​PROYECTO INTEGRADO SEMESTRE IV FISIOLOGÍA HUMANA,

BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR, ELECTRÓNICA

PROTOTIPO PARA EL DIAGNÓSTICO DE

ORGANOFOSFORADOS EN PRUEBAS
CONTROLADAS EN MEDIO ACUOSO

Mariana Aldana Castellanos,, Karen Tatiana Holguín Hurtado, Mayra Julieth Méndez
Bohórquez & Maria Fernanda Marin Ruiz
Facultad de Ingeniería ,Universidad El Bosque , Bogotá, Colombia
maldanac@unbosque.edu.co; ​mjmendezb@unbosque.edu.co​;
kholguin@unbosque.edu.co; mfmarinr@unbosque.edu.co

I. INTRODUCCIÓN Seguridad Química también aportó que se

En la actualidad se corren grandes peligros
con respecto al uso inapropiado de
agroquímicos sintéticos que no solo
comprometen la actividad agrícola, sino
que también el deterioro de los recursos
naturales principalmente el agua
conllevando a problemas en la salud
pública. Los países desarrollados hacen
uso del 25% de los plaguicidas que se
producen a nivel mundial y sufren del 99%
del total de muertes a causa de
intoxicaciones agudas por plaguicidas
[16].
Según el Enfoque Estratégico para la
Gestión de Productos Químicos a Nivel
Internacional (SAICM), es necesario
realizar una administración racional de los
productos químicos para lograr un
desarrollo sostenible, superando la pobreza
y las enfermedades, mejorando la salud
humana y del medio ambiente, asimismo,
preservando la vida de la población sin
importar su grado de desarrollo. Por otra
parte, el Foro Intergubernamental Sobre
debe realizar un equilibrio entre la
producción y consumo de los agentes
químicos, promoviendo el desarrollo social
y económico, y reduciendo al mismo
tiempo sus efectos adversos [18].
Los compuestos organofosforados se
originaron en 1854 tras la síntesis del
tetraetilpirofosfato (TEPP) por Moschniny
De Clermont, hoy en día hay una gran
producción de miles de estos plaguicidas.
Esos son potentes inhibidores de las
colinesterasas y causan un daño en la salud
humana. En Colombia son usualmente
usados como insumos agrícolas, como
plaguicidas domésticos y para el control de
enfermedades epidémicas, como la malaria
[17].
En nuestro país el consumo de plaguicidas
organofosforados (POF) empezó a finales
de la década de 1950, y para 1964-1974 el
consumo de estos aumentó en un 10% pero
aun así la producción agrícola sólo mejoró
en un 4,5%. En el año de 1978 se aplicaron
17.000 toneladas de plaguicidas en donde
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7.000 toneladas fueron de POF en los
cultivos en especial de algodón, donde
generalmente fueron aplicados por
aspersión aérea, extendiéndose hasta los
cultivos pequeños y también en las zonas
urbanas en la jardinería y para el control
de plagas domésticas, por lo cual se tiene
que del 36 al 40% de la población
colombiana se ve afectada [17].
Los reportes de la organización mundial de
la salud (OMS) muestran que anualmente
a nivel mundial, hay aproximadamente un
millón de intoxicaciones accidentales y
dos millones de intoxicaciones provocadas
(suicidios) con insecticidas, de las cuales
aproximadamente 200.000 terminan en la
muerte.
En Colombia gran parte de la población se
encuentra expuesta a plaguicidas, de
manera directa, en especial en las regiones
agrícolas. Sin embargo, no se puede
descartar la posibilidad de exposición
mediante la ingestión de alimentos entre
las poblaciones residentes en las regiones
donde sea habitual es uso de plaguicidas.
Aunque las estadísticas sobre
intoxicaciones por plaguicidas en
Colombia son deficientes, existen 4
antecedentes importantes de intoxicaciones
masivas como, la ocurrida en Chiquinquirá
(Boyacá) en 1967, la de puerto López
(Meta) en 1970, la de Pasto (Nariño) en
1977 y la de Risaralda en 1993. Los
agentes involucrados en estos 4 brotes de
intoxicación fueron organofosforados[22].
Adicionalmente se encuentran cifras de los
años 1981 a 2014 en donde el Programa de
Vigilancia de Plaguicidas OF y C-VEO,
monitoreado por el Instituto Nacional de
Salud (INS), realizó 275.455 pruebas de
actividad de acetilcolinesterasa en sangre -
AchE, de donde se obtuvieron que 27,482
pruebas (10%) resultaron anormales y en
cambio 448.973 (90%) estuvieron dentro
de los rangos normales [25]. Por otro lado
en un estudio epidemiológico dado en los
departamentos de Boyacá, Caldas, Huila,
Meta, Norte de Santander, Santander y
Valle del Cauca para la fecha de 1998 a
2001 se estableció en un total de 25.242
trabajadores expuestos a plaguicidas que
un 7,6% mostraron resultados anormales
en las pruebas de acetilcolinesterasa, en
donde se reconocieron los plaguicidas más
usados en como los organofosforados en
un 42,4%, los carbamatos con el 17,8%,
los insecticidas organoclorados con 8,4% y
por último los clorinados con el 6,6% [26].
Ante una investigación se toma ​Chlorella
Vulgaris ya que esta especie de microalgas
ha venido ayudando en ensayos de
toxicidad acuática por su gran
adaptabilidad en el laboratorio, además de
su sensibilidad ante la exposición de
compuestos tóxicos [19].
En este proyecto se propone realizar un
prototipo de diagnóstico que permita
determinar la influencia de
organofosforados en pruebas de
laboratorio controladas en el cual se
encuentra presente la ​Chlorella Vulgaris.
II. DEFINICIÓN PROBLEMA
En Colombia, la agricultura es tan
importante ya que no solo proporciona
alimentos y materias primas sino que
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desempeña un papel fundamental en la
economía del país y en las oportunidades de
empleo. Para mantenerla, muchos
agricultores utilizan pesticidas con el fin de
destruir, repeler o prevenir alguna plaga que
pueda afectar los cultivos. Generalmente los
pesticidas que utilizan son organofosforados
los cuales pertenecen a un grupo de
insecticidas que actúan sobre la enzima
acetilcolinesterasa. Estos pesticidas
inactivan irreversiblemente la
acetilcolinesterasa, esencial para el sistema
nervioso en humanos, insectos y animales.
Aunque estos pesticidas tienden a
degradarse rápidamente cuando se exponen
a la luz, el aire y el suelo, la mayoría de las
veces pueden persistir pequeñas cantidades y
terminar en la comida y fuentes hídricas
cercanas, esto se debe a que los insecticidas
cuentan con cierta volatilidad y pueden
llegar hasta las fuentes hídricas por medio
del aire, o por su movilidad en el suelo
pueden llegar hasta los acuíferos
subterráneos [21].
Aunque la mayoría de las ciudades cuentan
con acueductos, los cuales tratan el agua
para su consumo, muchos pueblos y fincas
no cuentan con uno y además están rodeadas
de cultivos, muchas veces los habitantes
consideran potable el agua de ríos o
quebradas cercanos a sus casas, sin tener en
cuenta que estas pueden estar contaminadas
por pesticidas.
Cuando una persona ingiere agua
contaminada con este tipo de pesticidas
puede haber una excesiva estimulación de
