BIOQUÍMICA Enzimas 8

ENZIMAS

Aceleran procesos biológicos (biocatalizadores). Son moléculas proteicas. Son muy pocas las reacciones que no son catalizadas por enzimas.
Como funciona: si se pasa de A a B. Al principio solo hay A. A se transforma en B y B en A, hasta que se llega al equilibrio de la reacción. En el
equilibrio la disminución de A se termina y el incremento de B se termina. Si a esta reacción se le agrega una enzima A se transforma en B, solo que el
equilibrio de la reacción va a llegar en un tiempo tremendamente menor. (Ejemplo de botar un borrador)
La reacción debe ser termodinámicamente posible, la energía que tiene A es tal que permite transformarse en B (que queda con menos energía). La
condición energética se llama energía libre. Se requiere una energía libre de activación. La enzima hace disminuir la energía de activación del
reaccionante. Si la energía de activación se reduce a la mitad, no implica que el tiempo también se disminuye a la mitad.

Energía libre de activación sin enzima

Energía libre de activación con enzima

CUALIDADES DE LAS ENZIMAS.

 Acelerar la reacción.
 Son específicas: una enzima va a catalizar una o un grupo de reacciones pero no cualquier reacción. El reaccionante sobre el que va a actuar la
enzima se llamaProgreso
sustrato (S)de
y lola reacción
que resulta se llama producto (P). Las enzimas aceptan determinados grupos de sustratos. La ureasa tiene
como sustrato la urea; la glucoquinasa, la glucosa; el sustrato de las proteasas son las proteínas (en este caso la especifidad es relativa porque
hay miles de proteínas); de las nucleasas los ácidos nucleico; de los aminoácidos oxidasas, los aminoácidos (los oxidan); hay enzimas d-
aminoácidos oxidasas, que tienen como sustrato los d-aminoácidos. *
 Efectividad: cuando una enzima reacciona con un sustrato se forma un complejo inestable, luego la enzima se recupera intacta y se puede
volver a usar miles de veces. Una molécula de enzima puede transformar muchas moléculas de sustrato. La efectividad se mide por el número
de transferencia: Nº de moléculas de sustrato que transforma un mol de enzima en un tiempo determinado. La catalasa tiene un Nº de
transferencia de 4 x 107 por segundo. La quimiotripsina: 100 por segundo.
 Las enzimas en su función son regulables, hay una serie de factores que hacen que la encima funcione o no funcione, más rápidamente o no tan
rápidamente. Se pueden regular por su cantidad: hay mecanismos que le indican a la célula que fabrique más una determinada enzima. Se
puede regular por su actividad: las enzimas están, pero condiciones pueden inhibir la activdad de la enzima.
Existen 2 tipos de reacciones enzimáticas:

 Reacción Monosustrato:

A+E AE P+E
 Reacción multisustrato:

A+B+E ABE P+Q+E

En este último caso las 2 moléculas interactúan con la enzima; ambos productos no pueden entrar ni salir al mismo tiempo, por lo que se dan los
siguientes casos:

1) Secuencial Ordenada: entra el primer sustrato y luego el segundo; sale el primer producto y luego el otro.

A B catálisis P Q
2) E al azar: cualquiera
Secuencial EA de los 2 sustratos
EABpuede entrar primero y cualquiera
EPQ de los 2 productos
EQpuede salir primero.
E
A B P Q
EA EQ
E EAB EPQ E
EB EP
3) B
Mecanismo ping-pong: la enzimaAreacciona con el primer sustrato entrega el primer producto,
Q toma el segundo sustrato y entrega el segundo
producto. P

A P B Q
EA EP E EB EQ Esteban Arriagada
E E
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En términos de regulación, la actividad enzimática va a depender del mecanismo de reacción que se de con una determinada enzima y si es de un
sustrato o de dos sustratos.

