UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUÍA COMPONENTE PRÁCTICO

201504 – MICROBIOLOGÍA

PRESENTADO POR
YENNIFER ROJAS ROJAS
CC 1.123.566.087
YENNY NNI BARRETO
MARIA GRACIELA HERNANDEZ

San Juan de Pasto

Mayo de 2019
 PRACTICA No. 1

NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

¿Qué es bioseguridad?
Es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir el riesgo de transmisión
enfermedades infecciosas y minimizar daños químicos o físicos al manipular plagas de
cuarentena, las especies exóticas invasoras, organismos vivos modificados.
Cuando se trabaja en laboratorio con microorganismos se deben poner en práctica varias
normas de bioseguridad para evitar accidentes y adquirir enfermedades.

¿Cuáles son las normas de bioseguridad?

 Mantener una actitud responsable, no se permite hacer bromas, jugar, correr o gritar.
 No se permite el ingreso de personas ajenas al laboratorio y/o que no porten sus
implementos de bioseguridad adecuados.
 No se permitirá el ingreso de personas bajo efectos de bebidas alcohólicas o
sustancias psicoactivas.
 Para el ingreso a los laboratorios, préstamo de material o equipo se debe presentar el
carnet vigente.
 Todas las superficies de trabajos se limpiaran y desinfectaran diariamente y siempre
que se produzca un derrame.
 Usar bata de manga larga con puños, la cual debe estar completamente cerrada.
 Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos los elementos de
seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
 Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.
 Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas, manillas, reloj o
elementos que puedan entorpecer la manipulación de los materiales o equipos.
 Bajo ninguna circunstancia se permitirá comer, beber o fumar en el laboratorio.
 Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias químicas o
biológicas utilizadas en el desarrollo de las prácticas.
 No trabajar nunca solo en el laboratorio.
 No pipetear sustancias con la boca.
 Cuando en el desarrollo de las prácticas se utilice ácido y agua en diluciones, agregue
el ácido sobre el agua.
 No devolver reactivos a los frascos, así no hayan sido utilizados.
 Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente responsable del
laboratorio.
 Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie corra peligro
de quemarse.
 Los residuos y muestras de procedimientos de microbiología que van a ser
incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivación en autoclave.
 Como norma general no se podrá verter ninguna sustancia peligrosa para el medio
ambiente por el desagüe.
 Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesón, devolver los elementos y
materiales perfectamente limpios, asegúrese de dejar cerrado el gas, agua y lavarse
las manos.
 Para la eliminación de los residuos se deben utilizar los recipientes destinados para
este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable del laboratorio.
 Cualquier accidente por pequeño que sea debe comunicarse al docente responsable
del laboratorio.
 Trabajo con material de vidrio
 No se debe calentar recipientes de vidrio común.
 No calentar directamente al mechero de gas ni colocar recipientes de vidrio vacíos o
húmedos por fuera en la parrilla eléctrica.
 Cuando utilice cubreobjetos, se deben revisar los mesones y evitar que queden sobre
ellos.
 Comprobar la temperatura del material de vidrio.
 No forzar el cierre del material.
 Comprobar cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan estado
sometidos a calor antes de tomarlos directamente con las manos.
 No lavar los elementos de vidrio de laboratorio con medios abrasivos que al rayar la
superficie debilitan el vidrio.
 Al lavar el material utilice guantes y gafas de seguridad y no deje residuos.
 Al lavar la vidriería de laboratorios no se debe someter a cambios brusco de
temperatura.
 PRACTICA No. 2 – PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

¿Qué es un medio e cultivo y de que está compuesto principalmente?

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo
de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos
van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres más
abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y
tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno,
nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del
aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto
de levadura entre otros.

