con agua muestreada después de enjuagar el interior de cada
botella con muestra de agua. Las botellas se transfirieron de la ciudad de Dhaka,
Bangladesh, a la ciudad de Nagoya, Japón, después de almacenarse a temperatura
ambiente durante algunas semanas. Después de que las muestras se almacenaron
a 4 ° C en la Universidad de Nagoya, Japón, se midieron los niveles totales de Cr,
As y Ba usando espectrometría de masas de plasma acoplado inductivamente (ICP-
MS) (7500cx, Agilent Technologies Inc, CA) siguiendo el método previamente
descrito ( Kato et al., 2013) La especie química de Cr se analizó por cromatografía
líquida de alta presión (HPLC) (SCL-10AVP, Shimazu Corporation, Japón) ICP-MS
utilizando una columna de especiación de Cr (G3268-80001, 30 mm × 4,6 mm,
Agilent Technologies, Inc.) . El nivel de Cr (VI) en cada muestra se cuantificó
utilizando el software MassHunter (Agilent Technologies, Inc.). El nivel de Cr (III) se
calculó restando el nivel de Cr (VI) del nivel total de Cr.
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La Fig. 1 . Monitoreo ambiental para muestras de agua del río Buriganga
y canales en Hazaribagh en la ciudad de Dhaka, Bangladesh
(modificado con el mapa de Google). (A) Se recogieron muestras de
agua aguas arribaregión (a: n = 21) y proximal (d: n = 20) y distal (e: n = 17)
regiones aguas abajo del río Buriganga después de definir la confluencia (c:
n = 11) del río Buriganga y canales de curtiembres en Hazaribagh (b: n = 39)
como punto básico. (B – D) Las concentraciones (media ± sd: μg / L) de
formas solubles de Cr (B), As (C) y Ba (D) en muestras de agua superficial
de cada sección se expresan por escala logarítmica (eje Y) . (E) Las
concentraciones (media ± sd: μg / L) de formas solubles de Cr (VI) (barra
cerrada) y Cr (III) (barra abierta) en muestras de agua del área de Hazaribagh
(n = 21) se expresan por escala logarítmica (Eje Y). ** Significativamente
diferente del control (** p <0.01) según lo analizado por la prueba U de Mann-
Whitney .
Este estudio fue aprobado por el Comité Ético de la Universidad de Nagoya
(aprobación no. 2013-0070) en la ciudad de Nagoya y el Comité Ético de la
Universidad de Chubu (aprobación no. 250007) en la ciudad de Kasugai en Japón.
2.2 . Linea celular y condiciones de cultivo
Eppelheim, Alemania, suministró una línea celular de queratinocitos cutáneos
HaCaT inmortalizados humanos ( Boukamp et al., 1988 ; Calay et al., 2010 ). El
método para el cultivo de queratinocitos HaCaT se describió previamente ( Yajima
et al., 2015 ). Brevemente, las células HaCaT se cultivaron en medio Eagle
modificado por Dulbecco (DMEM bajo en glucosa, Wako) suplementado con 10%
de suero fetal bovino (FBS) y 1% de penicilina / estreptomicina / suspensión de
anfotericina B (Wako) a 37 ° C en un 5% de CO 2 incubadoras humidificadas.
2.3 . Ensayo de supervivencia celular
Se usaron óxido de cromo (VI) (CrO 3 , Wako, Japón) y sulfato de cromo básico (Cr
(SO 4 ) OH, Yoshida Chemical Industrial Co., Japón) como cromo hexavalente y
cromo trivalente, respectivamente. Después de morir de hambre con suero bovino
fetal al 1% (FBS) durante 16 h, se cultivaron queratinocitos HaCaT en presencia o
ausencia de las concentraciones indicadas de Cr (VI) o Cr (III). La mitad del medio
se intercambió todos los días durante la cultura. Después de 0, 1, 3, 5 y 7 días
de incubación , se investigó la supervivencia de los queratinocitos HaCaT mediante
un ensayo de supervivencia celular siguiendo el método descrito anteriormente
( Yajima et al., 2012 ).
2.4 . Ensayo de formación de colonias.
