UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

CENTRO DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA 2

MICROSCOPÍA

INTRODUCCIÓN

El conocimiento de la estructura celular experimento una verdadera revolución en la segunda

mitad del siglo veinte, gracias al desarrollo de una técnica innovadora: la microscopia. Antes
de la Segunda Guerra mundial, los adelantos de la física ya habían sentado bases conceptuales
y técnicas de microscopio, con lo que se pudieron superar límites del poder de resolución. Sin
embargo, la aplicación de la nueva microscopía de la investigación biológica tuvo que esperar
hasta que se encontraran las técnicas adecuadas para la conservación de las células.
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RESUMEN

Identificación de las partes del Microscopio compuesto y sus

funciones, con ello se adquirió habilidades en la utilización
eficiente del mismo, para poder realizar la observación en el
microscopio compuesto con preparaciones fijas y fresca.
Después de la identificación de las partes del Microscopio, se
llevó acabo la observación de distintas muestras, con cada uno
de los objetivos, mirando así cada una de sus estructuras y los
cambios que tenían al incrementar el poder de resolución.

El método de microscopia, es una técnica de laboratorio que

ayuda a visualizar de mejor manera cuerpos extremadamente
pequeños que no están al alcance de la vista humana.

PALABRAS CLAVE:

MICROSCOPÍA/MICROSCOPIO/PLACAS FIJAS/PLACAS
SECAS/ PARTES_DEL_MICROSCOPIO/
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1. OBJETIVOS
1.1.Conocer e identificar las partes de un Microscopio compuesto y sus funciones.
1.2.Adquirir habilidades en la utilización eficiente del Microscopio.
1.3.Observar en el microscopio compuesto preparaciones fijas y preparaciones frescas.

2. TEORÍA
2.1.Tipos de microscopio.
 Microscopio de luz transmitida. - sirven para contemplar preparados transparentes y
muy finos
 Microscopio de luz reflejada. - se ilumina el preparado desde la parte superior a través
del objetivo o lateralmente
 Microscopio Estereoscópico. - El preparado se suele iluminar desde la parte superior
o inferior.
 Microscopio de fluorescencia. - se suele excitar desde un colorante fluorescente en la
muestra mediante una luz con una determinada longitud de onda desde el exterior
(Herreo, 1999).
2.2.Microscopio óptico
2.2.1. Sistema óptico.
 Diafragma. - es el que regula la cantidad de luz que penetra en la muestra, si la luz
que llega es excesiva al cerrar el diafragma el contraste aumenta.
 Ocular. – es el lente que está más próxima al ojo en la parte superior del tubo de
microscopio. Esta grabado con el número (5x, 10x, 40x,..) que corresponde al
número de veces que aumenta la imagen.
 Objetivo. – es el conjunto de lentes que está más próximo a la muestra, suele estar
en el sistema mecánico de revólver y acompañado a los objetivos.
2.2.2. Sistema mecánico.
 Es el conjunto de componentes que soporta la muestra, las lentes y todos los
sistemas de ajuste del microscopio para la observación adecuada. Se compone de
tubo, brazo, tornillos de enfoque macrométrico, micrométrico y pie (Tomas,2016).
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2.3.Poder de resolución.
El poder de resolución de un sistema óptico depende de la longitud de onda de la luz
empleada, del índice de refracción del medio por el que pasa la luz y del Angulo de
desviación que esta sufre y por lo tanto de la apertura numérica (Instruments, 2010)

2.4.Preparaciones frescas y fijas.

Las preparaciones fijas son aquellas que se han sometido a un proceso largo de
preparación, el que permite que se mantengan en buenas condiciones para su observación
por periodos prolongados de tiempo. La preparación de estas muestras incluye etapas de
fijación del material, deshidratación, inclusión en parafina, corte de la muestra en capas
muy finas con un micrótomo, colocación de estas capas que contienen la muestra en un
portaobjetos.
La preparación fresca consiste en colocar cualquier tipo de gota liquida acorde a la especie
a investigar entre el porta y cubre objetos (Tomas,2016).
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipo.
3.1.1. Microscopio óptico.
3.1.2. Preparaciones fijas.
3.1.3. Portaobjetos y cubreobjetos.
3.1.4. Pipeta.
3.1.5. Lanceta
3.1.6. Toallas de papel absorbente
3.1.7. Picetas
3.1.8. Palillo de dientes
3.1.9. Papel milimetrado
3.1.10. Hoja de matacallo

3.2. Sustancias y reactivos

3.2.1. Aceite de inmersión.
3.2.2. Sangre
3.2.3. Azul de metileno
3.2.4. Agua estancada
3.2.5. Preparaciones fijas
3.2.6. Alcohol
3.2.7. Agua. H2O ( L)
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3.3. Procedimiento
3.3.1. Observación de papel milimetrado
3.3.1.1.Coloque una gota de agua en el portaobjetos.
3.3.1.2.Coloque un trozo de papel milimetrado y cubra la preparación.
3.3.1.3.Situé la placa sobre la platina sujetándola con las pinzas.
3.3.1.4.Precise la observación ajustando tanto el ajustador macrométrico y micrométrico
3.3.1.5.Observe con los lentes de 4x y 10x. Realice el cálculo del poder de resolución con el
lente de mayor aumento.
3.3.1.6.Grafique la observación.