los receptores de acetilcolina. Lo cual causa
cambios en el estado de la conciencia,
debilidad muscular y excesiva actividad
secretora. [1]
Por esta razón surge la necesidad de crear un
prototipo de diagnóstico que permita
establecer la influencia de los
organofosforados en un medio acuoso.
III. MARCO TEÓRICO
1. Plaguicidas
La FAO (Food and Agriculture
Organization of the United Nations) define
a un plaguicida como "una sustancia o
mezcla de substancias destinadas a
prevenir, destruir o controlar cualquier
plaga, incluyendo vectores de enfermedad
humana o animal, especies indeseadas de
plantas o animales capaces de causar
daños o interferir de cualquier otra forma
con la producción, procesamiento,
almacenamiento, transporte o mercado de
los alimentos, otros productos agrícolas,
madera y sus derivados o alimentos
animales, o que pueden ser administrados
a los animales para el control de insectos,
arácnidos u otras plagas en sus
organismos". [1]
En Colombia, los plaguicidas son
utilizados ampliamente en diferentes
campos, principalmente en la agricultura
para mejorar la calidad y la cantidad de los
alimentos, a nivel doméstico para eliminar
insectos y a nivel de la salud pública, para
el control de vectores transmisores de
enfermedades. Entre los efectos adversos
que se pueden citar están la contaminación
ambiental y la toxicidad para los humanos.
[2]
1.1 Clasificación de los Plaguicidas
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Las intoxicaciones por plaguicidas, entre
ellos los organofosforados, hacen parte de
la lista de eventos de notificación
obligatoria a nivel nacional. Estas
sustancias se pueden clasificar según su
toxicidad, su naturaleza química o su
función. [2]
Clasificación según su función:pueden ser
insecticidas, fungicidas, herbicidas,
nematicidas y rodenticidas. [2]
Insecticidas:
● Organoclorados:endrín, aldrín,
DDT, lindano, toxafeno
● Organofosforados: paratión,
clorpyrifos, diazinon, diclorvos,
malation, dimetoato
● Carbamatos: aldicarb, carbofuran,
propoxur, carbaril.
● Piretrinas y piretroides:resmetrina,
bioresmetrina, aletrina,
decametrina, permetrina.
● Otros: ivermectina.
Fungicidas:
● Sales de cobre: oxicloruro de cobre
y sulfato de cobre.
● Derivados de la ftalimida:captafol
● Dinitrofenoles: dinitro-orto-cresol
● Dithiocarbamatos: maneb, zineb,
mancozeb.
Herbicidas:
● Bipiridilos: paraquat, diquat
● Glifosato
Nematicidas:
● Inorgánicos: 1,3 Dicloropropeno y
Cloropicrina.
● Orgánicos: Dazomet, Metam-sodio
y Metam-potasio.
Rodenticidas:
● Inorgánicos: sulfato de talio,
anhídrido arsenioso, fosfuro de
aluminio, fosfuro de zinc.
● Orgánicos: anticoagulantes:
cumarinas (Warfarina).
1.1.2 Organofosforados
Los compuestos organofosforados son un
grupo de sustancias orgánicas derivadas de
la estructura química del fósforo y tienen
un gran número de aplicaciones y
utilidades. Han sido utilizados como
aditivos del petróleo, disolventes, en las
industrias de colorantes, barnices, cuero
artificial, aislantes eléctricos,
impermeabilizantes, ablandadores de
plásticos, fungicidas, insecticidas entre
otros. Dado su amplia distribución y uso
en diferentes industrias y en la agricultura​.
[3].
Algunos se emplean como plaguicidas, de
gran importancia agrícola. Su fórmula
general es:
Imagen 1. Fórmula general del organofosforado
siendo R un radical orgánico y X un
halógeno o cianuro, tiocianato, fenoxi u
otra estructura. Los organofosforados
tienen un átomo de fósforo quiral, es decir
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tienen los dos estereoisómeros Sp y Rp.
[3].
2. Vías de propagación
La contaminación por plaguicidas está
dada fundamentalmente por aplicaciones
directas en los cultivos agrícolas, lavado
inadecuado de tanques contenedores,
filtraciones en los depósitos de
almacenamiento y residuos descargados y
dispuestos en el suelo, derrames
accidentales y el uso inadecuado de los
mismos por parte de la población. La
unión de estos factores provoca su
distribución en la naturaleza. Los restos de
estos plaguicidas se dispersan en el
ambiente y se convierten en contaminantes
para los sistemas biótico, como animales y
plantas, y abiótico, como el suelo, el aire y
el agua, amenazando su estabilidad y
representando un peligro de salud
pública.​[4].
2.1 Propagación por aire
Ocurre cuando la aplicación se da de modo
aéreo, ya que gracia al pequeño tamaño de
las partículas estas son arrastradas a las
zonas vecinas, fuera del área de
tratamiento. ​Este efecto tiene importancia
si contamina zonas habitadas o con
cultivos, y se hace muy evidente cuando se
emplean herbicidas de contacto que llegan
hasta cultivos que son muy sensibles a los
mismos.​[4].
Los insecticidas suelen dispersarse en el
aire para combatir los insectos voladores,
aunque en ciertos casos los ingredientes
activos de dichos productos sólo actúan
después de depositarse en objetos fijos,
como la vegetación, donde pueden entrar
en contacto con los insectos. En estos
casos el aire se contamina deliberadamente
con uno o varios productos cuyas
propiedades nocivas se conocen y que
también pueden ser tóxicos para el
hombre.​[4].
2.2 Propagación por suelo
La mayoría de los herbicidas, los
derivados fosforados y los carbamatos,
sufren degradaciones microbianas y sus
residuos desaparecen en tiempo
relativamente corto. Aunque en su
acumulación influye el tipo de suelo, ya
que los arcillosos y orgánicos retienen más
residuos que los arenosos.​[4].
La evaluación del grado de contaminación
del suelo por plaguicidas es de gran
importancia por la transferencia de ellos a
los alimentos. Algunos pueden permanecer
durante períodos de 5 a 30 años, como es
el caso del DDT. En el caso de la
ganadería, los residuos de plaguicidas
pasan del suelo al forraje y finalmente a
los animales, concentrándose en la grasa, y
por consiguiente, incrementan la
concentración de residuos persistentes en
la carne y la leche.​[4].
2.3 Propagación por agua
Los plaguicidas constituyen impurezas que
pueden llegar al hombre directamente a
través del agua potable y en forma
indirecta a través de la cadena biológica de
los alimentos. Estas sustancias químicas
pueden ser resistentes a la degradación, y
en consecuencia, persistir por largos
períodos de tiempo en las aguas
subterráneas y superficiales.​[4].
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Los plaguicidas se incorporan a las aguas
mediante diferentes mecanismos de
contaminación, como son:
- Por aplicación directa a los cursos
de agua, para el control de plantas
acuáticas, insectos o peces
indeseables.
- Por infiltración a los mantos de
agua subterráneos o escurrimiento
superficial a ríos, arroyos, lagos y
embalses desde las zonas agrícolas
vecinas.
- Por aplicación aérea sobre el
terreno.
- Por descarga de aguas residuales de
industrias productoras de
plaguicidas.
