UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORAORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO
ASIGNATURA: BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA

BASES MOLECULARES DE LAS

ENFERMEDADES.
CARIOTIPO
(Este material es sólo una guía de clase, en ningún momento intenta sustituir los
contenidos de los libros de texto ni los hemerográficos).

Dra. Morella Guillén Ferraro

“Todas las enfermedades tienen una causa molecular”.
Cualquier enfermedad tiene, en mayor o menor grado, alteraciones en la estructura, propiedades,
metabolismo o función de una o varias biomoléculas.

Causas que pueden inducir una enfermedad:

➢ Agentes físicos (radiaciones, polvos, traumatismos, etc.).

➢ Agentes Químicos: exposición a compuestos tóxicos (solventes, metales pesados, toxinas, etc.)

➢ Agentes biológicos (virus, bacterias, parásitos, hongos).

➢ Trastornos de origen genético cuya etiología radica en la información genética contenida en el

organismo.

➢ Según la biomolécula alterada, las enfermedades también pueden ser de origen hormonal,
inmunológico, nutricional, metabólicas, entre otras.

Resulta necesario conocer cómo el ADN se replica, se transcribe y se traduce a proteínas así como
los mecanismos de expresión basal e inducible de genes en el genoma. Uno de los principales
objetivos es conocer los mecanismos de regulación y expresión genética en los procesos de la
enfermedad para tratar de detenerla e incluso prevenirla, ya que mediante estudios genéticos
pueden saberse las probabilidades de que se presente en individuos susceptibles
En general la enfermedad hay:
➢ Disfunción celular y/o tisular.
➢ Cambios temporales o permanentes en el organismo.
➢ Variaciones en la función de órganos y sistemas .

Diferentes tipos de diagnóstico de una enfermedad de acuerdo con la información analizada:

1. El diagnóstico clínico se lleva a cabo a partir de la observación médica (exploración), con el apoyo
de los datos de laboratorio (análisis clínicos, radiología e imagen,
etc.), y se basa en un criterio fenotípico y de las manifestaciones bajo la forma de síndrome clínico.

2. El diagnóstico molecular de una enfermedad se basa en criterios genotípicos que alteran la

constitución del genoma.

El objeto de estudio de la patología molecular es el conocimiento de la enfermedad desde el punto de

vista de su alteración a nivel del ADN para contribuir a su diagnóstico y terapéutica.
El genoma:
Comprende todo el material genético de un organismo y está constituido por ácido
desoxirribonucleico o ADN.

Es el manual de instrucciones para la vida donde se encuentran los genes a partir de los cuales
se forman las proteínas, que a su vez llevan a cabo las funciones de un organismo.

La genómica:
Ciencia que se enfoca al estudio de los genomas así como los genes que contienen, sus
funciones, las interacciones entre ellos y con los factores ambientales.
El estudio de los genomas incluye los mapas genómicos, las secuencias genómicas y las
funciones génicas.

Se puede considerar una rama de la genética que estudia los organismos en términos de sus
genomas.

La genómica puede ser estructural , funcional y comparativa.

La Genómica funcional ha sido utilizada para determinar estructuras tridimensionales de las

proteínas en una célula (proteómica estructural).
La genómica estructural
Se refiere a la fase inicial de análisis del genoma, que incluye:
Construcción de mapas genéticos y físicos de un genoma
Identificación y características de los genes
Comparación de las estructuras del genoma.
Identificación y estudio de las variantes estructurales de secuencia en los genomas:
✓ Polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs)
✓ Mutaciones
✓ Cambios como repeticiones o inserciones de nucleótidos.

Mapeo genómico: Disciplina de la genética que, mediante varias técnicas, busca asignar a los
distintos genes de un genoma su lugar físico.
Mapa genético o genómico: es un tipo de mapa cromosómico que muestra la ubicación relativa de
los genes y otras características importantes. El mapa se basa en el concepto de ligamiento, el cual
significa que cuanto más cerca estén dos genes en el cromosoma, mayor será la probabilidad de
que se heredan juntos. Siguiendo así los patrones de herencia, se puede establecer la ubicación
relativa de los genes a lo largo de todo el cromosoma.

Mapa físico de un cromosoma o de un genoma

muestra la ubicación física de los genes y otras
secuencias de ADN de interés. En ellos se determina
la distancia entre dos genes (número de nucleótidos
o pares de bases).
Genómica comparativa
Se enfoca al estudio comparativo de los genomas estructural y funcionalmente en organismos como
el humano, el ratón, la mosca de la fruta o bacterias como Escherichia coli.

