Guía de Microscopia

Concepto
El Microscopio óptico es un instrumento que permite observar y cuantificar objetos y
organismos muy pequeños. Este instrumento ha sido fundamental para el avance de las
investigaciones biológicas y se ha convertido en una herramienta básica para ampliar las
fronteras de la biología. Existen diferentes tipos de microscopios que varían en su poder
de aumento y resolución. La lupa se puede considerar como el microscopio más simple y
fue usado inicialmente para adquirir los primeros conocimientos del mundo microscópico.
Luego se perfeccionó y en la actualidad existe una gran variedad de microscopios,
algunos de ellos altamente especializados. Los rangos aproximados de magnificación se
encuentran entre 4X y 40X (Estereoscopio), 40X-1.500X (Microscopio óptico
compuesto), 10.000X-16.000X (Microscopio electrónico). X hace referencia al número de
veces que se aumenta el tamaño real del objeto. El propósito de esta práctica es adquirir
destrezas en el cuidado y manejo del Microscopio óptico compuesto.
El microscopio permite estudiar las estructuras y células que no son observables con el ojo
humano.
 AUMENTO
CONCEPTOS IMPORTANTES
El poder de aumento de una lente está determinado por el grado de curvatura
de su superficie y la distancia focal.
En las lentes convexas a mayor distancia focal, mayor será el aumento.
El primer juego de lentes, cercano al objeto en estudio, se denomina objetivo y el
segundo juego, cercano al ojo del observador se denomina ocular.
Cada sistema de lentes produce un aumento enunciado con la letra x, así que
10x significa que la imagen está aumentada 10 veces.

AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular

Células epiteliales
 CONCEPTOS IMPORTANTES
RESOLUCIÓN
Es la capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que
se encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan ver
individualizados uno del otro.
La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio
depende de la habilidad de este para hacer que los puntos del
objeto que están muy cercanos aparezcan en la imagen como
puntos separados.

0,2 µm 200nm

EL LÍMITE DE RESOLUCIÓN de un microscopio está en proporción

directa con la longitud de onda de la luz: mientras mayor sea
la longitud de onda, es menor la resolución. A diferencia de un
fotón de luz que tiene una longitud de onda constante, la
longitud de onda de un electrón varía con la Velocidad a la
que la partícula viaja.

CLASES DE MICROSCOPIOS
Microscopio de campo
oscuro
Cambio en la manera
como que incide la luz Microscopio de luz
sobre el espécimen: Empleo polarizada
Microscopio de condensadores y filtros:
óptico
Contraste por
interferencia
Poder de diferencial (Differential
resolución Interference Contrast)
Nomarski
Microscopios 0,2 – 1 um

Microscopio de luz
ultravioleta.à tiene una longitud
de onda de200 nm, por lo tanto puede
Modificación de la alcanzar una resolución de 100 nm
fuente emisora de luz:
Cambiando la luz
Microscopio de Fluorescencia
blanca por luz
ultravioleta o rayos láser:
Microscopio confocal de
barrido láser

Poder de resolución 0,2 nm

Microscopio M. E de Transmisión TEM
Cortes finos
electrónico

M. E de Barrido Poder de resolución 10 nm

(Scanning) SEM Imágenes tridimencionales
DISPOSICIÓN Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO.
Es importante tener en cuenta las siguientes precauciones al utilizar el microscopio:
 Al transportar el microscopio, tómelo siempre con las dos manos, de tal forma que una
lo sostenga por el Brazo y la otra por debajo de la Base. Nunca tenga objetos adicionales
en sus manos.
 Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitúelo suavemente a unos 10 o 15 cm del borde
y oriéntelo de manera que el Brazo quede orientado hacia usted.
 Si se requiere limpiar las Lentes utilice sólo el papel y solución destinada para tal fin. No
utilice ningún otro tipo de papel.
 Nunca use el Objetivo de inmersión si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se
requiere el uso de aceite, y si no lo hace puede dañar el lente.
 Al terminar de trabajar deje el Microscopio en el Objetivo de 4 X.
 PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO Y SUS FUNCIONES.
En la siguiente figura identifique las siguientes partes: Oculares, Objetivos, Revólver,
Platina, Condensador, Diafragma-Iris, Tubo, Brazo, Tornillo macrométrico, Tornillo
micrométrico, Base y fuente de luz.

