Desinfectante Micribiano PDF

UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIA DE LOS ALIMENTOS Y TECNOLOGÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA APLICADA
Patrocinante Directores
Q. José Mario Romero Reyes Q.F Luis López Valladares
Q. José Mario Romero Reyes
Departamento de Ciencia de los Departamento de Ciencia de
los
Alimentos y Tecnología Química Alimentos y Tecnología
Química
Universidad de Chile. Universidad de Chile.
“Acción antimicrobiana de un desinfectante de uso industrial y doméstico sobre

cepas de Staphylococcus aureus y Escherichia coli ”
Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos
MARÍA DANIELA GALLARDO TRONCOSO
Santiago, Chile
2006
1
ÍNDICE
I. RESUMEN 3
II. SUMMARY 4
III. INTRODUCCIÓN 6
IV. OBJETIVOS 8
4.1 Objetivo general 8
4.2 Objetivos específicos 8
V. MATERIALES Y MÉTODOS 9
5.1 MATERIALES 9
5.1.1 Desinfectante 9
5.1.2 Neutralizante 9
5.1.3 Cepas 9
5.2 MÉTODOS 10
5.2.1 Recuento inicial de cepas 10
5.2.2 Determinación de la actividad antimicrobiana 10
5.2.3 Control del neutralizante 12
VI. RESULTADOS 13
6.1 Control del neutralizante 13
6.2 Actividad antimicrobiana 13
6.2.1 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre 13

Escherichia coli salvaje

Staphylococcus aureus salvaje
Escherichia coli ATCC 25922

Staphylococcus aureus ATCC 29213
VII. DISCUSIÓN 23
2
7.1 Resumen velocidad específica de muerte (k) 23
7.2 Acción germicida del desinfectante frente a las cepas estudiadas 25
7.3 Valores de coeficiente de dilución (η) 30
7.4 Análisis estadístico 31
VIII. CONCLUSIONES 32
IX. BIBLIOGRAFÍA 34
I. RESUMEN.
La desinfección de verduras y frutas es un tratamiento, destinado a reducir la

microflora presente en forma natural en estos alimentos o aquella que se incorpora a
través de las distintas etapas que ocurren desde su cultivo, hasta que el producto sea
expendido y consumido. La desinfección también abarca las superficies y equipos de
3
trabajo, donde se procesan y manipulan alimentos, para así asegurar la inocuidad al
consumidor.
Se realizó un estudio comparativo in vitro de la actividad germicida de un
desinfectante, compuesto por una mezcla de monoéster de propilenglicol, ácido láctico
y ácido cítrico, entre otros. Este fue probado a diferentes tiempos de acción y
concentraciones, incluyendo la recomendada por el fabricante.
Las pruebas se realizaron frente a cepas de Staphylococcus aureus salvaje y

ATCC 29213 y Escherichia coli salvaje y ATCC 25922. Se determinó la cinética de
muerte de los microorganismos para así evaluar la eficacia germicida del desinfectante,
la velocidad específica de muerte, coeficiente de dilución y el tiempo de reducción de
los microorganismos.
La eficiencia germicida in vitro del desinfectante a 400 ppm fue de 99,999%,

para Escherichia coli salvaje, Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus
ATCC 29213 a los 15 minutos, lo cual demuestra que es un buen bactericida, para
dichas cepas. Sin embargo, para Staphylococcus aureus salvaje solo se observó un
99,850% de eficacia a la misma concentración y tiempo.
Staphylococcus aureus salvaje y ATCC 29213 resultó más resistente que

Escherichia coli salvaje y ATCC 25922 lo cual se demuestra por los valores obtenidos
para el tiempo de reducción decimal y velocidad específica de muerte.
4
II. SUMMARY.
Antimicrobial action of a disinfectant used at the food industry and at home, against
Staphylococcus aureus and Escherichia coli strains.
The disinfection of vegetables and fruits is a treatment aimed to reduce the

microflora that grows naturally in these foodstuffs or that is incorporated through
different occurring stages from cultivation until the product is sold and consumed.
Disinfection also must be carried out on the working surfaces and equipments where
food is processed and manipulated, to ensure the safety for the consumer.
In this study, an in vitro comparative study of the germicide activity of a disinfectant

composed of a mixture of monoester of propylene glycol, lactic acid and citric acid
among others, was performed. This product was tested at different action times and
concentrations, including those recommended by the manufacturer.
The tests were carried out against wild type and ATCC strains of Staphylococcus
aureus (ATCC 29213) and Escherichia coli (ATCC 25922). The evaluated parameters
were the kinetics of death of the microorganisms, the germicide efficacy of the
disinfectant, the specific death rate, the dilution coefficient and the reduction time of the
microorganisms.
The in vitro germicide efficiency of the disinfectant at 400 ppm during 15 minutes of
contact was 99,999%, for the wild type of Escherichia coli, for Escherichia coli ATCC
25922 and for Staphylococcus aureus ATCC 29213. This fact demonstrates that the
disinfectant has a good bactericide effect on the assayed microorganisms; however, for
the wild type of Staphylococcus aureus only a 99, 850% of efficacy using the same
concentration and time was observed.
5
The wild type of Staphylococcus aureus and the ATCC 29213 strain showed a
greater resistance than the two strains of Escherichia coli, which is demonstrated in the
results obtained for the decimal reduction time and specific death rate.
6
III. INTRODUCCIÓN.
La contaminación microbiológica de los alimentos, es un problema permanente

en la industria. Sin embargo, hoy en día con el establecimiento de estándares
microbiológicos cada vez más exigentes y el avance tecnológico, se ha logrado
solucionar, en parte, este problema. Últimamente se han desarrollado una gran
variedad de productos detergentes y desinfectantes, que aplicados en adecuados
programas de sanitización, ayudan a prevenir y reducir la contaminación microbiológica
(Ureta, 1997).
Los desinfectantes se utilizan tanto en los alimentos como también en las

superficies de trabajo, equipos utilizados en la industria de alimentos y manipuladores.
Para la industria de alimentos, la formación de biopelículas en la maquinaria puede
provocar la contaminación del producto con patógenos, es por eso que se necesitan
mejores prácticas sanitarias y tratamientos en su elaboración, de modo que sean más
seguros al consumo humano (Betancourth et al., 2004).
Un reporte del FDA revela que en el 70% de restaurantes monitoreados durante

un estudio, se observó que no se realiza una sanitización efectiva del equipo y
superficies de trabajo (Flynn, 2000).
Se ha difundido el uso de productos naturales y biodegradables, en la industria

