Resultados:

Riboflavina Intensidad de Intensidad de Intensidad de Intensidad de

(ppm) Fluorescencia en Fluorescencia en Fluorescencia en Fluorescencia en
H2O HCl 0.1M CH3COOH NaOH
0.9M 0.1M
0.0 4.94 4.94 4.95 4.94
1.0 5.78 5.07 5.38 4.95
2.0 6.55 4.97 6.25 4.98
3.0 7.31 5.29 6.85 4.98
4.0 7.96 5.16 7.42 5
5.0 8.51 5.48 7.86 5
10.0 10.97 5.83 9.54 5.03
50.0 14.99 6.34 12.14 5.06
pH 6.0 1 3 13
 EFECTO DEL PH EN LA INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA DE
LA RIBOFLAVINA
Agua Acido Clorhidrico Acido Acetico Hidroxido de Sodio
Linear (Agua) Linear (Acido Clorhidrico ) Linear (Acido Acetico) Linear (Hidroxido de Sodio)
10

6
RFU

0
0 1 2 3 4 5 6
[C] PPM

EFECTO DE LA CONCENTRACION EN LA INTENSIDAD DE

FLUORESCENCIA EN LA RIBOLAVINA
Agua Acido Clorhidrico Acido Acetico Hidroxido de Sodio

16

14

12

10
RFU

0
0 10 20 30 40 50 60
[C] PPM
 Discusiones:
Se utilizo la Riboflavina, una vitamina hidrosoluble la cual es precursora de la
Vitamina B12, el primer experimento que se realizo fue una curva tipo con
diferentes disolventes el primero fue con Agua (pH = 6) en este pH neutro la
molécula se encuentra en estado óptimo por lo que al realizarse la curva tipo esta
se apega a la ley general de la espectrometría teniendo una
tendencia lineal y teniendo una mayor intensidad de RFU
dado que la estructura resonante no tiene impedimento para
fluorescer. Al probar con el segundo disolvente que fue acido
acético (Ph = 3) a este pH los iones H empiezan a competir
por los electrones libres del nitrógeno deformando la molécula
de tal forma que la estructura principal sigue intacta, pero la
resonancia se ve afectada por lo que le es más difícil
fluorescer al tener comprometida su estructura resonante,
Molécula de la Riboflavina en pH neutro
es por eso que la tendencia es menos intensa. En el HCl
(pH = 1) Al llegar a este pH la estructura resonante esta totalmente comprometida
al igual que el caso anterior la competencia por los
electrones libres afecta a la estructura resonante
impidiendo totalmente que esta Fluoresca, dando una
señal analítica muy débil. La molécula no es resistente
a Álcali por lo que al agregar como disolvente al NaOH
(pH = 13) La molécula de la vitamina se desnaturaliza
perdiendo la forma principal de su estructura y con ello
su estructura resonante, al medir con el espectrofotómetro esta no fluórese dado
que ya no es la molécula de Riboflavina.
En el segundo experimento se tomo en cuenta las concentraciones de 10 ppm y
50 ppm, en la grafica se pudo observar como en todas las líneas se pierde la
linealidad y con ello el apego a la ley de la espectrometría,
esto se debe a la naturaleza misma del método, ya que
algunos fenómenos pasan a altas concentraciones, uno de
ellos es la auto absorción; al haber tantas moléculas estas
se interfieren entre si al fluorescer, dando lecturas mas
bajas de lo que deberían de ser, algunas de las demás
moléculas pueden perder la energía absorbida en forma
Molécula de la Riboflavina en pH básico de calor ya que al haber muchas moléculas es muy
probable que choquen entre si perdiendo en los choques
su energía que absorbieron por el haz de luz.

Conclusiones:
 La estructura principal de la riboflavina es resistente a los ácidos, pero en
presencia de esto es la resonancia se ve comprometida
  El método de Fluorómetria no es efectivo para altas concentraciones de
analito
 El método de Fluorometria es mas sensible que los métodos
espectrofotométricos, pero no todas las moléculas pueden ser estudiadas
por este método
 La riboflavina es sensible a los solventes álcali
 Para una determinación espectrometría de fluorescencia el pH es un factor
a tener cuidado ya que repercute directamente al estudio
Referencias:
https://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan%201997/temarios/671111d-
archivos/fundamentos/SEMINARIO%203.PDF

https://www.salamarkesa.com/fluorescencia-fosforescencia/

https://periodistas-es.com/fluorescenciafosforescencia-19634

FranK Bradley Amstrong, Thomas Peter Bennett. (1982). Bioquimica. México :

REVERTÉ.

Preguntas Extras:
Menciona 3 diferencias entre Fluorescencia y Fosforescencia:
I. La fluorescencia absorbe la energía de la luz ultravioleta e, inmediatamente,
emite la radiación luminosa. En el caso de la fosforescencia, comienza
igual, absorbiendo la radiación ultravioleta, pero almacena la energía,
retardando la posterior emisión, siendo capaces de emitir esa radiación
luminosa poco a poco durante minutos u horas después de haber cesado la
fuente de radiación excitadora inicial.
I. Estos dos términos se han formado a partir de las propiedades físicas del
fósforo y del flúor, a comparación de la fluorescencia que viene de fluorita,
en la cual se observó primeramente el fenómeno.
II. La Fluorescencia es la propiedad, presente en distintos materiales, de emitir
luz en frío aparentemente de forma espontánea. La fosforescencia es la
propiedad que tienen algunos cuerpos de desprender luz en la oscuridad,
sin que se dé elevación apreciable de temperatura
¿Por qué se deben conocer las longitudes de onda de máxima excitación y de
máxima emisión?
Por qué se deben seleccionar los filtros que se deben de colocar en el Fluorómetro
que deben ser para esas longitudes de onda exactamente
¿Cuáles son las formas coenzimáticas de la Riboflavina y cual es su papel en el
metabolismo celular?
Los derivados de la riboflavina que son biológicamente activos son el flavin mono
nucleótido (FMN) y el flavín adenina dinucleótido (FAD), que son las forma en la
que actúa como coenzima. Ambos pueden interconvertirse reversiblemente en sus
formas oxidadas o reducidas:

FMN + NADH + H+←-→ FMNH2+ NAD+

FAD + glutatión reducido ←-→ FADH2 + glutatión oxidado

Precisamente su actuación como coenzimas asociados a las llamadas
“flavoenzimas” se produce en reacciones redox. Estas coenzimas son utilizadas
por unas 50 enzimas distintas, muchas de ellas implicadas en el metabolismo
energético.