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RESUMEN
El efecto antrópico, la pérdida de biodiversidad, el desplazamiento de especies, la introducción
de especies exóticas y el incremento demográfico, han promovido aumentar el rendimiento de
los cultivos, la recuperación de sitios impactados, la reintroducción de especies y la búsqueda de
alternativas para comprender, y evaluar la reproducción de las especies ícticas nativas. En ello,
el conocimiento y el empleo de los gametos de hembras y machos de los peces, para la produc-
ción masiva de larvas hacen necesario el uso de metodologías que permitan seleccionar todos
aquellos reproductores que muestren cualidades genéticas y fisiológicas que den pauta a mejorar
e incrementar la cantidad y la calidad de las larvas que serán empleadas para cultivo masivo,
repoblación, producción de reproductores y para su empleo en experimentos de ciencia básica
y aplicada. En esta revisión bibliográfica, se hace mención de las particularidades de las células
espermáticas de los peces y de las alternativas metodológicas para evaluar su calidad, mediante
la comprensión de la fisiología de la activación (porcentajes y tiempo de motilidad, tipo de mo-
vimiento y número de espermatozoides) y hasta el análisis estructural en el nivel extracelular e
intracelular (morfología espermática, daño a la membrana, ensayo cometa, células vivas/muer-
tas/apoptóticas, mismas que están en función de los objetivos de los programas de reproducción
o experimentación). Con el desarrollo de equipos de citometría automática y de genómica uni-
celular, se ha logrado mayor comprensión del funcionamiento de las células espermáticas, de la
expresión genética ligada a las cualidades celulares y del significado biológico.
ABSTRACT
Aspects such as anthropic effects, loss of biodiversity, species displacement, introduction of exotic
species, and demographic growth have caused an increase in crop yield, recovery of impacted sites,
1 División Académica de Ciencias Biológicas, Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT), Villahermosa, C. P.
86150, Tabasco, México. leninariasrodriguez@hotmail.com*
2 Universidade de São Paulo, São Paulo, Brasil.
reintroduction of species and the search for alternatives to understand and evaluate reproduction
of native fish species. In such context, knowing and using both female and male gametes for
massive larvae production creates the need to use methodologies that would allow sorting the
brood stock with genetic and physiological traits that would improve the quantity and quality of
larvae to be used for massive culture, restocking, breeding production, and experiments on basic
and applied sciences. This bibliographic review mentions the particularities of fish sperm cells
and methodological alternatives to assess their quality, by understanding activation physiology
(motility percentages and time of activity, type of movement and sperm number), including the
structural analysis at extracellular and intracellular levels (spermatic morphology, damage to
the membrane, comet assay, live/dead/apoptotic cells, which depend on the main objectives of
reproduction or experimental programs). The development of equipment to automated cytometry
and unicellular genomics has allowed for a better understanding of the functioning of spermatic
cells, genetic expression linked to cellular qualities and their biological implication.
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Artículo de Revisión: La calidad espermática en peces y los métodos de evaluación
et al. 2004; Mylonas et al. 2017; Woot- ción está regulada por la vía cerebral,
ton & Smith, 2014a, b). En el caso de la mediante la liberación de hormonas
fertilización interna, los espermatozoi- folículo estimulantes y luteinizantes,
des son depositados en el receptáculo las cuales son clave para el control
espermático de la hembra, mediante un reproductivo endocrino (Wootton &
órgano accesorio denominado gonopo- Smith, 2014b; Mylonas et al. 2017;
dio que está presente en ciertas especies Zohar & Mylonas, 2001).
de la familia poeciliidae, o mixopteri- El ciclo reproductivo típico de
gios en elasmobranquios, lo que garan- un pez, se divide en dos fases princi-
tiza la fecundación cuando los óvulos pales: la proliferación, el crecimiento
de la hembra están maduros (Herráez et y la diferenciación de los gametos,
al. 2017; Rurangwa et al. 2004; Woot- constituyen la primera fase (vitelogé-
ton & Smith, 2014a, b). Generalmente, nesis y espermatogénesis); mientras
la fertilización interna es exclusiva de que la maduración de los óvulos, los
cuidado parental vivíparo, donde el em- espermatozoides y la preparación para
brión se desarrolla dentro de la madre y la liberación, constituyen la segunda
las larvas son liberadas como juveniles (espermiación y ovulación) (Patzner,
de nado libre, lo que no requiere de un 2008; Schulz et al. 2010, Zohar &
gran número de gametos fertilizados, Mylonas, 2001). El control de la re-
pues la oportunidad de fertilización producción es un tópico importante
y de sobrevivencia de los embrio- en acuicultura y es uno de los factores
nes de pasar a estado juvenil es ase- limitantes del éxito reproductivo, en
gurada (Herráez et al. 2017; Patzner, ello la calidad de los gametos es cru-
2008; Rurangwa et al. 2004; Wootton cial (Zohar & Mylonas, 2001), pues de
& Smith, 2014a, b). En la mayoría de esta dependen también los porcentajes
peces teleósteos, como son las carpas, de fertilización.