- Por descargas provenientes del
lavado de equipos empleados en la
mezcla y aplicación de dichos
productos, como puede ocurrir en
los aeropuertos de fumigación
aérea al regreso de los vuelos, en el
proceso de descontaminación de
los aviones y sus equipos de
aplicación de plaguicidas.
3. Metabolismo de los organofosforado
Las reacciones metabólicas que sufren los
organofosforados dentro del organismo de
los mamíferos pueden agruparse en la
siguiente forma:
1. Reacciones generales de
activación: consisten
principalmente en reacciones de
oxidación catalizadas por oxidasas
microsómicas, dependientes del
NADPH por medio de las cuales el
compuesto original se transforma
en uno mucho más tóxico.
2. Reacciones de detoxicación: son
reacciones hidrolíticas y se deben
principalmente a la ruptura de un
enlace en el éster del fósforo, la
cual produce sustancias de menor
toxicidad y con mayor solubilidad
en agua, que facilita su excreción
por orina. Parte del residuo
orgánico de esta reacción
generalmente posee un grupo
hidroxi, amino o tiol que sufre
reacciones de conjugación
lográndose, de nuevo, una mayor
hidrosolubilidad que favorece su
excreción urinaria. Los dos tipos de
enlace éster que pueden romperse
son el enlace anhídrido o el enlace
éster alquílico. La ruptura de estos
enlaces se debe a enzimas
hidrolíticas aunque pueden ocurrir
mecanismos de degradación
oxidativa o de transferencia de
grupo.
Imagen 2. Reacciones generales de detoxicación
de los organofosforados.
3. Reacciones de biotransformación
de los grupos funcionales no
fosfóricos: son importantes en la
detoxicación de ciertos plaguicidas
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que contienen grupos carboxiester,
carboxamida o nitro.
4. Reacciones de conjugación: tienen
por objeto aumentar la excreción,
promoviendo el proceso de
filtración glomerular y evitando el
almacenamiento de los compuestos
originalmente lipofílicos, en los
lípidos orgánicos. [12]
4. Acetilcolinesterasas
La acetilcolinesterasa (AChE) es la enzima
que termina el efecto neurotransmisor de
la acetilcolina y pertenece al grupo de
enzimas denominadas colinesterasas
(ChEs). Dependiendo de su edición
alternativa en el extremo 3’ de los
transcritos y de modificaciones
posttraduccionales se originan tres
variantes de AChE:
- La AChE-R que se expresa como
monómeros en condiciones de
estrés y neuropatológicas.
- La AChE-E que se expresa como
dímeros anfifílicos que están
presentes en eritrocitos
- La AChE-T que se localiza
principalmente en las sinapsis, en
formas globulares como
asimétricas
Adicionalmente a su función colinérgica
convencional, la AChE participa en
procesos de desarrollo y su secuencia
contiene un dominio que se presenta en
proteínas de adhesión celular como la
glutactina, la neurotactina, la gliotactina y
las neuroliginas. ​[13]
Las esterasas son α/β-. hidrolasas. Su
estructura de plegamiento es α/β con una
lámina-β central muy retorcida, con 8 a 11
ramas, muchas de ellas paralelas,
flanqueada en ambos lados por hélices.
(carboxilesterasas, lipasas y lipasas
hormono-sensibles, hidrolasas, moléculas
de adhesión, prehormonas). Con estas
esterasas están relacionadas
filogenéticamente las colinesterasas. Las
proteínas plegadas de modo α/β, están
formadas por tres subfamilias la C, la L y
la H. Las proteínas de la subfamilia C de la
que forman parte las acetilcolinesterasas,
tienen estas dos posibles secuencias
aminoacídicas: la ps00941 que tiene la
secuencia
[ED]-D-C-L-[YT]-[LIV]-[DNS]-[LIV]-[LI
VFYW]-x-[PQR] y la ps00122 cuya
secuencia es:
F-[GR]-G-x-x-x-x-[LIVM]-X-[LIV]-x-G-
xS-[STAG]-G en la que se representan
aminoácidos alternativos posibles entre
corchetes y x representa cualquier
aminoácido. [5]
Las colinesterasas, son mucopolisacáridos
de pm es 165.000 unido enérgicamente, en
un 95 % a la alfa-2-globulina, y el 5% a la
albúmina, como demuestra la
electroforesis, uniones que impiden que
pase a los tejidos. Las acetilcolinesterasas
presentan en cada organismo múltiples
formas moleculares producidas por la
oligomerización y unión a otras proteínas a
glucolípidos o a ambos. [5]
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Imagen 3. Estructura molecular de
acetilcolinesterasa.
​ .1 Papel fisiológico de la acetilcolina
4 en
Así como el sistema simpático tiene como
principal neurotransmisor a la adrenalina,
(también interviene la acetilcolina), el
vagal funciona por la acetilcolina. Las
fibras nerviosas autónomas terminan en los
músculos lisos de los vasos, vísceras y
glándulas en forma de retículo. La
acetilcolina se sintetiza en
terminaciones axónicas de la placa
neuromuscular, y en determinadas sinapsis
por la unión del acetato procedente de la
acetil coenzima A con la colina procedente
de la sangre; estas sustancias también
llegan a la presinapsis de la
descomposición de la acetilcolina por la
colinesterasa. La colinacetiltransferasa
procedente de la soma neuronal y
transportada por el axón en sentido
descendente hasta la terminación cataliza
la síntesis de la acetilcolina. [5]
Todas las terminaciones emiten
simultáneamente acetilcolina, que al actuar
sobre las moléculas receptoras de las
electroplacas abren canales en la
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membrana sólo por la parte ventral de la
célula, es decir, por la parte de la
resistencia eléctrica alta. La apertura de los
canales permite la entrada rápida de
cationes sódicos a través de las membranas
ventrales, produciendo el movimiento de
estos iones una corriente eléctrica. El
efecto resultante es como el de la descarga
repentina de un numeroso conjunto de
pequeñas baterías conectadas en serie. [5]
Las neuronas responden a un
la neurotransmisor cuando este cambia el
potencial eléctrico de la membrana
polarizada respecto al potencial que tenía
reposo, haciendo que el
neurotransmisor pase a la hendidura
sináptica. En el caso de la placa
neuromuscular y en muchas sinapsis la
acetilcolina del citoplasma y la de las
vesículas se difunde a través de la
hendidura sináptica y parte de ella, se une
momentáneamente a receptores de la
las membrana de la célula postsináptica en
donde produce otro cambio local de la
resistencia eléctrica. En las fibras
musculares y en algunas neuronas el
cambio no constituye más que el primer
paso de la generación de otro potencial de
acción: la fibra muscular se contrae o la
señal nerviosa continúa su marcha. En
otras células postsinápticas la respuesta
puede ser inhibidora. [5]
La respuesta de la postsinapsis puede ser
una despolarización o una
hiperpolarización de la membrana. Para
que continúe la transmisión, debe
descomponerse toda la acetilcolina en
acetato y colina, reacción catalizada por la
acetilcolinesterasa, situada en las caras
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externas de las membranas celulares y en

