Kit Elisa

BIOO ALIMENTOS Y ALIMENTACIÓN DE SEGURIDAD
Manual del Kit de avermectinas prueba ELISA

Catálogo #: 1073
Referencia #: 1073-01B
Este kit está fabricado con la norma internacional de calidad ISO 9001: 2008.
ISO CI #: SARA-2009-CA-0114 - Una
© Corp. Científico BIOO • 2014 V14.11

TABLA DE CONTENIDO
INFORMACIÓN GENERAL ................................................ ...................... 1
Descripción del producto ................................................ .................................. 1

Descripción general del procedimiento ................................................ .................................. 1
Contenido del kit, Almacenamiento y vida ........................................... .............. 2
La sensibilidad (límite de detección) ............................................. ........................ 2
Especificidad (Reactividad cruzada) ............................................ ........................ 3
Materiales necesarios no suministrado con el kit ......................................... 3
Advertencias y precauciones ............................................... ......................... 3
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA ................................................ .......................... 4
Alimentar ................................................. .................................................. ........ 4

Carne / pescado / camarón ............................................. ........................................ 5
Hígado ................................................. .................................................. ....... 5
Leche ................................................. .................................................. ........ 5
Orina / Suero ............................................... ............................................... 6
Vegetales ................................................. ................................................ 6
Agua ................................................. .................................................. ...... 6
Avermectinas ELISA KIT DE PRUEBA PROTOCOLO ................................... 7
Preparación del reactivo ................................................ ................................. 7

Protocolo de prueba de ELISA ............................................... .............................. 7
Cálculos La ivermectina Concentración ............................................... ..... 8
SOLUCIÓN DE PROBLEMAS ................................................. .............................. 9
Sin el desarrollo de color con o sin señales de Normas ............................. 9

Baja densidad óptica (DO) Lecturas ........................................... ............. 9
Fondo de alta o alta densidad óptica (DO) ..................... 9 lecturas
Alta varianza intra-placa ............................................. ......................... 10
Alta varianza entre placas ............................................. .......................... 10
Uno o más de los puntos de la curva estándar está fuera del alcance ............... 10
el MaxSignal ® Kit avermectinas prueba ELISA para la muestra de leche se destina para uso de laboratorio, a menos que se indique lo contrario. Este producto no
es para uso diagnóstico clínico. MaxSignal es una marca comercial registrada de Bioo Scientific Corporation (BIOO).
MaxSignal ® Avermectinas prueba ELISA Kit Manual - 1073-01B
INFORMACIÓN GENERAL INFORMACIÓN GENERAL
Descripción del producto
Las avermectinas son una serie de derivados de lactona macrocíclica de 16 miembros con propiedades antihelmínticas e insecticidas
potentes. Estos compuestos de origen natural se generan como productos de fermentación por Streptomyces avermitilis, un actinomiceto
del suelo. Las avermectinas incluyen ivermectina, abamectina, emamectina, eprinomectina y otros. Las avermectinas están ganando
creciente uso en formulaciones para el tratamiento de ganado. La ivermectina es un agente antiparasitario de amplio espectro y utiliza
tradicionalmente contra los gusanos. Se utiliza principalmente en los seres humanos, pero también se utiliza en la medicina veterinaria.
Se mezcla a veces con otros medicamentos para llegar a un amplio espectro de parásitos de animales. Otra forma importante de esta
familia, abermectin, ha demostrado ser muy eficaz y insectaside se ha registrado para su uso en muchos tipos de cultivos. Debido a
expensas y complicado proceso, la aplicación de HPLC y GC en su detección de residuos está restringido. el MaxSignal ® Kit de
avermectinas prueba ELISA permite a las agencias gubernamentales, los fabricantes de alimentos y organizaciones de control de
calidad para detectar la ivermectina, abamectina y otras avermectinas en la alimentación, carne, pescado, hígado, verduras, leche y
muestras de orina y para satisfacer las preocupaciones de los usuarios acerca de la seguridad alimentaria. el MaxSignal ® Kit de
avermectinas prueba ELISA proporciona un método de extracción único, que es exacta, rápida, rentable y fácil de usar. Las
características del kit son:
• La extracción de avermectinas de varias matrices con una alta tasa de recuperación del 75 - 95%.
• Un ensayo de ELISA rápido (menos de 2 horas independientemente del número de muestras).
• Alta reproducibilidad.
Descripción general del procedimiento
El método se basa en un ensayo ELISA colorimétrico competitivo. El fármaco de interés se ha revestido en los pocillos de la placa.
Durante el análisis, se añade la muestra a lo largo con el anticuerpo primario específico para el fármaco diana. Si el objetivo está
presente en la muestra, que competirán por el anticuerpo, evitando de ese modo el anticuerpo de unión al fármaco unido al pozo.
El anticuerpo secundario, marcado con una enzima peroxidasa, se dirige el anticuerpo primario que está complejado con el
medicamento recubierto en los pocillos de la placa. La intensidad del color resultante, después de la adición de sustrato, tiene una
relación inversa con la concentración diana en la muestra.
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Contenido del kit, Almacenamiento y vida
el MaxSignal ® Kit de avermectinas prueba ELISA tiene la capacidad para 96 determinaciones o ensayo de 42 muestras por
duplicado (suponiendo 12 pocillos para los estándares). Devolver los pocillos no utilizados a la bolsa de papel de aluminio y vuelva
a sellar con el desecante suministrado en el embalaje original. Almacenar el kit a 2-8 • DO*. La vida útil es de 12 meses cuando el
kit se almacena correctamente.
Contenido del kit Cantidad Almacenamiento
Avermectina recubiertas de placa de microtitulación 1 x placa de 96 pocillos (8 pocillos x 12 tiras) 2-8 • do