de alimentos, debido a que éstos generan un mínimo de corrosión a los equipos, no
dañan al personal que los emplea y su efecto residual es fácilmente controlable,
además estos productos han sido aprobados por el FDA. El uso de estos compuestos
en comparación con los productos de síntesis química ha demostrado una serie de
ventajas. Entre los usos que se le dan en la agroindustria, están en términos
principales, la disminución o eliminación de riesgos microbiológicos. Actúan por
contacto, pueden aplicarse a través de aspersiones, inmersiones, nebulizaciones y
mezclas con otros productos afines, asegurando aun más su eficacia.
7
Los extractos cítricos han logrado en el ambiente agrícola, pecuario e industria
de proceso, sustituir a los agentes químicos de uso común para eliminar las
contaminaciones fúngicas y bacterianas, pero sin afectar a las materias primas y/o los
consumidores finales (www.organicitrus.s5.com).
Este es el caso del producto natural orgánico compuesto en sus inicios por
extracto de semilla y pulpa de toronja. Posee acción bactericida y fungicida de amplio
espectro, presenta efecto antioxidante, es biodegradable y no se acumula en los tejidos
ni deja residuos. Otras ventajas son las de no conferir olor, color, ni sabor a los
alimentos, en las concentraciones recomendadas. Puede presentar diversas
aplicaciones en la industria pesquera, industria láctea, quesera y de helados,
agroindustria y otros (www.engormix.com). Debido a los resultados demostrados por
este producto, se comenzó a sintetizar llegando en la actualidad a encontrarse una
gama de productos 100% sintéticos. Siendo un ejemplo de esto el producto compuesto
por una mezcla de: glicerol, monoéster de propilenglicol, ácido láctico, ácido cítrico,
ácido ascórbico, cloruro de sodio y ácido propiónico.
Escherichia coli es un microorganismo que se encuentra generalmente en el

intestino del hombre y de los animales y por esto se lo considera un indicador de
contaminación de origen fecal, si se detecta su presencia en productos alimenticios
(Dontorou et al.,2003).
Otro microorganismo de importancia en alimentos es Staphylococcus aureus el

cual puede causar enfermedades y muerte en poblaciones de alto riesgo (Griffin &
Tauxe, 2002). Puede estar presente en piel de animales y personas, además en sus
fosas nasales y garganta. Los manipuladores de alimentos pueden favorecer su rápida
extensión, por lo cual es fundamental su supervisión y control a nivel de industria
elaboradora de alimentos (Griffin & Tauxe, 2002).
En el presente estudio se determinará la acción biocida de dicho producto de

uso industrial y doméstico frente a cepas salvajes y de colección de microorganismos
Gram (+) Staphylococcus aureus y Gram (-) Escherichia coli.
8
IV. OBJETIVOS.
4.1 Objetivo General

- Determinar el efecto biocida de un desinfectante de uso industrial y doméstico
frente a cepas de colección de Staphylococcus aureus ATCC 29213,
Escherichia coli ATCC 25922 y cepas salvajes de Staphylococcus aureus y
Escherichia coli.
4.2 Objetivos específicos

- Realizar pruebas de acción germicida del producto desinfectante.
- Determinar la cinética de acción germicida y eficiencia germicida porcentual
(E%), mediante pruebas in vitro a distintas concentraciones y tiempos de acción
del desinfectante.
- Establecer parámetros cinéticos de destrucción para los microorganismos,
velocidad específica de muerte (t-1) y tiempo de reducción decimal (TRD) (min).
- Comparar la acción del desinfectante sobre cepas salvajes y cepas de
colección.
Hipótesis:
- El desinfectante presenta una actividad germicida a la concentración y tiempo
recomendado frente a cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus de
colección y salvajes, siendo estas últimas más resistentes a la acción del
desinfectante.
9
V. MATERIALES Y MÉTODOS
5.1 MATERIALES
5.1.1 Desinfectante
- El desinfectante estudiado es un producto comercial compuesto por una mezcla
de glicerol, monoéster de propilenglicol, ácido láctico, ácido cítrico, ácido
ascórbico, cloruro de sodio y ácido propiónico. Este fue probado a diferentes
tiempos de acción y concentraciones, incluyendo los recomendados por el
fabricante. Las concentraciones ensayadas fueron 300, 400 y 500ppm y los
tiempos 5, 10 y 15 minutos.
5.1.2 Neutralizante
Compuesto por:
- Tween 80 30ml/100ml Diluyente:
- NaHSO3 6,25ml (40%) - Peptona 1g
- Na2S2O3 3,92g - NaCl 8,5g
- Triptona c.s.p. 250ml - H2O 1000ml
5.1.3 Cepas
Las cepas utilizadas en este estudio fueron:
- Escherichia coli ATCC 25922
- Escherichia coli (cepa salvaje)
- Staphylococcus aureus ATCC 29213
- Staphylococcus aureus (cepa salvaje)
10
5.2 MÉTODOS.
5.2.1 Recuento inicial de las cepas.
La cuantificación se realizó por el método de conteo en Placa Petri, según las
especificaciones de ICMSF (1978). En cada caso las placas fueron incubadas a 35ºC
durante 24 horas.
5.2.2 Determinación de la actividad antimicrobiana.

La metodología utilizada fue la recomendada por la AOAC (1984), para medir
efectividad de desinfectantes sobre microorganismos de prueba. Se trabajó con un
cultivo puro de 24 horas de incubación de la cepa en estudio, de éste se extraía una
alícuota de 1 mL para realizar el recuento inicial detallado en punto 5.2.1.
De forma paralela, se extrajo otra alícuota de 1mL y se puso en contacto con 99
mL de desinfectante, a las concentraciones en estudio. De esta suspensión se tomaron
alícuotas de 1 mL a los tiempos determinados, y se inactivaron en las soluciones de
neutralizante correspondientes; luego se efectuaron sucesivas diluciones decimales de
estas alícuotas para realizar el recuento de microorganismos sobrevivientes; para lo
cual se utilizó como medio de cultivo, Tryptona soya agar (TSA). Las placas fueron
incubadas a 35ºC durante 24 horas, y se efectuó el recuento de las colonias
desarrolladas.
Los ensayos fueron realizados por triplicado y los resultados corresponden a la
media de ellos, calculándose también su desviación estándar.
Los resultados obtenidos son expresados en función de:
A) velocidad específica de muerte (minutos–1).
La cinética de muerte de los microorganismos se expresa de acuerdo a la
siguiente expresión, donde k es la velocidad específica de muerte y corresponde a la
pendiente de la recta resultante del gráfico ln Nt vs t.
ln (Nt / No) = - k t
Donde: No = número de microorganismos iniciales.

Nt = número de microorganismos sobrevivientes al tiempo t.
11
t = tiempo de contacto entre el desinfectante y el microorganismo.
k = velocidad específica de muerte.
La recta obtenida en el gráfico ln Nt vs t, presenta algunas desviaciones de la
linealidad debido a que la velocidad específica de muerte no permanece constante, ya
que la concentración del desinfectante va disminuyendo a medida que éste actúa en el
tiempo.
Valores elevados de velocidad específica de muerte, implican menor resistencia
de los microorganismos a la acción de un determinado desinfectante.
B) eficiencia germicida porcentual (%).
El valor de la eficiencia germicida corresponde al porcentaje de
microorganismos que son destruidos por la acción del desinfectante, y se obtiene a
partir de la siguiente expresión:
Eficiencia (%) = No – Nt x 100
No
Donde: No = número de microorganismos iniciales.