El propósito es obtener un mejor entendimiento de cómo han evolucionado las especies y también
es útil para determinar la función de los genes y de las regiones no codificantes de los genomas.

Proteoma
Conjunto de proteínas expresado por un genoma completo incluyendo las modificadas luego de la
traducción.

A diferencia del relativamente invariable genoma, el proteoma es dinámico y cambia minuto a

minuto en respuesta a miles de señales ambientales intra y extra celulares.

El proteoma varía en un organismo, como consecuencia de cambios en su entorno:

• Situaciones de estrés
• Administración de drogas
• Efectores o señales bioquímicas
• Su estado fisiológico o patológico

Proteómica:
Área científica que estudia y analiza la estructura y función de las proteínas de una célula en forma
global.
La proteómica será la meta de muchas investigaciones futuras que ayudarán a elucidar las bases
moleculares de la salud y enfermedad.
Clasificación molecular de las enfermedades humanas
Enfermedad genética:
✓ Es una situación causada por un cambio o mutación, que se presenta durante la replicación,
transcripción o traducción de uno o varios genes.
✓ La alteración interfiere con la producción de la proteína codificada por el gen que presenta
dicha mutación.
✓ Se transmiten de generación en generación debido a que se originan por una alteración
presente en las células madre, por lo que son de carácter hereditario.

Las alteraciones en las células somáticas no son hereditarias y sólo afectan al organismo que las
desarrolla.
Pueden clasificarse según su extensión:
➢ Mutación puntual (es la alteración de un solo nucleótido y la causa de las enfermedades
monogénicas).
➢ Mutación mediana: en secuencias repetidas, dDeleción o inserción de secuencias de más de
dos nucleótidos.
➢ Mutación a gran escala: cromosómicas, es decir, afectan a cromosomas completos o grandes
fragmentos de ellos.

Desde el punto de vista molecular:

➢ enfermedades monogénicas o mendelianas (nucleares y mitocondriales)
➢ enfermedades exógenas, adquiridas o ambientales
➢ enfermedades multifactoriales de origen complejo.
Enfermedades monogénicas

Enfermedades nucleares
Hereditarias causadas por la mutación o alteración de un solo gen (o locus).
También se les conocen como enfermedades mendelianas, ya que se transmiten en la
descendencia según las leyes de Mendel.
Más de 6000 enfermedades hereditarias monogénicas
Prevalencia de un caso por cada 200 nacimientos.

Se transmiten cumpliendo uno de varios patrones.

Ubicación del gen: cromosomas autosómicos o sexuales.
Si requieren una o dos copias normales del gen para una actividad proteica normal.
 TIPOS DE ENFERMEDADES GENÉTICAS

Enfermedades monogénicas

AUTOSÓMICO DOMINANTE
• Serán enfermos los individuos que tengan una
copia mutada de un gen en cada célula.
• Por lo general, las personas afectadas tienen un
progenitor (padre/madre) afectado.
• Tiende a ocurrir en todas las generaciones de
una familia afectada.
Ej: acondroplasia.
 TIPOS DE ENFERMEDADES GENÉTICAS

Enfermedades monogénicas

AUTOSÓMICO RECESIVO
Serán enfermos los que tengan dos copias
mutadas de un gen.
• Por lo general, los progenitores del afectado no
desarrollan la enfermedad y cada uno tiene una
copia mutada del gen (portadores).
• No se ve comúnmente en todas las
generaciones.
Ej: anemia falciforme.
 TIPOS DE ENFERMEDADES GENÉTICAS

Enfermedades monogénicas
MITOCONDRIALES: Las enfermedades originadas
por daños en el genoma mitocondrial tienen en
común el estar producidas por una deficiencia en
la biosíntesis de ATP, ya que toda la información
que contiene este DNA está dirigida a la síntesis
de proteínas componentes del sistema Oxphos.