Normas de ivermectina:
Control negativo ( tubo de tapa blanca) 0,8 ml
0,5 ng / ml ( tubo de tapa amarilla) 0,8 ml
1.0ng / mL ( Tubo anaranjado cap) 0,8 ml
2-8 • C *
2 ng / ml ( tubo con tapón de rosa) 0,8 ml
4 ng / ml ( tubo con tapón morado) 0,8 ml
8 ng / ml ( azul tubo con tapón) 0,8 ml
1,200 ng / mL (spiking, opcional, tubo de tapa roja) 0,8 ml
Avermectina Anticuerpo # 1 12 ml 2-8 • C *
100X HRP-anticuerpo conjugado # 2 250 • L 2-8 • C *
Anticuerpo # 2 diluyente ** 20 ml 2-8 • do
10 veces de la muestra de tampón de extracción 28 ml 2-8 • do
Solución de lavado 20X ** 28 ml 2-8 • do
De tope ** 14 ml 2-8 • do
Sustrato TMB ** 12 ml 2-8 • do
Avermectina Clean Up Mix (opcional) *** 25 g 2-8 • do
Leche tampón de extracción I (Opcional) *** 10 ml 2-8 • do
Leche Extraction Buffer II (Opcional) *** 28 ml 2-8 • do
Avermectina Equilibrio Buffer I (Opcional) *** 10 ml 2-8 • do
Avermectina Equilibrio Buffer II (Opcional) *** 62 g 2-8 • do
Liver Extraction Buffer (Opcional) *** 20 ml 2-8 • do
* Si usted no está planeando utilizar el kit para el control 1 mes, almacenar Normas de ivermectina ,
Avermectina Anticuerpo # 1 , 100X HRP-anticuerpo conjugado # 2 a -20 • C preferiblemente o en un congelador.
** Los componentes con la misma parte de BIOO No hay dentro de sus fechas de caducidad son intercambiables entre los kits de BIOO.
* * * Estos componentes serán proporcionados solamente cuando los clientes requieren.
La sensibilidad (límite de detección)
Tipo de ejemplo Límite de detección ( ng / g o ppb)
Alimentar 3
Carne / pescado / camarón 2.5
Hígado 10
Leche 2.5
Orina / Suero 2.5
Vegetales 2.85
Agua 2.5

Especificidad (Reactividad Cruzada)
Moléculas Reactividad cruzada (%)

La ivermectina 100%
emamectina 100%
abamectina 113%
eprinomectina 100%
doramectina <1%
moxidectina <1%
Milbamycin <1%
Materiales necesarios no suministrado con el kit
• lector de placas de microtitulación ( 450 nm)

• Incubadora
• Mezclador de tejido ( por ejemplo Omni TissueMaster Homogeneizador)
• Mezclador Vortex ( por ejemplo Gneie mezclador Vortex a partir de VWR)
• 10, 20, 100 y 1000 • L pipetas