Esteban Arriagada
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Cambios energéticos de una reacción en presencia de enzima y en ausencia de ella
Cuando una enzima cataliza una reacción lo que varía no es el cambio de energía, sino la energía libre de activación que se necesita, lo que se
traduce en una velocidad de reacción menor. La enzima no cambia el delta de energía al pasar de un sistema a otro, no se libera más o menos
energía. El equilibrio de la reacción expresado en la constante de equilibrio tampoco va a cambiar. Las enzimas no desencadenan la reacción, con o
sin enzima igual va a ocurrir, pero acelera la reacción y hace que se llegue a mayor velocidad al equilibrio.

Las enzimas están presentes en todas partes de un organismo biológico, en cualquier tejido, en cualquier líquido. Las enzimas son específicas, por lo
que hay miles de enzimas.
Para estudiar, por ejemplo, una enzima de la saliva se toma un poco de saliva. Allí habrán muchas enzimas (también hay de bacterias), para
diferenciarla hay que aprovecharse de que son específicas y se coloca el sustrato de esa enzima y se estudia el aparecimiento de producto o
desaparecimiento de sustrato. Si se dan las condiciones de temperatura y pH adecuado, aparece producto en un tiempo determinado. Si se le da más
tiempo debería aparecer más producto. Pero este incremento del producto no es eterno, llega un momento en que no se incrementa más; en este
lapso de tiempo donde se encuentra el mismo producto, se detuvo el incremento y la reacción llega a su equilibrio.

 Primera fase: se ve una línea recta y

proporcionalidad entre tiempo e incremento. Alto

Concentración de Producto [P]

rendimiento o velocidad.
 Segunda Fase: el incremento existe, pero empieza a
disminuir. La velocidad más baja.
 El incremento se hace cero, se llega al equilibrio.

La velocidad inicialmente no cambia.

Una de las formas clásicas de averiguar la presencia de Curva de progreso de una reacción enzimática
una enzima, cuanta hay, si está activa, etc., es a través de
t
su actividad, para lo cual lo esencial es agregarle el
sustrato. Si en las mismas condiciones se toma la
muestra de otra persona y se encuentra una curva con
menor ángulo con respecto a la horizontal, la enzima está
presente pero en menor cantidad.

Las enzimas pueden ser

 Simples: formadas solo por aminoácidos V=P
 Complejas: tienen otra parte, llamado cofactor, t
denominandose apo enzima a la parte proteica; el
conjunto se llama holo Enzima
Hay varios cofactores, como las sustancias derivadas de
vitaminas, caso en que se llaman coenzimas, como el
fosfato de piridoxal. Algunas están unidas fuertemente a
la enzima, otras no.
Tiempo
Las enzimas se recuperan y pueden volver a hacer lo 1ª Fase 2ª Fase
mismo. Tampoco las coenzimas se necesitan en grandes
cantidades, por lo que no es necesario tomar tantas vitaminas.

Regulación de la actividad enzimática

Presentan un sitio preciso para el sustrato, con una conformación precisa, llamado sitio activo de las enzimas. Además presentan otros sitios
llamados sitios regulatorios o sitio alosterio, que sirve para regular la actividad de la enzima a través de la modificación del sitio activo; a este sitio
entran moléculas que pueden regular positiva (estimular) o negativamente (inhibir) la actividad enzimática.
 Un regulador positivo: cuando se une la molécula reguladora al sitio regulatorio, entonces se produce un cambio de conformación del sitio
activo, lo que permite la formación del complejo enzima sustrato.
 Un regulador negativo: cambia la conformación a fin con el sustrato, lo que impide que se forme el complejo enzima sustrato.

No todas las enzimas son tan regulables. En esto hay que tener en cuenta un efecto de economía importante. La mayoría de los efectos biológicos
dependen de reacciones múltiples, cascadas o secuencias de reacciones; cada una de estas etapas es catalizada por una enzima (se habla de una
batería de enzimas). No hay necesidad de regular negativamente todas las enzimas de una cadena de reacciones, basta con que se regule una
(economía) y todo el proceso se afectará.