Nt = número de microorganismos sobrevivientes al tiempo t.
Como criterio de eficacia, se utilizó el test de Chambers, el cual señala que se

acepta como buen desinfectante un producto que, a la concentración recomendada,
cause un 99,999% de muerte a una cantidad entre 7,5 x 107 y 1,3 x 108 células/mL, en
30 segundos (Ayres, 1980).
C) tiempo de reducción decimal (TRD).
El tiempo de reducción decimal (TRD) indica, el tiempo necesario para disminuir
en un ciclo logarítmico la cantidad de microorganismos presentes en una muestra de
ensayo (Ureta, 1997).
El tiempo de reducción decimal queda determinado por la siguiente expresión:
TRD = 2.3
k
Donde: k = velocidad específica de muerte.
Por último se calculó, el coeficiente de dilución (η), el cual expresa la relación
entre la actividad y la concentración del desinfectante frente a un determinado
microorganismo, de acuerdo a la siguiente expresión:
12
Cη t = constante
Donde: C = concentración del desinfectante.
t = tiempo de acción para disminuir en un determinado porcentaje la
contaminación inicial de microorganismo.
η = coeficiente de dilución.
Luego, el coeficiente de dilución se obtiene a partir de la siguiente expresión:

η = (log t2 – log t1)
(log c1 – log c2)
Donde: t = tiempo.
c = concentración.
Un valor elevado del coeficiente de dilución (η) significa una gran dependencia
de la acción del desinfectante con la concentración del producto. (Hugo, 1971).
Los resultados se analizaron a través de un análisis de varianza multifactorial
mediante el software Statgraphics® Plus 4.0, con un nivel de confianza del 90%.
5.2.3 Control del neutralizante.

Esta prueba se realizó para verificar que el neutralizante usado en los ensayos
con el desinfectante, no tiene efecto bactericida y que cumple su efecto neutralizador.
La metodología empleada fue la recomendada por Russel (1998).
13
VI. RESULTADOS.
6.1 Control del Neutralizante

Tabla 1
Control del Neutralizante.
Escherichia
Recuento Escherichia coli Staphylococcus Staphylococcus
coli ATCC
ATCC salvaje aureus salvaje aureus ATCC 29213
25922
Recuento inicial 3,3x 103 ufc/mL 2,4x 103 ufc/mL 3,4 x 103 ufc/mL 3,7 x 103 ufc/mL
Recuento
3,1 x 103 ufc/mL 2,4x 103 ufc/mL 3,3 x 103 ufc/mL 3,5 x 103 ufc/mL
sobrevivientes
La tabla 1 muestra los valores promedios del recuento de microorganismos

iniciales y sobrevivientes para el control del neutralizante. Los recuentos de
3
microorganismos sobrevivientes, para ambas cepas, son del orden de 10 ufc/mL, lo cual
demuestra que el neutralizante inactiva en forma eficaz el desinfectante estudiado y no
presenta efecto bactericida sobre las cepas estudiadas.
6.2 Actividad antimicrobiana.

6.2.1 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Escherichia coli cepa
salvaje.
8
7
6
log (ufc/ml)
5
4
3
2
1
0
0 5 10 15
Tiempo (min)
300ppm 400pm 500pm
Figura 1: Efecto in vitro del desinfectante a 300, 400 y 500 ppm,

sobre Escherichia coli (cepa salvaje).
14
La Figura 1 presenta el efecto in vitro del desinfectante sobre Escherichia coli
(cepa salvaje) a las diferentes concentraciones y tiempos estudiados. A 300 ppm se
logra una reducción de 3 ciclos logarítmicos a los 5 min de acción, aumentando a 4
ciclos a los 10 min y a más de 5 ciclos a los 15 min. Sin embargo a 400 y 500 ppm se
reduce la población microbiana en 6 ciclos a partir de los 5 min de acción. No se
aprecia diferencia en la acción germicida a las concentraciones de 400 y 500 ppm.
Tabla 2
Actividad antimicrobiana del desinfectante a distintas concentraciones sobre
Escherichia coli (cepa salvaje).
300 ppm
N
Tiempo (min) E (%) k (min -1) TRD (min)
(ufc/mL)
0 3,81E+07 - - -
5 2,75E+04 99,812 1,41 1,69
10 1,1E+02 99,997 1,04 2,20
∗15 5E+01 99,997 0,87 2,65
∗∗400 ppm
N
(ufc/mL)
0 2,9E+07 - - -
5 <10 >99,999 3,40 0,67
10 <10 >99,999 1,69 1,35
∗ 15 <10 >99,999 1,13 2,02
500 ppm
N
(ufc/mL)
0 4,3 E+07 - - -
5 <10 >99,999 3,45 0,66
10 <10 >99,999 1,72 1,31
∗ 15 <10 >99,999 1,14 2,01
∗ Tiempo recomendado por el fabricante: 15 minutos
∗ ∗ Concentración recomendada por el fabricante: 400 ppm.
Nota: Valores de k y TRD fueron calculados para cada tiempo respecto del recuento inicial a
tiempo cero.
15
Los datos presentados en Tabla 2 muestran los valores de E(%), K y TRD para
Escherichia Coli (cepa salvaje) a diferentes concentraciones y tiempos estudiados. A
300 ppm se logra solo un 99,997 % de eficacia a los 15 min, mientras que a 400 y 500
ppm se logra una eficacia mayor del 99,999% a los 5 min.
Para las concentraciones de 400 ppm y 500 ppm, y a los 15 minutos, los TRD
fueron similares, y menores al obtenido a 300 ppm al mismo tiempo de acción. Igual
situación se observa en los valores de k, donde también hubo diferencias entre los
resultados de 300 ppm con respecto a las otras dos concentraciones.
6.2.2 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Staphylococcus

aureus cepa salvaje.
9
8
7
Log (ufc/ml)
6
5
4
3
2
1
0
0 5 10 15
Tiempo (min)
300ppm 400 pm 500 ppm
Figura 2: Efecto in vitro del desinfectante a 300, 400 y 500 ppm,

sobre Staphyloccus aureus (cepa salvaje).
La Figura 2 presenta el efecto in vitro del desinfectante sobre Staphylococcus

Aureus (cepa salvaje) a las diferentes concentraciones y tiempos estudiados. En
promedio, la cantidad inicial de microorganismos en las tres experiencias realizadas es
del orden de 107 ufc/mL.
En esta cepa de origen salvaje, se observa un efecto más diferenciado entre las
concentraciones de desinfectante ensayadas. Tanto a 300 ppm, 400 ppm y 500 ppm se
16
evidencia a los 5 min de acción la mayor velocidad de destrucción. Luego comienza a
decrecer la velocidad hasta llegar a los 15 min. Frente a esta cepa la eficacia del
producto es menor, ya que no se logra reducir 5 ciclos logarítmicos al tiempo máximo
estudiado, 15 min. Esto estaría demostrando la resistencia de esta cepa a la acción del
desinfectante.
Tabla 3
Staphylococcus aureus (cepa salvaje).
300 ppm
N
(ufc/mL)
0 2,2E+07 - - -
5 1,9E+06 89,402 0,50 2,12
10 2,62E+05 97,368 0,41 3,12
∗ 15 9,95E+04 99,211 0,38 3,84
∗∗400 ppm
N
(ufc/mL)
0 4,1E+07 - - -
5 1,72E+05 99,540 1,08 2,12
10 2,7E+04 99,923 0,74 3,12
∗ 15 5,5E+03 99,985 0,60 3,84
500 ppm
N
(ufc/mL)
0 1,6E+07 - - -
5 2,2E+04 99,853 1,32 1,74
10 5,45E+03 99,965 0,79 2,87
∗ 15 3,26E+02 99,998 0,73 3,13
∗ Tiempo recomendado por el fabricante: 15 minutos.

