“AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL”

“UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL DE HUAMANGA”

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE

MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE INFECCIÓN E INMUNIDAD

PRÁCTICA N°7: PRUEBA RÁPIDA OnSite HBsAg/ HCV Ab (SUERO

/ PLASMA/ SANGRE TOTAL)

PRÁCTICA N°8: DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO ABO

Y FACTOR RHESUS (MÉTODO DE AGLUTINACIÓN)

DISCENTE: AVILÉS SAAVEDRA, Bryan

HORA DE PRÁCTICA: Lunes 7-9pm

AYACUCHO- PERÚ
2018
 UNSCH – MEDICINA HUMANA

PRUEBA RÁPIDA OnSite HBsAg/ HCV Ab (SUERO / PLASMA/

SANGRE TOTAL)

PRINCIPIO:
La prueba rápida OnSite HBsAg es un inmuno
ensayo cromatográfico de flujo lateral. La prueba
del casete consiste en: 1) una membrana con
conjugado coloreado de borgoña que contiene
anticuerpos anti-HBsAg conjugados con oro
coloidal (conjugado HBsAg Ab) y un control de
anticuerpo conjugado con oro coloidal, 2) una
membrana de nitrocelulosa que contiene la
banda de prueba (banda T) y una banda de
control (banda C). La banda T esta pre-recubierta
con anticuerpos HBsAg no conjugados, y la
banda C esta pre recubierta con un control de
anticuerpo. (1) Cuando es dispensado un volumen adecuado de la muestra en el pozo de muestra
del casete, la muestra migra por acción capilar a través del casete. El HBsAg si está presente en
la muestra se une con el HBsAg Ab. Este inmunocomplejo es capturado en la membrana por el
anticuerpo HBsAg no conjugado pre-recubierto, formando una coloración en la banda T, indicando
un resultado positive para HBsAg. (1) La ausencia de la banda T indica un resultado negativo. La
prueba contiene un control interno (banda C) la cual muestra una coloración borgoña por la
formación de un inmunocomplejo de anticuerpos de control, que se forma independientemente de
la banda T. El resultado de la prueba es inválido si la banda C no se colorea y debe ser repetida
en un nuevo casete de prueba. (1)La hepatitis B se diagnostica y clasifica en grados evaluando una
compleja combinación de antígenos y anticuerpos contra el VHB. Algunas pruebas determinan tres
proteínas o antígenos asociados al VHB: HBsAg (de superficie), HBcAg (central) y HBeAg. El
sistema inmunitario produce tres anticuerpos correspondientes contra estos antígenos: anti-HBs,
anti-HBc y anti-HBe. La presencia de HbsAg o de ADN del VHB en la sangre indica que la persona
afectada tiene hepatitis B en ese momento. La presencia de anticuerpos anti-HBs en ausencia de
HBsAg muestra que la enfermedad ya no está activa. La gente que ha estado expuesta al VHB y
ha logrado superar la infección muestra un resultado positivo a los anticuerpos anti-HBs y anti-
HBc. En cambio, los sujeto que están vacunados contra el VHB tienen anticuerpos anti-HBs pero
no anti-HBc.(2)

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EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA:
El virus de la Hepatitis B (VHB) en la causa más
común de viremia persistente y la causa más
importante de enfermedad hepática crónica y
carcinoma hepatocelular. Clínicamente las
infecciones por el VHB han existido durante varios
milenios. Se estima que hay cerca de 300 millones
de portadores crónicos de VHB en el mundo. Los
tipos de portadores varían de un 0.3% (países del
occidente) al 20% (Asia, África) (2). El VHB es un
virus ADN hepatotrópico. El core de este virus contiene ADN polimerasa (3), el antígeno core
(HBcAg) (4) y el antígeno e (HBeAg)(5) . El core del VHB está encerrado en una capa que contiene
lípidos, proteínas y carbohidratos que expresan un antígeno en la superficie (HBsAg)(3). El HBsAg
es el primer marcador que aparece en sangre en la fase aguda de la hepatitis B, es detectado 1
semana a 2 meses después de la exposición, y de 2 semanas a 2 meses antes de la aparición de
los síntomas. Tres semanas después del inicio de hepatitis aguda casi la mitad de los pacientes
todavía es positivo para el HBsAg.
En la fase crónica, el HBsAg persiste por un largo periodo (6- 12 meses) sin seroconversión para
los anticuerpos correspondientes. Por lo tanto, el tamizaje para HBsAg es altamente recomendable
para todos los donantes, las mujeres embarazadas y las personas en grupos de alto riesgo.