Los reguladores: son de muy variada naturaleza y pueden ser reguladores externos o internos.
 Externo: por ejemplo, la propia glucosa puede ser un regulador para que se activen ciertos mecanismos que tienen que ver con el metabolismo
de la glucosa.
 Internos: Se puede dar que la formación de exceso de ATP regule negativamente alguna de las enzimas de la glicolisis, así se inhibe todo el
fenómeno. Si el organismo fabrica harto ATP y este se gasta, se forma mucho ADP, el que se transforma en un regulador positivo de una de las

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enzimas y se activa nuevamente la degradación de la glucosa. Así una enzima tendría un sitio que le permite estimular su actividad y otra que lo
inhibe.

Si se quiere verificar si una enzima está hay que colocarle harto sustrato (no suficiente), para así medir la concentración de enzimas. Harto significa
garantizar que por un tiempo determinado todas las moléculas de enzimas tengan sustrato. Esto se llama saturación de las enzimas por el sustrato y
permite construir una curva de progreso donde la línea recta indica que todas las enzimas estaban saturadas.
En el organismo las enzimas trabajan a una concentración saturizante; si no hay glucosa las enzimas están insaturadas.

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Ecuación Michaelis-Menten

Representa los efectos de la concentración de sustrato sobre los índices de numerosas reacciones enzimáticas.
La concentración del sustrato que produce la mitad de la velocidad máxima (constante de Michaeli o Km) se puede determinar graficando v i como
función de [S].
Vi = V max · [S]
Vi = V max · 1Km
= +V[S]
Cuando [S] es aproximadamente igual a Km, la enzima está trabajando a la mitad de su velocidad.
Supongamos un valor de 1 milimolar: max
1+1 2
Si la concentración de sustrato es 0,1
Vi = V max · 0,1
¿Qué pasa si la concentración de sustrato es 0,2; 100 veces Km o mil veces Km.? 1 + 0,1
Cuando la concentración del sustrato es considerablemente inferior a la requerida
para producir la mitad de la velocidad máxima, la velocidad inicial V i depende de la
concentración del sustrato. V max
Cuando la concentración del sustrato excede con mucho a Km la velocidad incial V i
es V max.
Cuando la concentración del sustrato es igual al valor de Km, la velocidad inicial V i Efecto
es semimáxima.
½V
saturación
Constante catalítica:
Se compara el valor Constante catalitica/Km con una enzima que tiene 2 sustratos:
exoquinosa, que trabaja con glucosa y galactosa, pero con una de ellas tiene un
valor mayor y con la otra menor. Qué significa (prueba).

Ecuación Lineweaver-Burk Km [S]

La ecuación de Michaelis-Menten se reordena en forma de una línea recta para 1 = Km · 1_ + 1__
determinar Km y V max. (Puesto que numerosas enzimas dan curvas de saturación
que no permiten fácilmente la valoración de V max).*
V Vmax [S] Vmax

La Km puede ser calculada a partir de la gráfica de Lineweaver-Burk o del doble

recíproco, donde la intersección en y es 1/Vmax y la pendiente es Km/Vmax. La i_ Pendiente= Km
intersección negativa en x es –1/Km. Vi Vmax

_ 1
Km 1__
INHIBIDORES DE ENZIMAS Vmax
Pueden disminuir la velocidad de la reacción enzimática. Esta sustancia al interactuar va
a disminuir el efecto de la enzima sobre el sustrato.
1
 En un caso, cuando esta molécula se ubica en el sitio inhibidor, se altera la
conformación del sitio activo, por lo que no se va a producir el complejo enzima [S]
sustrato. Este inhibidor no se puede desplazar porque la unión que
forma con la enzima es bastante fuerte (covalente). Este inhibidor se
llama no competitivo y se puede graficar. El valor de la velocidad
Con inhibidor
máxima disminuye, no se recupera aunque se aumente el sustrato y no competitivo
se mantiene para esa velocidad disminuida el valor de Km que se 1/V
encuentra en ausencia de esa inhibidor.