• pipeta multicanal: 50-300 • L ( Opcional)
• acetonitrilo
Advertencias y precauciones
BIOO recomienda encarecidamente que lea las siguientes advertencias y precauciones para garantizar su pleno
conocimiento de las técnicas de ELISA y otros detalles se debe prestar mucha atención a cuando se ejecutan los
ensayos. Más información también se puede encontrar en la sección Solución de problemas. Periódicamente,
optimizaciones y revisiones se realizan en el kit y manual. Por lo tanto, es importante seguir el protocolo que viene
con el kit. Si necesita ayuda adicional,
puede comunicarse tu local distribuidor o al BIOO
techsupport@biooscientific.com.
• Las normas contienen ivermectina. Manejar con especial cuidado.
• No utilice el kit después de la fecha de caducidad.
• No mezcle reactivos de diferentes kits o lotes a excepción de los componentes con la misma parte de nadie dentro de sus
fechas de caducidad. Los anticuerpos y las placas se KIT-LOT Y ESPECÍFICOS. Asegúrese de que el anticuerpo # 2 y el
diluyente se mezclan en volúmenes correctos.
• Trate de mantener una temperatura de laboratorio de 20 ° -25 ° C (68 ° -77 ° F). Evita ejecutar ensayos de debajo o cerca de
las salidas de aire, ya que esto puede causar un enfriamiento excesivo, de calefacción y / o evaporación. Además, no se
ejecutan los ensayos de la luz solar directa, ya que esto puede causar excesivo calor y la evaporación. mesas de trabajo en
frío debe ser evitado mediante la colocación de varias capas de toallas de papel o algún otro material de aislamiento bajo las
placas de ensayo durante la incubación.
• Asegúrese de que está utilizando sólo agua destilada o desionizada ya que la calidad del agua es muy importante.
• Cuando el pipeteado de muestras o reactivos en una placa de microtitulación de vacío, colocar las puntas de pipeta en la
esquina inferior del pozo, haciendo contacto con el plástico.
• Las incubaciones de placas de ensayo deben ser programados con tanta precisión como sea posible. Sea consistente
cuando se añade a los estándares de la placa de ensayo. Añadir sus normas primero y luego sus muestras.
• Añadir a la placa normas sólo en el orden de menor concentración a la alta concentración ya que esto reducirá al mínimo el
riesgo de comprometer la curva estándar.
• Siempre placas refrigere en bolsas selladas con un desecante para mantener la estabilidad. Evitar la formación de
condensación en las placas por lo que les alcancen la temperatura ambiente (20
- 25 • C / 68-77 • F) mientras que en el envase.
BIOO no ofrece garantías de ningún tipo, ya sea expresa o implícita, excepto que los materiales de que están hechos sus productos son de
calidad estándar. No hay ninguna garantía de comercialización de este producto, o de la idoneidad del producto para cualquier propósito.
BIOO no será responsable de ningún daño, incluyendo daño especial o consecuente, o gastos derivados directa o indirectamente del uso de
este producto.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Asegúrese muestras se almacenan correctamente. En general, las muestras deben ser refrigeradas a 2-4 ° C durante no más de
1-2 días. Congelar las muestras a un mínimo de -20 ° C si necesitan ser almacenados durante un período más largo. Las muestras
congeladas pueden ser descongeladas a temps de las habitaciones (20 - 25 • C / 68-77 • F) o en el refrigerador antes de su uso.
1. Preparación de 1X tampón de extracción de la muestra
Mezclar 1 volumen de 10 veces de la muestra de tampón de extracción con 9 volúmenes de agua destilada.
2. Preparación de 35% extracción con etanol / tampón de muestra:
Mezclar 3,5 volumen de 100% de etanol y 6,5 volúmenes de 1X tampón de extracción de la muestra
3. Preparación de 1X avermectina Equilibrio Buffer

Añadir 10 ml de la avermectina Equilibrio tampón I y 62 g de avermectina Equilibrio Buffer II (polvo) a una botella de plástico
de 250 mL. Añadir 190 ml de agua destilada a la botella, mezclar bien para obtener una solución homogénea.
Alimentar
1. Homogeneizar una cantidad razonable de muestra con un mezclador adecuado.
2. Pesar 1 g de la muestra homogeneizada. Añadir 5 ml de acetonitrilo, 2 ml de n-hexano (para

muestras de alto contenido de grasa), y 1 g de MgSO anhidro 4, vórtice 1 min a velocidad máxima y luego a rotorack durante
15 minutos.
3. Centrifugar durante 10 minutos a 4.000 x sol a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F).
4. Eliminar la capa de hexano tan completamente como sea posible. Tomar 1,2 ml de sobrenadante en
un nuevo tubo de 2 ml que contenía 250 mg de mezcla de avermectina Clean Up.

5. Agitar vigorosamente durante 1 minuto y se deja reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
Centrifugar la muestra durante 5 minutos a velocidad máxima a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F).
6. tomar 500 • L de sobrenadante a un tubo de 2 ml y el uso de un evaporador para secar la muestra a
50 • C bajo presión reducida. Alternativamente, la muestra puede ser secada por soplado de gas nitrógeno en un 50 • C
baño de agua.
7. Añadir 500 • L de 35% extracción con etanol / tampón de muestra al tubo de secado y vórtice
vigorosamente durante 2 minutos.
8. utilice 50 • L de la suspensión por pocillo en el ensayo de ELISA.

Nota: factor de dilución: 5 .