la hendidura sináptica. [5]

Imagen 4. La acetilcolina (ACh) es un neurotransmisor ampliamente distribuido en el sistema nervioso central

(SNC) aunque también se puede encontrar en el sistema nervioso periférico, autónomo y entérico. En el SNC,
ACh facilita muchas funciones, como el aprendizaje, la memoria, la atención y el control motor. Cuando se
libera en la hendidura sináptica, ACh se une a dos tipos distintos de receptores: receptores de acetilcolina
nicotínicos ionotrópicos (nAChR) y receptores de acetilcolina muscarínicos metabotrópicos (mAChR). La
activación de nAChR por ACh conduce a la rápida entrada de Na + y Ca2 + y a la posterior despolarización
celular. La activación de mAChR es relativamente lenta (milisegundos a segundos) y, dependiendo de los
subtipos presentes (M1-M5), alteran directamente la homeostasis celular de fosfolipasa C, trifosfato de inositol,
cAMP y calcio libre. En la hendidura, la acetilcolinesterasa (AChE) también puede hidrolizar la ACh en colina y
acetato. La colina derivada de la hidrólisis de ACh se recupera mediante un transportador de colina de alta
afinidad presináptica (CHT).

La colinesterasa es la enzima que actúa que seguiría produciendo potenciales

más rápidamente sobre su substrato es
decir que hidroliza un mayor número de
moléculas por minuto. Si no se inactivara a
la acetilcolina por ausencia o inactivación
de la enzima se acumularia la acetilcolina
postsinápticos. La acetilcolina se encuentra
además de en las neuronas en las células
epiteliales, en las de las vías respiratoria,
digestiva y urogenital, en las mesoteliales
de pleura y pericardio, en las fibras
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musculares y en los macrófagos, linfocitos
y granulocitos. Interviene en en la
regulación de las mitosis, de la
diferenciación celular, en la organización
5. Intoxicación por organofosforados
La intoxicación se puede producir por la
ingestión, inhalación e incluso por
absorción percutánea.
El compuesto actúa inhibiendo la
acetilcolinesterasa, lo que provoca la
acumulación del neurotransmisor
acetilcolina en las terminaciones nerviosas
y la hiperestimulación y posterior
interrupción del estimulos colinérgico,
tanto en los receptores muscarínicos como
en los nicotínicos. [5]
A nivel clínico existen 3 cuadros de
intoxicación.
- El síndrome colinérgico que se
produce por la sobreestimulación
colinérgica por acúmulo de
acetilcolina, sus síntomas son
muscarínicos, nicotínicos y de
afectación del sistema nervioso
central.
- El síndrome Intermedio que
aparece posterior a los efectos
agudos, es decir 24 - 48 horas
después de la exposición; se
caracteriza por debilidad de los
músculos proximales de las
extremidades, flexores del cuello,
lengua, faringe y músculos
respiratorios, con compromiso de
la función respiratoria, disminución
- manifiesta con debilidad
ascendente pero de predominio
distal, ataxia, hipotrofia muscular,
del citoesqueleto, relaciones intercelulares,
secreción y absorción, regula el sistema
inmune y durante el desarrollo neuronal
funciones de adhesividad celula
o ausencia de los reflejos
miotendinosos y compromiso de
pares craneales. Algunos estudios
han mostrado que el síndrome
intermedio sólo ocurre en pacientes
con inhibición prolongada de la
acetilcolinesterasa y que la
presencia del síndrome no depende
del tipo de agente tóxico
involucrado.
- La neuropatía retardada la cual se
presenta principalmente con los
compuestos que contienen flúor;
puede iniciarse entre una a cuatro
semanas después de la exposición
aguda al tóxico. Los posibles
mecanismos fisiopatológicos para
su aparición son la inhibición de
una enzima axonal conocida como
esterasa neurotóxica (NTE) del
sistema nervioso y el incremento
del Ca 2+ intracelular por
alteración de la enzima
calcio-calmomodulinaquinasa II,
produciendo degeneración axonal.
Se trata de una polineuropatía
predominantemente motora, de tipo
flácido, pero también con
manifestaciones de tipo sensorial,
que afecta a los músculos distales
de las extremidades que se
hiporreflexia en miembros
inferiores, calambres, parestesias,
dolor neuropático, e hipoestesia; su
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recuperación puede ser total o
parcial entre 6-12 meses con una
adecuada rehabilitación. [15]
Los organofosforados que no se gastan al
unirse a proteínas lo hacen con la
colinesterasa plasmática que protegen a la
tisular de modo que solo se empieza a
inhibir esta cuando las otras,
especialmente la de los glóbulos rojos se
han inactivado en una gran proporción. [5]
Una dosis baja de DFP en el hombre que
llega a inhibir el 90% de la colinesterasa
plasmática sólo inhibe el 15-20% de la de
los hematíes. La disminución de la
actividad colinesterásica, en los expuestos
a organofosforados, no es un efecto
adverso sino un biomarcador de la posible
afectación de la enzima en la sinapsis. En
los estudios de exposición ambiental existe
bastante dificultad para documentar el
grado de exposición a los plaguicidas
inhibidores de colinesterasas. [5]
Solo cuando la colinesterasa plasmática ha
disminuido un 35% aparecen síntomas sin
que exista correlación entre el grado de
inhibición de la colinesterasa en suero y la
gravedad de las manifestaciones salvo al
inicio de la intoxicación aguda. La
inhibición también se ejerce sobre la
colinesterasa de las sinapsis colinérgicas
del cerebro pues casi todos los OF
atraviesan la barrera hemato-encefálica
debido a su solubilidad (el ecotiofato no es
liposoluble) [5]
Una vez entrado en el organismo el
organofosforado se une a proteínas
plasmáticas y tisulares compitiendo con
otros organofosforados; así el
triortocresilfosfato impide la fijación de
los ésteres organofosforados, como el
paraxon. La unión a las proteínas resta
actividad anticolinesterásica y tóxica. Los
hepatocitos, las neuronas y el plasma
tienen enzimas que hidrolizan a los
agresivos organofosforados. [5]
5.1 Efectos cardiovasculares
Habría una gran bradicardia, hipotensión,
aunque la presión arterial puede estar
aumentada por el estímulo colinérgico
ganglionar y por el estrés. Los afectados
pueden sufrir diversas arritmias. [5]
5.2 Efectos en el sistema nervioso central
La inhibición de las sinapsis del sistema
nervioso central debida al paso del tóxico
al sistema nervioso central causa cefaleas
frontales, vértigo, ansiedad, astenia
generalizada,arreflexia,incoordinación
motora; disminuye y hasta se anula la
percepción, labilidad emocional,
dificultades en la concentración, pérdida
de memoria, irritabilidad, insomnio,
somnolencia, y hasta modorra,
pesadillas, ausencias, labilidad emocional,
inquietud, disartria, balbuceos,
desorientación, confusión de ideas,
desorientación, inconsciencia, depresión,
apatía, que pueden seguirse de
disminución del estado de conciencia,
coma, convulsiones y muerte. [5]
5.3 Efectos psicológicos
A las pocas horas de haber estado
expuestos a organofosforados aunque
pueden tardar 24 horas puede aparecer
malestar, tensión, fatiga y objetivamente
irritabilidad, desinterés, enlentecimiento en
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BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR, ELECTRÓNICA

las respuestas, que pueden persistir varios asfixia la cual por la hipoxia, además de
días o semanas. [5] las convulsiones, genera lesiones
cerebrales.[5]
5.4 Distrés respiratorio
La broncoconstricción, la ocupación
broncoalveolar por la hipersecreción de las 5.5 Efectos neuropsiquiátricos
células caliciformes y de glándulas
mucosas de las vías respiratorias, Pueden aparecer poco después de la
causantes de edema agudo de pulmón, la exposición o después del cuadro
paresia nicotínica de la fibra muscular colinérgico, alteraciones de la memoria,
estriada respiratoria y sobre todo las del sueño y de la vigilancia, depresión;
lesiones de los centros respiratorios causan ansiedad e irritabilidad. [5]

