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TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al título de
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará por que no se publique nada contrario
al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques personales
contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la
justicia”.
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE ALFA Y BETA AMILASAS
COMERCIALES EN LA PRODUCCIÓN DE ETANOL A PARTIR ALMIDÓN DE
CEBADA EMPLEANDO Saccharomyces cerevisiae
APROBADO
_________________________ _________________________
HELBERTH ESPITIA RIVERA IVONNE GUTIERREZ ROJAS
Ingeniero Químico Bacterióloga M. Sc
Director Asesor
_______________________ _______________________
ADRIANA MATIZ ANDREA AGUIRRE
Bacterióloga M. Sc Bacterióloga M. Sc
Jurado Jurado
DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE ALFA Y BETA AMILASAS
COMERCIALES EN LA PRODUCCIÓN DE ETANOL A PARTIR ALMIDÓN DE
CEBADA EMPLEANDO Saccharomyces cerevisiae
APROBADO
_______________________ _______________________
INGRID SCHULER JANETH ARIAS
Bióloga, Ph.D. Bacterióloga, M. Sc–M. Ed
DECANA ACADEMICA DIRECTORA DE CARRERA
Este trabajo lo dedico a Dios por darme la sabiduría y fortaleza en cada paso de
este proceso formativo. A mis padres por su amor, esfuerzo y apoyo. También
quiero agradecer a mis amigos que me acompañaron durante la carrera por toda su
colaboración y amistad que fueron muy importantes para lograr esta meta.
Carolina.
AGRADECIMIENTOS
Por último agradezco a mi madre por su interés compartido por este trabajo,
acompañándome siempre con una voz de ánimo y disposición de ayuda para poder
lograr esta meta.
vii
TABLA DE CONTENIDO
Pág.
1. INTRODUCCIÓN ....................................................................................................... 18
2. MARCO TEORICO .................................................................................................... 19
2.1 LA CEBADA .............................................................................................................. 19
2.1.1 Taxonomía ................................................................................................................ 19
2.1.2 Características generales ........................................................................................ 19
2.2 CEBADA MALTEADA ............................................................................................... 20
2.3 ALMIDON DE CEBADA ............................................................................................ 21
2.3.1 Amilosa...................................................................................................................... 21
2.3.1.1 Amilopectina ............................................................................................................. 23
2.4 MÉTODOS HIDROLÍTICOS DEL ALMIDÓN ............................................................ 23
2.4.1 Método químico ........................................................................................................ 23
2.4.2 Método enzimático ................................................................................................... 24
2.4.2.1 α-Amilasa .................................................................................................................. 27
2.4.2.2 -amilasa ..................................................................................................................... 28
2.4.2.3 Glucoamilasas .......................................................................................................... 29
2.4.2.4 Pululanasa ................................................................................................................ 29
2.5 PROCESO DE PRODUCCIÓN DE ALCOHOL ......................................................... 30
2.5.1 Sustrato: mosto ........................................................................................................ 30
2.5.2 Microorganismo: Saccharomyces cerevisiae ....................................................... 31
2.5.2.1 Morfología ................................................................................................................. 31
2.5.2.2 Reproducción ........................................................................................................... 32
2.5.2.3 Requerimientos nutricionales ................................................................................. 32
2.5.2.3.1 Fuente de Carbono ................................................................................................ 32