tiempo cero.
Los datos presentados en Tabla 3 muestran los valores de E(%), k y TRD para
Staphylococcus aureus (cepa salvaje), a diferentes concentraciones y tiempos
estudiados.
17
Respecto a la eficiencia, se observa que a 300 ppm apenas se reduce en 2
ciclos la población inicial, luego de 15 min de contacto con el producto. A 400 ppm, la
eficiencia aumenta solo en un ciclo al mismo tiempo y a 500 ppm, ya se observa una
disminución de 4 ciclos al máximo tiempo ensayado. Cabe destacar que a ninguna de
las concentraciones probadas se logra un 99,999% de destrucción bacteriana.
-1 -1
Los valores de k varían de 0,5 min a 300 ppm hasta 1,32 min al usar 500
ppm a los 5 min de acción. Igual situación sucede con los TRD, donde no se aprecia
mayor diferencia entre concentraciones, lo que estaría demostrando la mayor
resistencia a la acción germicida de este microorganismo.
De acuerdo a los resultados que se presentan en las tablas 2 y 3, se observa

que la cepa salvaje de Escherichia coli es más sensible que la cepa salvaje de
Staphylococcus aureus, a cualquiera de los tiempos y concentraciones usadas del
desinfectante.
6.2.3 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Escherichia

coli ATCC 25922.
6
Log (ufc/ml)
0
0 5 10 15
Tiempo (min)
300 ppm 400ppm 500ppm
Figura 3: Efecto in vitro del desinfectante usado a 300, 400 y 500 ppm,
sobre Escherichia coli ATCC 25922.
18
La Figura 3 presenta el efecto in vitro del producto desinfectante sobre
Escherichia coli ATCC 25922 a las distintas concentraciones y tiempos estudiados,
incluyendo los recomendados por el fabricante. La cantidad inicial de microorganismos
observada en las tres experiencias realizadas es del orden de 107. Luego de 15
minutos, se observan valores <10 ufc/mL para las concentraciones de 300 y 400 ppm.
A la concentración de 500 ppm, se llega a niveles <10 ufc/mL, lo que representa una
eficacia mayor al 99,999%. Lo que significa una reducción de más de 5 ciclos
logarítmicos. Cabe mencionar sin embargo, que este producto no cumple con lo
establecido por el test de Chambers, si se considera el tiempo de acción requerido.
19
Tabla 4
Actividad antimicrobiana del desinfectante a distintas concentraciones
sobre Escherichia coli ATCC 25922.
300 ppm
N
(ufc/mL)
0 2,8E+07 - - -
5 4,3E+03 99,982 1,77 1,30
10 4,9E+02 99,998 1,11 2,07
∗15 <10 >99,999 1,14 2,01
∗ ∗ 400 ppm
N
(ufc/mL)
0 2,3E+07 - - -
5 <10 >99,999 3,31 0,66
10 <10 >99,999 1,71 1,34
∗ 15 <10 >99,999 1,14 2,01
500 ppm
N
(ufc/mL)
0 2,1E+07 - - -
5 <10 >99,999 3,31 0,69
10 <10 >99,999 1,65 1,38
∗15 <10 >99,999 1,10 2,08
tiempo cero.
Escherichia coli ATCC 25922, a las diferentes concentraciones y tiempos estudiados
(incluyendo los recomendados por el fabricante).
Para todas las concentraciones estudiadas, a los 15 minutos se observan
eficiencias mayores a 99,999%. Esto representa una disminución de por lo menos 6
ciclos logarítmicos, al tiempo recomendado por el fabricante.
Con respecto al TRD, a los 15 minutos de acción, para las concentraciones de
300 y 400 ppm, se obtiene valores menores a los obtenidos en la experiencia con
Staphylococcus aureus ATCC 29213.
20
La rapidez de destrucción en el caso de Escherichia coli ATCC 25922 no es
constante a través del tiempo, lo que se evidencia a través de los valores de k. Los
promedios de éstos son de 0,87; 1,49 y 1,12 min-1 a las concentraciones de 300, 400 y
500 ppm, respectivamente. En este caso, se puede apreciar de manera más clara la
existencia de una correlación inversamente proporcional entre el aumento de la
concentración y el tiempo de contacto del desinfectante con respecto a la disminución
de la flora microbiana.
6.2.4 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Staphylococcus

aureus ATCC 29213.
9
8
7
Log (ufc/ml)
6
5
4
3
2
1
0
0 5 10 15
Tiempo (min)
300 ppm 400 ppm 500 ppm
Figura 4: Efecto in vitro del desinfectante usado a 300, 400 y 500 ppm,
sobre Staphylococcus aureus ATCC 29213.
La Figura 4 presenta el efecto in vitro del producto desinfectante sobre ATCC

29213 a las concentraciones y tiempos estudiados, incluyendo los recomendados por
el fabricante. Al igual que para Escherichia coli ATCC 25922 tanto la concentración y
tiempo recomendado es 400 ppm, y de 15 minutos, respectivamente. La cantidad
inicial de microorganismos en las tres experiencias realizadas es del orden de 107
ufc/mL.
Para las concentraciones de 400 ppm y 500 ppm, luego de 15 minutos de
acción, se observa una reducción significativa, llegando a valores <10ufc/mL, lo que
representa una disminución de 6 ciclos logarítmicos. Esto evidencia una eficacia mayor
21
al 99,999% en el tiempo recomendado. Sin embargo, los porcentajes de eficiencia para
Staphylococcus aureus ATCC 29213, son menores a los obtenidos para Escherichia
coli ATCC 25922.
Tabla 5
Staphylococcus aureus ATCC 29213.
300 ppm
N
(ufc/mL)
0 3,4E+07 - - -
5 5,53E+05 98,281 0,81 2,84
10 3,30E+04 99,893 0,69 3,31
∗15 4,07E+02 99,998 0,76 3,01
∗ ∗ 400 ppm
N
(ufc/mL)
0 5,2E+07 - - -
5 2,9E+04 99,880 1,38 1,60
10 4,5E+03 99,980 0,90 2,57
∗15 4,2E+01 99,999 0,93 2,47
500 ppm
N
(ufc/mL)
0 3,90E+07 - - -
5 3,79E+04 99,858 1,38 1,69
10 3,86E+03 99,987 0,91 2,52
∗15 <10 99,999 1,15 1,99
tiempo cero.
Staphylococcus aureus ATCC 29213, a las diferentes concentraciones y tiempos
estudiados (incluyendo los recomendados por el fabricante).
Se observan diferencias con respecto a los valores de E(%), k y TRD obtenidos

en las experiencias realizadas. Las eficiencias obtenidas en este caso, no son
elevadas y no se aprecia un buen efecto germicida, a las 400 ppm y a los 15 minutos
22
se obtiene una eficiencia de 99,999%, lo mismo ocurre a las 500 ppm (100 ppm más
de la recomendada por el fabricante) y a los 15 minutos de acción. A 300 ppm solo se
alcanza un 99,998% de destrucción al mismo tiempo de contacto. El TRD promedio
para Staphylococcus aureus ATCC 29213 obtenido en este estudio a los 15 minutos de
acción, para las tres concentraciones estudiadas es de 2,49 minutos; A los 10 minutos
a 400 ppm y 500 ppm el TRD es de 2,57 y 2,52 minutos respectivamente.
Con respecto a la velocidad específica de muerte, se observa que a los 5