• Solo las mujeres pueden transmitir

enfermedades mitocondriales a sus hijos
(herencia materna).
• Tanto mujeres como varones pueden verse
afectados.
• Puede aparecer en todas las generaciones de
una familia.
Ej: Neuropatía óptica hereditaria de Leber.
 TIPOS DE ENFERMEDADES GENÉTICAS

Enfermedades monogénicas

X DOMINANTE
• Las mujeres son afectadas con más frecuencia
que los hombres.
• Los padres no pueden transmitirles rasgos
ligados al cromosoma X a sus hijos (no existe la
transmisión de padre a hijo).
Ej: síndrome de X frágil.
 TIPOS DE ENFERMEDADES GENÉTICAS

Enfermedades monogénicas

X RECESIVO
• Mayor afectación en varones.
• Para que una mujer desarrolle la enfermedad,
ambos progenitores deben ser portadores.
• Para que un varón desarrolle la enfermedad, la
madre debe ser portadora (los padres no pueden
transmitir rasgos ligados al cromosoma X a sus
hijos).
Ej: hemofilia.
 TIPOS DE ENFERMEDADES GENÉTICAS

Muchas enfermedades son causadas o influenciadas por factores genéticos.

Enfermedades genéticas pueden clasificarse en tres

grandes grupos:

MONOGÉNICAS CROMOSÓMICAS MULTIFACTORIALES

Proteína alterada Pérdidas

Duplicaciones
Proteína inhabilitada Inserciones
Inversiones
Proteína diferente Translocaciones
➢ Las enfermedades multifactoriales resultan de una combinación compleja de factores
genéticos, del medio ambiente y de conducta. Algunos ejemplos de estas enfermedades
son espina bífida, diabetes y enfermedades cardíacas.
➢ A pesar de que las enfermedades multifactoriales pueden ser recurrentes en las familias,
algunas mutaciones como el cáncer pueden adquirirse a lo largo de la vida de un individuo.
Todos los genes funcionan dentro de un contexto ambiental y de comportamiento.
➢ Las alteraciones en costumbres o el medio ambiente tales como dieta, ejercicio, exposición
a agentes tóxicos o medicamentos, todas pueden influenciar los rasgos genéticos.
➢ Entre las enfermedades genéticas pueden citarse malformaciones congénitas (labio
leporino, cardiopatías congénitas, anencefalia, espina bífida, malformaciones congénitas
del sistema digestivo y respiratorio, etc.), que se manifiestan desde el nacimiento y pueden
ser producidas por un trastorno durante el desarrollo embrionario o el parto, o como
consecuencia de un defecto hereditario.
➢ Las exposiciones a productos químicos o radiaciones en el medio ambiente pueden inducir
resultados reproductivos adversos, como reducción en la fertilidad, abortos espontáneos,
bajo peso al nacer, malformaciones y deficiencias del desarrollo.
➢ Otra categoría son las enfermedades de la edad adulta (algunos tipos de cáncer,
enfermedades cardíacas y presión arterial elevada, artrosis, artritis, Alzheimer, Parkinson,
sordera, ictus, demencia senil y diabetes mellitus); en todas estas enfermedades se ha
observado una predisposición genética.
 Diagnóstico de una enfermedad genética
Pruebas genéticas
Detección o tamizaje neonatal:
Es la prueba genética más realizada.
➢ Detección sistemática de diferentes enfermedades genéticas.

Detección de portadores:
Permite conocer a las parejas a saber si son portadores y el riesgo de transmisión a sus hijos, de
una enfermedad recesiva

Diagnóstico prenatal:
Detecta modificaciones en los genes o los cromosomas de un feto.

Pruebas predictivas o de predisposición:

Identifican las personas con riesgo de una enfermedad antes de la aparición de los síntomas.
Muy útiles cuando se tiene antecedentes familiares de una enfermedad: diabetes, cáncer…
 Diagnóstico de una enfermedad genética
Tipos de pruebas genéticas

Depende del tipo de anomalía que se esté evaluando, pueden ser:

Bioquímicas, moleculares y citogenéticas.
BIOQUÍMICAS
Diferentes tipos de proteínas que cumplen distintas funciones:
enzimas, estructurales y reguladoras, hormonas, transportadoras.
Una mutación podría causar enfermedad.

Cambios en las proteínas que provocan

alteraciones en sus funciones
• Ausencia de proteína
• Demasiada o poca proteína producida
• Alteración en la ubicación activa o en
otra región crítica.
• Proteína modificada incorrectamente
• Proteína ubicada incorrectamente
(acumulación de proteínas).
 Diagnóstico de una enfermedad genética
Pruebas bioquímicas

Las pruebas clínicas para detectar una enfermedad usan técnicas que analizan las
proteínas pero no los genes.
Muestra: sangre, orina, líquido amniótico o LCR.
Las proteínas son menos estables que el ADN y pueden degradarse más rápido.
Ej:
Medir directamente la actividad de una proteína (enzima) : fosfatasas alcalinas.

