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Amanda Nayê Guimarães Tavares (1); Ubiana Cássia Silva (2), Ubiraci Gomes de Paula Lana (3,4);
Eliane Aparecida Gomes (5); Christiane Abreu de Oliveira Paiva (5); Vera Lucia dos Santos (6)
(1) Estudiante, miembro de FAPEMIG, Facultad de Ciencias de la Vida; (2) Estudiante de Doctorado
Centro Universitario de Sete Lagoas - UNIFEMM; (5) Investigador, maíz Embrapa y sorgo; (6)
Profesor, UFMG.
RESUMEN El maíz (Zea mays L.) es uno de los cultivos más importantes en la agricultura
mundial, siendo Brasil el tercer mayor productor. Sin embargo, la productividad de este
cultivo en Brasil todavía se considera baja. Lograr mayores rendimientos requiere el uso de
tecnologías sostenibles que interfieran con los factores de producción, como el uso de
inoculantes microbianos capaces de poner el fósforo (P) a disposición de la planta. En este
contexto, los estudios que apuntan a conocer la diversidad microbiana asociada con el maíz
cultivado bajo diferentes tensiones pueden promover el desarrollo de inoculantes
microbianos eficientes para promover el crecimiento de las plantas. Este estudio tuvo como
objetivo estudiar el perfil de la comunidad bacteriana y los hongos micorrícicos arbusculares
(AMF) asociados con la rizosfera y las partes internas de la raíz del maíz, cultivadas con
diferentes fuentes de fosfato, utilizando la técnica t-RFLP. El ADN extraído del suelo
rizosférico y las bacterias endofíticas de la raíz se amplificó con cebadores para los genes
16S rRNA y 23S rRNA de bacterias y AMF, respectivamente. Los resultados mostraron que
tanto las comunidades bacterianas como las AMF fueron alteradas de acuerdo con la fuente
de P agregada. La comunidad bacteriana también difería con el ambiente colonizado, el
suelo rizosférico y la región de la raíz interna (comunidad endofítica). Se concluye que
diferentes tipos de fertilización con fosfato modulan la composición de la comunidad
microbiana asociada al maíz, lo que debería ser un factor importante a considerar cuando el
objetivo es acceder a estos microorganismos a partir de técnicas de aislamiento y su uso
como bioinoculantes.
Términos de índice: tRFLP, bacterias, hongos, suelo. INTRODUCCION El maíz (Zea mays
L.) es uno de los cultivos más importantes en la agricultura mundial, siendo el segundo cereal
más utilizado para el consumo humano (Monje, 2011). El maíz (Zea mays L.) es uno de los
cultivos más importantes en la agricultura mundial, siendo el segundo cereal más utilizado
para consumo humano (Monje, 2011). El maíz (Zea mays L.) es uno de los cultivos más
importantes en la agricultura mundial, siendo el segundo cereal más utilizado para el
consumo humano (Monje, 2011). Para el cultivo a gran escala de este producto es necesario
agregar fertilizantes como nitrógeno (N), fósforo (P) y potasio (K). P es el tercer componente
que limita el crecimiento de las plantas y actúa en una serie de procesos, incluida la
fotosíntesis, la respiración, la señalización celular y la síntesis de ácido nucleico (Vance et
al., 2003). Para el maíz, el P es extremadamente necesario durante la floración, completando
su requerimiento máximo cuando el grano comienza a llenarse (Vasconcellos, 2000). En
este contexto, el efecto de la interacción planta-microorganismo puede ser beneficioso para
la planta huésped al ayudar en su desarrollo (Mendes et al., 2013). Los microorganismos
pueden interactuar de diferentes maneras con las plantas, funcionando colectivamente como
un microbioma. Pueden colonizar los tejidos internos de las plantas, y se denominan
microorganismos endofíticos, superficies foliares (epífitas) y compartimentos radiculares por
separado: rizosfera, rizoplano y endosfera (Ryan et al., 2008; Philippot et al., 2013). El
conocimiento y la manipulación de los microbiomas de las plantas pueden ser un recurso
biotecnológico alineado con los intereses de disminuir los costos de producción y aumentar
la sostenibilidad en la agricultura. Una tecnología prometedora es el uso de inoculantes
microbianos capaces de promover el crecimiento de las plantas o actuar como agentes
biológicos de control de plagas y enfermedades (Mendes et al., 2013). El objetivo de este
trabajo fue evaluar el perfil de la comunidad bacteriana y los hongos micorrícicos
arbusculares asociados con la rizosfera y las partes internas de la raíz del maíz, cultivadas
con diferentes fuentes de fosfato, utilizando la técnica t-RFLP.