2.5.2.3.2 Fuente de nitrógeno .............................................................................................. 32
2.5.2.3.3 Macro y Micronutrientes ....................................................................................... 33
2.5.2.3.4 Vitaminas ................................................................................................................ 33
2.5.2.4 Requerimientos ambientales ................................................................................. 34
2.5.2.4.1 Temperatura ........................................................................................................... 34
2.5.2.4.2 Oxigeno................................................................................................................... 34
2.5.2.4.3 pH ............................................................................................................................ 34
2.5.2.5 Metabolismo ............................................................................................................. 34
2.5.2.5.1 Azúcares ................................................................................................................. 34
2.5.2.5.2 Nitrógeno ................................................................................................................ 35
viii
ix
x
INDICE DE TABLAS
Pág
xi
INDICE DE GRÁFICAS
Pág
xii
xiii
INDICE DE FIGURAS
Pág
xiv
INDICE DE ANEXOS
xv
RESUMEN
Destilería Premier LTDA dentro de sus procesos productivos emplea cebada sin
maltear como sustrato para la producción de etanol en conjunto con la cebada
malteada, con el fin de equilibrar los costos de producción, por lo que en este
trabajo se probó la concentración de α y β amilasas que se deben adicionar al grano
de cebada sin maltear como alternativa para disminuir el uso de la cebada maltada
en el proceso de obtención de etanol. Para lo anterior se realizo ensayos a nivel de
laboratorio variando las concentraciones de α y β amilasas, Multifect® AA 21L y
Multifect® AA 23L, respectivamente, que se agregaron al medio para la etapa de
hidrólisis del almidón de cebada. La concentración de enzimas óptima fue 20 ml/L,
lo cual permitió mejorar el rendimiento de hidrolisis con 89,44 % en comparación
con las concentraciones que obtienen con la cebada malteada empleada en la
planta (41.85%) además de producir mayor cantidad de alcohol.
ABSTRAC
Premier LTDA distillery within their manufacturing processes used unmalted barley
as a substrate for the production of ethanol in conjunction with malted barley, in
order to balance the costs of production, so that this work was tested in the
concentration of α and β amylases to be added to the grain of unmalted barley as an
alternative to reduce the use of barley malt in the process of obtaining ethanol. For
the foregoing tests was performed at the laboratory by varying concentrations of α
and β amylases, Multifect ® 21L and Multifect® AA 23L AA, respectively, which were
added to the medium stage for the hydrolysis of starch from barley. The optimal
concentration of enzymes was 20 ml / L, which helped improve the performance of
hydrolysis with 89.44% compared with the concentrations obtained with malted
barley used in the plant (41.85%) in addition to producing larger quantities of alcohol.
1. INTRODUCCIÓN
18
2. MARCO TEORICO
2.1 LA CEBADA
2.1.1 Taxonomía
19
Proteínas 10
Celulosa 5.2
Agua 14
Fuente: http://fenalce.net/pagina.php?p_a=50
Aunque son varios los granos de cereal que pueden ser satisfactoriamente
malteados, los de cebada son los que generalmente presentan menos problemas
técnicos. Sus cáscaras ayudan a proteger el grano del malteado, además son útiles
como coadyuvantes de filtración en etapas posteriores (Hoseney, 1991).
20
2.3.1 Amilosa
21
d
depende de
el estado de maduración
n (Hoseney, 1991). Cad
da unidad de
e glucosa esstá
u
unida a la próxima por un enlace
e glucosídico α-1,4 (Ve
er Figura 1)). Este enla
ace
d
determina que el grupo reductor de
e la glucosa,, situado en la posición uno, pierda la
f
funcionalida
ad, una mo
olécula de amilosa
a no tiene máss poder red
ductor que el
c
correspondie
ente a una
a sola molé
écula de glu
ucosa, porq
que sólo tie
ene un grupo
r
reductor funcional, situa
ado en un exxtremo (Houg
gh, 1990).
Figura 1. Represen ntación de las dos forrmas de alm midón que se dan en la
cebada (a) cadena lineal de ammilosa y (b) amilopectina
a a ramificada
a. Cada círcuulo
represennta una unidad de gluco
osa y posible
es puntos dee ataque para las amilassas
α y β; NR
RE indica un
n extremo noo reductor.