las mojarras, los robalos, los bagres, Los métodos para el control y
etc., la fertilización es externa y en el manejo de la reproducción en pe-
otras especies interna, como es el caso ces son muy diversos, estos incluyen,
del pez cebra Oryzias setnai, donde los tratamiento hormonal, control de los
espermatozoides se mantienen viables parámetros físicos, almacenamiento
por largo tiempo en los espermatofitos de gametos, reversión sexual, manipu-
que se atan a la piel que reviste el go- lación del tiempo de reproducción, es-
noporo de la hembra durante la copula, terilización, y separación de reproduc-
permitiendo así la fertilización sin co- tores, entre otros (Mylonas et al. 2017;
pulas posteriores (Wootton & Smith, Zohar & Mylonas, 2001).
2014a). En ambos casos, la reproduc-
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Salomón Páramo-Delgadillo, Gabriel Márquez-Couturier, George S. Yasui y
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y está dividido en tres diferentes fases: quieren transitar por varios cambios
(I) mitótica con espermatogonias; (II) fisiológicos durante la maduración,
meiótica con espermatocitos primarios con el fin de responder al choque os-
y secundarios; y (III) espermiogéne- mótico que activará la capacidad fer-
sis con espermátidas que darán origen tilizante (Alavi et al. 2009; Dumorné
a espermatozoides haploides (Billard, et al. 2017). Durante la espermiación,
1986; Herráez et al. 2017; Schulz et los espermatozoides se dirigen de los
al. 2010) bajo desarrollo normal, ya testículos hacia la papila genital a tra-
que en algunas ocasiones hay irregu- vés del ducto espermático, cuyo fluido
laridades de interés evolutivo, genéti- seminal es de pH básico, rico en di-
co y biológico, que pueden dar origen versas sales como sodio, potasio, cal-
a endomitosis con presencia de esper- cio, magnesio, entre otras (Alavi et al.
matozoides con niveles diferentes de 2009; Dumorné et al. 2017; Mylonas
contenido genético como son los di- et al. 2017) que condicionan para cada
ploides, tetraploides, etc. (Arias-Ro- especie por osmolaridad del líquido
driguez et al. 2010; López-Hernán- seminal única (Dumorné et al. 2017),
dez, 2017, Herráez et al. 2017; Zohar siendo ello un atributo esencial para la
& Mylonas, 2001). activación de los espermatozoides que
Las espermatogonias son células depende del hábitat particular de cada
que se clasifican en primarias y secun- especie de pez.
darias, la primera de ellas tiene la ca- Generalidades de la morfología
pacidad de proliferar y autorenovarse espermática en peces
por mitosis, dando nuevas espermato- A través de los procesos de se-
gonias primarias o bien, diferenciarse lección natural, los arreglos microes-
a las secundarias, que desarrollan a es- tructurales de las células espermáticas
permatocitos. Los cuales se dividen en han optimizado las estrategias de ferti-
dos fases, primarios y secundarios; que lización de acuerdo con las particula-
se transformaran en espermátidas que ridades reproductivas de cada especie
sobrellevarán cambios estructurales (Birkhead et al. 2009; Herráez et al.
y funcionales como son la formación 2017; Rurangwa et al. 2004). Nume-
del flagelo, la pieza media y la cabeza, rosos trabajos, enfocados al conoci-
todo ello dará origen a espermatozoi- miento de la morfología de las células
des maduros, que tendrán la capacidad espermáticas de peces, han mostrado
de fertilizar un óvulo (Dzyuba & Cos- la diversidad de formas y la compo-
son, 2014; Herráez et al. 2017). sición estructural y ultraestructural de
Los espermatozoides haploides los espermatozoides (Herráez et al.
(1n), contenidos en los testículos, re- 2017; Rurangwa et al. 2004). Estos
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Salomón Páramo-Delgadillo, Gabriel Márquez-Couturier, George S. Yasui y
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han sido útiles, para comprender algu- confiere forma de cinta o de remo (ale-
nos aspectos taxonómicos y relaciones tas flagelares) (Jamieson, 1991), que de
evolutivas de cada familia (Islam & acuerdo a Tabares et al. (2005), posi-
Akhter, 2011). blemente es una ventaja evolutiva para
En casi todas las especies, la ana- favorecer el movimiento del esperma-
tomía de los espermatozoides consiste tozoide en el medio acuoso. Por otra
de tres segmentos: cabeza, pieza media parte, en algunas especies de la familia
y flagelo. La cabeza de acuerdo a la es- Mormyridae o peces elefantes de ferti-
pecie varia en forma y tamaño, trans- lización externa, el flagelo está ausente
porta los genes del macho (Ciereszko y su única forma de locomoción es de
et al. 2017) en condición haploide en tipo ameboideo (Jamieson, 1991).