 Otra situación ocurre cuando el inhibidor tiene la misma forma del Sin inhibidor
sitio activo, ocupa el lugar del sitio activo correspondiente al Con inhibidor
sustrato, impidiendo la formación del complejo enzima sustrato. Se
competitivo
puede desplazar al inhibidor del sitio activo por simple competencia, 1/V
aumentando la cantidad de sustrato. Estos inhibidores no alteran la
velocidad máxima, sino la Km. Se llaman inhibidores competitivos. 1/S Sin
Existen muchas alteraciones orgánicas donde se puede intervenir conociendo inhibidor
la patología y la enzimas. Todas las patologías comprometen la acción de una
o más enzimas. Ejemplo:
- La angiotensina eleva la presión, se sintetiza a partir de un
angiotensinógeno, que luego forma angiotensina I, II y III. Cuando hay
hipertensión se puede evitar la formación de II y III con inhibidores 1/S
enzimáticos competitivos.

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- Hipercolesterolemia: el organismo sintetiza colesterol, un inhibidor hace que la síntesis del colesterol baje.

Un inhibidor muy usado en el mundo (no reversible) es la aspirina. Su destino es interferir una reacción enzimática que lleva a la producción de
prostaglandinas (precursor: ácido araquidónico); la oxigenasa tiene en su sitio activo un aminoácido llamado serina con un radical con un grupo OH;
sobre esta enzima actúa el ácido acetilsalicilico; así la serina y la enzima no funcionan, lo que produce una inhibición irreversible. Cuando algún signo
molesto ocurre en el organismo (fiebre, dolor, coagulaciones intravasculares, etc), la disminución de la síntesis de prostaglandinas hace que estos
signos se abatan.

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REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.

Existen 2 mecanismos:
 Sintetizar más o menos enzimas de acuerdo a las necesidades.
 Regulación por vía de la actividad. Hay muchos mecanismos reguladores de la actividad enzimática.

MECANISMOS REGULATORIOS

INDUCCIÓN Y REPRESIÓN
Si una persona tiene tendencia a presión baja, tenderá a producir más sustancias que aumenten la presión. Esto está afectado por factores externos,
por ejemplo, si una persona come mucha azúcar, las enzimas degradadoras de glucosa estarán aumentadas y viceversa.

MODIFICACION COVALENTE
Agregado a las enzimas una sustancia que se une covalentemente a ellas se puede hacer más activa o menos activa. La regulación esta en la enzima
que une o separa una sustancia a la enzima. El caso más frecuente son las reacciones de fosforilación, donde X es un grupo fosfato. Una enzima
puede fosforilarse o defosforilarse. Hay enzimas que al fosforilarse se activan y otras que al desfosforilarse se activan; en cualquier caso se requiere
de un sistema que fosforile y otro que defosforile.

PROTEOLISIS DE PROENZIMA
Hidrólisis: degradación de enlaces peptídicos. Cuando* a una enzima (proenzima o cimógeno), se le corta un trozo, se activa. Esto lo hace otra
enzima, llamada proteolítica. Este mecanismo se da en un solo sentido, no se vuelve atrás, no se le puede volver a unir el péptido a la enzima.

MECANISMOS ALOSTÉRICOS
Enzimas que aparte de su sitio activo tiene un sitio alostérico que cuando se une un efector alostérico puede favorecer o desfavorecer (positivo o
negativo) la actividad de la enzima, en cualquier caso, regula.

COOPERATIVIDAD POSITIVA
La unión de un sustrato hace más fácil la llegada de un segundo sustrato. Cuando llega un
sustrato al primer sitio activo, se favorece la entrada de sustrato a los otros sitios activos. Sustrato solo
Normalmente se da en enzimas de estructura cuaternaria.

V
Cooperatividad
positiva

ENZIMAS V/S DIAGNÓSTICO [S]

Las enzimas están generalmente en el interior de las células; existe un recambio celular constante y cuando la célula se muere, el contenido de
enzimas pasa a la sangre. Por lo que se espera encontrar una cantidad basal en la sangre; pero si la cantidad de enzimas aumenta, esto es signo del
deterioro de un determinado órgano, lo que ayuda al diagnóstico.
Las enzimas aparecen, además, con una determinada secuencia:
Nivel Plasma

CF
5x
4x GOT
3x OH But DH
2x
x

VITAMINAS
1 3 5 7 9
Días post dolor toráxico
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x = valor normal
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A veces las enzimas necesitan trabajar con una sustancia no proteica que se llama Coenzima (CoE). En la estructura de estas coenzimas participan las
vitaminas. Las vitaminas no son coenzimas y solo algunas enzimas necesitan trabajar con coenzimas.