G
Generalmen
nte, es un po
olímero linea
al aunque se cree que solamente
s p
para una parte
d la amilos
de sa, siendo liigeramente ramificado el
e resto. Cuando se lixivia el almidón
p
para separa
ar la amilosa nte por encima de la te
a calentando ligeramen emperatura de
g
gelificación del almidó
ón, la amilosa solubilizada es esencialmen
e nte lineal. La
n
naturaleza lineal
l y de gran longitud, confiere
e a la amilo
osa algunass propiedades
ú
únicas, por ejemplo: su
u capacidad
d para forma
ar complejoss con yodoss, alcoholess o
á
ácidos orgá
ánicos. Estoss complejoss se llaman clatratos o compuestoss de inclusión
h
helicoidal (H
Hoseney, 19
991). A tem mbiente, la cadena de moléculas de
mperatura am
22
2.3.1.1 Amilopectina
El almidón puede ser hidrolizado por ácidos como el ácido clorhídrico, (hidrólisis
ácida), llegando a una conversión parcial del almidón a D-glucosa. Este método es
utilizado para preparar jarabes de glucosa a partir de suspensiones que contienen
20%(p/p) de almidón a pH 2 y a una temperatura de 140ºC (Glazer y Nikaido, 1998).
Tras el tratamiento, se neutraliza y se recupera el almidón no hidrolizado por
filtración (Hoseney, 1991).
23
Durante la reacción, el ácido penetra libremente por las partes amorfas del grano de
almidón, e hidroliza los enlaces glucosídicos. El ácido no puede penetrar por las
áreas cristalinas, quizás a causa de la doble hélice, permaneciendo por ello intactas.
El efecto principal del ácido es reducir el peso molecular de las moléculas de
almidón, dejando intacta la estructura cristalina del grano (Hoseney, 1991).
24
Microorganismos
Enzima Acción
productores
Clostridium
Necesita agua para la hidrólisis, ataca thermodyrosulfurico,
Enzimas
enlaces α-1,4. Desramificación de la Leuconostoc,
desramificadoras
amilopeptina produciendo una mezcla Enterobacter
(Pululanasa)
de dextrinas y unos pocos azúcares. aerogenes, Bacillus
polymixa
25
26
2.4.2.1 α-Amilasa
27
2.4.2.2 β-amilasa
Debido a que está enzima esta imposibilitada para hidrolizar los puntos ramificados
α-1,6 en la molécula de almidón, los productos finales de la acción sobre el sustrato
son maltosas y dextrinas, formándose pocas cantidades de maltotriosa y glucosa
(Mariño, 1989).
28
2.4.2.3 Glucoamilasas
2.4.2.4 Pululanasa
La pululanasa es una enzima desramificante que actúa sobre los enlaces α-1,6 de la
amilopeptina liberando como único producto la maltosa (Byong, 2000). Son
29
Cantidad
Componente
(gl-1)
Fructosa 2,1
Glucosa 9,1
Sacarosa 2,3
Maltosa 52,4
Maltotriosa 12,8
Carbohidratos no
fermentecibles 23,9
Aminoácidos totales
(nitrógeno) 0,30
Isoácidos α 0,035
30
2.5.2.1 Morfología
31
2.5.2.2 Reproducción
Su reproducción puede ser asexual por gemación. Cuando las condiciones son
adversas la mayor parte de las levaduras pueden reproducirse sexualmente
generando ascosporas (Mesas y Alegre, 1999). Durante la gemación, la célula hija
inicia crecimiento formando una yema en la célula madre, posteriormente ocurre la
división nuclear, la síntesis de la pared y finalmente la separación de las dos células
(White, 1995).