Carne / pescado / camarón
1. Homogeneizar una cantidad razonable de muestra con un mezclador adecuado.
2. Pesar 2 g de la muestra homogeneizada. Añadir 6 ml de acetonitrilo, 2 ml de n-hexano (para

muestras de alto contenido de grasa), y 1 g de MgSO anhidro 4, vórtice 1 min a velocidad máxima y luego a rotorack durante
15 minutos.
3. Centrifugar durante 10 minutos a 4.000 x sol a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F).
4. Eliminar la capa de hexano tan completamente como sea posible. Tomar 1,0 ml de sobrenadante en
un nuevo tubo de 2 ml que contenía 250 mg de mezcla de avermectina Clean Up.

5. Agitar vigorosamente durante 1 minuto y se deja reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
Centrifugar la muestra durante 5 minutos a velocidad máxima a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F).
6. tomar 400 • L de sobrenadante a un tubo de 2 ml y el uso de un evaporador para secar la muestra a
50 • C bajo presión reducida. Alternativamente, la muestra puede ser secada por soplado de gas nitrógeno en un 50 • C
baño de agua.
7. Añadir 500 • L de 35% extracción con etanol / tampón de muestra al tubo de secado y vórtice
vigorosamente durante 2 minutos.
8. utilice 50 • L de la suspensión por pocillo en el ensayo de ELISA.

Nota: factor de dilución: 5 .
Hígado
1. Pesar 2 g de muestra homogeneizada hígado, añadir 6 ml de acetonitrilo y 2,5 ml de 1X

Buffer Equilibrio avermectina
2. Vortex durante 3 minutos a velocidad máxima o agitar durante 20 minutos a un vórtex de múltiples tubos o
criba vibradora.
3. Añadir 200 • L de hígado de tampón de extracción, de vórtice durante 1 minuto.
4. Centrifugar durante 10 minutos a 4.000 x sol a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F),

transferencia 200 • L del sobrenadante a un nuevo tubo. Use un evaporador rotatorio para secar la muestra en un 50-60 • C
baño de agua bajo presión reducida. Alternativamente, la muestra puede ser secada por soplado de gas nitrógeno en un
50-60 • C baño de agua.

5. Añadir 1 ml de 35% extracción con etanol / tampón de muestra al tubo de secado y agitar vigorosamente
durante 1 minuto.
6. utilice 50 • L de la muestra para el ensayo.

Nota: factor de dilución: 20.
Leche
1. Para la leche normal con la grasa, la muestra de leche se centrifuga a 10.000 x sol durante 5 minutos o
4.000 x sol durante 30 minutos, se descarta la capa de grasa superior. Para la leche sin grasa, omita este paso.
2. Después de eliminar la grasa, tomar 2 ml de muestra de leche, añadir 6 mL de acetonitrilo y 0,1 ml de leche
Tampón de extracción I, agitar 5 segundos después de la leche de tampón de extracción I se añade a todas las muestras, y
a continuación, añadir 0,35 ml de leche Extraction Buffer II, vórtice manualmente a velocidad máxima durante 2 minutos o
agitar durante 10 minutos en un multi-vórtex o agitador .
3. Centrifugar a 4.000 x sol durante 10 minutos.
4. Transferencia de 0,4 ml del sobrenadante de acetonitrilo (que corresponde a 0,1 ml del original
muestra de leche) en un nuevo vial y el uso de un evaporador rotatorio para secar la muestra en un 50 • C baño de agua bajo
presión reducida. Alternativamente, la muestra puede ser secada por soplado de nitrógeno

gas en un 50 • C baño de agua.

5. Se disuelve el residuo seco en 0,5 ml de 35% extracción con etanol / tampón de muestra mediante agitación con vórtex
a velocidad máxima durante 1 minuto.
6. utilice 50 • L de la muestra por pocillo para el ensayo.

Nota: Factor de dilución: 5. El factor de dilución se puede cambiar a 1 si la transferencia de 2 ml de sobrenadante de
acetonitrilo en el Paso 4 en lugar de 0,4 ml.
Orina / Suero
1. Centrifugar la muestra de orina a la velocidad máxima durante 5 minutos.
2. transferencia 250 • L de sobrenadante a un nuevo tubo, añadir 1 ml de etanol al 35% Extracción / Sample
Buffer y 25 mg de mezcla de avermectina Clean Up, de vórtice durante 1 minuto, se colocan a temperatura ambiente durante
5 minutos.
3. Centrifugar a máxima velocidad durante 10 minutos.
4. utilice 50 • L del sobrenadante por pocillo para el ensayo.

Vegetales
método I
1. Pesar 1 g de muestra homogeneizada vegetal, añadir 2 ml de etanol, vórtice durante 3 minutos a

máxima velocidad o sacudida durante 10 minutos a un vórtex de múltiples tubos o agitador.
2. Centrifugar la muestra a la velocidad máxima durante 10 minutos.
3. transferencia 500 • L de sobrenadante a un nuevo tubo, añadir 450 • L de 1X Muestra de tampón de extracción,
mezclar bien.