Imagen 5. Los organofosfatos inducen la apoptosis neuronal y la señalización molecular. Los compuestos
organofosforados aumentaron la generación de especies de radicales libres (ROS) resultando en el desequilibrio
de proteínas apoptóticas, incluyendo Bax y antiapoptótico Bcl-2, Bcl-zL que altera el potencial de la membrana
mitocondrial y facilita la liberación de citocromo-C y activación de la vía apoptótica neuronal. Debido al estrés
oxidativo y la peroxidación lipídica, la composición de las balsas lipídicas se altera y se ve implicada en la
acumulación de beta amiloide, iniciación de la producción de ceramida y expresión alterada de JNK, ERK 1/2,
quinasas MAP resultando en apoptosis. La exposición a organofosfatos también incrementa los niveles de calcio
intracelular y activa los calpainas y ckd5 que conducen a la apoptosis neuronal y enfermedades
neurodegenerativas.
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6. Microalgas
Las microalgas son organismos
unicelulares eucariotas fotosintéticos
(2-200 um), que pueden crecer de modo
autotrófico o heterotrófico. En general son
altamente eficientes en la fijación de CO2
y utilización de la energía solar para
producir biomasa, con una eficiencia hasta
cuatro veces superior a la de las plantas.
[16].
Las especies de microalgas son
comúnmente utilizadas para ensayos de
toxicidad acuática porque se adaptan
fácilmente a las condiciones de
laboratorio, son sensibles a la exposición
de compuestos tóxicos y se recomiendan
en este tipo de ensayos por tener la
característica de crecimiento rápido. [6]
Las microalgas son los principales
componentes del fitoplancton y el inicio de
la cadena trófica en los ecosistemas
acuáticos, por tanto su disponibilidad y
abundancia son elevadas, encontrándose
en todos los medios acuáticos y en muchos
medios terrestres. La mayoría de las
especies microalgas pueden crecer en casi
cualquier condición medioambiental y
sobrevivir con bajas concentraciones de
nutrientes y en condiciones ambientales
extremas de ph, temperatura, salinidad…
que podrían ser letales para otros
organismos. [6].
Se estima que existen unas 90.000 especies
de microalgas (sin incluir las
cianobacterias). [6].
En resumen, en presencia de agentes
tóxicos, la actividad de las microalgas se
ve afectada. La disminución de la función
fotosintética puede evaluarse a través de la
disminución de la emisión de
fluorescencia, la disminución de la
producción de oxígeno y/o la
alcalinización del medio. Cualquiera de los
parámetros derivados de estos métodos
puede servir, en principio, para detectar la
presencia de un agente tóxico. [8]
IV. ESTADO DEL ARTE
En el 2015 Franklin Edmundo Quenguan y
Edwin Giovany Eraso, publicaron un
proyecto en el departamento del Nariño
titulado “Determinación de plaguicidas
organofosforados y carbamatos en agua
para consumo humano mediante
cromatografía de alta eficiencia”, lo
primero que hicieron fue realizar un
estudio en los municipios de Gualmatán,
Pupiales, Ipiales, Potosí y Túquerres del
departamento de Nariño-Colombia,
escogieron estos 5 municipios ya que se
caracterizan por estar dedicados a la
agricultura y según SIVIGILA el uso
inadecuado de plaguicidas estaba causando
diversos problemas de intoxicación en la
población humana. El estudio fue
realizado durante cinco semanas continuas
entre enero y febrero de 2013, las muestras
de agua fueron sometidas a un proceso de
extracción en fase sólida (SPE) y se
analizó la presencia de residuos de
plaguicidas mediante HPLC con detector
de longitud de onda variable. El método de
extracción y análisis cumpliocon los
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criterios de validación analitica
(Linealidad, precisión, exactitud y límite
de detección). De las 50 muestras
analizadas, en una muestra proveniente del
municipio de potosí, se detectó
Metamidofos (Organofosforado), y en una
segunda muestra proveniente del
municipio de Gualmatán, se detectó
Carbaril. En ambos casos ninguno
sobrepasa los límites máximos permitidos
por la norma colombiana para agua de
consumo humano [22].
Por otra parte se han registrado en
artículos con un propósito similar al de
nuestra investigación, como el artículo
titulado “Identificación de variedades de
plaguicidas mediante la detección de
características de ​Chlorella pyrenoidosa
usando imágenes hiperespectrales de
infrarrojo cercano / visible y tecnología de
microespectroscopía Raman” (Shao, y
otros, 2016), en el cual se busca como
objetivo principal examinar la viabilidad
de hacer uso de imágenes hiperespectrales
visibles e infrarrojas cercanas junto con la
tecnología de microespectroscopía Ramam
para lograr identificar como elementos
propios o características de la ​Chlorella
pyrenoidosa varían a medida que se
aplican pesticidas e identificando al mismo
tiempo distintas variedades de pesticidas.
En el hicieron uso del algoritmo de
proyecciones sucesivas (SPA) con el fin de
identificar las siete longitudes de onda más
efectivas. Ya con esas longitudes de onda
sugeridas por SPA, partieron de un
modelo de ​análisis discriminante lineal
(LDA), establecido para clasificar las
variedades de pesticidas. Finalmente
lograron determinar que la tasa de
clasificación correcta del modelo
SPA-LDA alcanzó el 100% [23].
Cuando hicieron uso de la técnica Raman,
establecieron algunos modelos de análisis
discriminante de mínimos cuadrados
parciales con diferentes métodos de
preprocesamiento a partir de los cuales
también identificaron un enfoque de
procesamiento que logró el resultado más
óptimo. Posteriormente escogieron
longitudes de onda sensibles (SW) que
estuvieran relacionadas con el pigmento de
las algas, y se estableció un modelo de
LDA con la identificación correcta que
alcanzó un alto nivel de 90.0%.
Concluyendo en los resultados mostraron
que las técnicas de microespectroscopía
Vis / NIR-HSI y Raman si fueron capaces
de identificar variedades de pesticidas de
manera indirecta pero efectiva, y SPA si
fue un método efectivo de extracción de
longitud de onda. Los SW
correspondientes a los pigmentos de las
microalgas​, que fueron influenciados por
los pesticidas, también podrían ayudar en
la caracterización de diferentes variedades
de pesticidas beneficiando la identificación
de la variedad [23].
El artículo “Evaluación de ​Spirogyra spp.
como potencial bioindicador de
plaguicidas organofosforados” (García,
Pacurucu Reyes, & Silva Quiguiri, 2017)
buscaba estudiar el grado de tolerancia que
tenía ​Spirogyra ssp. a distintas
concentraciones de plaguicidas
organofosforados como el curacrón,
malathion y acefato durante 72 horas de
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exposición. En este se realiza una
evaluación cualitativa, de la cual se
observa que los cambios en el color y en la
cohesión de la biomasa se encontraban
relacionados directamente con el tiempo
de exposición y las concentraciones
experimentales. Luego se hizo un análisis
de bioacumulación en el que se determinó
que ​Spirogyra spp. bioacumuló 3848,19
mg/Kg del plaguicida curacrón y 0,0444
mg/Kg del plaguicida malathion en su
biomasa. Para concluir en los resultados
se señala como el alga demuestra una
sensibilidad ante la presencia de
plaguicidas organofosforados en relación
la capacidad bioindicadora,
adicionalmente lo anterior se puede ligar
con un potencial bioacumulador y
propiedades útiles que hacen de esta alga
una opción económica y eficaz para el
control y tratamiento de aguas
contaminadas con estas sustancias [24].
V. JUSTIFICACIÓN
La bioingeniería trabaja en distintos
campos de acción, como en la relación del
hombre con el agua teniendo en cuenta la
preservación y mejoramiento de la calidad
de este gran recurso, por esto es
importante dar a conocer los distintos
casos en que la contaminación de
plaguicidas ha llegado a ocasionar muertes
en los seres humanos tras la intoxicación
de estos por medio del agua.
Para el año de 1998 ocurrieron masivas
intoxicaciones por plaguicidas en
Colombia. En 1970 en Puerto López
(Meta) se presentó la contaminación del
río Negro con plaguicidas
organofosforados y dejó 190 intoxicados,
de los cuales 157 requirieron de un
tratamiento médico, pero tristemente 7
personas murieron, esta problemática se
pudo dar en consecuencia de los
plaguicidas usados comúnmente en los
cultivos de arroz de la región. Aún así, se
resalta que ya se habían presentado
denuncias el año anterior de la falta de
control en los procesos de fumigación
debido a que los fumigadores solían lavar
sus equipos en los ríos [9].
Adicionalmente cabe destacar que más de
30 ríos son los que abastecen las
principales ciudades del país, siendo un
recurso importante y además fuente
económica para Colombia, pero según
datos del año 2012 del Ideam se advierte
que materia orgánica no biodegradable
como las sustancias químicas alcanzaron
alrededor de 918.670 toneladas vertidas en
las fuentes hídricas [10].
Sin embargo, desde distintas
organizaciones internacionales y el
gobierno con el decreto 1594 del 26 de
junio de 1984 se establecen ciertas
restricciones en cuanto a las cantidades
presentes en el agua para los plaguicidas
organofosforados, que se dejan a un lado
sin cumplirlas propiamente [11].
Por ello surge la idea de desarrollar un
prototipo que ayude en el diagnóstico de la
presencia de organofosforados en medio
acuoso a través de pruebas controladas del
laboratorio, de forma que se establezcan
datos de acuerdo a las diferentes variables
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medidas, con el fin de dejar un sustento
teórico para próximas investigaciones.
VI. OBJETIVOS
General:
Desarrollar un prototipo para el
diagnóstico de organofosforados en
pruebas controladas en medio acuoso.
Específicos:
1. Diseñar un prototipo para el
diagnóstico de organofosforados
pruebas controladas en medio
acuoso utilizando ​Chlorella
vulgaris.
2. Implementar un prototipo para el
diagnóstico de organofosforados
pruebas controladas en medio
acuoso.
3. Probar el prototipo para el
diagnóstico de organofosforados a
partir de las variables a evaluar.
4. Determinar la afinidad entre un
organofosforado y la
acetilcolinesterasa a través de
modelamiento molecular.
VII. REQUERIMIENTOS
Requerimientos Funcionales
1. El proceso de detección será
automático.
2. El tiempo de respuesta del equipo
no sobrepasará el minuto y medio.
3. El prototipo deberá mostrar los
datos en el software (LabView).
4. El prototipo determinará los
cambios de pH y temperatura
asociados en la solución acuosa.
5. Cuando exista la presencia de
organofosforados en las muestras a
tratar, el prototipo emitirá una
alarma sonora y lumínica alertando
dicha presencia.
6. El fotodiodo maneja únicamente un
voltaje máximo de 5 Voltios.
7. El buzzer maneja un voltaje
máximo de 5 Voltios.
8. La motobomba debe mandar a
presión el dióxido de carbono para
el satisfacer el crecimiento celular
de la microalga.
9. El sensor de pH analógico para
arduino debe estar alimentado por
5 VDC.
10. El rango de medición del sensor de
pH analógico para arduino está
entre 0 - 14 pH.
11. El sensor de temperatura DS18B20
debe estar alimentado de 3 a 5
VDC.
12. El rango de medición del sensor de
temperatura DS18B20 es desde los
-55 a 125 grados C.
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13. El margen de error del sensor
DS18B20 para temperaturas entre
-10ºC y 85ºC podemos tener
±0,5ºC. Para el resto de
temperaturas entre -55ºC y 125ºC
el error es de ±2ºC.
Requerimientos de Calidad
1. Los componentes electrónicos del
equipo (sensor de pH, sensor de
temperatura) deben estar
funcionando perfectamente para su
uso.
2. Para la optimización del circuito se
deberá realizar pruebas del antes,
durante y después de aplicado el
organofosforado.
3. El equipo contará con unas
dimensiones de 50*50*50 cm, con
el fin de ofrecer comodidad al
usuario.
4. El tiempo para las mediciones entre
cada muestra será de 1 minuto.
5. Para las pruebas controladas se
aplicará el parámetro de
conductividad eléctrica la cual se
relacionará con la Biomasa de la
microalga.
Requerimientos de restricción
1. Emplea solamente una microalga
para la detección de
organofosforados.
2. El equipo solo realiza el proceso de
detección del organofosforado, y
únicamente se tomarán en cuenta
las variables de pH, temperatura,
conductividad eléctrica, biomasa y
colorimetría.
3. Los datos de medición deberán
tener relación con los datos
obtenidos en el laboratorio.
4. No se descontamina el afluente de
agua.
5. Las pruebas biológicas no se
contaminan ya que los sensores
deben ser descontaminados con
agua destilada después de cada
toma de datos.
6. Las mediciones no sobrepasan el
minuto.
7. La conductividad eléctrica será
leída únicamente por Arduino.
8. La conductividad eléctrica no hará
parte del prototipo, se emplea para
relacionar la biomasa de la
microalga.
9. La escala de la colorimetría es de
autoría propia tomando únicamente
5 valores.
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VIII. DISEÑO FUNCIONAL