Las coenzimas pueden servir a varias enzimas, son poco específicas.

Como las enzimas son pocas, las coenzimas igual, por tanto, las vitaminas también se necesitan en pequeña cantidad.

Las vitaminas están en todos los alimentos. Si una persona hace una dieta normal, jamás necesitará vitaminas.

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COFACTORES ENZIMÁTICOS

Uno de ellos se refiere a las coenzimas. En general las coenzimas son sustancias que están al lado de las enzimas contribuyendo a la
eficiencia de la reacción enzimática.
Las coenzimas son siempre cofactores positivos. En general están hechos de vitaminas más algún agregado.

VITAMINAS

Deben venir de afuera porque el organismo humano no las sintetiza. Provienen de la dieta, por lo que las vitaminas se llaman
complementos de la dieta o factores accesorios de la alimentación. Están en los vegetales y otros animales.
Las vitaminas, generalmente una vez que ingresan al organismo se catabolizan, por lo que hay que irlas reemplazando diariamente.
Otra fuente importante de vitaminas es la flora bacteriana intestinal. Los antibióticos esterilizan la zona bacteriana, por lo que se puede
caer en un déficit de vitaminas.
Cuando ocurre una falla nutricional o un tratamiento de antiobióticos o una dificultad de absorción de las vitaminas, aparecen signos
típicos que en su conjunto corresponden a los cuadros carenciales.

ALGUNAS VITAMINAS
 La vitamina D contribuye a favorecer el proceso de mineralización de los tejidos duros; cuando hay un cuadro carencial de vitamina D, se
produce una hipocalcificación de los tejidos duros, lo que puede ocurrir en cualquier momento de la vida. Cuando esto ocurre en la infancia, la
desmineralización se llama raquitismo; cuando ocurre en los adultos se llama osteomalacia.
 La vitamina K tiene un rol en la formación de un grupo de enzimas que coagulan la sangre; cuando hay déficit de vitamina K (por antibióticos, ya
que un aporte importante lo entrega la flora bacteriana) hay tendencia a sangramiento anormal largo.
 La vitamina C tiene rol en la formación de colágeno, estructura que le da firmeza a todos los tejidos; cuando falta, se dañan los tejidos de vasos
sanguíneos, por lo que se produce sangramiento por ruptura de los vasos.

La gran mayoría de las vitaminas deben su nombre a la función recién mencionada. Así, la vitamina D se denomina antirraquítica, la K,
antihemorrágica, la C, antiescorbuto.

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ROL DE LAS VITAMINAS COMO COENZIMAS

Una parte del sustrato liberado por una enzima no queda libre, sino unido a la coenzima. La coenzima acepta un grupo químico del
sustrato. Este complejo EC0Eh se una a otro sustrato formando un segundo complejo, al que se unirá el elemento libre.

ECoEh + S2 ECoEhS2 ECoE + S2h

Hay una transferencia de un grupo químico de un elemento a otro, donde el elemento que transfiere es la coenzima, es un aceptor
transitorio del grupo químico del sustrato.
La gran mayoría de las reacciones químicas consiste justamente en esto, en degradar un sustrato y componer otro. Los grupos químicos
transferibles son muchos: metilar, carboxilar, acetilar, hidrogenar, etc.
Por ejemplo, en las reacciones de oxido reducción de la cadena respiratoria de las mitocondrias o fosforilación oxidativa se forma ATP, aquí
lo que se hace es trasladar un grupo H al oxígeno para formar agua; aquí hay coenzimas que sirven a la unión transitoria de hidrógeno. (Cuando
pierde hidrógeno se oxida, cuando gana H, se reduce.). De esto deriva el nombre de la enzima y coenzima, ej: enzima oxireductasa y coenzima de co-
oxidoreductasa.