Nota: factor de dilución: 5,7.
método II
1. Pesar 1 g de muestra homogeneizada vegetal, añadir 4 ml de etanol, vórtice durante 3 minutos a

máxima velocidad o sacudida durante 10 minutos a un vórtex de múltiples tubos o agitador.
2. Centrifugar la muestra a la velocidad máxima durante 10 minutos.
3. transferencia 500 • L de sobrenadante a un nuevo tubo, añadir 100 • L de etanol y 900 • L de 1X

Ejemplo de tampón de extracción, mezclar bien.

Agua
1. Centrifugar 1 ml de muestra de agua a 4000 x sol durante 5 minutos.
2. transferencia 200 • L de sobrenadante a un nuevo tubo ya precargado con 450 • L de 1X Muestra

Extraction Buffer y 350 • L de etanol. Vortex durante 30 segundos y se centrifuga a la velocidad más alta disponible durante 1
minuto a temperatura ambiente.
Nota: Factor de dilución: 5. (para detectar menor concentración de avermectina, el factor de dilución se puede cambiar a
1,67 mediante la mezcla de 600 • L de sobrenadante con 50 • L de 10 veces de la muestra de tampón de extracción y 350 • L de
etanol.

Avermectinas ELISA TEST protocolo

Avermectinas ELISAdelTEST
kit protocolo del kit
Preparación de los reactivos
IMPORTANTE: Todos los reactivos deben ser llevados hasta la temperatura ambiente antes de usar (1 - 2 horas a 20 - 25 • C
/ 68-77 • F); Asegúrese de leer la sección “Advertencias y precauciones” en la página 3. Las soluciones deben prepararse
justo antes de la prueba de ELISA. • Todos los reactivos deben mezclarse invirtiendo suavemente o girando antes de su uso .
Preparar volúmenes necesarios para el número de pozos en ejecución. No devolver los reactivos a los tubos Stock originales /
botellas. El uso de depósitos desechables cuando reactivos de manipulación pueden minimizar el riesgo de contaminación y se
recomienda.
1. Preparación de 1X conjugado con HRP de anticuerpos # 2
Mezclar 1 volumen de 100X conjugado con HRP de anticuerpos # 2 con 99 volúmenes de anticuerpo # 2 diluyente.
2. Preparación de Solución de Lavado 1X
Mezclar 1 volumen de la solución de lavado 20X con 19 volúmenes de agua destilada
Protocolo de prueba de ELISA
Etiquetar las tiras individuales que serán utilizados y reactivos alícuotas como el siguiente ejemplo:
Componente Volumen por reacción 24 Reacciones
Avermectina Anticuerpo # 1 100 • L 2,4 ml

1X-HRP conjugado de anticuerpos # 2 150 • L 3,6 ml
Solución de Lavado 1X 2,0 ml 48 ml
De tope 100 • L 2,4 ml
Sustrato TMB 100 • L 2,4 ml
1. Añadir 50 • L de cada estándar ivermectina por duplicado en distintos pocillos ( • Añadir a las normas
placa sólo en el orden de baja concentración a la alta concentración).
2. Añadir 50 • L de cada muestra por duplicado en diferentes pocillos de muestra.
3. Añadir 100 • L de la avermectina de anticuerpos # 1 a cada pocillo y mezclar bien agitando suavemente la
placa manualmente durante 1 minuto.
4. Incubar la placa durante 30 minutos a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F). •
5. A fondo decantar o solución aspirado de los pocillos y desechar el líquido. Lavar la placa 3
veces con 250 • L de 1X disolución de lavado. Después del último lavado, invierta la placa y golpear suavemente la placa
sobre toallas de papel seco ( • Realizar el siguiente paso inmediatamente después de los lavados de las placas. No permita que la
placa se seque al aire entre los pasos de trabajo).
6. Añadir 150 • L de 1X HRP-anticuerpo conjugado # 2. Incubar la placa durante 30 minutos a la habitación

temperatura ( 20 - 25 • C / 68-77 • F) ( • • Evitar la luz solar directa y mesas de trabajo en frío durante la incubación. Cubrir la
placa de microtitulación, mientras que se recomienda incubación).
7. A fondo decantar o solución aspirado de los pocillos y desechar el líquido. Lavar la placa 3
veces con 250 • L de 1X disolución de lavado. Después del último lavado, invierta la placa y golpear suavemente

