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OBJETIVOS
Determinar cuántos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un
diagnóstico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal
de Hemoglobina.
La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido
de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina
capaces de transportar 800ml de oxígeno.
La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras α,
β, γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se
diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están
compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las
siguientes hemoglobinas normales:
Algunos datos se obtienen examinando a simple vista una muestra de sangre. Un aspecto
normal del suero o del plasma revela que el pigmento esta en los glóbulos rojos. Si se agita en
una sangre total normal en el aire durante 15 min. Adquiere un color rojo claro por convertir la
Hb en oxihemoglobina.
10 tubos de ensayo
1 gradilla-alcohol rectificado
algodón
jeringas desechables
torniquete
pipeta automática (20 ul)
pipetas graduadas de 5 a 10 ml
puntas amarillas adaptables para pipeta automática
guantes
tubos de espectrofotómetro
espectrofotómetro
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
Parte 1:
A) Realizar un espectro de absorción abs. vs. longitud de onda para una muestra de sangre de
concentración conocida (12 a 14 mg %) Para ello se toma con la pipeta automática 20 ul de
la sangre y se diluye en ml dela solución de Drabkin. Se lee luego a diferentes longitudes
de onda (400 a 600) y se grafica en papel milimetrado.
B) Realizar 6 disoluciones de la sangre de concentración conocida utilizando siempre un
volumen constante de sangre de 20 ul con pipeta automática variando solo el volumen de
solución de Drabkin en cada tubo. Podrían ser volúmenes de 4, 5,7,10 y 12 ml. Luego, para
graficar la curva patrón, medir las absorbancias de cada una de las diluciones y realizar un
gráfico de abs. Vs. Concentración de hemoglobina.
Parte 2:
Introducir la pipeta y mezclar la sangre con el reactivo de Drabkin contenido con el tubo-
Mezclar bien y esperar 5 minutos
Conclusiones
Existen varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los
exámenes. Su duración puede depender de los resultados o terminación de otros exámenes,
procedimientos o tratamientos. Los exámenes pueden ser realizados inmediatamente en una
emergencia o pueden ser demorados conforme una condición es tratada o monitoreada. Se
puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o síntomas.
Debido a cambios de las funciones naturales del organismo durante el día, los exámenes
pueden ser realizados en una determinada hora. Si usted se ha preparado para este examen
con cambios en la ingesta de comida o líquidos, los exámenes pueden ser realizados de
acuerdo con estos cambios. Los intervalos para la realización de los exámenes pueden basarse
en el aumento o disminución de los niveles de medicamentos, drogas u otras sustancias en el
organismo.
La edad o el género de las personas pueden influir en la fecha y la frecuencia con que se
requiere un examen. Las condiciones crónicas o progresivas pueden necesitar un monitoreo
continuo mediante exámenes. Ciertos exámenes pueden ser repetidos para obtener una serie
de resultados o para confirmar o refutar resultados. Las veces que deban realizarse los
exámenes y su frecuencia varían dependiendo si se llevan a cabo por razones profesionales o
legales.
RECUENTO DE HEMATÍES
OBJETIVO
Los recuentos celulares son procedimientos que se utilizan para determinar el número de los
distintos tipos celulares en una unidad de volumen de sangre (generalmente, en 1 mm cúbico).
Dilución de la sangre.
Conteo del número de células.
Cálculo matemático del número de células presentes en 1 mm3 de sangre.
Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el líquido de Hayem, en una
proporción exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequeña colocada en
la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de
la cámara y mediante una operación se obtiene el número total.
Para la realización del conteo manual se necesita un líquido de dilución, una cámara de
recuento, una pipeta diluidora y un microscopio.
MATERIAL NECESARIO
Cubreobjetos
El bulbo contiene una perla de vidrio para facilitar la mezcla de la sangre con el líquido de
dilución, y acaba en un tubo capilar corto. La perla de vidrio es roja en las pipetas empleadas
para el recuento de hematíes, y blanca en las usadas para el recuento de leucocitos. Además,
en las pipetas para hematíes la capacidad del bulbo es 100 veces superior a la del tubo capilar
largo, por lo que en el tubo capilar corto hay una marca de 101. En las pipetas para leucocitos
la capacidad del bulbo es 10 veces mayor que la del tubo capilar largo, por lo que en el tubo
capilar corto hay una marca de 11.
Microscopio
REACTIVOS
Líquido de dilución
Debe ser isotónico, para evitar alteraciones en los hematíes o su lisis.
Tras el empleo de las pipetas de Thoma, éstas deben lavarse interiormente del siguiente
modo:
PARTE EXPERIMENTAL
3. Limpiamos el exterior de la pipeta con una gasa, con cuidado de que no descienda el
volumen de sangre.
6. Desechamos las tres primeras gotas que se vierten con la pipeta y la siguiente gota la
colocamos entre la cámara y el cubre por uno de los bordes de la cámara, dejándola que
penetre por capilaridad. Debemos intentar que no rebose la sangre diluida, ni se formen
burbujas.
Como tenemos dos retículos, echamos una gota en el borde externo de cada retículo.
7. Dejamos reposar la sangre diluida ya en la cámara, durante unos minutos. Así las células
tienen tiempo de sedimentarse.
8. Ya tenemos la cámara preparada para el estudio al microscopio.
Para hacer el recuento de hematíes, tenemos que contar los presentes en 80 cuadros
pequeños del cuadrado central. En el libro de clase, nos da la opción de contar los
cuadrados pequeños contenidos en los cuatro cuadrados medianos de las esquina y el
mediano del centro, contenidos, a su vez, en el cuadrado central.