Pruebas moleculares
El análisis directo de ADN se realiza cuando se conoce la secuencia del gen de
interés.
Cualquier muestra de tejido, incluso las muy pequeñas.
Secuenciación directa, PCR, hibridación…
Análisis de micromatrices cromosómicas permite analizar las ganancias o pérdidas
del ADN y que no son detectables con los análisis cromosómicos de rutina.
Ej: evaluar la presencia de proteínas tau o beta‐amiloides para diagnosticar el mal de
Alzheimer en LCR.
CITOGENÉTICA:
Es el estudio de los cromosomas y de las enfermedades, causadas por alteraciones en el número o
estructura de ellos.

CARIOTIPO:
Conjunto de cromosomas de una célula (ordenados en función de su tamaño, forma y número), que
constituyen el patrimonio genético de un individuo.

CARIOTIPO EUPLOIDE: (Eu = verdadero, Ploide= juego)

Cuando el número cromosómico de un individuo y la morfología de sus cromosomas corresponde a la de
la especie. En los humano es de 46 cromosomas.

Los cariotipos los podemos clasificar en haploides, diploides y poliploides

1. Cariotipo haploide
Un solo juego de cromosomas: presente en protozoarios, en el núcleo de las células de la mayoría de
hongos y en las células de los zánganos (machos de la abejas).

2. Cariotipo diploide
Dos juegos de cromosomas. Esta condición se observa en la mayoría de animales.

3. Cariotipo poliploide
Se relaciona con la presencia de tres o más juegos de cromosomas.

Puede estar representado tres, cuatro, seis o más veces, siendo respectivamente triploide, tetraploide,
hexaploide, etc. Común en las plantas superiores.

La triploidía (3n) no es rara en los embriones abortados espontáneamente en el comienzo del embarazo.
Los pocos triploides y tetraploides (4n) que han nacido vivos murieron en unos cuantos días.

Las poliploidías es rara en los animales.

4. Cariotipo Aneuploide

(An = sin, Eu = verdadero, Ploide = juego)

El número cromosómico de un individuo no corresponde al número de la especie sino que ha

sido alterado.

ANEUPLOIDÍAS: son anomalías cromosómicas que consisten en la ausencia de un cromosoma

o en la presencia de uno más.

Individuo Trisómico: Individuo con un cromosoma adicional (es decir, tiene tres cromosomas
del mismo tipo).

Individuo Monosómico: Individuos que carecen de un cromosoma de un par.

CAUSAS: No disyunción durante la meiosis, puede ocurrir en la meiosis I o en la meiosis II.

La no disyunción es la no separación del cromosomas lo que conlleva a un reparto desigual de

cromosomas, dando lugar a gametos desequilibrados.

CITOGENÉTICA HUMANA
Estudia el cariotipo humano, es decir, el número y las características de los cromosomas
humanos.
Cariotipo Humano Normal :
La especie humana posee 46 cromosomas de los cuales: 44 (22 pares) son somáticos o
autosomas y 2 (1par) son sexuales (determinan el sexo).
La denotación del cariotipo femenino es 46, XX.
Uno de sus cromosomas X siempre es inactivo, se le llama cromatina sexual o corpúsculo de Barr; sin
embargo, su presencia es necesaria para que la mujer tenga un desarrollo femenino normal.

En el varón existen también 23 pares de cromosomas:

22 pares son homólogos y somáticos, y 1 par es heteromorfo (diferentes en estructura), se trata de
los cromosomas sexuales: XY.
La denotación del cariotipo masculino es 46, XY.

LOS CROMOSOMAS SEXUALES HUMANOS

Son heteromorfos, es decir, de diferente forma:
El cromosoma X es submetacéntrico, mientras que el cromosoma Y es acrocéntrico.
Además el cromosoma X es más grande que el Y.
ESTUDIO DEL CARIOTIPO:
Permite identificar anomalías cromosómicas.
Ej: una malformación o enfermedad.

¿A quién se realiza un cariotipo?

➢ Recién nacidos con malformaciones congénitas.
➢ Niños con retraso en el desarrollo y crecimiento.
➢ Individuos con ambigüedad de genitales.
➢ Adolescentes sin desarrollo de caracteres sexuales secundarios.
➢ Parejas con abortos de repetición.
➢ Para hacer diagnóstico prenatal
➢ Apoyo diagnóstico de padecimientos. Ej. Leucemia.