minutos es cuando se logra la mayor rapidez de destrucción del Staphylococcus
aureus ATCC 29213 y luego decrece de manera paulatina. De manera general, se
puede apreciar la existencia de una correlación inversamente proporcional entre el
aumento de la concentración del desinfectante y la disminución de la flora microbiana
en los ensayos realizados.
De acuerdo a los resultados que se presentan en las Tablas 4 y 5, se observa

de manera clara que Escherichia coli ATCC 25922 es menos resistente que
Staphylococcus aureus ATCC 29213, a cualquiera de las concentraciones y tiempos de
acción estudiados para el desinfectante.
23
VII. DISCUSIÓN
7.1 Velocidad específica de muerte (k).
Tabla 6
Resumen velocidad específica de muerte de las diferentes cepas frente al
desinfectante estudiado.
k (min-1)
Concentración Tiempo Escherichia Staphylococcus Escherichia coli Staphylococcus
(ppm) (min) coli salvaje aureus salvaje ATCC 25922 aureus ATCC
29213
5 1,41 0,50 1,77 0,81
300 10 1,04 0,41 1,11 0,69
∗15 0,87 0,38 1,14 0,76
5 3,4 1,08 3,31 1,38
∗ ∗ 400 10 1,69 0,74 1,71 0,90
∗15 1,13 0,6 1,14 0,93
5 3,45 1,32 3,31 1,38
500 10 1,72 0,79 1,65 0,91
∗15 1,14 0,73 1,10 1,15
Según Tabla 6 se observa que ambas cepas de Escherichia coli, salvaje y

ATCC 25922 presentan una resistencia similar a la acción del desinfectante, a
cualquier concentración probada. También se observa que a medida que transcurre el
tiempo disminuye k, lo cual es lo esperado debido a que la concentración del
desinfectante va disminuyendo conforme pasa el tiempo. Ambas cepas de
Staphylococcus aureus presentan valores comparables entre iguales concentraciones.
Al efectuar una comparación entre Escherichia coli y Staphylococcus aureus
salvaje se aprecia una mayor resistencia por parte de Staphylococcus aureus salvaje
24
frente al desinfectante usado. En el caso de Staphylococcus aureus ATCC 29213 este
presenta una mayor resistencia al desinfectante estudiado que la cepa de colección de
Escherichia coli ATCC 25922 a cualquiera de las concentraciones probadas.
Escherichia coli salvaje muestra una resistencia mayor al desinfectante estudiado que
Escherichia coli ATCC 25922, esto concuerda con lo esperado, ya que la cepa de
colección debiera presentar una mayor sensibilidad al efecto del desinfectante. Este
resultado también se observó en las cepas de Staphylococcus aureus salvaje y ATCC
29213, lo cual se comprueba al ver los valores de k, los cuales son menores para el
caso de la cepa salvaje, a cualquiera de las concentraciones estudiadas.
Finalmente se presenta en orden decreciente, la resistencia de las cuatro cepas

estudiadas frente a la acción del desinfectante estudiado:
Staphylococcus aureus salvaje > Staphylococcus aureus ATCC 29213 >
Escherichia coli salvaje ≥ Escherichia coli ATCC 25922.
25
7.2 Acción germicida del desinfectante frente a las cepas estudiadas.
Tabla 7
Resumen de Eficiencia germicidas porcentuales del desinfectante frente a diversos
microorganismos.
% Eficiencia
Concentración Tiempo Escherichia Staphylococcus Escherichia Staphylococcus

(ppm) (min) coli salvaje aureus salvaje coli ATCC aureus ATCC
25922 29213
5 99,812 84,402 99,982 98,281

300 10 99,997 97,368 99,998 99,893
∗15 99,997 99,211 >99,999 99,998
5 >99,999 99,540 >99,999 99,880
∗ ∗ 400 10 >99,999 99,923 >99,999 99,980
∗15 >99,999 99,985 >99,999 99,999
5 >99,999 99,853 >99,999 99,858
500 10 >99,999 99,965 >99,999 99,987
∗15 >99,999 99,998 >99,999 99,999
Para todas las cepas se utilizó la dosis recomendada por el fabricante, 0,4 mg en
1 litro de agua, es decir una concentración de 400 ppm, con un tiempo de contacto de
15 minutos, además concentraciones adicionales de 300 ppm y 500 ppm, junto a otros
tiempos adicionales. La cantidad inicial de microorganismos observada en las tres
experiencias realizadas para cada cepa fue del orden de 107 ufc/ml.
Para una concentración de 300 ppm y 15 minutos de acción del desinfectante,

se logra una reducción significativa de 6 ciclos logarítmicos solo para Escherichia coli
ATCC 25922, llegando a niveles de 101 ufc/mL, lo que representa una eficiencia mayor
al 99,999%. De acuerdo a los datos de Tabla 7 se puede observar, que a 300 ppm y a
los tiempos estudiados, ninguna de las cepas restantes logró una eficiencia del
99,999%, siendo la más resistente Staphylococcus aureus salvaje con una eficacia de
26
99,211%. Datos similares son presentados por Acevedo (2006) a 300 ppm y a 15
minutos de acción sobre Escherichia coli O157:H7, en el cual se alcanza una eficiencia
de 99,999%, lo que representa una disminución en 6 ciclos logarítmicos en el tiempo
recomendado por el fabricante y a una concentración menor a la recomendada.
Cabe mencionar otra investigación sobre la inactivación de Listeria

monocytogenes CECT 4032 en la superficie de tomates utilizando agua electrolizada
neutra (NEW), en la cual informa una reducción superior a los 6 ciclos logarítmicos
dentro de los 5 minutos de exposición, a una concentración de 90 mg/L de cloro activo.
Dicha investigación, realizada por Deza et al., (2003), informa poblaciones iniciales de
microorganismos en la superficie de tomates, del orden de 107 ufc/mL, similares a las
obtenidas en el presente estudio in vitro. Esto evidencia que dicho desinfectante tiene
mejor efecto germicida que el usado en este estudio, sobre la bacteria Gram (+)
Staphylococcus aures ATCC 29213 y salvaje.
Para una concentración de 400 ppm y 15 minutos de acción del desinfectante,
se observa una reducción de 6 ciclos logarítmicos para Escherichia coli ATCC 25922,
llegando a valores <10 ufc/mL, lo que evidencia una eficacia mayor a 99,999%. Cabe
destacar que para la misma cepa y a la misma concentración, pero a un tiempo menor
al recomendado, es decir a 5 y 10 minutos de acción del desinfectante, también se
logro disminuir la contaminación inicial, logrando valores <10 ufc/mL, es decir se
obtuvo una eficacia mayor al 99,999%. A la concentración y tiempo recomendado, para
el desinfectante, es decir a 400 ppm y 15 minutos, también se logró reducir la
contaminación inicial, para Escherichia coli salvaje, cuya eficacia fue mayor a 99,999%.
A tiempos menores de acción al recomendado para el desinfectante (5 y 10 minutos),
se logró reducir 6 ciclos logarítmicos, llegando a valores <10 ufc/mL, estos valores
evidencian una eficacia mayor al 99,999%. En esta experiencia no se observa una
mayor diferencia entre la sensibilidad de las cepas frente al desinfectante. Para ambas
cepas de Escherichia coli se logra reducir la contaminación inicial a un tiempo menor al
recomendado por el fabricante. Esto concuerda con los datos observados en un
estudio in vitro realizado por Ureta (1997), en el cual se alcanza una eficiencia de
99,999% sobre Escherichia coli ATCC 25922 a los 10 minutos de acción del mismo
producto, a una concentración de 400 ppm.
27
En el estudio realizado por Deza et al., (2003), se observaron resultados sobre
Escherichia coli O157:H7 CECT 4267, con una reducción mayor a los 6 ciclos
logarítmicos dentro de los 5 minutos de exposición a NEW. Esto evidencia que dicho
desinfectante tiene mejor efecto germicida que el usado en este estudio.
Para Staphylococcus aureus salvaje no se logró una eficiencia satisfactoria a la

