INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LICENCIATURA EN BIOLOGÍA

UNIDAD DE APRENDIZAJE

ECOTOXICOLOGÍA Y CONTAMINACIÓN ACUÁTICA

Prueba de toxicidad aguda (48 hrs.) con Artemia franciscana

ALUMNO:

Nolasco Cruz Fernando

FECHA DE ENTREGA: 14 de Junio de 2017

Introducción

El uso de la Artemia franciscana se ha extendido en las investigaciones de

toxicología aplicada debido a su disponibilidad comercial de quistes secos, los
cuales pueden eclosionar en condiciones estandarizadas en un laboratorio de
bioensayos de toxicidad (Sogeloos et al. 1987, Nunes et al. 2006, Carballo et al.
2010, Fuentes et al. 2011, Kokkali et al. 2011). Las investigaciones
ecotoxicológicas con A franciscana se iniciaron desde 1975 en Bélgica (Artoxkit,
1990) y a pesar de la abundante literatura relacionada con la relación dosis-efecto
de un producto químico aplicado a ella, no es hasta 1981 que se desarrolla el
primer ensayo estandarizado de ecotoxicología marina: el ensayo ARC, que es un
ensayo de 24 y 48 horas para determinar la concentración letal media (CL50) en
nauplios de instares II y III. La confiabilidad y precisión de este ensayo fue
investigada durante un extenso ejercicio de calibración donde participaron 80
laboratorios americanos y europeos, dando resultados muy satisfactorios (Artoxkit,
1990).

La A franciscana tiene una gran importancia en la industria acuícola por sus

resultados en la alimentación de larvas de peces y crustáceos (Delbare et al.
1995), pero además ha sido utilizada como un sistema de prueba para medir
toxicidad de sustancias químicas, biológicas y para estudios en el desarrollo de la
toxicología (Borowitz y McLaughlih 1999, Fuentes et al. 2011). Entre los criterios
que avalan esta propuesta encontramos que: se puede colectar poblaciones
homogéneas de nauplios del instar I metanauplial, inmediata caracterización del
desarrollo por simples técnicas de medición y demostrar vulnerabilidad diferencial
de nauplios durante su desarrollo (Sleet y Brandel 1985). Se afirma que la A
franciscana cubre ampliamente todos los requisitos de disponibilidad segura,
métodos sencillos de obtención, europlasticidad y versatibilidad en el uso, ya que
los nauplios son fáciles de obtener a través de quistes secos que se encuentran
disponibles en cualquier parte del mundo (Lavens y Sorgeloos 1996, Nunes et al.
2006).

Los ensayos de toxicidad con A franciscana permiten determinar la letalidad

potencial de sustancias químicas puras, aguas residuales domésticas e
industriales, lixiviados, aguas superficiales o subterráneas, agua potable y agua de
poro de sedimentos, toxinas, entre otros (Barahona y Sánchez-Fortún, 1996,
Svensson et al. 2005, Pelka et al. 2000, Koutsaftis y Aoyama 2007).
El objetivo del presente trabajo es evaluar la calidad de sedimentos superficiales
marinos en nueve sitios de muestreo del golfo de Guacanayabo, mediante el
empleo de una prueba de toxicidad aguda, utilizando A franciscana durante 48 hr.

Hipótesis

Se espera que en la prueba de toxicidad aguda con Artemia franciscana el número

de individuos por replica a concentraciones altas del toxico (3-4-DCA) el
porcentaje de mortalidad sea superior al 50% en 48 horas y en el testigo que al
menos el 90% de los organismos deben de estar vivos.

Resultados

Tabla 1. Resultados y promedio de las CL50 (mg/L) y límites de confianza para Artemia
franciscana

Alumno CL50 Límite inferior 95% Límite superior 95%

Fernando 0.87153 0.38959 1.99957

Ana 1.16484 0.75596 1.99129
Johaly 0.92882 0.67901 1.28687
Maricruz 1.02575 0.65174 1.69031
Mehida 1.54769 0.62997 18.40554
Brenda 1.52031 0.75644 5.00376
Oscar 1.66487 0.97777 4.42216
Mariana 4.45752 4.45752 4.45752
Anabel 1.71956 1.50259 2.00479

Promedio 1.655654444 1.200065556 4.584645556

Tabla 2. Resultados y promedio de las CL50 (mg/L) y límites de confianza para Artemia
franciscana, sin incorporar los datos obtenidos por Mariana y Mehida.