3.3.2. Observación placa fija:

3.3.2.1.Enfocar las preparaciones fijas con los lentes 10x y 40x y observar.
3.3.2.2.Graficar lo observado.

3.3.3. Preparaciones frescas.

Células de la mejilla
3.3.3.1.Colocar una gota de agua en el portaobjetos.
3.3.3.2.Coger un palillo de dientes y raspar la parte interna de la mejilla para recoger células.
3.3.3.3.A continuación, mezclar el palillo con el agua del portaobjetos durante unos
segundos para depositar las células.
3.3.3.4.Colocar el cubreobjetos sobre la gota de agua del portaobjetos intentado evitar la
formación de burbujas.
3.3.3.5.Depositar una gota de azul de metileno sobre uno de los bordes del cubreobjetos y
espera unos minutos hasta que el tinte haya empapado parte de la muestra.
3.3.3.6.Utilizar papel secante para eliminar el exceso de tinte y agua en las partes laterales
del cubreobjetos.
3.3.3.7.Coloca el portaobjetos en la platina y empieza con su observación utilizando el
objetivo de mínimo aumento.

Sangre.
3.3.3.8.Desinfectar la zona, con mucho cuidado pinche una yema del dedo y con ayuda de la
pipeta tome una muestra de sangre.
3.3.3.9.Coloque inmediatamente en el portaobjetos y coloque el cubreobjetos sin formar
burbujas.
3.3.3.10. Observe con los diferentes lentes de aumento, analice las diferencias y
grafique.
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3.3.3.11. Realizar el mismo procedimiento de la sangre para el agua estancada y la hoja

de matacallo.

4. DATOS
4.1.Datos Experimentales

Tabla 1. Datos Experimentales

Lente AN λ
4X 0,1 550
10 X 0,25 550
40 X 0,65 550

5. CÁLCULOS.
𝟎,𝟔∗𝝀
𝑷𝑹 = Ec. 5-1
𝑨𝑵

𝟎, 𝟔 = 𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑛𝑢𝑚é𝑟𝑖𝑐𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑙𝑜𝑛𝑔𝑢𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒𝑙 𝑡𝑢𝑏𝑜 ó𝑝𝑡𝑖𝑐𝑜

𝝀 = 𝐿𝑜𝑛𝑔𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒 𝑜𝑛𝑑𝑎
𝑨𝑵 = 𝐴𝑝𝑒𝑟𝑡𝑢𝑟𝑎 𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑖𝑐𝑎.
𝟎, 𝟔 ∗ 𝟓𝟓𝟎
𝑷𝑹 =
𝟎, 𝟏
𝑷𝑹 = 𝟑𝟑𝟎𝟎
6. RESULTADOS
Tabla 2. Poder de resolución.
Lente PR
4X 3300
10 X 1320
40 X 507,69

Tabla 3. Observaciones.
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Muestra Observación

4x Un conjunto de puntos verdes claro.

Una especie de algas en forma de

Agua estancada 10x puntos verde claro, reunidos en un solo
punto.

Una especie de algas divididas en

40x grupos con un centro transparente en
cada una de ellas

4x Glóbulos rojos en forma de puntos.

Glóbulos rojos en forma de puntos y

Sangre 10x
manchas.

40x Glóbulos rojos en forma de mancha.

Conjunto de celulas de distintos

10x
colores, unas amarillas y otras verdes

Matacallo

Se distinguen las celdas que tiene

40x

Letra “e” al revés, se diferencia su

4x
forma
Letra
Letra “e” al revés, más cerca, se
distingue su forma, pero se ve más
10x
como una mancha.
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7. DISCUSIÓN.
El método utilizado en la presente práctica fue cualitativo, y se lo determinó como
adecuado ya que se obtuvo resultados muy parecidos a los teóricos. Se realizó la
observación de cuatro placas fijas y frescas, la primera de ellas fue la sangre, en la cual se
logró identificar claramente los glóbulos rojos desde el lente objetivo 4x, en la segunda
placa observamos agua estancada, en ella se logró divisar un tipo de algas en color verde
claro, en la tercera experimentación que correspondía a la planta de matacallo, se tubo de
colocar una tela fina de la planta, en esta se logró distinguir como estaba conformada por
células en forma de celdas y en la cuarta experimentación clocó la letra “e” recortada de
una revista, esta letra se encontraba al revés al momento de observarla por medio del
microscopio. En la práctica se cometió un error aleatorio, al momento de colocar el cubre
objetos, ya que se dejó con burbujas de aire la muestra, esto no afecto a los resultados, pero
se tuvo que observar con más precisión al momento de las experimentaciones. En las
siguientes prácticas es recomendable realizarlas con calma, ya que de esa manera se puede
eliminar errores, como las burbujas en la muestra.
8. CONCLUSIONES.
8.1. La muestra de la hoja de matacallo debe ser fina, para que de esta manera la luz del
microscopio pueda atravesarla, y así se lograr obtener una mejor observación de la
experimentación.
8.2.En la experimentación de la sangre, se debe tener mucho cuidado de prevenir la existencia
de burbujas en la muestra para que así no se dificulte ver los glóbulos rojos.
8.3.Se debe limpiar los residuos en el portaobjetos con cautela para que de esta manera no se
contamine la muestra de elementos ajenos a los que queremos buscar.
8.4.Es necesario conocer qué tipo de muestra se va a utilizar antes de colocar cualquier medio
de montaje, ya que no todos los organismos funcionan de la misma manera.
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9. APLICACIONES.
En la Ciencia