concentración recomendada; 400 ppm a ninguno de los tiempos estudiados, 5, 10 y 15
minutos de acción. La máxima eficacia obtenida se obtuvo a los 15 minutos de acción,
y cuyo valor fue de solo 99,985%. Estos resultados evidencian una baja acción
germicida del desinfectante frente a dicha cepa. No así para la cepa de colección
Staphylococcus aureus ATCC 29213, cuya eficacia fue 99,999% a los 15 minutos,
tiempo de acción recomendado. Esto deja entrever la mayor sensibilidad que muestran
las cepas de colección en comparación con las cepas salvajes frente a la acción de
desinfectantes. Estos resultados son similares a los obtenidos por Ureta (1997), en un
estudio in vitro sobre Staphylococcus aureus ATCC 6538 y Streptococcus faecalis
ATCC 33186. En ambos microorganismos, Gram positivos, se reportan eficiencias de
99,999% a 400 ppm de concentración, pero a los 10 minutos de acción del mismo
desinfectante.
Los primeros valores mostrados en Tabla 7, ponen nuevamente en evidencia el

buen efecto germicida del desinfectante sobre Escherichia coli ATCC 25922 y salvaje,
no así para la cepa de Staphylococcus aureus salvaje. Para una concentración de 500
ppm, del desinfectante estudiado, después de 5 minutos de acción, se observan
valores <10ufc/mL, lo que representa una disminución de 6 ciclos logarítmicos. Esto
evidencia una eficacia mayor al 99,999% en un tiempo menor al recomendado para
Escherichia coli ATCC 25922, lo mismo se observó a los 10 y 15 minutos de acción.
Con respecto a Staphylococcus aureus ATCC 29213 se observan valores de

1
10 ufc/mL, es decir se logra disminuir 6 ciclos logarítmicos la contaminación inicial, lo
que representa una eficacia de 99,999%, a una concentración de 400 ppm y 15
minutos de acción, concentración y tiempo recomendados. Para Staphylococcus
aureus salvaje, se obtuvo un valor de 3,2x102 ufc/mL , lo que representa una eficacia
28
de 99,998%. Estos valores evidencian una menor sensibilidad de parte de la cepa de
salvaje en comparación a la cepa de colección, frente a la acción del desinfectante
estudiado.
Investigaciones realizadas en el Stadslaboratorium Gent (1988), sobre

Staphylococcus aureus ATCC 6538 y Streptococcus faecium DVG 8582, arrojan
eficiencias de 99,999% a los 5 minutos de acción de un producto desinfectante mixto
(cloruro de alquildimetil benzilamonio, glutaraldehído, glioxal, formaldehído, isopropanol
y excipientes), a una concentración de 0,1% (concentración recomendada por el
fabricante entre 0,25 a 0,5%). Esto estaría demostrando una mayor eficacia que la del
desinfectante estudiado en este trabajo, ya que se logran mejores resultados para
Staphylococcus aureus en menor tiempo de acción.
Eficiencias menores a las observadas en este estudio, son las reportadas por
Diez de Medina (1983), con valores de 99,325% y 96,311% para Escherichia coli y
Pseudomonas aeruginosa, respectivamente, a la concentración de 400 ppm y a los 10
minutos de acción de un compuesto de amonio cuaternario. Para un compuesto
anfolítico a 1500 ppm y al mismo tiempo de contacto, se obtiene una eficiencia de
79,810% sobre Escherichia coli.
Ureta (1997), en un estudio similar sobre una cepa de Staphylococcus aureus

ATCC 6538 obtiene una eficacia de 99,999% a los 10 minutos de acción y a una
concentración de 400 ppm del mismo desinfectante. Esto difiere de los resultados
obtenidos en este estudio, esto podría deberse a que las cepas no son idénticas, ya
que el número de colección es diferente.
Según las eficiencias presentadas en Tabla 7, a una concentración de 300ppm,

Escherichia coli salvaje es más sensible que Staphylococcus aureus salvaje con una
eficacia de 99,997% y de 99,211%, respectivamente a los 15 minutos de acción,
(tiempo recomendado). Sin embargo, ninguna de las cepas obtiene una eficacia
satisfactoria. De igual manera Escherichia coli ATCC 25922 es más sensible en
comparación con Staphylococcus aureus ATCC 29213, lo que se evidencia en los
29
valores de sus eficiencias, siendo estas de 99,999% y 99,998%, respectivamente, a
una concentración de 300 ppm. Estos valores ponen de manifiesto la sensibilidad de
las cepas de colección con respecto a las cepas salvajes, tanto para Escherichia coli
salvaje como para Staphylococcus aureus salvaje, se obtienen valores menores de
eficiencia que sus pares de colección. Ya sea Escherichia coli salvaje versus
Escherichia coli ATCC 25922 o Staphylococcus aureus ATCC 29213, o bien sobre
Staphylococcus aureus salvaje versus Staphylococcus aureus ATCC 29213 o
Escherichia coli ATCC 25922. La acción bactericida del desinfectante estudiado
resulta ser mayor al aumentar la concentración en 100 ppm, es decir a 400 ppm, sobre
Escherichia coli ATCC 25922 y Escherichia coli salvaje y Staphylococcus aureus
ATCC 29213, lo cual queda de manifiesto por los valores de sus eficiencias 99,999%,
para todas las cepas mencionadas anteriormente, sin embargo no se logró obtener una
eficacia satisfactoria para Staphylococcus aureus salvaje, la cual obtuvo un valor de
solo 99,985%. Este valor en comparación a la eficiencia obtenida a una concentración
de 300 ppm (99,211%) es superior, por lo tanto, se puede apreciar de manera más
clara la existencia de una correlación inversamente proporcional entre el aumento de la
concentración y el tiempo de contacto del desinfectante con respecto a la disminución
de la flora microbiana.
No se evidencian diferencias entre cepas salvajes y de colección para una