Las levaduras no pueden asimilar el nitrógeno elemental ni los iones nitrato. Algunas
cepas pueden utilizar los iones de amonio, pero la mayor parte de nitrógeno
requerido para la síntesis de constituyentes celulares esenciales, procede de los
aminoácidos y de los di- y tri-péptidos del mosto. Estos han sido originados
proporcionalmente por la propia malta. Como en el caso de la utilización de
carbohidratos por levaduras, los aminoácidos son captados y utilizados
consecuentemente, de acuerdo con la presencia de enzimas adecuadas de
transferencia en la membrana. Un mosto de malta total, contiene 19 aminoácidos
(Hornsey, 2003). La propia célula produce aminoácidos por transaminación y/o
32
2.5.2.3.4 Vitaminas
El mosto proporciona una rica fuente de vitaminas y aunque las levaduras difieren
mucho en sus necesidades de vitaminas para el crecimiento, normalmente existe un
aporte adecuado en variedad como de cantidad en la cuba de maceración. El mosto
debe contener biotina, tiamina (B1), ácido nicotínico, riboflavina, pantotenato cálcico,
inositol, piridoxina, piridoxal y piridoxamina. Con la excepción del inositol, que
interviene o participa en la síntesis de la membrana (fosfolípidos), es decir
desempeña un papel estructural. Todas las vitaminas tienen función catalítica como
parte de alguna coenzima en el metabolismo (no-funcional). Los factores de
crecimiento que comúnmente requiere la levadura son: biotina, ácido pantoténico e
inositol importantes para la resistencia del microorganismo a altas concentraciones
de etanol (Jaccques et al., 1999).
33
2.5.2.4.1 Temperatura
2.5.2.4.2 Oxigeno
2.5.2.4.3 pH
2.5.2.5 Metabolismo
2.5.2.5.1 Azúcares
34
2.5.2.5.2 Nitrógeno
2.5.2.5.3 Fósforo
35
2.5.3 FERMENTACIÓN
Durante la etapa de crecimiento de los cultivos, los mismos son sometidos a una
oxigenación fuerte, mediante la aireación del medio, lo que permite la utilización de
la glucosa por oxidación completa. Este proceso genera una gran cantidad de
energía que en parte es fijada mediante el sistema ADP-ATP y posibilita el
desarrollo de reacciones de síntesis celular, que consumen gran cantidad de
energía. Una vez que el cultivo en el fermentador ha alcanzado el número de células
36
En el reactor se carga e hidrata la cebada molida con agua potable, en este paso se
utilizan mezclas de cebada nacional con cebada malteada o importada. El sistema
de agitación y calentamiento con vapor del reactor permite llevar a cabo la hidrólisis
de los almidones, y posterior transformación en azúcares. Cuándo todos los
almidones han sido transformados en azúcares, se procede a separar el mosto de
cebada del resto de los afrechos de la misma, de tal forma que el mosto a fermentar
esté libre de cascarilla, obteniéndose así un mosto disponible para realizar el
proceso de fermentación.
37
Una vez se obtienen los grados Brix y la población de levadura requerida, se pasa
alternadamente a la batería de cubas madres, dónde se realiza el pie de cuba y se
controla temperatura, población y calidad de la fermentación. Una vez iniciada la
fermentación en la cuba madre se procede al cargue de esta al tanque de
fermentación, alimentándose con un mosto de 15 a 18º Brix hasta llenar el tanque
para dar paso a la fermentación por espacio de 8 a 10 días.
Se dice que la fermentación llega a su fin cuando los azúcares de la cebada son
consumidos y convertidos a alcohol, la temperatura disminuye y cesa la producción
de gas carbónico y de esta forma la biomasa se deposita en el fondo del recipiente.
En esta etapa se realizan trasiegos para la separación de los sólidos en el líquido,
realizándose de tanque a tanque con bombas y mallas. Finalizada la fermentación y
trasiegos se determina la calidad producida del producto durante el proceso
fermentativo realizando análisis para determinar los parámetros fisicoquímicos.
38
El empleo de enzimas tiene muchas ventajas: son de origen natural y por lo tanto no
son tóxicas, son muy específicas en su manera de actuar, por lo que no propician
reacciones secundarias indeseables, funcionan en condiciones moderadas de
temperatura y de pH y no requieren de condiciones de procesamiento drásticas que
puedan alterar la naturaleza del alimento, ni del equipo, actúan a bajas
concentraciones y son fácilmente inactivadas una vez alcanzado el grado de
transformación deseado (Hough, 1990).
