BROMATOLOGIA Y MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

INFROME DE LABORATORIO

RECUENTO DE ESPORAS CLOSTRIDIUM SULFITO-REDUCTOR

MALORY BOLIVAR

LORAINE CASTILLO BENITEZ

OMADIS MESA

LERSY LOPEZ

DOCENTE

CORPORACION UNIVERSITARIA RAFAEL NUÑEZ

PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA

CARTAGENA-BOLIVAR

2019
INTRODUCCION OBJETIVOS

Clostridium es un género de bacterias  Identificar las características

anaerobias de las cuales algunas morfológicas de este
causan enfermedades en el hombre. microorganismo.
El nombre de sulfitos reductores  Conocer la importancia de este
alude al método por el cual se como transmisor de
identifican. enfermedades por alimentos.

Clostridium perfringens es una

MATERIALES Y EQUIPOS
especie del género que puede
 Agua peptonada
producir algunas toxinas que causan
 Agar Sps
intoxicaciones alimentarias, es un
 caldo nitrato
organismo anaerobio Gram-positivo
de forma bacilar que forma esporas  Agar gelatina y agar Kligler.
ovales subterminales. Se diferencia  peróxido de hidrógeno al 3%
de los demás clostridios en que los  Pipetas estériles 1 ml
bacilos, relativamente grandes, son  Gradillas
cápsulados e inmóviles; crece a  Incubadora
temperaturas de 12 a 50ºC, aunque  Balanza
es muy lento a temperaturas  Morteros
inferiores a 20ºC pero
Muestra
extraordinariamente rápido al rango
de temperatura entre 43 y 47ºC, con Camarón
un tiempo de generación de sólo 7,1
minutos 1,4. Las colonias PROCEDIMIENTO
sospechosas pueden ser confirmadas
1. Se maceró en el mortero el
por la ausencia de movilidad, por su
alimento hasta obtener una
capacidad de reducir el nitrato a
mezcla homogénea.
nitrito, por la fermentación de la
2. Con ayuda de la balanza se
lactosa y por la licuación de la
agregaron 10 gramos de la
gelatina. La intoxicación alimentaria
mezcla homogenizada en el
por C. perfringes es generalmente
frasco con los 90 ml de
una enfermedad autolimitante, no
peptona al 0,1% (se obtuvo
febril, que se manifiesta por náuseas,
una dilución 1 en 10 o 10¯¹)
dolor abdominal, diarrea y vómito; su
3. Se agitó muy bien durante 2
comienzo ocurre a las 8 a 24 horas
minutos, se tomó 1ml de la
después de la ingestión del alimento
dilución anterior y se agregó
que contenía al microbio en su forma
en otro tubo con 9 ml de
vegetativa.
peptona al 0,1% (se obtuvo
una dilución 10¯²)
 4. De la dilución anterior se tomó
1 ml y se transfirió a otro tubo
con 9ml de peptona al 0,1%
(se obtuvo una dilución 10¯³)
5. Teniendo preparadas todas las
diluciones se llevaron al baño
serológico y se incubaron a
80°C durante 10 minutos
6. Se marcaron las cajas
(10¯¹,10¯²,10¯³) cada una con
el nombre de su respectiva
dilución y se agregó 1 ml de
cada dilución a cada caja.
7. Finalmente se agregó entre 15
y 20 ml de agar SPS a cada
caja se mezcló
cuidadosamente y se esperó
hasta solidificar.
8. Posteriormente se llevó a
incubar en anaerobiosis a
35°C ± 2°C durante 72h
RESULTADOS
Se obtuvieron los siguientes
crecimientos:
10¯¹ = 0
10¯² = 0
10¯³= 0
Reporte e informe: Menor a 10
UFC/g de Clostridium sulfito
reductores
CONCLUSION
De acuerdo a esta práctica podemos
concluir que es de mucha importancia
aprender a realizar la determinación
de Clostridium sulfito reductores ya
que son considerados patógenos
importantes debido a la producción
de unas exotoxinas extracelulares las
cuales son sus principales factores de
virulencia. Los Clostridium producen
una mayor diversidad de toxinas que
cualquier otro género de bacterias(1)
causando afectación al sistema
nervioso y digestivo, además,
evidencian una posible deficiencia en
las buenas prácticas de fabricación a
lo largo del proceso de