concentración de 400 ppm. Sin embargo, cabe destacar que para Escherichia coli
ATCC 25922 y Escherichia coli salvaje se obtienen eficiencias mayores a 99,999%, a
tiempos menores al recomendado. No así para Staphylococcus aureus ATCC 29213,
ya que solo a los 15 minutos, tiempo recomendado logra reducir 5 ciclos logarítmicos,
es decir obtiene una eficacia de 99,999%. Lo cual demuestra nuevamente que las
cepas de colección son más sensibles a la acción bactericida del desinfectante. En
esta experiencia sigue siendo más sensible la bacteria Gram (-), Escherichia coli ATCC
25922 que la bacteria Gram (+), Staphylococcus aureus ATCC 29213. La correlación
inversamente proporcional entre el aumento de la concentración y el tiempo de
contacto del desinfectante con respecto a la disminución de la flora microbiana, queda
claramente demostrada al aplicar una concentración de 500 ppm del desinfectante
estudiado sobre las cepas. En esta experiencia se logra reducir más de 5 ciclos
30
logarítmicos para Escherichia coli ATCC 25922 y Escherichia coli salvaje y
Staphylococcus aureus ATCC 29213, lo que pone en evidencia nuevamente el buen
efecto germicida del desinfectante, para estas cepas. Sin embargo, nuevamente no se
logra la eficacia deseada para Staphylococcus aureus salvaje.
En ninguna de las experiencias realizadas se logra el 99,999% de eficiencia

sugerida por Chambers. Se debe considerar que este indicador es demasiado riguroso,
ya que 30 segundos es un tiempo muy breve para la acción de un desinfectante, sobre
todo si es a nivel de superficies; además los tiempos empleados en la industria de
alimentos para efectuar el proceso de desinfección, son de 10 minutos o más, con lo
que se asegura que los desinfectantes logren su máxima eficacia.
7.3 Valores de coeficiente de dilución (η).
Tabla 8
Valor de coeficiente de dilución (η) para el desinfectante
Staphylococcus
Escherichia Staphylococcus Escherichia coli
Desinfectante aureus ATCC
coli salvaje aureus salvaje ATCC 25922
29213
Producto
2,4 2,5 3,02 0,67
estudiado
Un valor del coeficiente de dilución igual a 1 implica que la actividad del

desinfectante varía en potencia de 1 con la concentración (Hugo, 1971).
De acuerdo a los valores de coeficiente de dilución (η) presentados en Tabla 8,

se observa que el desinfectante presentaría la mayor dependencia con respecto a la
concentración frente a Escherichia coli ATCC 25922 y la menor frente a
Staphylococcus aureus ATCC 29213. Escherichia coli y Staphylococcus aureus
salvajes presentan valores de coeficiente de dilución intermedios.
31
7.4 Análisis estadístico.
Con los valores del recuento de microorganismos sobrevivientes, de

Escherichia coli salvaje (Tabla 2), Escherichia coli ATCC 25922 (Tabla 4)
Staphylococcus aureus salvaje (Tabla 3), y Staphylococcus aureus ATCC 29213 (Tabla
5), se realizó un análisis de varianza multifactorial considerando la concentración y el
tiempo de contacto como los factores en cada caso, para determinar la existencia de
diferencias significativas con un intervalo de confianza del 95% (ANEXO 1).
Según ANEXO 1, para Escherichia coli (cepa salvaje) y Escherichia coli

ATCC 25922, con respecto al factor tiempo de contacto, no se estableció la
existencia de diferencias significativas, con un nivel de confianza del 95%. Esto se
comprueba al observar los valores de p-value para los factores estudiados, los
cuales son mayores que 0,05% para ambas cepas. Sin embargo para el factor
concentración si hubo diferencia significativa con un 95% de confianza, para
Escherichia coli (cepa salvaje), lo cual se observa en tabla de Rangos Múltiples,
donde a 300 ppm existe diferencia significativa con respecto a la media obtenida a
una concentración de 400 ppm y 500 ppm. Esto queda demostrado en los
recuentos realizados para Escherichia coli (cepa salvaje), los cuales se ven
disminuidos al aumentar la concentración del desinfectante estudiado.
Según ANEXO 1, para Staphylococcus aureus (cepa salvaje), con respecto al

factor tiempo de contacto, al igual que para el caso de las cepas de Escherichia coli, no
se estableció la existencia de diferencias significativas, con un nivel de confianza del
95%. Lo cual se comprueba al observar el valor de p-value para el factor estudiado.
Este resulta mayor al 0,05%, para dicha cepa de Staphylococcus aureus. No obstante,
para Staphylococcus aureus ATCC 29213, si existió diferencia significativa, con un
nivel de confianza del 95%, para el factor tiempo. Lo cual claramente se evidencia al
disminuir la cantidad de microorganismos sobrevivientes, al aumentar el tiempo de
contacto del desinfectante. Para el factor concentración aplicado a ambas cepas de
Staphylococcus aureus, salvaje y ATCC 29213, no se observo la existencia de
diferencias significativas con un nivel de confianza del 95%. Lo cual se comprueba al
observar los valores de p-value para el factor estudiado.
32
VIII. CONCLUSIONES.
El neutralizante empleado no presenta actividad bactericida sobre las cepas

bacterianas probadas en este estudio y actúa inhibiendo completamente al producto
desinfectante.
El desinfectante estudiado, a las condiciones de concentración y tiempo

recomendado por el fabricante, es decir a 400 ppm y 15 minutos de acción, presenta
una buena acción germicida in vitro frente a Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia
coli salvaje y Staphylococcus aureus ATCC 29213. Logrando una reducción de 6 ciclos
logarítmicos. Sin embargo, presenta una débil acción germicida in vitro frente a
Staphylococcus aureus salvaje a las condiciones mencionadas anteriormente.
Logrando una reducción de 4 ciclos logarítmicos.
Las eficacias obtenidas para Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli
salvaje, Staphylococcus aureus ATCC 29213 y Staphylococcus aureus salvaje fueron
>99,999%, >99,999%, 99,999% y 99,985%, respectivamente.
Los valores de velocidad específica de muerte y tiempo de reducción decimal

calculados permiten concluir que, las cepas de Staphylococcus aureus ATCC 29213 y
la salvaje resultaron más resistente que las de Escherichia coli ATCC 25922 y salvaje.
Los valores de coeficiente de dilución demuestran que, el efecto desinfectante

con mayor dependencia de la concentración es sobre Escherichia coli ATCC 25922
y el menor sobre Staphylococcus aureus ATCC 29213; Escherichia coli y
Staphylococcus aureus salvajes presentaron valores intermedios.
33
Solo para Escherichia coli se estableció diferencia estadísticamente significativa
entre las concentraciones probadas, con un nivel de confianza del 95%.
Para la cepa Staphylococcus aureus ATCC 29213, según factor tiempo se
estableció diferencia estadísticamente significativa con un nivel de confianza del
95%.
La limpieza y sanitización requieren de una adecuada demostración

experimental de su eficacia, por lo que es indispensable efectuar estudios de este tipo
a fin de llegar a seleccionar adecuadamente los productos a emplear.
34
IX. BIBLIOGRAFÍA.
1. Acevedo, M., (2006). “Estudio comparativo de la eficacia de desinfectantes de