Los efectos de la exposición a Cr (VI) y / o Cr (III) en el crecimiento independiente
del anclaje de los queratinocitos HaCaT se investigaron mediante un ensayo de
formación de colonias como se describió anteriormente ( Yajima et al., 2015 ) con
una ligera modificación. Las células HaCaT que se habían dejado pasar hambre
durante 16 h se preincubaron en presencia o ausencia de las concentraciones
indicadas de Cr (VI) y / o Cr (III) durante 2 días. Los queratinocitos se transfirieron
a metilcelulosa al 1% / Medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM)
suplementado con FBS al 10% y se incubaron continuamente en presencia o
ausencia de las mismas concentraciones de Cr (VI) y / o Cr (III) en Costar Ultra-
Low fijación de placas de 96 pocillos (Corning, NY, Estados Unidos) a una densidad
de 1.6 × 10 3 células por pozo. Se contó el número de colonias con diámetros ≥50
μm.
2.5 . Análisis de inmunotransferencia
El análisis de inmunotransferencia se realizó mediante el método descrito
anteriormente ( Akhand et al., 1999 ). Anticuerpos monoclonales de ratón contra α-
TUBLIN (Sigma-Aldrich, MO, Estados Unidos) y MEK1 / 2 y phospho-ERK1 / 2
(Thr202 / Tyr204) (Cell Signaling Technology, MA, Estados Unidos), anticuerpos
monoclonales de conejo contra fosfo- MEK1 / 2 (Ser217 / 221) (Tecnología de
señalización celular) y anticuerpos policlonales de conejo contra ERK1 / 2, AKT y
fosfo-AKT (Ser473) (Tecnología de señalización celular) se utilizaron como primeros
anticuerpos. Como segundos anticuerpos se usaron anticuerpos policlonales de
cabra contra IgG de ratón e IgG de conejo conjugadas con peroxidasa (Merck
Millipore).
2.6 . Adsorción de cromo por HT-MF
Nuestro compuesto original de hidrotalcita a base de magnesio y hierro [Mg (II) 4 -
Fe (III) 2 (OH) 12 ] 2+ [NO 3 xCO 3 · zH 2 O] 2- (MF-HT) se desarrolló de acuerdo con
al método descrito anteriormente ( Kato et al., 2013 ; Kumasaka et al.,
2013 ). Brevemente, 300 ml de una solución de 0.67 M Mg (NO 3 ) 2 y 0.33 mM Fe
(NO 3 ) 3 se administraron lentamente por gotas en 525 ml de solución 1 M
Na 2 CO 3 , después de lo cual precipitafueron desarrollados. Los precipitados se
filtraron a presión reducida y se secaron durante más de 16 h. Después de analizar
la estructura sólida utilizando un difractómetro de rayos X , se examinó la capacidad
de adsorción de MF-HT (tamaño de partícula: <250 μm) para Cr (VI) y Cr (III). Las
soluciones que contenían las concentraciones indicadas de Cr (VI) o Cr (III) se
agitaron con 1% (p / v) de MF-HT a 300 rpm durante el tiempo de incubación
indicado. Después de la centrifugación (21600 × g,10 min), los niveles de Cr en los
sobrenadantes diluidos por HNO3hasta una concentración final de 1% se midieron
por ICP-MS. Se usó la incubación durante 60 minutos para obtener la isoterma de
adsorción de Langmuir., y se usó la incubación durante 1 minuto para las muestras
de agua en Hazaribagh para la aplicación práctica de MF-HT.
2.7 . análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron mediante la prueba de Dunnett y la prueba U
de Mann-Whitney de acuerdo con los métodos descritos anteriormente ( Kato et al.,
2004 ; Ohgami et al., 2016 ) utilizando el software JMP Pro (versión 11.0.0) (SAS
Institute Inc ., NC, EE. UU.).