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MATERIALES:
 Control positivo
 Control negativo
 Un pad conjugado coloreado
 Una tira de membrana
nitrocelulosa
 Buffer salina o buffer fosfato
salina
 Suero sanguíneo

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PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN DEL SUERO:

PROCEDIMIENTO:

1 Preparamos la muestra de sangre y lo centrifugamos para la extracción de sangre

y los materiales necesarios para la prueba.

2 Rotulamos el dispositivo de prueba.

Llenamos la pipeta con el espécimen y colocamos 2 a 3 gotas en el pocillo de la

3 muestra haciendo con cuidado que no salgan burbujas de aire.
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OBSERVACIÓN:
RESULTADO POSITIVO
Indica que la persona afectada tiene hepatitis B en ese
momento. La presencia del HBsAg indica que una
persona es infecciosa
Los sujetos que están vacunados contra el VHB tienen
anticuerpos anti-HBs.

NOTA: El HBsAg es el antígeno que se utiliza para

elaborar la vacuna de la hepatitis B.

RESULTADO NEGATIVO
Indica que la persona no tiene
hepatitis B en ese momento;
tampoco está vacunado contra el
VHB y no tiene anticuerpos anti-
HBs.

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DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO ABO Y FACTOR

RHESUS (MÉTODO DE AGLUTINACIÓN)

GRUPO SANGUÍNEO:
La membrana celular de los glóbulos rojos contiene en su superficie diferentes proteínas, las cuales
son las responsables de los diferentes tipos de sangre. Existen principalmente dos tipos de proteínas
que determinan el tipo de sangre, la proteína A y la B. El sistema de grupo sanguíneo, descubierto
hace más de 100 años por Karl Landsteiner, es uno de los sistemas más importantes en medicina
transfusional. Está compuesto por los antígenos A, los antígenos B, y los correspondientes
anticuerpos contra estos antígenos. (7)

La sangre tiene propiedades antigénicas distintas en cada individuo al igual que propiedades
inmunitarias diferentes, estas diferencias permitieron el descubrimiento de varios sistemas de
grupos sanguíneos. Dos antígenos (tipo A y tipo B) aparecen en las superficies de los eritrocitos en
una gran proporción de los seres humanos; son estos antígenos (llamados también aglutinógenos
porque aglutinan a menudo los eritrocitos) los que causan la mayoría de las reacciones
transfusionales sanguíneas. (8)

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El examen para determinar el grupo sanguíneo se

denomina sistema o tipificación ABO. Su sangre
se mezcla con anticuerpos contra sangre tipo A y
tipo B, y la muestra se revisa para ver si los
glóbulos sanguíneos se pegan o se aglutinan. Si
dichos glóbulos se aglutinan eso significa que la
sangre reacciono con uno de los anticuerpos. (9)
Los grupos sanguíneos eritrocitarios son
componentes antigénicos en la superficie de los
hematíes que están relacionados con la
terapéutica transfusional y la prevención de
accidentes hemolíticos secundarios a las
transfusiones. A parte de los grupos eritrocitarios
tiene gran interés el grupo antigénico no
eritrocitario Sistema del antígeno leucocitario
humano que interviene en el rechazo de
transplantes de órganos. Los grupos sanguíneos
son glucolípidos y proteínas que forman parte de
la membrana del hematíe y se diferencian por su diferente capacidad antigénica. Las glucoproteínas
están unidas a diferentes azúcares que les da la especificidad de grupo. (A, B, O). Los antígenos
crean reacciones antígeno-anticuerpo que desencadenan una reacción de inmunidad tipo I. (10)

COMPATIBILIDADES TRANSFUSIONALES DEL GRUPO AB0:

 Un individuo del grupo A es receptor de sangre del grupo A y 0 y donante para individuos del
grupo A y grupo AB.
 Un individuo del grupo B es receptor de sangre del grupo B y 0 y donante para individuos del
grupo B y grupo AB.
 Un individuo de grupo AB es receptor de sangre del grupo A, de sangre del grupo B y del
grupo 0 y donante sólo para individuos del grupo AB.
 Un individuo del grupo 0 es receptor sólo de sangre del grupo 0 y donante para individuos de
todos los grupos. (Donante universal)

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MATERIALES:
Una pipera gotera calibrada para suministrar 20 gotas
por ml.
Piperas Pasteur con perillas de goma (chupón)
Antisueros: anti A, anti B y anti AB
Sangre capilar o venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO:

1 Extraemos sangre con el sistema vacutainer.

2 Preparamos un portaobjeto y lo rotulamos

Agregamos a cada portaobjeto una gota de la suspensión preparada de glóbulos rojos.