Alumno CL50 Límite inferior 95% Límite superior

95%

Fernando 0.87153 0.38959 1.99957

Ana 1.16484 0.75596 1.99129
Johaly 0.92882 0.67901 1.28687
Maricruz 1.02575 0.65174 1.69031
Mehida 1.54769 0.62997 18.40554
Brenda 1.52031 0.75644 5.00376
Oscar 1.66487 0.97777 4.42216
Mariana 4.45752 4.45752 4.45752
Anabel 1.71956 1.50259 2.00479

Promedio 1.270811429 0.816157143 2.628392857

120

100
% de mortlidad

80

60

40

20

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Concentraciones de 3-4 DCA (mg/L)

Fig. 1.- Porcentaje de mortalidad de Artemia franciscana a las 48 horas, con respecto a
las distintas conncetraciones de 3-4 DCA.
 120

100
% de supervivencia a

80

60

40

20

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Concentraciones de 3-4 DCA (mg/L)

Fig. 2.- Porcentaje de supervivencia de Artemia franciscana con respecto a las 48 horas,
con respecto a las distintas conncetraciones de 3-4 DCA.

5
4.5
4
Intervalos de confianza

3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
CL50 de cada alumno tomando de referencia los numeros 1,2,3,4,5,6,7,8 y 9 para
cada integrante

Fig. 3.- Cl50 obtenida de cada alumno tomando como referencia los nombres de la tabla 3,
en elgrafico se observa una linea de color rojo que corresponde al valor promedio del
limite superior y una línea de color azul que corresponde al valor promedio del límite
inferior.

Tabla 3.- Asignación de un número para cada integrante.

Fernando 1 Mehida 5
Ana 2 Brenda 6
Johaly 3 Oscar 7
Maricruz 4 Mariana 8
Anabel 9
 3

Intervalos de confianza 2.5

1.5

0.5

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Cl 50 de cada alumno tomando como referencia los datos 1,2,3,4,5,6 y7 para cada
integrante

Fig. 4.- Cl50 obtenida de cada alumno tomando como referencia los nombres de la tabla 4,
en elgrafico se observa una linea de color rojo que corresponde al valor promedio del
limite superior y una línea de color azul que corresponde al valor promedio del límite
inferior, en donde no se contemplan los datos de la alumna Mariana ni Mehida.

Tabla 4.- Asiganación de un número para cada integrante.

Fernando 1 Maricruz 4
Ana 2 Brenda 5
Johaly 3 Oscar 6
Anabel 7

Discusión

En la fig.1 se observa que a mayor concentración del toxico, mayor es el índice de

mortalidad, donde se visualiza que la mortalidad media de Artemia franciscana se
encuentra entre los valores 0.8 y 1.6 mg/L de 3-4 DCA, alcanzando así una
mortalidad total en la concentración de 3.2 mg/L de 3-4 DCA, también se logra ver
que a la concentración 0 del tóxico que corresponde a nuestro testigo el
porcentaje de mortalidad es 0, por lo que el criterio de validación de la prueba se
cumple, debido a que ésta estipula que en el testigo el 90% de los organismos
deben de estar vivos por lo que se cumple el criterio de aceptación.

En la fig.2 se logran interpretar los datos correspondientes al porcentaje de

supervivencia con respecto a las diferentes concentraciones, en donde a menor
concentración del tóxico mayor es el porcentaje de supervivencia de Artemia
franciscana, también se observa que el valor medio de la supervivencia se
encuentra entre las concentraciones de 0.2 y 0.4 mg/L de 3-4 DCA, mientras que a
la concentración de 3.2 mg/L de 3-4 DCA, la supervivencia de Artemia franciscana
es 0, el uso de este organismo en métodos de prueba en la evaluación de un
tóxico nos proporciona datos de supervivencia y mortalidad que pueden indicar
que tan perjudicial es un toxico en un cuerpo de agua (Bustos-Obregon et al.
2010).