la placa seca sobre toallas de papel ( • Realizar el siguiente paso inmediatamente después de los lavados de las placas. No permita
que la placa se seque al aire entre los pasos de trabajo).
8. Añadir 100 • L de substrato TMB. Tiempo la reacción inmediatamente después de añadir el sustrato.
Mezclar la solución agitando suavemente la placa manualmente durante 1 minuto, mientras que la incubación de ( • • No
ponga cualquier sustrato de vuelta al recipiente original para evitar cualquier posible contaminación. Cualquier solución de sustrato
que presenta la coloración es indicativo de deterioro y debe desecharse. Cubrir la placa de microtitulación, mientras que se
recomienda incubación).
9. Después de incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F), añadir 100 • L
para Stop Buffer para detener la reacción enzimática.
10. Leer la placa tan pronto como sea posible después de la adición de tope en un lector de placas
con 450 nm longitud de onda ( • Antes de leer, utilice una bayeta sin pelusa en la parte inferior de la placa para asegurar que no la
humedad o las huellas dactilares interfieren con las lecturas).
Cálculos de concentración Ivermectina
Una curva estándar se puede construir mediante el trazado de la absorbancia relativa media (%) obtenido a partir de cada
estándar de referencia contra su concentración en ng / ml en una curva logarítmica.
La absorbancia relativa (%) = estándar de absorbancia (o muestra) x 100

estándar absorbancia cero
Utilice los valores de absorbancia relativa media para cada muestra para determinar la concentración correspondiente del
fármaco ensayado en ng / ml a partir de la curva estándar. Un programa especial con funciones de Excel, MaxSignal ® Programa
de Análisis de ELISA en Excel, está disponible a petición de evaluar la MaxSignal ® prueba de ELISA
resultados. Por favor, póngase en contacto con su distribuidor o
techsupport@biooscientific.com para más información.
La siguiente figura es una curva estándar típica ivermectina.
(LN) Ivermectina
90
La absorbancia relativa (%)
70
50
30
10
0.10 1.00 10.00
ng Standard / mL curva estándar

SOLUCIÓN DE PROBLEMAS SOLUCIÓN DE PROBLEMAS
Sin el desarrollo de color con o sin señales de Normas
Posibles causas Acción sugerida

Los reactivos se utilizan en el orden equivocado o
Siga el protocolo cuidadosamente y repetir el ensayo.
se ha omitido un paso.
Se utilizaron anticuerpos equivocado, o Asegúrese de que los anticuerpos utilizados son los que vienen con el kit. Todos los anticuerpos son kit- y
anticuerpo # 2 se preparó de forma incorrecta o específica del lote. Asegúrese de que el anticuerpo # 2 y el diluyente se mezclan en volúmenes correctos.
se ha deteriorado.
sustrato TMB se ha deteriorado. Use un nuevo conjunto de sustrato TMB BIOO.
Baja densidad óptica (DO) Lecturas

Los reactivos han caducado o se mezclan con un
Verificar las fechas de caducidad y números de lote.
número de lote diferente.
La solución de lavado se preparó de forma

Utilice la solución de lavado para el kit y asegúrese de que está preparado correctamente.
incorrecta.
Demasiado se utilizaron muchos ciclos de lavado. Asegúrese de utilizar el número de lavados por la instrucción protocolo.
Los tiempos de incubación fueron demasiado cortos. Tiempo de cada placa por separado para asegurar tiempos de incubación precisos, seguir el protocolo.
Mantener la temperatura ambiente del laboratorio dentro de 20 ° -25 ° C (68 ° -77 ° F). No ejecutar ensayos bajo
temperatura Lab era demasiado bajo.
rejillas de aire acondicionado o cerca de ventanas frías.
Reactivos y placas eran demasiado frío. Hacer placas seguro y reactivos son llevados hasta la temperatura ambiente. Mantener el
los componentes del kit de la caja kit durante al menos 1 hora antes de comenzar el ensayo.
Lector estaba en la longitud de onda equivocado, o Asegúrese de que la longitud de onda es de 450 nm para el ensayo y se lee la placa de nuevo. Verificar calibración
el lector estaba funcionando mal. lector y alineación de la lámpara.
Comprobar los registros para ver cuántas veces ha completado un ciclo el kit de la nevera. Compruebe si el equipo se
se ha producido un estrés excesivo kit.
quedó a temperaturas extremas durante demasiado tiempo.
Siempre placas refrigere en bolsas selladas con un desecante para mantener la estabilidad. Evitar la
se vieron comprometidas placas de ensayo.
formación de condensación en las placas por lo que les equilibrar a temperatura ambiente (20 - 25 • C /
68-77 • F) mientras que en el envase.
Antecedentes alta o lecturas de alta densidad óptica (DO)