PARTE MECÁNICA.

Base: es el punto de apoyo de la armazón del microscopio y donde generalmente se insertan

la fuente luminosa

Platina: es el lugar de posición de portaobjetos, posee un orificio central que deja pasar la
luz. Con su carro y sus pinzas permite sujetar y mover la preparación hacia delante, hacia
atrás y de derecha a izquierda.

Brazo o Mango: Lugar de agarre y de transporte del instrumento

Tornillo macrométrico: ubicado en el mango ayuda a acercar y alejar la platina de los

objetivos. Con este tornillo se realizan movimientos más rápidos. En algunos microscopios
este botón acerca o aleja el tubo, sitio en donde se colocan las lentes oculares.

Tornillo micrométrico: Ubicado junto con el macrométrico. Permite un enfoque preciso de

la imagen mediante movimientos suaves.

Revolver: En él se colocan los objetivos del microscopio. Posee un sistema giratorio que
permite colocar el objetivo requerido en posición correcta.

PARTE ÓPTICA.

Fuente de Luz: En algunos microscopios no tan modernos, la fuente de luz puede ser: natural
o artificial para lo cual se utiliza un espejo que refleje la luz proveniente de una lámpara o
del sol. En los modernos una bombilla o lámpara suministra luz suficiente para la observación
de los objetos de interés.

Diafragma (iris): Está situado por debajo de la platina, de apariencia laminar y acoplado al
condensador, su función es regular la cantidad de luz que debe llegara a la muestra. Puede
abrirse o cerrarse totalmente.

Condensador: concentra los rayos de luz hacia la preparación

Objetivos: Son lentes que suministran la imagen del objeto. Pueden ser secos como los de
4X, 10X y 40X o sea que no necesitan aceite para lograr nitidez y húmedos como el de 100X
que si necesita aceite y recibe el nombre de objetivo de inmersión.

Oculares: Son lentes cuya función es aumentar la imagen proveniente del objetivo. Su
aumento depende de las lentes que lo conforman, pueden ser de 10, 15 o 16X. Puede ser uno
solo en el microscopio monocular y dos en el binocular.
MICROSCOPIO ÓPTICO
Utiliza luz visible y un sistema de lentes ópticas para aumentar imágenes de pequeñas
estructuras. Por tal motivo, también es conocido como microscopio de luz o microscopio de
campo claro. Consta de ocular, objetivo, portador del objeto, lentes de la iluminación,
sujeción del objeto y espejo de la iluminación.

Hay dos tipos de microscopios ópticos: los simples y los compuestos.

Microscopio óptico.

– MICROSCOPIO SIMPLE.
También es conocido como microscopio lupa porque consiste en una sola lente
tradicionalmente llamada así, lupa. Se caracterizan por ser los más básicos y porque
generalmente se colocaban alrededor del cuello para ajustarse firmemente a la altura de los
ojos. Algunos joyeros tradicionales continúan utilizando este tipo de instrumentos, aunque
coloquialmente no se les denomina microscopios como tal.

En la antigüedad, el microscopio simple permitía estudiar organismos microscópicos como

algunos protistas.

– MICROSCOPIO COMPUESTO.
Usa un par de lentes para mejorar la ampliación de un objeto y por lo tanto, son comunes
para la investigación. Uno de esos lentes es el objetivo que tiene una distancia focal corta y
es colocado cerca del objeto que se examina. El otro, el ocular, se utiliza para formar una
imagen real ampliada en el plano focal frontal, la cual puede ser vista por el observador.

Existe una amplia variedad de acuerdo a sus configuraciones ópticas, costos y propósitos.
Algunos ejemplos son: microscopio de luz polarizada, microscopio de fluorescencia y
microscopio confocal.

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.

La imagen que se forma está constituida por estructuras brillantes sobre un fondo oscuro,
utilizando un haz enfocado de luz muy intensa. Para ver una muestra en un microscopio de
campo oscuro, se coloca un disco opaco debajo de la lente del condensador, de modo que
solo la luz que es dispersada por los objetos en la diapositiva puede alcanzar el ojo.

Los objetos que son pigmentados suelen verse con colores distorsionados; es decir, la luz
reflejada es de un color diferente al color del objeto.

