Resultados

Se hizo la respectiva preparación de la fase móvil 1:24 de acetonitrilo para HPLC y agua des-
ionizada (500mL) siendo el reservorio para el respectivo análisis, posteriormente se prepara la
solución de acrilamida a 100 ppm siendo esta aforada a 50 mL, lo cual se toma una cantidad de
volumen para realizar unas disoluciones de concentraciones de 1, 2, 4,6 y 8 ppm a un aforo de
50 mL con agua des-ionizada para la respectiva medición en HPLC, a continuación las
cantidades utilizas de acrilamida.
Volumen requerido Concentración de acrilamida Volumen de aforo
(mL) ppm (mL)
0,5 1 50
1 2 50
2 4 50
3 6 50
4 8 50

Continuando con el procedimiento de las diferentes disoluciones, no fue posible obtener la señal
representativa de acrilamida en el cromatograma ya que estas concentraciones fueron bajas y la
columna se encontraba con residuos de acrilamida de un anterior análisis realizado en el equipo
,por tal razón se decide tomar la concentración más alta que es la de 100ppm de acrilamida la
cual al ser inyectada y pasado el tiempo requerido se observó la banda en un tiempo de
retención de 4,053min con las condiciones ya mencionadas anteriormente

Figura# cromatograma de acrilamida a 100ppm

Con el fin de determinar el área del pico correspondiente a la acrilamida se procedió a ampliar e
imprimir la figura que este describía, seguidamente se pesó un cm2 de papel y el triángulo
descrito por el pico y mediante la siguiente relación de pesos se determinó el área del mismo:

𝟏𝒄𝒎𝟐
𝑷𝑬𝑺𝑶 𝑫𝑬𝑳 𝑻𝑹𝑰𝑨𝑵𝑮𝑼𝑳𝑶(𝒈) ∗ = Á𝑹𝑬𝑨 𝑫𝑬𝑳 𝑻𝑹𝑰𝑨𝑵𝑮𝑼𝑳𝑶
𝑷𝑬𝑺𝑶 𝑫𝑬𝑳 𝒄𝒎𝟐 (𝒈)

1𝑐𝑚2
0,0965 𝑔 ∗ = 𝟏𝟐, 𝟎𝟔𝟐𝟓𝒄𝒎𝟐
0,0080 𝑔

Posteriormente partiendo de la medida de 1 cm, se procedió a medir el ancho del pico y a pasar
este valor a unidades de tiempo siguiendo la escala de las abscisas suministrada por el
cromatograma de la siguiente manera:
 𝑻𝑰𝑬𝑴𝑷𝑶 (𝒎𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐𝒔)
𝑳𝑶𝑵𝑮𝑰𝑻𝑼𝑫 𝑩𝑨𝑺𝑬 𝑫𝑬𝑳 𝑷𝑰𝑪𝑶 (𝒄𝒎) ∗
𝟏𝒄𝒎
= 𝑨𝑵𝑪𝑯𝑶 𝑫𝑬 𝑳𝑨 𝑩𝑨𝑺𝑬 𝑫𝑬𝑳 𝑷𝑰𝑪𝑶 (𝒎𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐𝒔)

0,125 𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑜𝑠
2,3 𝑐𝑚 ∗ = 𝟎, 𝟐𝟖𝟕𝟓 𝒎𝒊𝒏𝒖𝒕𝒐𝒔
1 𝑐𝑚
Por último, partiendo de los resultados anteriores se determinó el número de platos y la altura
del pico sabiendo que la longitud de la columna empleada fue de 150mm.

𝒕𝑹 4,053𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑜𝑠 2
𝑵 = 𝟏𝟔( )𝟐 = 16 ( ) = 𝟑𝟏𝟕𝟗, 𝟕
𝑾 0,2875 𝑚𝑖𝑛𝑢𝑡𝑜𝑠

𝑳 150𝑚𝑚
𝑯= = = 𝟎, 𝟎𝟒𝟕𝟏𝒎𝒎
𝑵 3179,7

Discusión
En la actualidad el uso del HPLC ha llegado a ser una de las técnicas de laboratorio más
importantes como herramienta analítica para separar y detectar compuestos químicos. Sin
embargo, como en todas las técnicas analíticas, los pequeños problemas pueden generar un
impacto negativo en la exactitud de las medidas y la durabilidad del sistema. Como se
evidenció en el proceso experimental, no fue posible realizar el proceso completamente y esta
limitación pudo deberse a distintos factores como daños en la columna los cuales se relacionan
con obstrucciones debidas a partículas pequeñas en los solventes o fases móviles, daños por
materiales no eluidos en las muestras, entre otros; los cuales causan variación en las
características de retención, perdida de resolución, picos no resueltos e imposibilidad de
registrar medidas a concentraciones bajas. Otros de los factores que pudieron influir de manera
negativa en la realización del proceso pudieron ser la degradación del solvente pues cuando se
abre el recipiente, a pesar de contener reactivo de alta calidad es posible que gases de la
atmosfera se introduzcan y afecten su calidad; la temperatura y presión a la que se lleva a cabo
el proceso pues alteran el comportamiento de las reacciones y el modo de preparación de las
soluciones a analizar, siendo todos estos factores que contribuyen al desgaste del sistema
HPLC.
Partiendo de las afectaciones mencionadas es necesario que antes de llevar a cabo un proceso de
HPLC se le realice una limpieza a cada una de las partes del sistema y se realice un monitoreo a
los distintos componentes del mismo como son la columna, precolumna, sistemas de filtración y
desgasificación de solventes, bombas, sistema de inyección de muestra y detector para asegurar
el óptimo funcionamiento del equipo y obtener así resultados eficientes y reproducibles.

Conclusiones

 Se logró obtener la banda representativa de la acrilamida por el método de

cromatografía de alta resolución con una concentración de 100ppm ,ya que las demás
concentración preparadas que fueron menos concentradas(1,2,4,6.8ppm) no arrojaron
una señal representativa porque la columna utilizada se encontraba con residuos de una
anterior análisis con acrilamida.
 Se halló el área de la señal representativa que mostro del cromatograma de acrilamida
dando como resultado 12,0625𝑐𝑚2 con un tiempo de retención de 4,053minutos, con
 un numero de platos de 3179,7y una altura de 0,0471mm , a pesar de las interferencias
que se encontraron en la columna se pudo obtener un buen cromatograma
 Se recomienda hacer una buena limpieza al equipo como a la columna que se va a
utilizar para el análisis para evitar los errores de interferencias, superposiciones de
bandas no resultas y evitar el taponamiento de la columna