Se usó agua de mala calidad en la solución de Si la calidad del agua es cuestionable, trata de sustituir una fuente de agua alternativa destilada para preparar
lavado. la solución de lavado.
La solución de sustrato se ha deteriorado. Asegúrese de que el sustrato es incoloro antes de la adición a la placa.
Utilice el número de lavados por la instrucción protocolo. Asegúrese de que al menos 250 • L de solución de
No había lavado insuficiente o mal lavado se dispensa por pocillo por lavado. Verificar el rendimiento del sistema de limpieza; tener el sistema
desempeño de la lavadora. reparadas si cualquier puerto goteo, dispensar o aspirado mal.
Lector estaba funcionando mal o no blanqueó

correctamente. Esta es una gran posibilidad si Compruebe el rendimiento del lector usando una placa de calibración y comprobar la alineación de la lámpara.
las lecturas de DO eran altos y el color fue la Verificar el procedimiento de supresión, en su caso, y reblank.
luz.
Mantener la temperatura ambiente dentro de 20 ° -25 ° C (68 ° -77 ° F). Evitar ensayos cerca de fuentes de calor o
temperatura Lab era demasiado alto.
de la luz solar directa en funcionamiento.
Los reactivos se entremezclan,

Asegúrese de que se utilizaron los reactivos correctos, que las soluciones de trabajo se prepararon
contaminados o preparados de forma
correctamente y no se ha producido la contaminación.
incorrecta.

Varianza alta intra-placa

tiempo inconsistente fue tomada cuando la adición Asegúrese de que todos los materiales están configurados y listos para usar. Utilice una pipeta multicanal para añadir
de estándares, reactivos o muestras a la placa de reactivos a múltiples pozos siempre que sea posible. No interrumpa mientras que la adición de estándares, reactivos y
ensayo. muestras.
Pipeta multicanal no funcionaba Verificar la calibración de pipetas y comprobar que las puntas están apretados. Asegúrese de que todos los canales de la
correctamente. pipeta dibujan y dispensar volúmenes iguales.
No había lavado inconsistente o mal funcionamiento Comprobar el rendimiento del sistema de lavado. Haga que el sistema reparado si los puertos de goteo o dispensar
del sistema de la lavadora. / aspirado mal.
Alta varianza entre placas

tiempos de incubación inconsistentes se
Tiempo de cada placa por separado para asegurar tiempos de incubación consistentes.
produjeron de placa a placa.
Asegúrese de utilizar el número de lavados por la instrucción protocolo. Verificar el rendimiento del sistema
lavado inconsistente ocurrió de placa a
de lavado y tiene el sistema reparado si cualquier puerto de goteo o dispensan / aspirado mal.
placa.
Comprobar la calibración de pipetas. Verificar que la pipeta consejos están apretados antes de usar y que todos los
Pipeta estaba funcionando incorrectamente.
canales atraen y dispensar volúmenes iguales.
Asegúrese de que para que haya tiempo suficiente para placas kit, reactivos, estándares y muestras alcancen la
Kit de placas, reactivos, patrones y las muestras temperatura ambiente (20 - 25 • C / 68-77 • F). volúmenes más grandes requerirán más tiempo de equilibrio. Si se
fueron a diferentes temperaturas. utiliza un baño de agua para acelerar el equilibrio, asegúrese de que se mantiene a temperatura ambiente; no utilice
un baño de agua caliente para calentar los reactivos, muestras y los patrones del kit.
etiquetar cuidadosamente cada reactivo para asegurarse de que los reactivos no están entremezclados. Kits con
Los reactivos utilizados fueron mezclados de diferentes fechas de vencimiento pueden generar diferente gama de lecturas de DO, sin embargo, los valores de
diferentes lotes de kits, o los kits eran de diferentes absorbancia relativos pueden muy bien ser comparable. En general, un valor de menos de 0,6 en la lectura estándar
fechas de vencimiento. cero puede indicar ciertos grados de deterioro de los reactivos.
Uno o más de los puntos de la curva estándar están fuera de rango

Normas se añadieron en mal Seguir el protocolo y volver a ejecutar el ensayo. Asegúrese de que las normas se aplican y se registran
ordenar o grabado en la posición incorrecta. correctamente.
Normas fueron contaminados o Use un nuevo conjunto de normas. Añadir a la placa normas sólo en el orden de menor concentración a
mezclados con otras normas. alta concentración.
No había lavado inconsistente o mal funcionamiento Realizar lavado consistente. Comprobar el rendimiento del sistema de lavado. Haga que el sistema reparado
del sistema de la lavadora. si los puertos de goteo o dispensar / aspirado mal.
Asegúrese de que todos los materiales están configurados y listos para usar. Añadir a la placa normas sólo en el orden
inconsistente en el tiempo se tomó para agregar
de menor concentración a la alta concentración a un ritmo ininterrumpido. Usar una pipeta multicanal para añadir
patrones y reactivos a la placa.
reactivos a múltiples pozos simultáneamente.
Pipeta multicanal no funcionaba Verificar la calibración de pipetas y comprobar que las puntas están apretados. Asegúrese de que todos los canales de la
correctamente. pipeta dibujan y dispensar volúmenes iguales.
Bioo Scientific Corporation 7050 Hecho en EE.UU. BIOO para Alimentos y Piensos
Burleson carretera Austin, TX 78744 Productos de seguridad info@biooscientific.com
EE.UU. Tel: 1.888.208.2246 Fax: foodfeedsafety@biooscientific.com
(512) 707 a 8122 www.biooscientific.com