¿Cómo se clasifican según su proporción de agar y según su suministro de

nutrientes?
Los medios de cultivo que se utilizan el laboratorio dependen del microorganismo que se
pretende cultivar y de la finalidad de su cultivo. Puede hacerse una descripción global de los
mismos atendiendo a su composición química, a su estado físico y la finalidad del cultivo.
Cuando no es decisivo conocer la composición exacta del medio de cultivo se utilizan medios
indefinidos, naturales o complejos, como el Agar nutritivo preparados con mezclas de
nutrientes como peptonas, extracto de carne, extracto de levadura, agar-agar, etc.
Según su estado físico . Los medios de cultivo sólidos (como el TSA) contienen el agente
solidificante (generalmente agar al 1,5-2%) y los medios de cultivo líquidos (como el agua
de peptona) no llevan adicionados agentes solidificantes; los medios de
cultivo semisólidos (como el Agar de Hugh-Leiffson contienen el agente solidificante en
menor concentración que los sólidos.
Según su finalidad Cuando se cultivan microorganismos que requieren nutrientes
comunes, se utilizan medios de cultivo ordinarios (como el Agua de peptona): sus nutrientes
permiten el crecimiento de gran número de microorganismos, pero no de los que requieren
nutrientes particulares. Las bacterias mas exigentes nutricionalmente se cultivan en medios
enriquecidos (como Agar chocolate que es Agar nutritivo añadido del 10% de sangre
calentada –hemolizada-): Contienen los nutrientes ausentes de los medios ordinarios, como
por ejemplo factores orgánicos de crecimiento.

¿Cuáles es la utilidad de los medios de cultivos?

Los microorganismos por lo general pueden vivir y multiplicarse sobre substratos nutritivos
preparados en el laboratorio, denominados medios de cultivo. Los Medios de Cultivo son
preparados estériles que contienen sustancias necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
Condiciones de los medios de cultivo
Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los microorganismos (tales
como aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes, vitaminas, minerales).
Tener un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo general las bacterias patógenos
necesitan un pH neutro o ligeramente alcalino (7.0 – 7.4), en cambio las levaduras y hongos
requieren un pH ácido (5.0).
Estar previamente esterilizados o preparados en condiciones asépticas.
Estar protegidos de la contaminación ambiental por tapones de algodón cardé, tapones de
goma, tapas metálicas o roscas.

su utilidad es aislar las bacterias desde una muestra o material patógeno (secreción
purulenta, orina, órgano, fecas, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)
Estudio morfológico de las colonias.
Conservación de cepas identificadas (colección de cepas microbianas o cepario).
Clasificación y tipificación de bacterias por estudio de sus propiedades bioquímicas en
medios diferenciales.
Obtención de toxinas o investigación de sus características.
Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboración de productos biológicos (vacunas,
antígenos, bacterinas, toxoides, etc.).
¿Cuál es la diferencia de un caldo a un medio solidos?
El medio de cultivo es donde se va a sembrar a una serie de microorganismos, que
contendrá los nutrientes y condiciones necesarias para dicho desarrollo.
Por otro lado, el medio de cultivo puede ser sólido o líquido, si es sólido está hecho de agar
(es un como un gel sólido... más cómodo de utilizar) y si es líquido entonces se denomina
caldo.
Esa es la diferencia,

¿En qué momento se esteriliza un medio de cultivo y porque?

Esterilizar la disolución. Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el
crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el medio, el
procedimiento será diferente:

Medios sólidos en placa. Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con papel de
aluminio. Llevar a esterilizar a la autoclave (1210C) durante 15-20 minutos. Una vez estéril
repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo para que solidifique.
 Desarrollo de la práctica

Medio de
cultivo

PA: 39g/L 50 L Agar nutritivo 28g/L

Hongos 150 L Bacterias
levaduras

39 1000 X= (39 gr. x 28 1000 X= (28 gr.x

gr. ml 50ml)/1000= gr. ml 150ml)/1000=
X 50ml 1.95 gr. X 150ml 4.2 gr.
gr. gr.