IX. DISEÑO DETALLADO

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X. METODOLOGÍA
1. Pruebas controladas
Primera etapa
La metodología que se llevó a cabo para la
realización del proyecto consistió en la
revisión bibliográfica para conocer las
condiciones de un adecuado crecimiento
de la microalga Chlorella vulgaris,
posteriormente se preparó el medio de
cultivo de la Chlorella vulgaris, disuelta en
1.5 Litros de agua y empleando 120 mL
de Chlorella. Para optimizar el crecimiento
fue necesario la utilización de una
motobomba la cual suministre al cultivo la
presión adecuada para evitar el
estancamiento y brindarle el Dióxido de
Carbono necesario; posterior a esto deben
pasar 3 días para su óptimo crecimiento.
● Esterilización de materiales. Si se
quiere garantizar un buen
crecimiento de la microalga es
importante contar con un ambiente
estéril, por ello, es necesario la
eliminación de cualquier agente
contaminante o microorganismo
indeseable en todos los materiales
involucrados en el proceso,
especialmente los que entran en
contacto directo con la microalga
Chlorella vulgaris.
Segunda etapa
Una vez haya transcurrido tres días, es
esencial la toma de las variables
(Temperatura, Biomasa, Colorimetría, pH,
Conductividad eléctrica) tanto con los
instrumentos de laboratorio: Ph Metro,
Termómetro, Electrodo, Cámara de
Neubauer, microscopio; como el prototipo
a desarrollar.
● Cámara de Neubauer: La cámara
de Neubauer cuenta con una
cuadrícula de recuento que muestra
9 cuadrados grandes, cada uno de
1mm2 . Los cuadrados grandes que
se encuentran en las esquinas están
divididos en 16 cuadrados con
aristas de 0,25 mm. El cuadrado
grande del centro está dividido en
25 cuadrados medianos con aristas
de 0,2 mm en donde cada cuadrado
mediano está subdividido en 16
cuadrados pequeños con aristas de
0,05 mm y una superficie 42 de
0,0025 mm2 . El conteo fue
realizado en el cuadro grande del
centro, éste se utiliza para células
de menor tamaño como lo son las
microalgas, mientras que los demás
cuadrados son utilizados para
células de mayor tamaño. En la
imagen 6 se muestra la cuadrícula
de la cámara de Neubauer.
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hasta llegar a una máxima concentración

de 3 mL. Nuevamente se procede el
registro de las variables con el prototipo y
los instrumentos de laboratorio con el
objetivo de conocer cuál era la incidencia
en la adaptación de la microalga Chlorella
vulgaris ante la presencia del malatión.