3 . Resultados
3.1 . Niveles de Cr, As y Ba en el agua del río Buriganga y canales en Hazaribagh
El muestreo ( Fig. 1 A) se realizó en la región aguas arriba (a) y en las regiones
proximales (d) y distales (e) aguas abajo del río Buriganga después de definir la
confluencia (c) del río Buriganga y los canales de las curtiembres en Hazaribagh (b)
como punto base Se muestran las concentraciones (μg / L) de formas solubles de
Cr ( Fig. 1 B), As ( Fig. 1 C) y Ba ( Fig. 1 D) en agua de 5 secciones. Los niveles
medios de Cr en el agua del canal en Hazaribagh y en el agua del río Buriganga
desde la confluencia y las regiones proximales y distales aguas abajo fueron
aproximadamente 5160 veces, 5 veces, 4 veces y 1 veces más altos que el nivel
medio de Cr en el río Buriganga agua de la región aguas arriba, respectivamente
( Fig. 1SI). Sin embargo, los niveles medios de As y Ba en el agua del canal en el
agua del río Hazaribagh y Buriganga de las regiones aguas arriba, confluencia y
proximal y distal aguas abajo fueron comparables ( Fig. 1 C y D).
Luego, la contaminación por Cr se concentró porque el nivel de Cr era 252 veces y
2211 veces mayor que los niveles de Ba y As, respectivamente, en el agua del canal
en Hazaribagh. Nuestro análisis de especies químicas mostró la concentración
promedio de Cr (VI) [6.7 μg / L (0.1 μM)] y la concentración total promedio de Cr
 [14284.7 μg / L (274.7 μM)] en el agua del canal en Hazaribagh ( Fig. 1 E ) Las
concentraciones máximas de Cr (VI) y Cr (III) fueron 38.1 μg / L (0.7 μM) y 88697.3
μg / L (1705.7 μM), respectivamente.
3.2 . Efectos de la exposición a Cr (VI) o Cr (III) en el crecimiento independiente del
anclaje
Un estudio anterior mostró que el agua del canal en Hazaribagh ( UNICEF (Fondo
de las Naciones Unidas para la Infancia), 2010 ; Watch, 2012 ) además del agua del
río Buriganga ( Rahman y Al Bakri, 2010 ) fue utilizada para lavarse y bañarse por
los residentes. Para examinar el riesgo potencial para la salud de la única
exposición a Cr (VI) y Cr (III), se realizó un ensayo de formación de colonias después
de un ensayo de supervivencia celular mediante el uso de queratinocitos HaCaT no
tumorigénicos humanos ( Fig. 2 , Fig. 3 ). Después de confirmar que ≤0.3 μM Cr (VI)
( Fig. 2 A) y ≤30 μM Cr (III) ( Fig. 2 B) no tuvieron efecto sobre la supervivencia de
los queratinocitos HaCaT en nuestro ensayo de supervivencia celular durante 7
días, formación de colonias ensayos de ≤0.1 μM Cr (VI) (Fig. 3 A) y ≤10 μM Cr (III)
( Fig. 3 B) se realizaron. Los niveles de crecimiento independiente del anclaje
aumentaron 2.3 veces y 2.2 veces por exposición única a 0.03 μM y 0.1 μM Cr (VI),
respectivamente ( Fig. 3 A). Por otro lado, los niveles de crecimiento independiente
del anclaje de las células expuestas únicamente a 0.1 μM, 1 μM y 10 μM Cr (III)
fueron comparables con los del control nulo.

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 Fig.2 . Efectos de la exposición única a Cr (VI) y Cr (III) sobre la
supervivencia de los queratinocitos HaCaT. (A) Se presentan las
proporciones (media ± sd; n = 3) de los queratinocitos HaCaT supervivientes
cultivados durante los días indicados en presencia (0.1–3 μM) o ausencia de
Cr (VI). (B) Se presentan las proporciones (media ± sd; n = 3) de los
queratinocitos HaCaT sobrevivientes cultivados durante los días indicados
en presencia (10-1700 μM) o ausencia de Cr (III). Los resultados se muestran
como relación al valor de control nulo en el día 7 (Ctrl, cuadrado abierto). * , **
Significativamente diferente del control como (* p <0.05, ** p <0.01) analizado
por la prueba de Dunnett en cada día.