Preparamos 50 mililitros de medio de cultivo, al leer las instrucciones de preparación en la

etiqueta dice que para preparar 1 litro (1000 ml) de medio se necesitan PA 39 gramos medio
deshidratado.
Para hacer el cálculo se realiza un regla de tres simple:
 39 gr. 1000 ml X= (39 gr. x 50ml)/1000= 1.95 gr.
X gr. 50ml

Esto quiere decir que se necesitan 1,95 gramos de medio deshidratado para preparar 50 ml
de medio de cultivo. Para preparar el medio se hace el siguiente procedimiento:
Pese 1.95 gramos del agar deshidratado. Mida 50 mililitros de agua destilada con una probeta.
De esos 50 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer previamente lavado
con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El erlenmeyer debe ser de
volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue los 1.95 gramos de PA
deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y posteriormente adicione el resto del agua
destilada. Mezcle con el agitador.

Luego Preparamos 150 mililitros de medio de cultivo, al leer las instrucciones de preparación
en la etiqueta dice que para preparar 1 litro (1000 ml) de medio se necesitan AGAR 28
gramos medio deshidratado.
Para hacer el cálculo se realiza un regla de tres simple:

28 gr. 1000 ml X= (28 gr.x 150ml)/1000= 4.2 gr.

X gr. 150ml

Esto quiere decir que se necesitan 4,2 gramos AGAR Nutritivo de medio deshidratado para
preparar 150 ml de medio de cultivo. Para preparar el medio se hace el siguiente
procedimiento:
Pese 4.2 gramos del agar deshidratado. Mida 150 mililitros de agua destilada con una
probeta. De esos 150 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer
previamente lavado con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El
erlenmeyer debe ser de volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue los 4.2
gramos de agar deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y posteriormente adicione
el resto del agua destilada. Mezcle con el agitador.
A continuación llevamos los dos medios a la preparación a disolver en la plancha de
calentamiento, agite constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para
lograr la disolución total del Agar.
Tape la boca del erlenmeyer papel aluminio. Si las normas de preparación no indican otra
cosa, la esterilización se lleva a cabo en autoclave, a 121 grados centígrados, durante 15
minutos.
Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45°C.
Proceda a servir el medio en presencia del mechero y en cajas de Petri, previamente
esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan “abanicando”
brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Deje enfriar hasta
que solidifique.
Los medios de cultivo líquidos se preparan de la misma forma y se sirven en tubos con tapa
rosca. Posteriormente lleve los tubos con caldo a esterilizar en autoclave. No olvide que
cuando se va a esterilizar medios directamente en los tubos estos no deben tener la tapa
ajustada. Finalmente tenga en cuenta que para preparar Agar inclinado en tubo, solo cambia
el momento en que se pone a solidificar ya que los tubos deben colocarse sobre una pipeta
para lograr que se forme el pico de agar inclinado.
Resultados
Cultivo de PA dos Cajas de Petri
Cultivo de AGAR 5 Cajas de Petri
 PRACTICA No. 3 – MICROORGANISMOS EN EL AMBIENTE

¿Consulte los medios de los cultivos empleados?

AGAR: Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es
una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa.1 Aunque
ambas clases de polisacáridos comparten la misma estructura básica, estando formadas por
unidades alternadas de D-galactosa y de 3,6-anhidro-L-galactopiranosa, unidas por enlaces
α-(1-3) y β-(1-4), la agaropectina está modificada con grupos ácidos, tales
como sulfato y piruvato.2 Los polisacáridos de agar forman parte de la estructura de la
pared celular de las algas. Disuelto en agua caliente y enfriado se vuelve gelatinoso. Su uso
principal es como soporte de cultivo en microbiología, para el crecimiento
de bacterias, hongos y virus bacteriófagos

PA: El agar de papa y dextrosa (APD1) –en inglés Potato Dextrose Agar (PDA)– y
el caldo de patata y dextrosa son medios comunes de cultivo microbiológico que se
preparan a partir de infusión de patata y dextrosa. El agar de patata y dextrosa es el medio
más utilizado para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o
materia vegetal muerta en descomposición.