39
4. OBJETIVOS
40
5. MATERIALES Y MÉTODOS
5.1.2 Materiales
41
5.2 MÉTODOS
Concentración de Concentración de
Sustrato Enzimas
Ensayo
Cebada
Cebada
Sin α-amilasa β-amilasa
Malteada
Maltear
Fuente: Autor.
42
43
44
5.2.3.3 Fermentación
45
cambió el tapón de algodón por un tapón de caucho con filtro de salida de CO2, para
dar inicio a la fase de fermentación en condiciones anaeróbicas. Se tomaron
muestras cada 12 horas para determinar biomasa (Cáceres et al., 2008). La
concentración de azúcares reductores y etanol se determinaron al final del proceso
de fermentación. Todos los ensayos se realizaron por duplicado.
La determinación se debe repetir hasta que los resultados no difieran en ± 0.2 mL.
(Pg) x (Vg)
T =
100 mL de la solución
46
47
indico el numeral 5.4.1, pero empleando como titulante el filtrado recogido de las
muestras con las diferentes concentraciones de enzimas y controles (NTC 5146,
2008).
1000 mL x Título
Gramos glucosa/L =
V gastado x V alícuota
5.5.1 Destilación
Utilizando un matraz aforado de 250 mL, se llenó casi hasta la marca con la muestra
y colocándose en un baño a temperatura constante a 20ºC por una hora.
Manteniéndolo en el baño, se completó el volumen con la cantidad necesaria de
muestra, a 20ºC. Teniendo instalado el destilador, se vertió en el matraz con la
ayuda de un embudo la muestra contenida en el balón aforado; lavándose el
recipiente que contiene la muestra y el embudo, con tres porciones de 15 mL de
agua destilada, las cuales se añaden al matraz de destilación, retirando el embudo y
agregando una pequeña cantidad de regulador de ebullición, tapando y dando
comienzo a la destilación, recogiendo el destilado en el mismo matraz en que se
48
49
Se llenó con agua a 20ºC y se pesó para obtener el peso del agua contenida. Se
desocupó el picnómetro, se lavó varias veces con pequeñas cantidades del
destilado, llenandolo con el destilado a 20ºC y volviéndolo a pesar para obtener el
peso del destilado (NTC 5113, 2008).
Con los resultados obtenidos se calcularon los grados alcoholimétricos, por medio
de las tablas correspondientes (NTC 5113, 2008).
50
Todos los resultados obtenidos serán llevados en una bitácora, anotando la fecha
de montaje experimental, evolución, observaciones, fecha de análisis y los
resultados obtenidos.
La hipótesis nula será que hay igualdad de medias entre los niveles para cada
factor, así:
Ho: 5 = 10 = 15 = 20 = 25
Ho: 5 = 10 = 15 = 20 = 25
51
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Cebada
malteada
80
Cebada sin
60
maltear
Estos valores concuerdan con los mencionados en el marco teórico (Ver Tabla 1).
Descartándose que cualquier irregularidad en los ensayos sea ocasionada por
limitación de la concentración de almidón. En el trabajo realizado por Chen et al.
52
53
54
55
56
57
Los análisis estadísticos fueron realizados por medio del programa computarizado
SPSS vs 10, en donde se cumplió la hipótesis alterna (ver numeral 5.8),
presentando diferencias significativas entre los tratamientos (Ver Tabla Anexo 9.1 y
9.2), confirmando que las dosis de enzimas influyen significativamente en la
concentración de azúcares reductores (p<0,005) y del rendimiento de la hidrólisis
enzimática (p<0,005), obteniendo la mayor concentración de estos en el tratamiento
con 20 mL/L de enzimas.
58
de 2,88x 109 UFC/mL, como se aprecia en la Tabla Anexo 6.1. Sin embargo el
recuento entre la hora 36 y 48 no presentó un aumento significativo, como se puede
ver en la Gráfica 3, determinando que la fase aeróbica de fermentación de los
tratamientos con enzimas y controles seria durante las primeras 36 horas de
crecimiento de S. cerevisiae Safwhisky M-1, teniendo en cuenta que muchas
fermentaciones anaeróbicas requieren una fase inicial de crecimiento aeróbico como
es el caso de la producción de dextranos, alcoholes y 2,3 etilenglicol, y sólo
después, en la fase de producción se generan condiciones reductoras (Rhodes y
Fletcher 1969).
59
60
61
62
63
64
65
66
67
Concentración Log
de enzimas Biomasa Sustrato
mL/L máx Consumido
(UFC/mL) (g/L)
5 8,902 36,159
10 9,295 38,274
15 9,261 42,312
20 9,332 53,400
25 9,371 41,084
C+ 9,366 34,208
C- 8,889 0,159
68
70
60
40
30
20
10
0
5 10 15 20 25 C+ C-
69
(Ver tabla Anexo 6.11). El tratamiento con mayor producción de etanol fue con 20
mL/L de enzimas, comprobando que el aumento de la dosis de enzimas, favorece la
obtención de etanol. Sin embargo, los valores de etanol obtenidos en la
concentración de 15 mL/L, en relación a los de la concentración de 20 mL/l
presentan una variación de solo 0,58% de etanol, por lo que el rendimiento de esta
concentración es muy cercano al mejor (20mL/L).
70
71
3
4
Etanol (%)
3
2
1
1
0 0
5 10 15 20 25 C+ C-
72
como la mejor concentración de alfa y beta amilasas, para la obtención de una alta
concentración de azúcares reductores fácilmente asimilables por Saccharomyces
cerevisiae.
73
y fermentativo, presenta ventajas como ser 2.500 pesos/kilo más económica que la
cebada malteada, asimismo su disposición no requiere un proceso de importación.
Por otro lado, en este estudio se demostró que las enzimas empleadas para el
proceso amilolítico, realmente degradaron el almidón de la cebada sin maltear, por
lo que se podría considerar para futuros estudios el empleo de concentraciones de
sustrato mayores, empleando las mismas concentraciones de enzimas de este
estudio durante periodos de tiempo más largos y a su vez, concentraciones de
enzimas menores tales como las reportadas por Kolusheva y Marinova (2007), las
cuales fueron 6, 8, 10, 12 y 14 unidades de enzimas por mL, obteniendo un 30,2 %
de rendimiento de hidrólisis, teniendo en cuenta que entre mayor sea el uso de la
cebada nacional o sin maltear en el proceso productivo, mayor será el ahorro para la
destilería.
74
7. CONCLUSIONES
75
76
8. RECOMENDACIONES
77
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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86
87
10. ANEXOS
88
• Adicionar 50 mL de HCl.
• Filtrar si es necesario.
• Cálculo:
500 x T
% Almidón =
V x M
T: título de Fehling.
V: volumen gastado.
M: peso muestra.
89
90
X: # de células en 1 mm3
C: Espesor de la cámara = 10
91
Concentración de Rendimiento de
AR (g glucosa/L)
enzimas (mL/L) hidrólisis (%)
5 42,6528 63,9792
10 44,8590 67,2884
15 48,1819 72,2728
20 59,1323 88,6984
25 43,3637 65,0455
Control de
comparación 37,1689 41,8150
92
Figura 5.1. (a) Aspecto físico de los ensayos antes de la hidrólisis; (b) después
de la hidrólisis.