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 Fig.3 . Efectos de la exposición a Cr (VI) o Cr (III) sobre la actividad
transformadora en los queratinocitos de HaCaT. (A, B) Gráficos (media ±
sd; n = 4) que muestran las proporciones del número de colonias por pocillo
(A) y fotografías de colonias (B) de queratinocitos HaCaT en presencia
(0.001–0.1 μM) o ausencia de Cr ( VI) se presentan. (C, D) Gráficos (media
± sd; n = 4) que muestran las proporciones del número de colonias por pocillo
(C) y fotografías de colonias (D) de queratinocitos HaCaT en presencia (0.1-
10 μM) o ausencia de Cr ( III) se presentan. Los resultados (barras cerradas)
se muestran como relación al valor del control nulo (Ctrl, barra abierta) (A,
C). ** Significativamente diferente del control (** p <0.01) según lo analizado
por la prueba de Dunnett.
3.3 . Efectos de la coexposición a Cr (VI) y Cr (III) en el crecimiento independiente
del anclaje
Nuestros resultados de monitoreo ambiental en la ciudad de Dhaka indicaron que la
piel de los residentes posiblemente estuvo expuesta a relaciones molares de Cr (VI):
Cr (III) que van desde 1:29 a 1: 32782. Por lo tanto, se examinó el efecto de la
coexposición a Cr (VI) y Cr (III) en ese rango de relaciones sobre el crecimiento
independiente del anclaje de los queratinocitos HaCaT. Inesperadamente, los
niveles de crecimiento independiente del anclaje aumentaron 2.5 veces y 2.3 veces
por coexposición a 0.001 μM Cr (VI) y 10 μM Cr (III) ( Fig. 4 A) y coexposición a
0.003 μM Cr (VI) y 1 μM Cr (III) ( Fig. 4 B), respectivamente, en comparación con la
del control nulo.
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Fig.4 . Efectos de la coexposición a Cr (VI) y Cr (III) sobre la actividad
transformadora en los queratinocitos de HaCaT. Gráficos (media ± sd; n
= 4) que muestran las proporciones del número de colonias por pocillo (A, C)
y fotografías de colonias (B, D) de queratinocitos HaCaT en presencia o
ausencia de 0.001 μM Cr (VI) y / o Se presentan 10 μM Cr (III) (A, B) o 0.003
μM Cr (VI) y / o 1 μM Cr (III) (C, D). Los resultados (barras cerradas) se
 muestran como relación al valor del control nulo (Ctrl, barra abierta) (A, C). *
Significativamente diferente del control (* p <0.05) según lo analizado por la
prueba de Dunnett.
3.4 . Efectos de la coexposición a Cr (VI) y Cr (III) en la señalización de MEK / ERK
y AKT en queratinocitos HaCaT
Los niveles fosforilados de MEK / ERK en los queratinocitos HaCaT coexpuestos a
0.001 μM Cr (VI) y 10 μM Cr (III) fueron mayores que los de las células expuestas
únicamente a 0.001 μM Cr (VI) y 10 μM Cr (III) y en cero control ( Fig. 5 ). Los niveles
fosforilados de AKT en células coexpuestas a 0.001 μM Cr (VI) y 10 μM Cr (III)
también fueron más altos que los de las células expuestas únicamente 0.001 μM Cr
(VI) y 10 μM Cr (III) y en el control nulo ( Fig. 5 ).

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Fig.5 . Efectos de la coexposición a Cr (VI) y Cr (III) en la señalización de
MEK / ERK y AKT en queratinocitos HaCaT. Resultados del análisis de
inmunotransferencia en queratinocitos HaCaT con control nulo (carril 1; Ctrl),
exposición única a 0,001 μM Cr (VI) (carril 2) y 10 μM de Cr (III) (carril 3) y
 coexposición a 0,001 μM de Se presentan Cr (VI) y 10 μM de Cr (III) (carril
4). Las fotografías muestran niveles de fosforilación de MEK (pMEK), ERK
(pERK) y AKT (pAKT) y expresión de MEK (MEK), ERK (ERK), AKT (AKT) y
TUBLIN (TUBLIN).