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Mezclamos la preparación de cada portaobjetos con un aplicador de madera

3 Hacemos osilar el portaobjetos hacia delante y hacia atrás para terminar de hacer la mezcla

1-Colocaos el anti A 1-Colocaos el anti B 1-Colocaos el anti D

OBSERVACIÓN DE LA MUESTRA

No existe aglutinación en las gotas A y B la sangre es del tipo

“O”
 Si existe aglutinación en la gota Rh la sangre es de factor
Rh positivo

RESULTADO: TIPO DE
SANGRE O+

OTRAS OBSERVACIONES

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ERITOBLASTOCIS FETAL:

La etiopatogenia de esta enfermedad está

basada en la incompatibilidad de grupo
sanguíneo materno-fetal, cuando los
eritrocitos fetales poseen antígenos de origen
paterno carentes en los glóbulos rojos de la
madre. Esto origina el desarrollo de una
respuesta inmunitaria en la madre, y paso de
anticuerpos (del tipo IgG) a través de la
placenta. Estos anticuerpos se unen a la
membrana del hematíe fetal y facilitan su
hemólisis (excepto en la EHPN por ABO
(EHPN-ABO), donde los anticuerpos están
preformados. (11)

Resumiendo, para que la enfermedad se produzca es necesario:

Incompatibilidad de grupo sanguíneo materno-fetal.
Aloinmunización(es la aparición de anticuerpos en un organismo que ha recibido un antígeno
procedente de un individuo de la misma especie) materna específica contra un determinado
antígeno fetal.
Paso de anticuerpos maternos al organismo fetal.
Acciones derivadas de la unión de los anticuerpos maternos sobre los hematíes fetales.

BIBLIOGRAFÍA:

1) CTK diagnóstico de simplificación biotecnológica. Prueba rápida (suero/ plasma). San

Dieo.2014. http://www.medibac.com/wp-content/uploads/2016/10/R0040C-Hepatitis-B.pdf
2) Franciscus A. Kukka C. Guía para comprender la hepatitis B. Versión 4.1.2008
http://hcvadvocate.org/hepatitis/sp_factsheets/guia_VHB.pdf
3) Emanuel Rubin y John Farber. El hígado y el sistema biliar. Hepatitis viral aguda P 721-729.
Rubin E, Farber JL ed. Patología 2nd ed. 1994. J.B. Lippincott, Filadelfia
4) Kaplan PM, Greenman RL, Gerin JL, Purcell RH, Robinson WS. ADN polimerasa asociado
con el antígeno de la hepatitis B humana. J Virol. 1973 12 (5): 995 - 1005.
5) Dane DS, Cameron CH, Briggs M. Partículas similares a virus en el suero de pacientes con
Australiaantígeno asociado hepatitis. Lanceta. 1970; 1 (7649): 695-8.
6) Magnius LO, Espmark A. Un nuevo complejo de antígeno que coexiste con el antígeno de
Australia.Acta Pathol Microbiol Scand. Microbiol Immunol. 1972; 80 (2): 335-7.
7) Arbeláez C. Sistema del grupo sanguíneo ABO. Medicina y laboratorio 2009;15: 329-346.
8) Andia E, Solis A. J, Castellón N, ed al Tipificación del grupo sanguíneo A B O y el factor Rh
en la población de Totora-Cochabamba gestión 2012. Rev Cient Cienc Med 2013;16(1): 25-
27
9) http://practicas-de-samuel.blogspot.com/2014/06/practica-4-grupo-sanguineo.html
10) http://ieslorcalapuebla.es/wp-content/uploads/2012/11/Practica_GRUPOS_ABO.pdf
11) López de Roux M, Cortina L. Instituto de Hematología e Inmunología ENFERMEDAD
HEMOLÍTICA PERINATAL. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter 2000;16(3):161-83

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