un núcleo de formas variables y en la Tales estructuras y componentes
mayoría de los teleósteos es ausente que integran la célula espermática, son
de acrosoma, debido a la presencia del crucialmente importantes para deter-
micrópilo en el óvulo (Islam & Akh- minar la calidad del desempeño esper-
ter, 2011; Jamieson, 1991; Zohar & mático (Linhart et al. 2003; Saudrais
Mylonas, 2001). La pieza media está et al. 1998). Mediante la tinción de un
sujetada a la cabeza de los espermato- frotis espermático con giemsa al 20%
zoides, constituida principalmente por y con el empleo de un microscopio
mitocondrias que contribuyen con la óptico, provisto de una cámara con un
energía mediada por el ATP (Dzyuba et programa para la visualización de imá-
al. 2017; Saudrais et al. 1998 Ruran- genes, es posible observar los atributos
gwa et al. 2004), para el movimiento básicos de la anatomía extracelular de
flagelar hay dos centriolos, el proximal los espermatozoides, como son la ca-
y distal que durante la espermiogéne- beza y el flageló, tal y a como puede
sis utilizarán uno o los dos centriolos observarse en las imágenes mostradas
como cuerpo basal para originar uno o de la Figura 1, que dan como ejemplo
dos flagelos respectivamente (Jamie- las variaciones en tamaño y formas de
son, 1991). El flagelo, es el aparato los espermatozoides del bagre tropical
motil para alcanzar y penetrar el óvu- Rhamdia laticauda (Fig. 1A, 1B), los
lo por el canal micropilar (Dzyuba & del pejelagarto tropical Atractosteus
Cosson, 2014; Jamieson, 1991), en su tropicus (Fig. 1C, 1D) y los de la mo-
mayoría esta constituido por el axone- jarra del Nilo Oreochromis niloticus
ma en arreglo de nueve pares de mi- (Fig. 1E, 1F).
crotúbulos periféricos y un par central
llamado complejo 9+2 que está recu-
bierto por la membrana plasmática, y
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técnica atractiva, debido a que per- 100X con contraste de fases negativo,
mite la caracterización de cada es- al ajustar correctamente el brillo del
permatozoide en términos de función campo (Fig. 1), seguido por el análi-
celular e integridad de sus diferentes sis de las imágenes capturadas.
compartimentos, así como, también Técnicas de tinción diferentes
la identificación de subgrupos sobre han sido desarrolladas para el análisis
un gran número de células. Por medio espermático por microscopia óptica
del análisis de citometría de flujo, la como: Hematoxilina-eosina, azul de
detección de moléculas involucradas toluidina, giemsa, Wright, naranja G,
en la muerte apoptótica, el análisis tinción con azul de eosina-anilina, mé-
del ciclo celular y la determinación de todo de Shorr, Papanicolaou, método
la actividad de las caspasas han sido de Berg, tinción verde claro, naranja
también evaluadas con éxito en célu- de acridina y tinción verde de Janus
las espermáticas. (Aksoy et al. 2012; Serafini et al.
Evaluación de las microestructuras 2014). Sin embargo, el desarrollo del
espermáticas por Microscopia Ópti- Análisis Automatizado para la Morfo-
ca (MOP) logía Espermática (AAME) o el Siste-
El análisis de la morfología es- ma de Análisis Espermático Integrado
permática típica es el criterio directo (SAEI), ha llevado al incremento en el
más importante para evaluar la calidad número de estudios sobre la morfolo-
de una muestra de semen. La correcta gía en espermatozoides de animales,
evaluación depende del modo de pre- principalmente en mamíferos median-
paración, fijación y del método de tin- te el empleo de tinciones que da un
ción de las células gaméticas (van der mejor contraste de fondo.
Horst & Maree, 2010). El empleo combinado por sis-
Una técnica de tinción debe temas computarizados y métodos de
causar el menor cambio en las dimen- tinción como Diff-Quick, Hemacolor,
siones y las formas como sea posible, Spermac, SpermBlue, actualmente
con el fin de evaluar de manera con- permite el análisis automático de ruti-
fiable las características morfométri- na de la forma de los espermatozoides
cas de cada componente celular. Las y fomenta el desarrollo del análisis de
diferentes morfologías espermáticas imágenes para caracterizarlos de ma-
por microscopia óptica, son usual- nera rápida (van der Horst & Maree,
mente establecidas por la tinción de 2010) en otros grupos taxonómicos
las muestras de semen y al exami- como es el caso de varias especies de
nar la laminilla bajo un microscopio mamíferos, lo que incluye a nuestra
óptico, con los objetivos de 40X o especie Homo sapiens. En el caso de
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