Ambos, microscopios de campo oscuro y de campo claro, forman parte de los microscopios
fotónicos.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES.
También es fotónico y es el más utilizado para observar objetos o estructuras transparentes
sin teñir. Es ideal para el estudio y análisis morfológico de células vivas, así como para el
estudio de las funciones que puedan desarrollar.

El inventor de este microscopio, el físico neerlandés Frits Zernike, recibió el Premio Nobel
de Física en 1953.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
Se identifican dos tipos de microscopios electrónicos: el electrónico de transmisión y el
electrónico de barrido.
Para formar imágenes de objetos pequeños, el microscopio electrónico utiliza electrones en
lugar de luz visible, como ocurre en el microscopio óptico.

– MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN.

Permite observar detalles internos de las estructuras a través de una visión bidimensional.
Posee tres sistemas esenciales: un cañón de electrones, un generador de imágenes y un
sistema de grabación de imágenes.

En este instrumento se aprovecha la colisión y la dispersión provocada entre un haz de

electrones con una muestra preparada, lo que brinda información de acuerdo a la
orientación y estructura de los cristales presentes. En vez de utilizar energía luminosa, usa
haces de electrones reemplazando las lentes ópticas de vidrio, por “lentes” obtenidas
mediante campos electromagnéticos.
Microscopios sofisticados.

– MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO.

En este tipo de instrumento rebotan electrones especímenes recubiertos con metales que
proporcionan imágenes tridimensionales. Aquí los electrones interactúan con los átomos de
la muestra, produciendo señales que contienen información sobre la topografía de la
superficie y la composición de la muestra.

Su diferencia con el de transmisión es que los electrones no atraviesan el espécimen para

formar las imágenes.

MICROSCOPIO DE LUZ TRANSMITIDA.

Está compuesto por un microscopio óptico, una cámara CCD (en español, significa
Dispositivo de Carga Acoplada) y una pantalla LCD (representación visual por cristal
líquido). Sirven para observar estructuras transparentes o muy finas, aunque también es
posible hacerlo a través de superficies opacas.

En este microscopio el rayo de luz se proyecta desde abajo, atravesando la estructura

cuando esta es transparente. Si se desea observar una estructura especial que se deposita
sobre la platina, es mejor utilizar un microscopio invertido.

Existen varios costos de acuerdo a sus características y a la tecnología añadida que puedan
almacenar.
MICROSCOPIO INVERTIDO.
Este microscopio que se inventó en 1850, lleva su fuente de luz y condensador en la parte
superior por encima de la platina, apuntando hacia abajo. Mientras que los objetivos y la
torreta están debajo del escenario apuntando hacia arriba. Se utiliza para mirar células y
organismos vivos en el fondo de un recipiente grande.

MICROSCOPIO DE RAYOS X.
Con este tipo de microscopios es posible obtener imágenes de células completas a una
resolución intermedia entre un microscopio electrónico o uno óptico. Los rayos X no se
reflejan ni se refractan, a diferencia de la luz visible.

En el mundo de la medicina, este microscopio ha tenido una importancia invaluable, pues

ha permitido localizar pequeñísimas cantidades de iones metálicos dentro de las células
humanas, lo que facilita los estudios y tratamientos a diversas enfermedades metabólicas.

MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA.

Es un tipo de microscopía de sonda de barrido de muy alta resolución, con capacidad para
detectar fuerzas del orden de los nanonewtons. Es requerido para el desarrollo de la
nanotecnología; es decir, el estudio de la materia a escala atómica, molecular y
supramolecular.

Este microscopio tiene tres principales habilidades: medición de fuerza, imágenes y

manipulación.

MICROSCOPIO DE EFECTO TÚNEL.

Fue desarrollado por Binnig y Rohrer en 1982, quienes posteriormente, en 1986 recibieron
el Premio Nobel de Física. Este instrumento fue el primero en generar imágenes de
superficies a nivel atómico, con lo que dio origen a toda una familia de microscopios de
sonda local.

Una punta metálica y afilada se acerca a una superficie, lo que genera una tensión entre esta
punta y la muestra a analizar. Debido a esta distancia interatómica, se establece una
corriente, cuya intensidad es sensible a la distancia punta-muestra.