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BIOO ALIMENTOS Y ALIMENTACIÓN DE SEGURIDAD

Manual del Kit de avermectinas prueba ELISA

© Corp. Científico BIOO • 2014 V14.11

INFORMACIÓN GENERAL ................................................ ...................... 1

Descripción del producto ................................................ .................................. 1

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA ................................................ .......................... 4

Alimentar ................................................. .................................................. ........ 4

Avermectinas ELISA KIT DE PRUEBA PROTOCOLO ................................... 7

Preparación del reactivo ................................................ ................................. 7

SOLUCIÓN DE PROBLEMAS ................................................. .............................. 9

Sin el desarrollo de color con o sin señales de Normas ............................. 9

INFORMACIÓN GENERAL INFORMACIÓN GENERAL

Descripción del producto

• Un ensayo de ELISA rápido (menos de 2 horas independientemente del número de muestras).

Descripción general del procedimiento

relación inversa con la concentración diana en la muestra.

BIOO ALIMENTOS Y ALIMENTACIÓN DE SEGURIDAD • WWW.BIOOSCIENTIFIC.COM 1

Contenido del kit, Almacenamiento y vida

Contenido del kit Cantidad Almacenamiento

Avermectina recubiertas de placa de microtitulación 1 x placa de 96 pocillos (8 pocillos x 12 tiras) 2-8 • do

10 veces de la muestra de tampón de extracción 28 ml 2-8 • do

Solución de lavado 20X ** 28 ml 2-8 • do

Sustrato TMB ** 12 ml 2-8 • do

Avermectina Clean Up Mix (opcional) *** 25 g 2-8 • do

Leche tampón de extracción I (Opcional) *** 10 ml 2-8 • do

Leche Extraction Buffer II (Opcional) *** 28 ml 2-8 • do

Avermectina Equilibrio Buffer I (Opcional) *** 10 ml 2-8 • do

Avermectina Equilibrio Buffer II (Opcional) *** 62 g 2-8 • do

Liver Extraction Buffer (Opcional) *** 20 ml 2-8 • do

* * * Estos componentes serán proporcionados solamente cuando los clientes requieren.

La sensibilidad (límite de detección)

Tipo de ejemplo Límite de detección ( ng / g o ppb)

BIOO ALIMENTOS Y ALIMENTACIÓN DE SEGURIDAD • WWW.BIOOSCIENTIFIC.COM 2

Especificidad (Reactividad Cruzada)

Moléculas Reactividad cruzada (%)

Materiales necesarios no suministrado con el kit

• lector de placas de microtitulación ( 450 nm)

• 10, 20, 100 y 1000 • L pipetas

• Las normas contienen ivermectina. Manejar con especial cuidado.

• No utilice el kit después de la fecha de caducidad.

diluyente se mezclan en volúmenes correctos.

placas de ensayo durante la incubación.

esquina inferior del pozo, haciendo contacto con el plástico.

riesgo de comprometer la curva estándar.

- 25 • C / 68-77 • F) mientras que en el envase.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1. Preparación de 1X tampón de extracción de la muestra

2. Preparación de 35% extracción con etanol / tampón de muestra:

3. Preparación de 1X avermectina Equilibrio Buffer

1. Homogeneizar una cantidad razonable de muestra con un mezclador adecuado.

2. Pesar 1 g de la muestra homogeneizada. Añadir 5 ml de acetonitrilo, 2 ml de n-hexano (para

3. Centrifugar durante 10 minutos a 4.000 x sol a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F).

un nuevo tubo de 2 ml que contenía 250 mg de mezcla de avermectina Clean Up.

6. tomar 500 • L de sobrenadante a un tubo de 2 ml y el uso de un evaporador para secar la muestra a

8. utilice 50 • L de la suspensión por pocillo en el ensayo de ELISA.

BIOO ALIMENTOS Y ALIMENTACIÓN DE SEGURIDAD • WWW.BIOOSCIENTIFIC.COM 4

Carne / pescado / camarón

1. Homogeneizar una cantidad razonable de muestra con un mezclador adecuado.

2. Pesar 2 g de la muestra homogeneizada. Añadir 6 ml de acetonitrilo, 2 ml de n-hexano (para

3. Centrifugar durante 10 minutos a 4.000 x sol a temperatura ambiente ( 20 - 25 • C / 68-77 • F).

un nuevo tubo de 2 ml que contenía 250 mg de mezcla de avermectina Clean Up.

6. tomar 400 • L de sobrenadante a un tubo de 2 ml y el uso de un evaporador para secar la muestra a

8. utilice 50 • L de la suspensión por pocillo en el ensayo de ELISA.