Imagen 6. Cámara de Neubauer

En la tabla I se puede ver el color con su

respectiva valoración numérica, esta será
útil para evaluar el color de las muestras.
Imagen 7. Experimentación de la
TABLA I Chlorella ​con Malation
ESCALA COLORIMÉTRICA

Color Valoración
numérica

Verde 5

Verde amarillento 4

Café claro 3
Imagen 8. Experimentación del control
Café oscuro 2 positivo y negativo
Blanco 1
Fuente: Noemí Silva, 2016.
Tercera etapa
Posterior, se procede a envasar la Chlorella Luego de comprobar que la microalga
disuelta en 1.5 Litros de agua en diferentes Chlorella vulgaris sufrió cambios frente al
frascos. Dos tarros son empleados para un Malatión se procede nuevamente a la toma
control negativo (120 mL de agua con de datos y a su debido registro.
Chlorella) y otro control positivo (120 mL Nuevamente se tomó los datos tres días
de agua con Malation). Los diez frascos después de la adición del Malatión, este
restantes se les aplicará 120 mL de la proceso se realiza 2 veces más.
solución de Chlorella en 1.5 Litros de
agua, sin embargo a cada frasco se
adicionará 0.3 mL del pesticida Malatión
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2. Funcionamiento electrónico

Imagen 9. Programación de los sensores de Ph y temperatura en el software Arduino

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A partir del software de Arduino se realizó
la programación de dos sensores: uno de
temperatura (DS18B20) y otro de PH
análogo a arduino (SKU SEn0161), los
cuales permitirán determinar cómo a
medida que avanza el tiempo, la presencia
del malatión reacciona con las microalgas.
La programación consiste es llamar las
bibliotecas de los respectivos sensores y
declarar las variables en donde se van a
guardar los datos que se desean medir.
Imagen 10. Sensor ph analógico a Arduino
Imagen 11. Sensor de temperatura DS18B20
Para realizar las simulaciones del circuito
se utilizó el software Proteus, como se
puede observar tenemos 2 sensores, el de
temperatura conectado al pin digital 7 y el
de pH conectado al pin análogo A0.
El sensor de temperatura tiene una
resistencia de 4,7 K​Ω desde el DQ hasta el
positivo porque por en el datasheet se
indica así. También se puede observar que
el led se encuentra conectado al pin digital
1 y tiene una resistencia de 330 ​Ω debido
que consume 1.7 V y el buzzer (CLDZ)
está en directo debido a su consumo de 5
V.
Cálculo del valor de la resistencia del
Led.
5−1.7
Resistencia (Ohms, Ω) = 10x10−3
= 330
La programación fue desarrollada en el
software labview, en el cual se utilizó el
Visa para establecer la comunicación entre
el arduino y Labview, se utilizó un ciclo
while para que el usuario realizará lectura
de los datos por el tiempo que decida y lo
detenga con un botón, se utilizaron 2
ciclos case para establecer si las lecturas
sobrepasan los límites de normalidad de la
chlorella y de ser así mandar un mensaje
de aviso, y se utilizó un ciclo case para
comparar los resultados obtenidos al
momento de comparar temperatura y pH
con el valor en condiciones normales, y de
acuerdo a ello se establece si hay o no
presencia de un organofosforado.
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Imagen 12. Simulación del circuito en el software Proteus.

Imagen 13. Programación de los sistemas de alarma desarrollado en el software Labview.

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Imagen 14. Interfaz de usuario desarrollado en el software Labview.

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XI. RESULTADOS En la tabla IV se pueden observar los

En la tabla II se encuentran registrados los
datos obtenidos al hacer el conteo de la
biomasa de ​Chlorella Vulgaris con la
cámara de neubauer, donde A1,A2,A3,A4
Y A5 corresponden a los 5 cuadros
medianos donde fueron contadas las
partículas, y C1, C2, Y C3 se refieren a
conteo uno, conteo dos y conteo tres
respectivamente
TABLA II
DATOS OBTENIDOS UTILIZANDO CÁMARA DE NEUBAUER
resultados de las mediciones de 4 variables
(pH, temperatura, colorimetría y
conductividad) las dos primeras variables
nombradas anteriormente fueron medidas
tanto con equipos de laboratorio como con
sensores programados en Arduino, en una
muestra patrón, compuesta por 120 mL de
Chlorella Vulgaris ​disuelta en 1.5 L de
agua.
TABLA IV
MEDICIONES DE PH, TEMPERATURA, COLORIMETRÍA Y CONDUCTIVIDAD DE
UNA MUESTRA PATRÓN

A1 A2 A3 A4 A5 Tot

C1 13 11 2 16 3 45

C2 3 5 18 10 4 41

C3 15 10 13 14 6 58

En la tabla III se puede ver el número total TABLA V

TEMPERATURA Y PH PROMEDIADOS
de partículas contadas obtenido al
promediar el total de partículas en cada
conteo.

TABLA III
NÚMERO TOTAL DE PARTÍCULAS CONTADAS Cálculo del % de error

%ERROR=
Promedio Total 48
|K (TEÓRICO) − K RESORTE (EXPERIMENTAL) |
RESORTE
X 100
K RESORTE (TEÓRICO)

- % de error del sensor de pH

Cálculo de la biomasa:
|7.64−7.51 |
%​ERROR= X 100 = 1.7 %
Partículas por µL volumen= 7.64
P articulas contadas - % de error del sensor de
sup, cont * prof undidad camara *dilución
temperatura
(1)
48
=2400 particulas /20µL |22−22 |
0.2 *0.1*1
%​ERROR= X 100 = 0%
22
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TABLA VI XII. REFERENCIAS

ERRORES EXPERIMENTALES

[1]. D. Fernández , L. Mancipe y D.

Sensor Porcentaje de
Fernández, «SCIELO,» 15 06 2010. [En
error (%)
línea]. Available:
Temperatura 0 http://www.scielo.org.co/scielo.php?script
=sci_arttext&pid=S0121-52562010000100
Ph 1.7
009​.[Último acceso: 18 08 2019].

[2]. Guidelines for Legislation on the

Control of Pesticides. Food and
Agriculture Organization of the United
Nations. (1989) Recuperado de :
http://www.fao.org/agriculture/crops/core-
themes/theme/pests/pm/code/guidelines/es
/​.