La principal aplicación de microscopios es la investigación científica. Nos permite ver

cosas que nunca antes podríamos ver. Los utilizamos en biología para estudiar células
(microscopios ópticos), desarrollar nanotecnología como nanotubos de carbono (sondas
de electrones y de exploración) para comprender cómo funcionan las enfermedades.
Tenemos una comprensión mucho mejor del cuerpo humano gracias a los microscopios,
y eso ha llevado a tratamientos para todo tipo de enfermedades. De hecho, los
microscopios incluso se usan directamente en medicina para analizar muestras biológicas
de pacientes.
Los microscopios también se pueden usar fuera de la búsqueda del conocimiento en sí
mismo. Se pueden usar para observar los datos recopilados de una escena de un crimen.
Puedes mirar las balas para compararlas con las balas que se encuentran dentro de un arma
en particular. O puedes hacer un análisis de ADN para descubrir quién estuvo presente en
la escena de un crimen.

10. CUESTIONARIO.
1. Iluminación por el método de Köhler
El profesor August Köhler propuso un método de iluminación para optimizar la
observación microscópica y la microfotografía, que permite aprovechar al máximo las
capacidades de las lentes (objetivos) iluminando la muestra en estudio con un campo
de luz uniforme cuyo diámetro sea igual al del área de captura del objetivo. Los
microscopios modernos están diseñados para utilizar la iluminación Köhler(Pietrasana
& Sigaut, 2015).

2. Cuando utilizó el microscopio, ¿las imágenes se observaron derechas o invertidas?

Se vio al revés porque cada lente hace converger los rayos luminosos que le atraviesan,
y el objetivo forma una imagen real, aumentada e invertida.
3. Cuando movió el tornillo hacia la derecha, izquierda, abajo y arriba, ¿hacia dónde se
desplazó la imagen?
El movimiento de la imagen con el Tornillo o también conocido como Micrómetro,
fue mínimo hacia arriba y abajo, ya que este es el encargado de medir objetos con alta
precisión, y por ende no se mueve con brusquedad.

4. ¿Por qué razón las muestras que se observan en el microscopio compuesto deben ser
delgadas y utilizar un medio de montaje?
Se debe utilizar las muestras delgadas ya que, al momento de colocar la muestra en el
portaobjetos y este en la platina, la luz que llega a la muestra debe atravesarla par que
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así llegue al lente objetivo. El medio de montaje depende de la especie de muestra que
estemos analizando, y este nos ayuda a observar de mejor manera lo que nosotros
coloquemos en el portaobjetos.
5. Explique las razones porque NO deben tocarse los lentes de un microscopio con los
dedos. Investigue sobre las buenas prácticas en el uso de microscopio.
No debe tocarse porque al momento de tocar el lente, este se puede ensuciar y con ello
alterar los resultados de la observación.
Una excelente practica puede ser la observación de tejido epitelial en el microscopio,
de las plaquetas glóbulos rojos y blancos.
6. Investigue sobre los diferentes tipos de microscopios y su utilización.
Microscopio confocal. - se escanea secciones ópticas muy finas y se compone una
imagen tridimensional.
Microscopio STED (Stimulates Emmision Depletion). - es un método más reciente
aún de la microscopía de fluorescencia, con la que se puede eludir el límite de
resolución definido por Abbe(Instruments, 2010)

11. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Herreo, J. (1999). Biología Celular , Histología. Fundamentos y Manejo Del Microscopio,
1–16.
Instruments, P. C. E. (2010). Tipos de microscopios. Tipos de Microscopios, 3–6.
Pietrasana, L., & Sigaut, L. (2015). Guía 6 : Microscopía óptica y de fluorescencia .
Objetivos Introducción. 1–8.

12. ANEXOS
- Diagrama del equipo. (Microscopios con sus partes) (ANEXO 1)
- Observaciones realizadas con el microscopio. (Hoja de Laboratorio)