transformación, o materia prima de
baja calidad. Realizar su recuento en
diversos alimentos ayudaría a
prevenir posibles brotes epidémicos y
ETAS, así como a evaluar la calidad
de los alimentos luego de su
elaboración.
TALLER
1. Consultar el valor permitido
de Clostridium sulfito-
reductor para el producto
con el que usted trabajó
según normativa alimentaria.
2. Según los resultados arrojados
en la práctica, ¿su muestra cumple
con las normas colombianas?
3. Investigar el fundamento de agar
SPS, caldo de carne y caldo
tioglicolato
AGAR SPS (AGAR SULFITO-
POLIMIXINA - SULFADIAZINA):
SPS Agar se utiliza para la detección
y recuento de Clostridium perfringens
en los alimentos. SPS Agar contiene
peptona como fuente de carbono,
nitrógeno, vitaminas y minerales.
Vitaminas, extracto de levadura
material de construcción del complejo
B que estimula el crecimiento
bacteriano. Citrato férrico de sodio y
sulfito son indicadores de H2S.
Clostridium reduce el sulfito a sulfuro,
que reacciona con el hierro de citrato
férrico para formar un negro hierro
precipitado de sulfuro. Polisorbato 80
es un agente dispersante. Sulfato de
polimixina B y sulfadiazina son
inhibidores para los organismos que
no sea Clostridium spp. tioglicolato de
sodio es un reducción de agente. El
agar es el agente solidificante.
CALDO TIOGLICOLATO: el medio
de cultivo, tiene por sus componentes
la calidad nutricional del caldo
tripteína soya. Este permite el
desarrollo de una amplia variedad de
microorganismos, incluidos los
nutricionalmente exigentes. Además,
se observa que las bacterias
estrictamente aerobias, crecen en la
parte superior, mientras que las
anaerobias facultativas o anaerobias
estrictas crecen en las profundidades
del medio.
Las sustancias reductoras como
tioglicolato de sodio y cisteína
proporcionan una anaerobiosis
suficiente y debido a los grupos -SH-
de estos compuestos, se neutralizan
los efectos bacteriostáticos de los
derivados mercuriales, arsenicales y
de otros metales pesados. La
presencia de una baja cantidad de
agar, retarda la dispersión de CO2 y
O2.
CALDO DE CARNE (COOKED
MEAT MEDIUM): proporciona un
entorno favorable para el crecimiento
de anaerobios dado que la proteína
muscular en los gránulos del tejido
cardiaco constituye una fuente de
aminoácidos y otros nutrientes. El
tejido muscular también proporciona
reducción de sustancias, en especial
la glutianona. Los grupos de sulfidrilo,
que ejercen un efecto de reducción,
están más disponibles en la proteína
desnaturalizada; por consiguiente, las
partículas de carne se cocinan para
su uso en el medio. En la fórmula de
BBL, el contenido de corazón de res
se expresa como el peso de los
gránulos secos de tejido cardiaco. El
crecimiento se indica mediante
turbidez y, en el caso de algunos
organismos, con la presencia de
burbujas de gas en el medio. La
desintegración y oscurecimiento de
las partículas de carne indican
proteolisis. Deben realizarse tinciones
de Gram o tinciones de esporas para
determinar la forma y ubicación de las
esporas.
4. ¿A qué tipos de alimentos se le
hace la investigación de
Clostridium sulfito-reductor y cuál https://www.bd.com/resource.aspx?ID
es la importancia de este control? X=22253.

 Carne de res 4. FoodSafety. Clostridium

 Carne de aves
 Jugos de las carnes
perfringens. [ Internet] 2016 [citado 27
Abril 2019].Disponible en:
https://espanol.foodsafety.gov/intoxic
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Sulfito-reductores [Accessed 28 Apr.
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3. BBL Cooked Meat Médium.

Servicio técnico de BD Diagnostics
[internet] Rev. 12 Enero 2015[citado
27 Abril 2019]. Disponible en: