ISO 11133: 2014 CALIDAD

MEDIOS DE CULTIVO – MC
MEDIA PAD

Deysi Lisseth Gonzalez

Product Specialist BioMonitoring Colombia
Life Science
 Agenda

• Bienvenida
• Componentes de la Norma ISO 11133/2014
• Break
• Parte Practica con Mc Media PAD.
 ISO 11133: 2014
Objetivos
• Establecer criterios que garanticen su calidad
• Especificar requisitos para su preparación y evaluación del rendimiento

CAMPO DE APLICACIÓN:
• Entidades comerciales que producen y/o distribuyen medios
• Entidades no comerciales que proporcionan medios a terceros
• Laboratorios microbiológicos que prepararan sus propios medios
Qué es la CRM
CRM “Materiales de Referencia Certificados”
Producidos bajo la guia ISO 34 y certificados de acuerdo a ISO 17025

Microorganismos de Referencia Certificados

CONTROLES!!!

American Type Culture Collection Coleccion Española de Cepas

4
Qué Debe cumplir una cepa CRM?

1 2 3

Debe tener
Tener
descripción
caracterización
Debe ser precisa de
fenotípica y
homogéneo Estabilidad,
genotípica por
y estable concentración,
métodos
validados viabilidad

5 Company presentation
Presentaciones Cepas Lenticule y
Vitroids By Merck

6
Certificado de Analisis

7
Gestión de la Garantía de la Calidad de
los Medios
 Documentación
Suministrada por el Fabricante/Proveedor.
Aceptación de la entrega de Productos.
 Conservación (Sellado, fecha de recepción, fecha de apertura).
 Preparación de Medios en el Laboratorio
Instrucciones del Fabricante
Registros
Calidad de los componentes
 Calidad de los Componentes
 Agua purificada: carga microbiana<102ufc/mL (ISO 6222: 22 ±1ºC/68 ±4h)
(Destilada, desmineralizada, desionizada o agua producida por ósmosis inversa.

 Conductividad< 5 μS/cm (máx. 25) (Tipo grado 3, ver ISO 3696)

 Medida del peso y rehidratación: Error máximo de pesada1% (ISO 7218 e ISO 8199)

 Los ingredientes se añaden sobre el volumen de agua(no enrasar)

 Medida y ajuste del pH (antes de autoclavar) Ajuste con NaOH (Hidróxido de Sodio)
1M ó HCl (Ac Clorhídrico) 1M .

 Esterilización Calor húmedo (autoclavado)

 Filtración(0.22 μm) humedecer filtro para evitar retenciones

 Controles de Perdida de Volumen
Durante la Esterilización
 Para la evaluación de la perdida de Volumen de los Diluyentes:

 1. Colocar un volumen fijo de diluyente en tubos de ensayo o frascos de

dilución.
 2. Medir el peso o volumen antes y después del proceso de esterilización en
autoclave.
 3. Con los datos obtenidos, se efectúa el calculo y la inferencia estadística.
 SISTEMA DE PURIFICACION DE AGUA
Parámetro Valor Unidad
Agua purificada, Tipo 2, ideal para la preparación de medios de
Resistividad >5 MΩ.cm @ 25°C
cultivo.
Elimina sustancias inhibidoras/promotoras de crecimiento microbiano. Conductividad < 0.2 µS/cm
TOC < 30 ppb
Bacteria < 0.1 cfu/ml*
Tecnología de Partículas > 0.22µm <1 partícula/ml*
Electrodesionización - Elix
* Con filtro final de membrana Millipak™ Express
Agua pura con calidad constante y confiable.
Menores costos de operación.
Valores de resistividad y TOC mejores que el
Millipak Express
agua producida por doble destilación.
Filtración directa a 0.22µm,
asegurando el agua libre de bacterias y
partículas luego de la dispensación.

Control
Equipado con tecnologías que
permiten una alta precisión en la
medición de los parámetros del agua.
Lámpara UV 254 nm
Permite la inhibición de las bacterias
presentes en el agua.
Manejo intuitivo
Sistema de fácil manejo, con
dispensadores que permiten visualizar el
estado de su sistema.
Sencillo mantenimiento y disponibilidad
de Guías de referencia rápidas para el
usuario.
Dispensador
Fácil y ergonómica dispensación del agua
en su laboratorio.
Permite optimizar tiempo y espacio.
Dispensación volumétrica o manual.
 Almacenamiento y Vida Media de los
Medios Preparados
▪ Medios Comerciales: Instrucciones Fabricante
▪ Medios Preparados en el Laboratorio
Refrigerados (5+/- 3°C), protegidos de la Luz o desecación (bolsas celofán o
plástico).
Evaluación Vida Útil: rendimiento físico, químico y microbiológico.
Recomendación: 2 a 4 semanas placas y 3 a 6 meses tubos y botellas selladas. ***

Preparación para su Uso:

• Fusión medios en baño térmico y/o Autoclave a 47 a 50°C (max. 4 h)
• Vertida en placa 44-47°C
• Preparación de Medios para Inoculación: Secado de Placas a 25-50°C/ 60 a 30
Minutos
Microorganismos de Ensayo para Pruebas
de Rendimiento
▪ Criterios de Selección
Cepas Positivas (Características típicas del microorganismos diana)

Cepas débilmente Positivas.

Cepas negativas

Cepas completa o parcialmente inhibidas

Números de la cepa de prueba WDCM:

Los números de la cepa especificados en el Anexo
E y en el Anexo F son los del catálogo de
identificadores en los compilados universales por
el Centro Mundial de Datos para Microorganismos
(WDCM).
Este catálogo contiene detalles de las cepas de
referencia representadas por cada número de
WDCM y detalles de contacto de las colecciones de
cultura.
 Microorganismos para pruebas de
rendimiento - Nivel de inóculo e incubación
 Nivel del inóculo para pruebas de
productividad - Pruebas cualitativas
▪ 103 a 104 UFC para pruebas cualitativas de
medios de placa
▪ ≤ 100 UFC para pruebas de productividad de
medios de enriquecimiento previo y
enriquecimiento selectivo
▪ 104 a 106 UFC para pruebas cualitativas de
medios de transporte sólidos
 Nivel del inóculo para selectividad y
para pruebas de especificidad
▪ 104 a 106 UFC del microorganismo no
diana
▪ 103 a 104 UFC de microrganismo
especifico del medio
Contaminación microbiana
incubación a T adecuadas):
>1 placa o tubo para lotes pequeños (<100 und).
Se establecerán y justificarán criterios de
aceptación para cada medio por el laboratorio o
fabricante
Métodos para pruebas de rendimiento de
medios de cultivo sólido
 Productividad:

Inoculo: Concentración conocida Medios Cultivo Prueba para Rto Medios Cultivo REFERENCIA no selectivo

PR: coeficiente de productividad

NS: recuento total de colonias obtenidas en o en el medio de cultivo sometido a prueba
N0: recuento total de colonias obtenidas en el medio de cultivo definido de referencia
(Aprox 100 cfu)
 Métodos para pruebas Cualitativas
cultivo sólido
 Para la productividad y la especificidad,
utilice una placa de medio de prueba y raya
cada microorganismo de prueba de una
manera para obtener colonias discretas.
Interpretación de resultados:
 0 corresponde a ningún crecimiento
 1 corresponde a un crecimiento débil
 2 corresponde a un buen crecimiento.
 Para la selectividad, utilice una
placa del medio de ensayo y trace
cada microorganismo de ensayo
como una sola línea recta.
Interpretación de resultados:
La especificidad del medio de cultivo
está dada por características fisiológicas
indicativas esenciales para diferenciar
los organismos relacionados
Respuestas bioquímicas específicas (por
ejemplo, halos de clarificación de yema
de huevo para Baird-Parker Agar).
Métodos para la prueba de rendimiento de
medios de cultivo líquido
 Cualitativas - Medios líquidos selectivos

M.O NO
M.O M.O NO Mezcla Diana
Diana Diana

Incubación a condiciones adecuadas del medio/M.O.

Tomar 10ul

Medios Cultivo ESPECIFICO Medios Cultivo NO especifico

Resultados
 La productividad del caldo selectivo es satisfactoria si se obtiene al menos 10
cfu del microorganismo diana sobre el medio especıfico para ese organismo
(por ejemplo, XLD)

 La selectividad del caldo de ensayo es satisfactoria si no se produce

crecimiento de microorganismos no diana en la placa de agar no selectiva
(TSA)
Medios y reactivos listos para usar

➢ Si el fabricante tiene un sistema de aseguramiento de

la calidad en su lugar, Está aprobado según A ISO 9001:
el usuario no necesitará realizar pruebas extensas en
dichos medios, sino que debe garantizar que se
mantienen las condiciones de almacenamiento.

➢ El usuario se asegurará de que los fabricantes de

medios listos para el uso disponibles en el mercado
dispongan de un programa de calidad para esta
gama de productos.
Aseguramiento de la Calidad del Medio
de cultivo Posibles Problemas
Anormalidad Posible Causa

Formación de Precipitado ▪ Sobrecalentamiento del medio durante

la preparación.
▪ pH medido incorrectamente
▪ Pobre calidad del agua o pobre calidad
del medio deshidratado.

Falla en la Solidificación del medio solido. ▪ Sobrecalentamiento del medio durante

la preparación.
▪ Peso incorrecto del Agar
▪ Agar mal disuelto o incompleta mezcla
de los ingredientes.

Medio Inhibitorio/ productividad baja ▪ Sobrecalentamiento del medio durante

la preparación.
▪ Pobre calidad del agua o del medios
deshidratado
• Formulación inadecuada Ej. Ingredientes
y suplemento mal pesados.
pH Incorrecto ▪ Sobrecalentamiento del medio durante la preparación.
▪ pH medido incorrectamente
▪ Pobre calidad del agua
▪ Pobre calidad del medio deshidratado
▪ Contaminación externa con químicos.

Color Anormal ▪ Sobrecalentamiento del medio durante la preparación.

▪ pH medido incorrectamente
▪ Pobre calidad del medio deshidratado o del agua.
▪ Contaminación externa.

Selectividad pobre ▪ Sobrecalentamiento del medio durante la preparación.

▪ pH incorrecto.
▪ Pobre calidad del medio deshidratado
▪ Formulación inadecuada
▪ Suplemento agregados incorrectamente Ej. Con el medio demasiado caliente o en alta
proporción.
 Conclusión Final
 Un punto critico a la hora de implementar la norma ISO 17025 y
acreditar los métodos del laboratorio, es la preparación, esterilización
y evaluación de calidad de los medios de cultivo empleados para
realizar los ensayos.
 Las recomendaciones internacionales de organismos de acreditación
se basan en la norma ISO 11133-1:2014 Esto implica una revisión de
las practicas cotidianas realizadas por el laboratorio y a su vez la
seguridad que los medios usados son adecuados a la finalidad
prevista.
Fundamento
Sterikon® plus bioindicador MERCK
Formulación Experimentan una destrucción total

Esporas - Calentamiento a vapor

Geobacillus
stearothermophilus
ATCC 7953 - 15 minutos a 121°± 0,5 °C
(245 kPa)
n: 5x105 - 1x107

Indicador de pH
Experimentan una destrucción
Azúcar incompleta
- Calentamiento a vapor
Caldo nutritivo
- A temperatura
Viviendo dos
más baja o
2ml tiempo productos
dias con los
de
Merck
Ubicación Sterikon® plus Bioindicador
Ubicación*

1. Fondo
2. Centro
3. Arriba / Abajo

Capacidad hasta 250 litros = Min 2 ampollas

Capacidad Mayor de 250 litros= Min 6 ampollas

* Condiciones desfavorables. Viviendo dos

dias con los
productos de
Merck
STERIKON PLUS
Interpretación de resultados

Adecuada +
Esterilización

Control Positivos

Después de 24 h de incubación a
60+/- 2°C

Inadecuada
Esterilización y/o
Sobrecalentamiento Viviendo dos
dias con los
productos de
Merck Continuar :
Prueba hasta 48h
READYPLATE 55 Y READYPLATE 55
KIT

Minimice el flujo de Trabajo

Tome la
correcta
decisión,

En un
solo
vistazo
Diseñado para su conveniencia.

Código de color para

rápida y segura
diferenciación de las
almohadillas

Almohadilla de material no
tejido para mejor difusión
de la muestra

Cuadriculas visibles para

mejor lectura.
Espacio suficiente para
colocar el nombre y
especificaciones de la
muestra

Espacio suficiente para

colocar el nombre y
especificaciones de la Código de color para
muestra rápida y segura
diferenciación de las
almohadillas

Cubierta de
film
transparente

Capa soluble en agua

Almohadilla que incluye nutrientes,
con el medio sustancias cromogénicas
e inhibidores.

Film Lámina a prueba de agua

adhesivo

Chameleon: Pre-Launch | Jun 21th, 2017

32
 Abrir Inocular 1ml Cerrar Incubar Contar
Levantar la cubierta Inocular la muestra en el Cerrar la cubierta Incubar de acuerdo a las
diagonalmente, centro la almohadilla, se Contar
condiciones particulares
difunde automáticamente de la aplicación

33
 Especificaciones
Embalaje:
del producto
100 almohadillas de medios / caja
(4 bolsas de aluminio con 25 pastillas de medios
cada una)

Almacenamiento Color coding:

2-15°C same color
of pad,
aluminum
Vida de anaquel
pouch and
E.coli / Coliform, Coliform : 36 meses box
Rapid Aerobic Count: at least 18 meses
Yeast and Mold: 24 meses
Staph.Aureus: 12 meses

Periodo de validez de las bolsas abiertas: 4 semanas

Chameleon: Pre-Launch | Jun 21th, 2017

Automatic Dilutor
DiluCult & DiluCult 2  Low profile, can be put into a safety cabinet
 Easy-to-use and to clean
 Light code
 Different sample weight: up to 5kg for DiluCult 2
 Adjustable parameters : pump selection, dilution factor,
distribution mode, speed
 Can prepare 2 different bottles and have them on each side
 Traceability

JumboKit – for 3500 ml bags

F&B Instrumentation DiluCult & ESH 35
 Enrichment Sample
Homogenizer (ESH) Ajuste de Intensidad
Marketing

400 cm3 Boton de cierre

Capa Max.

Su complement Perfecto

• ISO 8199 dicta

• “La distribución aleatoria de los microorganismos Global Marketing Plans
Global Marketing Plans
en una muestra causa imprecisión en los
resultados” Debe homogenizar adecuadamente
Campaign Plans
Campaign
Ventana Plans
inquebrantable
• Merck le da el complemento perfecto

Homogenizador
Marcom de Pedal
MarCom channels
channels
and tools
and tools
Un Mundo de Innovación