Fig.3 y 4 se interpretan los valores correspondientes a la CL50 que cada alumno

cálculo de manera individual comparando los datos entre sí, donde en la fig.3 los
cálculos correspondientes al promedio de los límites de confianza son más
amplios y esto se debe a que las alumnas Mariana y Mehida tienen datos
equívocos para la validación de la prueba (véase tabla 2}. Por lo que la
interpretación del gráfico de la fig.3 algunos valores de las CL 50 para los alumnos
Fernando (1), Johaly (3), Maricruz (4) quedan fuera de los límites de confianza del
límite inferior, mientras que la CL50 de Mariana (8) es muy alta en comparación
con las CL50 de los ensayos elaborados por los demás compañeros, mientras que
los valores de las CL50 para los compañeros Ana (2), Mehida (5), Brenda (6),Oscar
(7) y Anabel (9) quedan dentro de los límites de confianza y además guardan una
tendencia cercana en los valores de las CL50 que calcularon.
Posiblemente el error que llevo a que Mariana y Mehida tuvieran esos datos, se
deba al mal conteo de individuos de Artemia franciscana al momento de
incorporarlos a los recipientes de plástico al iniciar la prueba, otra posible causa es
quizá la mala interpretación de individuos en si era afectado o estaba muerto, otro
factor puede ser el mal manejo de los organismos, provocando una alteración
negativa en los mismos acelerando la muerte de estos, un factor más puede ser el
hecho de que en la solución donde se encontraban los organismo se haya
incorporado material no propio del ensayo por ejemplo partículas de polvo o
pelusa, que hizo que los organismos quedaran atrapados, provocando
aletargamiento y estrés en los mismos acelerando su muerte, no se sabe a ciencia
cierta qué fue lo que ocurrió, de lo que si se está seguro es que los ensayos
elaborados por Mariana y Mehida, no cumplen con los criterios de validación de la
prueba por lo que los datos los descartamos para no generar un mayor error en la
interpretación de los resultados como se observa en la fig.4, al no estar presentes
los datos de Mariana y Mehida, los valores promedio de los imites de confianza
presentan un rango más estrecho, donde también se logra interpretar que los
valores de las CL50 para todos los alumnos Fernando (1), Ana (2), Johaly (3),
Maricruz (4), Brenda (5), Oscar (6) y Anabel (7) se encuentran dentro del rango
que marcan los límites de confianza, por lo que podría esperarse que los ensayos
elaborados por los compañeros se hicieron de la manera adecuada aceptando la
validación de la elaboración de los ensayos de los compañeros ya mencionados.

Conclusiones

Los resultados del trabajo dan evidencia de la aplicación del bioensayo de

toxicidad con Artemia franciscana para la evaluación de un tóxico además
demuestra ser un bioindicador ecotoxicológico apropiado para ambientes
acuáticos y es una importante herramienta para estudios toxicológicos futuros.
A concentraciones más altas del tóxico (3-4 DCA) mayor tasa de mortalidad y
menor tasa de supervivencia, mientras que a menor concentración del tóxico
mayor supervivencia y menor tasa de mortalidad de Artemia franciscana.

A las concentraciones de 3.2 mg/L la mortalidad es total de Artemia franciscana.

Una mal manejo del equipo de laboratorio, mala interpretación de los resultados y
una mala elaboración del ensayo generan datos erróneos que pueden repercutir
en el rechazo de la prueba elaborada.

Bibliografía

Artoxkit, M. 1990. Artemia toxicity screening test for estuarine and marine waters.
Standard Operational Procedure. Creasel, Deinze, Bélgica. 22 pp.

Barahona, M.V. & S. Sánchez-Fortún. 1996. Comparative sensitivity of three age

classes of Artemia salina larvae to several phenolic compounds. Bull. Environ.
Contam. Toxicol., 56: 271-278.

Borowitz, J.L. & J.L McLaughlin. 1999. Evidence for calcium channels in brine
shrimp: Diltiazem protects shrimp againt cadmium. In: Bull. Environ. Contam.
Toxicol.. Prudue Univ., Sch Phar. And Pharm. Sci., USA. 48 : 435-440.

Delbare, D., P. Lavens & P. Sorgeloos. 1995. Clownfish as a reference model for
nutritional experiments and determination of egg/larval quality. In: Larvi”95-Fish
and Shellfish larviculture symposium. P Laven, E.jaspers and I. Roelants (Eds): 22-
25.Gent, Belgium.

Lavens, P & P. Sorgeloos. 1996. Manual on the production and use of line food for
aquaculture. Artemia Reference Center. Unive. Gent, Belgium. 380 pp.

Sleet, R.B. & K. Brandel. 1985. Homogeneous population of Artemia nauplio and
their potential use for “in vitro” testing in developmental toxicology in: Teratology in:
Teratog. Carcinog. Mutag. 5: 41-54. Inst. Toxicol. USA.

Sorgeloos, P. et al. 1987. Artemia research and it applications. Morphology,

genetics. Strain characterization, toxicology. Universa Press. Belgium. 300 pp.