Facultad de Ciencias Básicas

Programa de Biología

ESTIMACIÓN DEL CRECIMIENTO CELULAR POR MÉTODOS INDIRECTOS

(TURBIDIMETRÍA)
Jorge L. Acuña1, Abimael J. Ariza1 & Juana C. Peralta1
1
Estudiantes del Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del Atlántico Km 7
Antigua vía Puerto Colombia
jluisacuna@mail.uniatlantico.edu.co
RESUMEN
En esta práctica de laboratorio se analizó la turbidez de un medio mediante el espectrofotómetro. Con la
finalidad de estudiar y estimar el crecimiento bacteriano. Se tuvieron en cuenta como objetivo de
profundización las diferentes muestras, tales como: caldo nutritivo, caldo nutritivo más bacterias, caldo
nutritivo más bacteria más inhibidor y por último el conjunto de medio, bacteria, inhibidor más muestra
problema.
Palabras claves: turbidez, dilución, crecimiento, espectrofotómetro, bacterias.

INTRODUCCIÓN el crecimiento bacteriano mediante un análisis del

La estimación y el control del crecimiento celular en
algunos tipos de trabajos experimentales es
utilizada en la turbidimetría, cuando las células se
multiplican en un medio líquido, el mismo se tiende
a tornarse turbio o nebuloso por la cantidad de
células y el instrumento que es utilizado para medir
este efecto es el espectrofotómetro o bien conocido
como el colorímetro.
En este equipo un haz de luz se transmite a través
de la muestra a una celda fotoeléctrica y cuando el
número de células tiende a aumentar, esta luz se
dispersa y menos luz alcanza la celda fotoeléctrica.
El resultado de este proceso se registra en el
instrumento como porcentaje de transmisión o
absorbancia.
Las diluciones, son un factor clave para la correcta
determinación del desarrollo de las células en el
medio, las cuales son depositadas en tubos
Eppendorf, para así poder aplicar los tipos de
diluciones, sean seriadas u otro mecanismo, y el
pipeteo llevado a cabo con las micro pipetas, el
óptimo manejo de estos instrumentos condicionan
los mejores resultados al momento de ser evaluados
en el espectrofotómetro.
Con este ejercicio de laboratorio se puso en
práctica el método correcto para aplicar la
turbidimetría, con el propósito de conocer y estimar
comportamiento de la biomasa celular.
METODOLOGÍA
En un plato de 96 pocillos, enumerado de forma
horizontal de 1 a 4 y de forma vertical de la letra A
hasta la D, se colocó un Eppendorf en su lugar
correspondiente.
En la primera fila del grupo 1 se agregó 500μL del
medio de cultivo con la micro pipeta de 1000μL a
cada Eppendorf, en la segunda fila del grupo 2 se
agregaron 440μL de cultivo más 60μL de E. Coli con
la micro pipeta de 100μL, en la tercera fila del grupo
3 se agregó (440)μL de cultivo más (60)μL de
bacterias (E. Coli) más (20)μL de inhibidor, en la
cuarta y última fila del grupo 4 se agregó (440)μL de
cultivo más (60)μL de bacterias (E. Coli) más (20)μL
de inhibidor más el problema asignado por el
profesor (20)μL.
Se procedió a hacer una dilución de 1/20 por cada
columna desde la letra A hasta D de cada grupo.
Seguidamente se incubó las muestras a 37 grados
Celsius por un tiempo estimado de
aproximadamente 5 horas (desde las 10AM hasta
las 3PM), posteriormente se realizó la lectura en el
espectrofotómetro acorde con cada muestra,
registrados en la tabla 1.