Hay dos etapas diferentes. La coenzima le va a quitar H al sustrato; puede ocurrir que una segunda enzima que va a entregar H a un
segundo sustrato necesita una coenzima reducida; aquí se ocuparon 2 enzimas. En otras oportunidades la misma enzima toma de un sustrato y se lo
entrega a otro sustrato.

SH2 CoEH2 + S CoEH2 + O CoE + OH2

Coenzimas de oxidorrecudcción o oxidorreductasa:
 NAD (Nicotidamida adenina dinucleótico)
 FAD (flavina adenina dinucleótido; flavina es la vitamina)
 CoA (la vitamina es la A)

NUCLEÓTIDOS

Son biomoléculas de múltiples funciones:

 Son precursores activados de ADN y ARN
 Sirven como intermediarios de algunas biosíntesis importantes; en el caso de la síntesis del glicógeno es necesaria la presencia de un nucleótido
a base de uracilo.
 Se definen como la moneda universal de la energía; el ATP (adenina) y el GTP (guanina) son nucleótidos.
 Existen muchas coenzimas cuya estructura química es de nucleótidos.
 Algunos de ellos son reguladores de procesos metabólicos, interfiriendo la actividad de ciertas enzimas (AMPc)

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ESTRUCTURA
Están formados por:
 Base nitrogenada, que puede ser adenina, guanina, citosita, uracilo, timina
 Azucar: ribosa o desoxirribosa.
 Grupo fosfato que puede estar 1,2 o 3 veces (mono, di o trifosforado)

Cuando la base nitrogenada está unida al azúcar se habla de nucleósido; cuando se agrega el fosfato se transforma en nucleótido.
ATP: adenosina (adenina más ribosa) tri-fosfato; es un nucleósido trifosforado, (no nucleótido trifosforado). Cuando se habla de
nucleótidos se indica que el azúcar es ribosa; cuando se habla de d-cleótidos, el azúcar es desoxirribosa. (El carbono 2 de la ribosa lleva un grupo OH,
cuando desaparece, se transforma en desoxirribosa).

BASES NITROGENADAS
Se clasifican de 2 maneras
 Púrica: Estructura cíclica carbonada y nitrogenada; puede ser adenina y guanina.
 Pirimídica: puede ser citosina, timina y uracilo.

El organismo sintetiza las bases púrica y pirimídica. La síntesis es extremadamente complicada. Sin los nucleótidos no se construyen ácidos
nucleicos, es una síntesis de las más costosas, complicadas y reguladas, porque cuando ocurre la división celular se necesitan muchísmas bases
nitrogenadas para construir el ADN.
Las bases nitrogenadas se construyen a partir de elementos muy simples, como los aminoácidos: glicina, glutamina, ácido aspártico. A
partir de los esqueletos formados hay que construir las bases específicas, donde nuevamente hacen aporte los aminoácidos.

La ribosa (pentosa) deriva de los glúcidos, se come como almidón o glucógeno.

Adenina + ribosa = adenosina + P = AMP + P = ADP + P = ATP.
Guanina + ribosa = guanosina + P = GMP + P = GDP + P = GTP.
Timina + desoxirribosa = d-timidina + P = d-TMP + P = dTDP + P = dTTP

El ATP es una molécula de alto contenido de energía química, la que se libera al desdoblarse. Cuando una célula está en reposo funcionan
los mecanismos para sintetizar ATP; cuando la célula ejerce su función se desdobla el ATP en ADP + P.

Para sintetizar nucleótidos de timina hay que transformar el nucleótido uracilo, sacarle el OH (sistema enzimático: reductasa) e insertarle
un CH3 (como el nucleótido de timina se llama ácido timirílico, la enzima se llama timidilato sintetasa).
Del uracilo se fabrica citosina y timina. Se necesita ácido timirílico para construir timina para la mitosis, se necesitan varios miles de
millones.
Es dañino que esta molécula se sintetice cuando el tejido se transforma en tumoral. Un mecanismo que frena esta síntesis consiste en
inhibir la timidilato sintetasa, que constituye una de las terapias anticancerígenas (fármacos fluoracilo y fluordesoxiuridilato), por medio de un
inhibidor competitivo.

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