UTILIDAD DEL ESTUDIO DEL CARIOTIPO:

El estudio se realiza utilizando los cromosomas aislados de las células obtenidas a partir de una
muestra de sangre, MO, líquido amniótico o tejido de la placenta.

Por medio de esta prueba se puede:

Determinar el número y tamaño de los cromosomas.
Detectar cambios estructurales en los cromosomas.
➢ El cariotipo es la organización de los cromosomas de acuerdo con el tamaño y la posición
del centrómero.
➢ El número asignado a cada cromosoma está basado en el patrón de bandas Q.
➢ El análisis cromosómico requiere de células en metafase, para una mejor clasificación y
evaluación de los cromosomas.
➢ La obtención de células en esta fase requiere de un tejido con gran número de células en
división: los linfocitos de sangre periférica, los fibroblastos, las células del líquido amniótico
y células de algunos tumores, las cuales deben ser cultivadas bajo ciertas condiciones in
vitro para obtener un número suficiente de células en división.
➢ Las células empleadas para cultivo cromosómico deben ser capaces de crecer y dividirse
rápidamente en el cultivo, siendo las más accesibles los leucocitos, los cuales en cultivo
requieren de estimulantes mitóticos como la fitohemaglutinina, cuyo efecto transforma los
linfocitos periféricos en células parecidas a blastos capaces de reentrar en el ciclo mitótico,
ya que ellos normalmente sólo se dividen una vez.
➢ Una vez se obtienen células en proliferación activa, es posible detener células en metafase
al inhibir la formación del huso acromático mediante el uso de la colchicina.
➢ Además, esta sustancia ayuda a la contracción de los cromosomas, hecho que permite una
mejor delineación, un extendido más eficiente y un mejor análisis.
➢ Luego, las células son expuestas a solución salina hipotónica con el fin de asegurar la
dispersión adecuada y la observación de los cromosomas dentro de la membrana celular,
mediante la extensión en un portaobjetos para posteriormente ser coloreados y analizados
al microscopio.
Para estudiar y clasificar los cromosomas se aplica la técnica de preparación de
cromosomas mitóticos.

1. Muestra de sangre periférica con heparina.

2. Siembra en un medio enriquecido con fitohemaglutinina y se incuba a 37°C 72
horas.
3. Adición de una solución de colchicina (inhibe la formación del huso mitótico)
para detener la división celular: metafase.
4. Adición de una solución hipotónica que hace que las células se hinchen y
estallen con la técnica de goteo sobre un portaobjeto, para liberar los
cromosomas.
5. Posteriormente se fijan y se tiñen.

El cromosoma metáfasico tiene doble cantidad de ADN porque ya ha duplicado el ADN.

CARIOTIPO HUMANO

Los cromosomas se ordenan:

➢ Por tamaño de mayor a menor:
Cromosomas grandes, medianos y pequeños.
➢ Posición del centrómero:
Metacéntricos, submetacéntricos y los acrocéntricos.
➢ Presencia o no de constricciones secundarias.
Se clasifican en 7 grupos, por tamaño y tipo de cromosoma (metacéntricos,
submetacéntricos o acrocéntricos).
 CARIOTIPO HUMANO
LIMITACIONES DE LA CITOGENÉTICA
► Cromosomas Grandes CONVENCIONAL
- Grupo A: Cromosomas 1, 2 y 3, que son Requiere células en metafase.
meta y submetacéntricos. No siempre la calidad de las metafases es
- Grupo B: Cromosomas 4 y 5, que son óptima
submetacéntricos. Resolución limitada.

► Cromosomas Medianos VENTAJA: bajo costo

- Grupo C: Cromosomas 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12
+ X que son submetacéntricos Alternativa: CITOGENÉTICA MOLECULAR
- Grupo D: Cromosomas 13, 14 y 15 que son
acrocéntricos con satélites. FISH (Hibridación in situ con
fluorescencia)
Tener la sonda adecuada
► Cromosomas pequeños
- Grupo E: Cromosomas 16, 17 y 18 .que son Otras técnicas:
meta y submetacéntricos.
- Grupo F: Cromosomas 19 y 20 que son Requieren equipos muy sofisticados y
metacéntricos. apoyo informático
- Grupo G: Cromosomas 21 y 22 + Y que son SKY (Cariotipo espectral multicolor,
acrocéntricos. multifish)
CGH (Hibridación Genómica
Comparada)