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RESULTADOS DISCUSIÓN Y ANÁLISIS.
A una longitud de onda de 620nm se realizó el
HORAS M M+B M+B+I M+B+I+P
análisis en el espectrofotómetro con el fin de
0,000 0,020 0,014 0,035
11AM 0,000 0,011 0,053 0,022
observar con respecto al tiempo transcurrido como
0,000 0,021 0,006 0,006 se desarrollaba el crecimiento de una población
0,000 0,006 0,120 0,068 bacteriana de E. Coli (Escherichia Coli), teniendo en
0,000 0,006 0,034 0,038 cuenta la dilución seriada 1/10 y el resto de factores
12PM 0,000 0,090 0,050 0,030 que afectan este crecimiento.
0,000 0,133 0,088 0,058
0,000 0,029 0,082 0,018 Primeramente, de la tabla 1 y la gráfica 1 se observa
0,000 0,750 0,105 0,290 que el medio de cultivo [500uL] utilizado no tiene
1PM 0,000 0,610 0,113 0,288 ninguna variación con respecto al tiempo, esto
0,000 0,550 0,116 0,219
debido a que no hay presencia del agente
0,000 0,460 0,166 0,331
0,000 0,297 0,249 0,243
bacteriano en estas muestras, por ende la
2PM 0,000 0,161 0,152 0,179 absorbancia obtenida será de 0,000 lo que
0,000 0,131 0,153 0,157 conocemos como “blanco”.
0,000 0,129 0,142 0,152
0,000 0,207 0,193 0,181 En la segunda línea de análisis se encuentra el
3PM 0,000 0,246 0,227 0,230 medio de cultivo [500uL] más la bacteria E. Coli
0,000 0,197 0,246 0,187 [100uL] que mediante una disolución seriada de
0,000 0,087 0,119 0,148 1/10 disminuye la concentración de la bacteria en
Tabla 1: DATOS DE LA ABSORBANCIA. Se registran las muestras secuencialmente por ende también
los datos obtenidos mediante el espectrofotómetro a disminuye la absorbancia arrojada por el
620nm con respecto a las diferentes horas de análisis.
espectrofotómetro. Según la gráfica 1, para esta
(M: medio; B: bacteria; I: inhibidor; P: sustancia problema)
muestra de M+B desde que se incubaron las
muestras hasta aproximadas 2 horas después
GRÁFICA DE ABSOBANCIA VS (lapso de 11AM y 12PM) se encuentra la fase Lag o
TIEMPO periodo de adaptación donde el crecimiento de la
0.8 población se da de manera lenta. Posteriormente 1
hora después (lapso de 12PM a 1PM) se encuentra
0.7 la fase exponencial donde se evidencia un
0.6 crecimiento optimo del número de bacterias con una
absorbancia registrada de 0,750 siendo la más alta
Absorbancia

0.5
de los registros para esta columna. Entre las 2PM y
0.4 3PM se encuentra en la fase estacionaria, debido a
0.3 que el número de bacterias se encuentra en valores
0.2 de absorbancia cercanos a 0,150. Finalmente en
horas cercanas a las 3PM en adelante se encuentra
0.1 la fase de muerte, donde disminuyen los valores de
0 la absorbancia con una fuerte tendencia a valores
11AM 12PM 1PM 2PM 3PM de 0, debido a la muerte de la población.
Tiempo
En la tercera línea de análisis se encuentra el medio
M M+B M+B+I M+B+I+P de cultivo [500uL] más la bacteria E. Coli [100uL]
más el inhibidor [20uL] que también por dilución
Gráfica 1: ABSORBANCIA VS TIEMPO. Se graficaron seriada se obtiene una disminución de la
los datos de la absorbancia obtenidos mediante el absorbancia, teniendo en cuenta que la función del
espectrofotómetro a 620nm con respecto a las horas de inhibidor es detener y evitar el crecimiento de la
análisis realizadas (M: medio; B: bacteria; I: Inhibidor; P:
población.
sustancia problema).