¿Que es un medio de cultivo selectivo y no selectivo?

Un medio selectivo es un medio de cultivo en el que sólo puede crecer un tipo
de microorganismo (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
Un ejemplo de medio selectivo sería usar un medio rico en un antibiótico, como
la ampicilina, para permitir únicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a éste.
no selectivo que consta de un gel o una solución que contiene los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo
que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.
¿En siertos procesos se requiere de areas blancas que significa este termino?

Es referencia a la rama de la biotecnología dedicada a optimizar los procesos industriales,

buscando reemplazar a las tecnologías contaminantes por otras más limpias o amigables con
el ambiente. Básicamente, emplea organismos vivos y enzimas para obtener productos más
fáciles de degradar, y que requieran menos energía y generen menos desechos durante su
producción.
El uso de enzimas o biocatalizadores es uno de los avances más significativos en el área de
la biotecnología blanca. Las ventajas de su uso residen en la alta selectividad y eficiencia de
las enzimas en comparación con los procesos químicos. Mientras los procesos químicos
convencionales requieren alta presión y alta temperatura, los microorganismos y sus enzimas
trabajan a presión y temperaturas normales. Además, las enzimas son biodegradables y
muchas de ellas pueden funcionar en solventes orgánicos, alta concentración de sales y otras
condiciones extremas. Las enzimas hoy se aplican a prácticamente todas las industrias,
incluyendo la farmacéutica, alimenticia, química, textil, de detergentes, del papel,

Las bacterias se siembran 35 a 37 °C 24 horas

Hongo se siembran 20 22 °C de 5 a 7 dias
 Descripción de la práctica

Marcar cada caja de Petri que se va a

utilizar con los siguientes datos: Introduzc
Deje una caja Nombre, Sitio del cual se tomó la a un
de Petri abierta muestra, Fecha de la práctica copito en
durante 30
su oído y
minutos en el
siembre
sitio del
Tosa o en una
laboratorio Pase sus Toque
estornu caja de
sera al acuario dedos por el con sus
de Petri.
cabello y dedos la
rasque superfici sobre
suavemente e de una
para que el una caja caja de
Petri Introduz
producto de Petri.
Pase un copito ca un
que salga
sobre la copito en
caiga sobre
superficie del su oído y
la caja de
mesón en el siembre
Petri.
cual está en una
trabajando y caja de
siembre en una Todas las cajas Petri
caja de Petri. llévelas a incubar a
37 Grados. Y
quedaron
pendientes para la
proxima practica
REFERENCIAS
 REFERENCIAS

 APHA, AWWA. WPCF. 1989. Standar Methods for the examination of water and
wasterwater.

 GARCES, Emira. 2003. Morfología y Clasificación de los hongos. Notas de clase

Universidad Nacional de Colombia. Editorial UNIBIBLIOS.

 GRANT Y LONG. 1999. Microbiología Ambiental. Editorial Acriba. España.

 MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. Y PARKER,J. 2003. Brock: Biología de los

Microorganismos, Prentice Hall.

 MONTOYA, Olga Ines. 2004. Manual de Microbiología. Universidad Nacional de

Colombia Sede Medellín.

 SALDARRIAGA, Yamilé y PINEDA, Fabio. 2001. Manual de Micología Aplicada.

Editorial Universidad de Antioquia.

 SANCHES, Marina, MARMOLEJO, Fernando y BRAVO, Nelson. 2000. Microbiología

Aspectos Fundamentales. Universidad Nacional de Colombia, sede Palmira. Feriva S.A.

 VALENCIA. Hernando. 2004. Manual de Prácticas de microbiología básica. Notas de

clase Universidad Nacional de Colombia. Editorial UNIBIBLIOS.