Para evitar contar repetidamente los mismos hematíes, contamos los que están
contenidos dentro del cuadrado y los que están en contacto con sus líneas de
demarcación superior o derecha.
El libro guía también nos aconseja hacer el conteo en zig-zag.
Una vez contados los cinco cuadrados, obtenemos los siguientes resultados:
El resultado total de los 80 cuadrados pequeños sería 538 hematíes. Teniendo en
cuenta que:
– El cuadrado grande central tiene 25 cuadrados medianos (Habrá que multiplicar el resultado
por 5)
– La longitud del espacio entre dicho cuadrado y el cubre es de 0,1mm (Habrá que multiplicar
el resultado por 10, para determinar la cantidad de hematíes en 1mm3)
RBC = H x 5 x 10 x D
RBC= Recuento de hematíes por mm3 de sangre
D= Factor de dilución
Los valores normales de RBC están comprendidos entre los 4 y los 5,5 millones/mm3 en
mujeres, y entre los 4,5 y los 6 millones/mm3 en los hombres, creemos que la sangre con la
que hemos realizado la práctica está deteriorada por el tiempo que tiene, pues los valores
obtenidos están muy por debajo de la media.
HEMATOCRITO
OBJETIVO
FUNDAMENTO
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre
que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y
de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo
completo (hemograma).
Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de
una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor
moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura.
Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la
marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el
plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo
intenso.
Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado,
llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último
es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se
usa una escala estandarizada.
MATERIAL
SUSTANCIAS:
Alcohol al 70%
Sangre venosa
PROCEDIMIENTO
1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares
azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse
aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.
2. Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o
sellando con fuego
3. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido
adherido al reborde externo de la plataforma
RESULTADOS
OBJETIVO
INTRODUCCION
El tiempo de sangría: es una prueba que sirve para evaluar la integridad de los vasos,
plaquetas y la formación del coágulo. Posee baja sensibilidad y especificidad debido a que se
ve afectado por múltiples factores desde una mala técnica de realización del examen, uso de
anti plaquetarios o enfermedad concomitante de la hemostasia primaria. Debido a estos
factores, el tiempo de sangría no es predictor de hemorragias durante una cirugía, por lo cual
ha ido disminuyendo su utilidad entre los exámenes preoperatorios.
Fundamento:
Material y equipo:
2 Lancetas estériles
2 Torundas de algodón con alcohol (70%)
Papel filtro
Un Cronometro
Parte experimental:
1. selecciona uno de los lóbulos de la oreja del paciente (que esté libre de lesiones), dar un
masaje suave (esto favorece a la circulación) hasta que la zona este tibia.
2. limpiar el lóbulo de la oreja con una torunda de algodón con alcohol dejar secar la región
limpiada.
3. se hace una punción con la lanceta en el sitio elegido, al mismo tiempo echar a andar el
cronometro. La punción debe hacerse en un solo movimiento, y sin hacer movimientos
laterales para no rasgar la piel.
4. sin tocar la piel ni comprimir se seca la gota de sangre que salga por el sitio de la punción
con papel filtro cada 15 o 30 segundos.
6. anotar el tiempo.
2 min
VALORES DE REFERENCIA.
Fundamento:
El tiempo necesario para que la primera sangre se coagule en tubo de crista es la medida de la
actividad total des sistema intrínseco de la coagulación. La inspección periódica del coagulo
permite la valoración de las propiedades físicas del coagulo (tamaño, aspecto y fuerza
mecánica).
Material y equipo:
1 Jeringa de 5 mililitros
Cronometro
3 tubos de ensayo
Torundas con alcohol (70%).
Marcador
Parte experimental:
5. cada 30 segundos se inclinan suavemente los tubos hasta que se vea un coagulo en cada
uno de ellos; se anota el tiempo y se saca el promedio.
OBJETIVO
FUNDAMENTO
Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del
cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero
pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de
una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.
MATERIAL
SUSTANCIAS
Alcohol al 70%
Sangre venosa
Diluyente de plaquetas
PROCEDIMIENTO
4. Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilución 1:100)
5. Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto
OBSERVACIONES
RESULTADOS
Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como
concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre,
que es 1mm3.
Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido
se multiplica por el factor de dilución de la siguiente manera:
Dilución: 1:100
Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la cámara
es de 0.1 mm3. El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron
así:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10 = 535 000 plaquetas por mm3 lo que indica un índice
elevado de plaquetas.
VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
http://aline-monserrat.blogspot.pe/2012/04/practica-7-determinacion-de-la.html
https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2015/03/02/practica-no33-
tiempo-de-coagulacion/
http://edurirom.blogspot.pe/2012/03/practica-no-3-determinacion-de.html
http://edurirom.blogspot.pe/2012/03/practica-no-4-cuenta-de-eritrocitos.html
http://practicashema.blogspot.pe/2015/02/recuento-de-hematies-practica-xiii-
del.html
http://aline-monserrat.blogspot.pe/2012/04/practica-7-determinacion-de-la.html
https://www.google.com.pe/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rja&
uact=8&ved=0ahUKEwiN-
azr59PXAhXCmOAKHdvvBKoQFggzMAI&url=http%3A%2F%2Fwww.labtestsonline.es%
2Ftests%2FRBC.html%3Ftab%3D3&usg=AOvVaw0HimO8TJWCExXVp8-uc775
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003644.htm
http://recuentodeplaquetas.blogspot.pe/2008/02/recuento-de-plaquetas.html
https://es.scribd.com/doc/95719682/2-Informe-de-Analisis-I-Recuento-de-Plaquetas
http://edurirom.blogspot.pe/2012/03/practica-no-6-recuento-de-plaquetas-con.html