3.5 . Adsorción de Cr (VI) y Cr (III) por MF-HT
La adsorción de Cr (III) y Cr (VI) por MF-HT se examinó mediante un método por
lotes descrito previamente ( Kato et al., 2016 ). Después de investigar modelos de
adsorción plurales que incluyen las isotermas de Freundlich y Langmuir , se
seleccionó el uso de isotermas de Langmuir como un método adecuado para
examinar los resultados de adsorción de equilibrio de Cr en MF-HT. Datos de
equilibrio de Cr (VI) ( Fig. 6 A) y Cr (III) ( Fig. 6 C) e isotermas de Langmuir para Cr
(VI) ( R 2  > 0.95; Fig. 6 B) y Cr (III) ( R 2  > 0,95; Fig.6D) se muestra la adsorción por
MF-HT. Las capacidades máximas de adsorción de MF-HT para Cr (VI) y Cr (III)
calculadas a partir de las isotermas de Langmuir fueron en teoría de 9,0 mg / gy
1041 mg / g, respectivamente.
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Fig.6 . Capacidad de MF-HT para la adsorción de cromo . (A – D) Se
presentan datos de equilibrio (A, C) e isotermas de Langmuir (B, D) para la
adsorción mediada por MF-HT de Cr (VI) (A, B) y Cr (III) (C, D). C e y q e son
la concentración de cromo en solución en equilibrio y la cantidad de cromo
 absorbido por MF-HT en equilibrio, respectivamente. (E, F) Niveles de cromo
de cada muestra (E) y media ± sd (n = 10) (F) en el agua del canal en
Hazaribagh con (carril 2 en E y F) o sin tratamiento (carril 1 en E y F) con 1%
en peso de MF-HT para incubación de 1 minuto . ** Significativamente
diferente del control (** p <0.01) según lo analizado por Mann-
WhitneyPrueba U (F).
Finalmente se realizó una prueba de adsorción para Cr por MF-HT en agua de canal
que contenía aguas residuales de curtiembres en Hazaribagh. La concentración
media de Cr (1213 μg / L) en muestras de agua del canal (n = 10) tratadas con 1%
en peso de MF-HT durante 1 minuto se redujo a 142 μg / L ( Fig. 6 E y F).
4 . Discusión
Nuestro monitoreo ambiental en amplias áreas del río Buriganga y canales en
Hazaribagh proporcionó evidencia más directa de la contaminación dependiente de
Hazaribagh con Cr y la contaminación independiente de Hazaribagh con As y Ba en
el río Burigangagh. Dado que el nivel de Cr es> 2000 veces y> 200 veces más alto
que los niveles de As y Ba, respectivamente, en el agua del canal en Hazaribagh,
nos concentramos en la contaminación por Cr. No ha habido ningún estudio que
muestre los efectos biológicos de la coexposición a Cr (VI) y Cr (III). Por lo tanto, los
efectos biológicos de la coexposición al rango de relaciones molares de Cr (VI) y Cr
(III) en el agua del canal en Hazaribagh se examinaron usando queratinocitos de
piel no tumorigénicos humanos. Nuestro ensayo de formación de colonias demostró
por primera vez que la coexposición a Cr (VI) y Cr (III) promovió sinérgicamente la
actividad transformadora de los queratinocitos HaCaT.Thang et al., 2015a ; Yajima
et al., 2015 ), se activaron sinérgicamente por coexposición a Cr (VI) y Cr (III). La
promoción sinérgica de la actividad transformadora por coexposición a 0.001 μM Cr
(VI) y 1 μM Cr (III), que están en el rango de proporciones en el agua de la ciudad
de Dhaka, también se mostró en nuestro ensayo de formación de colonias usando
pulmón humano no tumorigénico células epiteliales Beas-2B (véase la Fig. S1
suplementaria en línea). Nuestros resultados utilizando células humanas plurales
proporcionaron evidencia más sólida de la promoción sinérgica de la actividad
transformadora por coexposición a Cr (VI) y Cr (III). Nuestros resultados también
revelaron parcialmente el mecanismo molecular de la promoción sinérgica.