Extracción de ADN Para la extracción de ADN genómico del suelo y las membranas que
contienen células bacterianas, se usó el kit de ADN Power Max Soil (MoBIO Laboratories,
Inc.), siguiendo las instrucciones del fabricante. La calidad del ADN se evaluó mediante
(NanoDrop Technologies, Wilmington, DE). T-RFLP Para el análisis bacteriano, la región del
gen 16S rDNA se amplificó con los cebadores 8F (6-FAM) y 1492R (LaMontagne et al.,
de tampón de reacción 10X, 3 mmol / L de MgCl2, 0.125 mmol / L de dNTP, 2.5 U Taq ADN
polimerasa (Invitrogen, Paisley, Reino Unido) a 50 µL. Para la amplificación del gen 23S
rDNA de hongos micorrícicos arbusculares (AMF), se usó PCR anidada de la reacción con
los cebadores LR1 y FLR2 (Trouvelot et al., 1999). La reacción inicial consistió en 50 ng de
ADN, 0.2 mmol / L cebador, 5 μL 10X buffer de reacción, 2.5 mM MgCl2, 0.125 mmol / L
dNTPs, 2.5 U Taq DNA polimerasa ( Invitrogen) a 50 μL. Para la segunda reacción de PCR,
se usaron 2.5 μL del primer producto de reacción y los cebadores FLR3 (6-FAM) y FLR4
(NED) (Gollotte, 2004). Las condiciones de PCR fueron las mismas que las utilizadas en la
primera reacción. Los fragmentos amplificados se digirieron con enzimas de restricción AluI
(16S rDNA) y TaqI (23S rDNA). Para la digestión, se usaron 10 μL de producto de PCR, 2
μL de tampón 10X y 1 U de cada enzima en 20 μL. Para evaluar los fragmentos de ADN
Biosystems, Foster City, CA, EE. UU.) Y 0.2 μL del estándar ROX 500 (Applied Biosystems).
REX (Culman et al., 2009), que permite el filtrado de ruido y la alineación automática del
tamaño de los fragmentos. Luego, los datos se exportaron en una hoja de cálculo binaria y
no métrico (NMDS) desde un Matriz de similitud de Jaccard utilizando el programa pasado versión
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De acuerdo con los resultados obtenidos, podemos observar la separación de la comunidad bacteriana
según los ambientes, el suelo rizosférico y el interior de la raíz (Figura 1). Los microorganismos pueden
interactuar de diferentes maneras con las plantas y colonizar tejidos internos y externos, así como la
región de la rizosfera. Sin embargo, cada entorno tiene características físicas y químicas diferentes, lo
se caracteriza por recibir metabolitos producidos por la planta, como mucílagos y exudados liberados
por las raíces que estimulan el crecimiento y la diversidad de la microbiota (Bais et al., 2011). La
rizosfera está directamente influenciada por los componentes del suelo y las tensiones abióticas, como
ya está en un entorno protegido, pero expuesta a otras tensiones bióticas, como las presiones de
los tejidos de la planta sin ser reconocidos como patógenos ( Kogel et al., 2006).
Figura 1. Análisis de escalamiento multidimensional no métrico (MDS) de la diversidad genética,
Además de la diferencia encontrada entre la rizosfera y los ambientes interiores de la planta, también
agregada al suelo, lo que indica que, independientemente del ambiente evaluado, el tipo de fertilización
con fosfato afectó la composición. comunidad bacteriana (Figuras 2 y 3). Para los hongos micorrícicos
arbusculares también se observó separación de las muestras según el tipo de fertilización con fosfato
(Figura 4).
función de las fuentes de P: No se agrega P (rojo), fosfato de Araxá (azul) y P soluble (negro).
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