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Entre las 11AM y las 1PM se encuentra la fase Lag
en esta muestra M+B+I, a partir de la 1PM hasta las
2PM se observa la fase exponencial pero esta vez
con una absorbancia menor (máx. 0,249), entre las
Se observa una notable disminución en los valores
de la absorbancia.
Finalmente, en la última línea de análisis se
encuentra el medio de cultivo [500uL] más la
bacteria E. Coli [100uL] más el inhibidor [20uL] más
la sustancia problema agregada por el docente,
debido a la forma que tomo la gráfica para esta
muestra M+B+I+P como grupo se tiene la hipótesis
que la sustancia agregada por el profesor fue más
volumen de la bacteria E. Coli ya que esta muestra
tuvo mayor crecimiento que la muestra M+B+I. En el
lapso de 11PM a 12PM se ubica la fase lag, se
observa poco crecimiento de la población, de 1PM a
2PM se observa la fase exponencial, debido al
notorio crecimiento de la población y es ahí donde
la gráfica nos permite hacer una hipótesis sobre la
sustancia problema. Seguidamente entre 2PM y
3PM se observa la fase estacionaria y finalmente
después de 3PM se observa la fase de muerte.
En conclusión, gracias a esta experiencia, se
entendió la proporcionalidad encontrada entre la
concentración y la absorbancia, del mismo modo el
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2PM Y 3PM se encuentra la fase estacionaria ya
que se observan datos constantes sin crecimiento
de la población, finalmente a partir de las 3PM
encontramos la fase de muerte porque
efecto de la dilución seriada sobre el crecimiento de
la población. También la diferencias entre cada una
de las fases del crecimiento de una población
bacteriana, en las primeras 2 horas encontramos la
fase lag con una crecimiento lento debido a la
adaptación fisiológica de las células; a las 3 horas
se encuentra la fase de crecimiento exponencial
debido al optimo crecimiento de la población; a las 4
horas se encuentra la fase estacionaria debido a la
falta de nutrientes o acumulación de residuos
tóxicos; y a partir de las 5 horas encontramos la fase
de muerte lo que resulta en una pérdida neta del
número de células visibles. Del mismo modo, el
efecto del inhibidor o de agregar mayor volumen de
bacteria, aumenta o disminuye consecuentemente
el tamaño de la población.
BIBLIOGRAFÍA.
[1] Anónimo. (2015). Curva del crecimiento
bacteriano [en línea] Disponible en:
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/20
14/10/curva-del-crecimiento.html [22 de
septiembre del 2018].
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ANEXOS

GRÁFICA DE EJEMPLIFICACIÓN Y
PRACTICA
0.12
ABSORBANCIA

0.15
0.088
0.1 0.068
0.05 0
0
A B C D
M + C+DS 0 0.12 0.088 0.068

DILUCIÓN

M + C+DS

GRAFICA 2 IMAGEN 1.

GRÁFICA 2: EJEMPLIFICACIÓN Y PRÁCTICA. Se registran y grafican los datos obtenidos mediante el

espectrofotómetro en una práctica de prueba con el fin de aprender el uso de dicho instrumento y las técnicas
del pipeteo (M: medio [190 uL]; C: colorante purpura [10uL]; DS: disolución seriada 1/20 [10uL])

IMAGEN 1: DILUCIONES. Se utilizaron los Eppendorf 1 (sin diluir), 2(primera dilución), 3(segunda dilución) y
un Eppendorf usado como blanco.

Esta parte de la experiencia se realizó semanas antes de realizar la práctica de turbidimetría, el objetivo de esta
prueba por parte del docente era enseñarnos el manejo de las micropipetas y los volúmenes que podemos
encontrar en cada una de ellas, también enseñarnos como realizar una dilución seriada y por último las partes,
el manejo y uso del espectrofotómetro, fue así como entendimos que la absorbancia es directamente
proporcional a la concentración del soluto en la muestra, ya que a medida que avanzábamos en la dilución
seriada 1/20 en la sustancia de 200uL disminuía la absorbancia obtenida en base a que disminuía la
concentración de soluto presente en la muestra.

CUESTIONARIO
1. ¿QUÉ FACTORES BIÓTICOS Y ABIÓTICOS CONTROLAN EL CRECIMIENTO CELULAR?
R/: Los factores bióticos que controlan el crecimiento celular son: El pH, la temperatura, cantidad de nutrientes
necesarios, espacio en el que habita.
Los factores abióticos, las concentraciones de agua, la acidez o basicidad del medio que lo rodea, la
temperatura.
2. ¿CUAL FUE EL EXTRACTO QUE PRODUJO LA MAYOR INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO DE E.COLI?
R/ El extracto que produjo la mayor inhibición fue el M+B+I ya que contenía la sustancia inhibidora utilizada para
mitigar el crecimiento bacteriano
3. ¿A QUÉ SE PUEDE ATRIBUIR EL EFECTO INHIBITORIO DEL EXTRACTO SELECCIONADO EN LA
PREGUNTA ANTERIOR?
R/ Si se dice que el extracto posee un efecto inhibitorio, se puede deducir que el mismo tiene actividad
antimicrobiana. De otra manera, se puede proponer que la existencia de un déficit nutritivo disuelto en el
extracto, la cual produjo un efecto inhibidor.

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