[3]. ​Instituto Nacional de Salud Colombia-

Imagen 15. Toma de pH realizada en los
laboratorios.
Subdirección de Vigilancia y Control.
Intoxicación Aguda por Plaguicidas.
Primer Semestre de 2007.Recuperado de:
http://www.minproteccionsocial.gov.co/D
ocumentos%20y%20Publicaciones/LINE
AMIENTOS%20VSP%202009.pdf

[4]. ​Weselak M, Arbuckle T, Foster W.

Pesticide Exposures and Developmental
Outcomes: The Epidemiological Evidence.
Journal of Toxicology and Environmental
Healt. (2007).

[5]. Rodríguez A., Suárez s., Palacio D.

Efectos de los plaguicidas sobre el
ambiente y la salud. Instituto Nacional de
Higiene, Epidemiología y Microbiología
(INHEM); La Habana, Cuba. Recuperado
de:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_ar
ttext&pid=S1561-3003201400030001​0
Imagen 16. Datos obtenido con el sensores de ph
análogo Arduino y temperatura DS18B20 .
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BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR, ELECTRÓNICA
[6]. Domínguez, M., Dominguez, L. Los
organofosforados. REAL ACADEMIA
NACIONAL DE FARMACIA; Madrid,
España. Recuperado de:
http://www.analesranf.com/index.php/mon
o/article/view/550/568
[7]. Riva MC, Vallés B, Efectos de
compuestos orgánicos halogenados en
Chlorella vulgaris y Scenedesmus
subspicatus. Actas III Congreso Nacional
de Acuicultura: 633-637 (1990).
[8]. Morales, D., Cano, N., Ospina, N. Red
Inalámbrica de biosensores enzimáticos
para la detección de contaminantes de
aguas. Revista Politécnica, ISSN
2256-5353 (En línea), Año 15, Número 29,
pág. 9-22, 2019
[9]. Idrovo, A. J. (1999). Intoxicaciones
masivas con plaguicidas en Colombia.
Biomédica. Obtenido de
https://www.revistabiomedica.org/index.p
hp/biomedica/article/view/1009
[10]. Dinero. (2015). Colombia, a pensar
más en los ríos. Dinero. Obtenido de
https://www.dinero.com/economia/articulo
/panorama-economico-social-rios-colombi
a/213793
[11]. Cardona Londoño, A., & Giraldo
Tamayo, L. (2008). Evaluación del grado
de contaminación por pesticidas
organofosforados de la cuenca del río otún,
departamento de Risaralda. Obtenido de
http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstre
am/handle/11059/1781/62816842L847.pdf
?sequence=1&isAllowed=y
[12]. Restrepo, M., Guerrero, E. Los
plaguicidas organofosforados. Instituto
Nacional de Salud, Bogotá. Recuperado
de:
http://www.actamedicacolombiana.com/an
exo/articulos/01-1979-04.pdf
[13] Sanchez, G & Salceod, R. ENZIMAS
POLIFUNCIONALES: EL CASO DE LA
ACETILCOLINESTERASA. REB 27(2):
44-51, 2008. Recuperado de:
http://www.facmed.unam.mx/publicacione
s/ampb/numeros/2008/02/e_1erArticulo.pd
f
[14] Fernández, D., Mancipe, L. &
Fernández, D. Intoxicación por
organofosforados. Facultad de Medicina,
Universidad Militar Nueva granada,
Bogotá, Colombia. 18 (1): 84-92, 2010.
[15] Grupo cooperativo Cajamar. ¿Qué
son las microalgas? Interés y uso.
(Octubre, 2015). Recuperado de:
https://www.grupocooperativocajamar.es/r
ecursos-entidades/pdf/bd/agroalimentario/i
nnovacion/investigacion/documentos-y-pr
ogramas/microalgas-1444391623.pdf
[16]. OPS (2009). Herramientas de
capacitación para el manejo responsable de
plaguicidas y sus envases. 2da ed.:
AAMMA, Organización Panamericana de
la Salud, Secretaría de Ambiente y
Desarrollo Sostenible. Buenos Aires,
Argentina.
[17]. Restrepo, M., & Guerrero, E. (1979).
Los plaguicidas organofosforados. Acta
Médica Colombiana, 4(1). Obtenido de
 ​PROYECTO INTEGRADO SEMESTRE IV FISIOLOGÍA HUMANA,
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR, ELECTRÓNICA
http://www.actamedicacolombiana.com/an
exo/articulos/01-1979-04.pdf
[18]. Díaz, P. B., & Miranda Contreras, L.
(2013). CONTAMINACIÓN DE AGUAS
SUPERFICIALES POR RESIDUOS DE
PLAGUICIDAS EN VENEZUELA Y
OTROS PAÍSES EN LATINOAMÉRICA.
Revista Internacional de Contaminación
Ambiental.
[19]. Riva Juan, M., López Ribas, D., &
Fabián Mumbrú, L. (1998). Toxicidad de
plaguicidas organofosforados en
microalgas acuáticas.
[20] Silva, N., Gonzalez, J., Pacurucu, A.
Evaluación de ​Spirogyra spp,​ como
potencial bioindicador de plaguicidas
organofosforados (2016). Recuperado de:
file:///C:/Users/USUARIO/Downloads/Ev
aluaci%C3%B3n%20de%20Spirogyra%20
spp.%20como%20potencial%20bioindicad
or%20deplaguicidas%20organofosforados
%20(1).pdf
[21] M. Chavarrías, "Pesticidas en el agua
subterránea | Consumer", ​Consumer.es,​
2008. [Online]. Available:
https://www.consumer.es/seguridad-alime
ntaria/pesticidas-en-el-agua-subterranea.ht
ml. [Accessed: 24- Sep- 2019].
[22] ​F. Quenguan and E. Eraso,
Determinación de plaguicidas
organofosforados y carbamatos en agua
para consumo humano mediante
cromatografía de alta eficiencia​, 1st ed.
San Juan, 2015, p. 5.
[23] ​Shao, Y., Li, Y., Jiang, L., Pan, J., He,
Y., & Dou, X. (2016). Identification of
pesticide varieties by detecting
characteristics of Chlorella pyrenoidosa
using visible/near infrared hyperspectral
imaging and Raman microspectroscopy
technology. ​Water research,​ ​104,​ 432-440.
[24] ​García, J. C. G., Reyes, A. R. P., &
Quiguiri, N. S. (2017). Evaluación de
Spirogyra spp. como potencial
bioindicador de plaguicidas
organofosforados. ​REVISTA
PERSPECTIVA,​ ​18(​ 4), 365-373​.
[25] Daza Agudelo, M. (2018). INFORME
DE RESULTADOS DE TAMIZAJE DE
INTOXICACIÓN POR PLAGUICIDAS
ORGANOFOSFORADOS Y
CARBAMATOS – VEO 2018. EN
POBLACIONES ANTIOQUEÑAS.
Retrieved 26 September 2019, from
https://www.dssa.gov.co/images/programa
s-y-proyectos/factores-de-riesgo/riesgo-qui
mico/INFORME_TAMIZAJE_VEO_ANT
IOQUIA_2018_(FINAL).pdf
[26] Cárdenas, O., Silva, E., Morales, L.,
& Ortiz, J. (2005). Estudio epidemiológico
de exposición a plaguicidas
organofosforados y carbamatos a siete
departamento colombianos, 1998-2001.
Retrieved 26 September 2019, from
https://revistabiomedica.org/index.php/bio
medica/article/view/1339