a
b
93
94
0 1,08E+06 6,033
6 1,18E+07 7,072
12 1,22E+08 8,086
24 1,30E+09 9,114
36 2,83E+09 9,451
48 2,88E+09 9,458
60 2,28E+09 9,357
72 1,73E+09 9,237
84 8,00E+08 8,902
0 1,08E+07 7,033
12 3,45E+07 7,536
24 6,25E+07 7,796
36 5,75E+08 8,756
48 7,50E+08 8,871
60 7,10E+08 8,851
72 5,50E+08 8,739
84 4,15E+08 8,480
95
0 1,08E+07 7,033
12 4,28E+07 7,630
24 6,05E+07 7,782
36 9,00E+08 8,954
48 1,98E+09 9,295
60 7,25E+08 8,860
72 5,50E+08 8,739
84 8,25E+08 8,916
0 1,08E+07 7,033
12 3,45E+07 7,536
24 6,25E+07 7,796
36 5,75E+08 8,756
48 7,50E+08 8,871
60 7,10E+08 8,851
72 5,50E+08 8,739
84 4,15E+08 8,480
96
0 1,08E+07 7,033
12 6,25E+07 7,536
24 7,63E+07 7,796
36 1,33E+09 8,756
48 2,15E+09 8,871
60 9,00E+08 8,851
72 9,50E+08 8,739
84 1,05E+09 8,480
0 1,08E+07 7,033
12 8,40E+07 7,924
24 9,30E+07 7,968
36 1,68E+09 9,224
48 2,35E+09 9,371
60 9,00E+08 8,954
72 1,03E+09 9,007
84 9,25E+08 8,962
97
0 1,08E+07 7,033
12 1,19E+08 8,074
24 1,29E+08 8,109
36 2,28E+09 9,357
48 2,33E+09 9,366
60 1,98E+09 9,296
72 1,43E+09 9,154
84 1,63E+09 9,211
0 1,08E+07 7,033
12 2,55E+07 7,405
24 2,88E+07 7,455
36 5,00E+08 8,699
48 7,75E+08 8,889
60 1,50E+08 8,151
72 1,50E+08 8,151
84 1,00E+08 8,000
98
Concentración de
enzimas (mL/L) Azúcares Azúcares Consumo de
Reductores Reductores Sustrato
Iniciales (g/L) Finales (g/L) (g/L)
Control de
comparación 37,199 2,9914 34,208
Concentración de
enzimas (mL/L) Biomasa máx Log Biomasa Tiempo
promedio máx promedio Biomasa Max
(UFC/mL) (UFC/mL) promedio
5 7,30E+08 8,9020 54
10 1,98E+09 9,2953 48
15 1,83E+09 9,2609 48
20 2,15E+09 9,3320 48
25 2,35E+09 9,3707 48
Control de
comparación 2,33E+09 9,3664 48
99
Concentración de
% OH Yp/s
enzimas (mL/L)
5 3,015 0,083
10 3,435 0,090
15 4,44 0,107
20 5,02 0,095
25 2,98 0,073
Control de
comparación 3,76 0,110
100
10
8
Log UFC/ml
0
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
10
6
Log UFC/ml
0
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
101
9,5
9,0
8,5
8,0
Log UFC/ml
7,5
7,0
6,5
6,0
5,5
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
10
8
Log UFC/ml
0
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
102
10
Log UFC/ml 8
0
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
10
9
Log UFC/ml
5
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
103
10
Log UFC/ml 8
0
0 12 24 36 48 60 72 84
Tiempo (horas)
104
105
106
107
108
Cebada
1 1.000 600 600.000
Nacional
Costo de OH
Valor 20 Costo
Valor enzimas OH producido
Presentación mL de litro de
Enzima Total para un producido para
(Litros) enzimas alcohol
(Pesos) lote de (%) 10.000L
(Pesos) (Pesos)
10.000 (litros)
Multifect
1 40.000 800 8.000.000
AA 21L
5,02 502 15.936
Multifect
1 40.000 800 8.000.000
AA 23L
109
110
111
112
113
114