Dado que nuestros resultados mostraron un efecto sinérgico cuando Cr (III) de baja
toxicidad estaba presente junto con Cr (VI) de alta toxicidad, tanto Cr (VI) como Cr
(III) deben eliminarse de manera efectiva. Nuestro análisis de ingeniería ambiental
mediante el uso de isotermas de Langmuir mostró que nuestro MF-HT original
podía adsorber al máximo 9.0 mg / g Cr (VI) y 1041 mg / g Cr (III) en teoría. Hasta
donde sabemos, la capacidad de eliminación de Cr (III) de MF-HT es mayor que la
de cualquier otro depurativo previamente informado evaluado por la isoterma de
Langmuir (consulte la Tabla complementaria S1 en línea). Dado que el costo de MF-
HT se calculó en 0.7 centavos por kg de informes anteriores ( Gillman, 2006 ; Kato
et al., 2016 ), MF-HT, un depurativo de bajo costo y alta eficacia, podría ser una
herramienta sólida paracontramedidas para la contaminación ambiental y los
riesgos para la salud causados por las aguas residuales de las curtiembres. Dado
que el agua del canal contaminada con Cr en Hazaribagh podría ser remediada por
MF-HT, proponemos que se instale MF-HT en las fuentes de contaminación
por cromo (curtiembres, en este caso). Anticipamos que MF-HT se aplicará
después del proceso de bronceado en las curtiembres en el futuro
cercano. Además, en nuestros estudios anteriores se demostró que MF-HT podría
eliminar As, Ba, hierro (Fe) y uranio (U) pentavalentes y trivalentes del agua de los
pozos en las zonas rurales de Bangladesh, Vietnam y Afganistán (Kato et al.,
2016,2013;Kumasaka et al., 2013) Por lo tanto, MF-HT se puede utilizar para
eliminar elementos tóxicos en varios países, así como en áreas rurales y urbanas
de Bangladesh.
5 . Conclusiones
Nuestro monitoreo ambiental mostró ≤38 μg / L Cr (VI) y ≤88697 μg / L Cr (III) en
aguas del río Buriganga y canales que contienen aguas residuales de curtiembres
en la ciudad de Dhaka, Bangladesh. Nuestro estudio de biología molecular mostró
que la carcinogenicidad de Cr (VI) aumenta en presencia de Cr (III), lo que sugiere
la importancia de eliminar Cr (III) además de Cr (VI) del agua. Nuestro estudio de
ingeniería ambiental finalmente demostró que MF-HT, un depurativo de bajo costo
y alta eficacia, puede usarse para eliminar Cr (VI) y Cr (III). Por lo tanto, nuestro
estudio integral ha proporcionado una contramedida realizablepara la
contaminación por Cr en canales y aguas de ríos en la ciudad de Dhaka,
Bangladesh. Más importante aún, nuestro estudio sugiere una solución eficiente
para abordar la contaminación ambiental global por Cr causada por desechos de
curtiembres.
Conflictos de interés
Los autores declaran que no tienen conflicto de intereses .
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado en parte por Grants-in-Aid for Scientific Research (A)
( 15H01743 y 15H02588 ), (B) ( 17KT0033 ) y (C)
( 16K11177 , 16K08440 , 16K08343 y 17K09156 ), Grant-in-Aid para Desafiando la
investigación exploratoria ( 26670525 ), Grant-in-Aid para investigación científica en
áreas innovadoras ( 16H01639 y 24108002 ) y Grant-in-Aid para la puesta en
marcha de actividades de investigación ( 15H06274 ) del Ministerio de Educación,
Cultura, Deportes,Ciencia y Tecnología , Fondo para el Medio Ambiente de Mitsui
& Co., Ltd. ( R13-0014 ), Fundación del Centro de Investigación Médica y Clínica
Avanzada del Hospital de la Universidad de Nagoya , Fundación
Mitsubishi ( 27310 ), Fundación Internacional de Becas Ichihara ( 196 ), KENKO -
KAGAKU Zaidan (Fundación Ciencias de la Salud) , Fundación para la Promoción
de la Salud de Aichi , Fundación Ambiental AEON , Fundación médica Nagono ,
subvención para Proyectos de investigación Ambiental de la Fundación
Sumitomo ( 163.119 ) y TheFundación de Investigación de Ciencias de la Sal .