uso industrial sobre Listeria innocua ATCC 33090 y Escherichia coli O157:H7-
VT(N) NCTC 12900” Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos,
Universidad de Chile. Santiago de Chile.
2. AOAC, (1984). “Official Methods of Analysis of the Association of Official
Agricultural Chemists”. 12th Ed. Washington. USA.
3. Betancourth, M., Botero, J. y Rivera, S., (2004). “Biopelículas: una comunidad
microscópica en desarrollo”. Colombia Médica. 35 (3) Supl1: 35-39.
4. Deza, M.A., Araujo, M. y Garrido, M.J., (2003). “Inactivación de Escherichia
coli O157:H7, Salmonella enteritidis y Listeria monocytogenes en tomates
utilizando agua activada electroquímicamente”. Instituto de Investigación y
Análisis Alimentario. Universidad de Compostela. Santiago de Compostela.
España.
5. Diez de Medina, Dafne (1983). “Evaluación de la Eficacia Germicida de
Desinfectantes”. Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos,
Universidad de Chile. Santiago de Chile.
6. Dontorou, C., Papadopoulou, C., Filioussis, G., Economou, V.,Apostolou, I.,
Zakkas, G., et al. (2003). Isolation of Escherichia coli O157:H7 from foods in
Greece. Internl. J. of Food Microbiol. 82: 273–279.
7. Flynn, J.F.,(2000). FDA Study Declares Unsanitized Food Preparation
Surfaces and Equipment Among the Greatest Risks of Foodborne Illness.
Chlorine Chemistry Council.
8. Griffin, P. M., Tauxe, R. V. (2002).”The Epidemiology infection caused by
Escherichia coli O157:H7, other enterohemoragic Escherichia coli, and
associated hemolytic uremic syndrome”. Epidemiological Review, 13:60-96.
35
9. Hugo, W.B., (1971) Chemical Disinfectants, Antiseptics and Preservatives.
Department of Pharmacy. University of Nottingham England. Academic Press.
London. New York.
10. ICMSF, (1978). “Microorganisms in Foods, their significance and methods of
enumeration”. 2nd edition. University of Toronto Press. Toronto/Buffalo/London
11. Russel, A.D.,(1998). Bacterial resistance to disinfectantants: present knowledge
and future problems. J. Hosp. infect. Supl 43: 57- 68.
12. Stadslaboratorium Gent, (1988). “Determination of the anti-microbial power of
the formutation CID-20 (according to the European Suspension Test – method
(EST)”. Belgium.
13. Ureta, F., (1997).”Evaluación de la actividad germicida de ácido láctico, ácido
peracético y extracto de semilla de toronja”. Memoria para optar al título de
Ingeniero en Alimentos, Universidad de Chile. Santiago de Chile.
14. http://www.organicitrus.s5.com
15. http://www.engormix.com
36
ANEXO 1

Análisis de la Varianza para E.Coli salvaje - Sumas de Cuadrados de Tipo III
--------------------------------------------------------------------------------
Fuente Suma de cuadrados GL Cuadrado Medio Cociente-F P-Valor
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Tiempo 1,12482 2 0,562411 1,00 0,4444
B:Concentración 7,50136 2 3,75068 6,67 0,0532
RESIDUOS 2,24964 4 0,562411

--------------------------------------------------------------------------------
TOTAL (CORREGIDO) 10,8758 8
--------------------------------------------------------------------------------
Los cocientes F están basados en el error cuadrático medio residual.
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de Coli salvaje en las
contribuciones debidas a varios factores. Puesto que se ha elegido la
suma de cuadrados Tipo III (valor por defecto), se ha medido la
contribución de cada factor eliminando los efectos del resto de los
factores. Los P-valores comprueban la importancia estadística de cada
uno de los factores. Dado que ningún P-valor es inferior a 0,05,
ninguno de los factores tiene efecto estadísticamente significativo en
Coli salvaje para un nivel de confianza del 95,0%.
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para E.Coli salvaje

con 95,0 Intervalos de confianza
--------------------------------------------------------------------------------
Error Límite Límite
Nivel Frecuencia Media Estándar Inferior Superior
--------------------------------------------------------------------------------
Media Total 9 1,64556
Tiempo
5 3 2,09667 0,432978 0,894522 3,29881
10 3 1,60667 0,432978 0,404522 2,80881
15 3 1,23333 0,432978 0,0311887 2,43548
Concentración
300 3 2,93667 0,432978 1,73452 4,13881
400 3 1,0 0,432978 -0,202145 2,20214
500 3 1,0 0,432978 -0,202145 2,20214
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la Coli salvaje media para cada nivel de
factores. También presenta el error estándar de cada media, lo cual
es una medida de su variabilidad en la muestra. Las dos columnas de
la derecha muestran 95,0% intervalos de confianza para cada una de las
medias. Puede visualizar estas medias e intervalos seleccionando
Gráfico de Medias de la lista de Opciones Gráficas.
37
Contraste Múltiple de Rangos para E.Coli salvaje según Tiempo
--------------------------------------------------------------------------------
Método: 95,0 porcentaje Duncan
Tiempo Recuento Media LS Sigma LS Grupos Homogéneos
--------------------------------------------------------------------------------
15 3 1,23333 0,432978 X
10 3 1,60667 0,432978 X
5 3 2,09667 0,432978 X
--------------------------------------------------------------------------------
Contraste Diferencias
--------------------------------------------------------------------------------
5 - 10 0,49
5 - 15 0,863333
10 - 15 0,373333
--------------------------------------------------------------------------------
* indica una diferencia significativa.
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla aplica un procedimiento de comparación múltiple para
determinar las medias que son significativamente diferentes unas de
otras. La mitad inferior de la salida muestra la diferencia estimada
entre cada para de medias. No hay diferencias estadísticamente
significativas entre ningún par de medias a un nivel de
confianza.95,0%. En la parte superior de la página, se identifica un
grupo homogéneo según la alineación del signo X en la columna. Dentro
de cada columna, los niveles que tienen signo X forman un grupo de
medias entre las cuales no hay diferencias estadísticamente
significativas. El método actualmente utilizado para discernir entre
las medias es el procedimiento de Duncan de comparaciones múltiples.
Con este método, hay un 5,0% de riesgo de considerar uno o más pares
como significativamente diferentes cuando su diferencia real es igual
a 0.

Análisis de la Varianza para E.Coli salvaje - Sumas de Cuadrados de Tipo III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Concentración 7,50136 2 3,75068 6,67 0,0299
RESIDUOS 3,37447 6 0,562411

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de Coli salvaje en las
uno de los factores. Dado que un p-valor es inferior a 0,05, este
factor tiene efecto estadísticamente significativo en Coli salvaje
para un 95,0%.
38
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para E.Coli salvaje
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Concentración
300 3 2,93667 0,432978 1,8772 3,99613
400 3 1,0 0,432978 -0,0594629 2,05946
500 3 1,0 0,432978 -0,0594629 2,05946
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la Coli salvaje media para cada nivel de
Contraste Múltiple de Rangos para E.Coli salvaje según Concentración
--------------------------------------------------------------------------------
Concentración Recuento Media LS Sigma LS Grupos Homogéneos
--------------------------------------------------------------------------------
500 3 1,0 0,432978 X
400 3 1,0 0,432978 X
300 3 2,93667 0,432978 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
300 - 400 *1,93667
300 - 500 *1,93667
400 - 500 0,0
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
entre cada para de medias. El asterisco que se encuentra al lado de
los 2 pares, indica que éstos muestran diferencias estadísticamente
significativas a un nivel de confianza 95,0%. En la parte superior de
la página, se identifican 2 grupos homogéneos según la alineación del
signo X en la columna. Dentro de cada columna, los niveles que tienen
signo X forman un grupo de medias entre las cuales no hay diferencias
estadísticamente significativas. El método actualmente utilizado para
discernir entre las medias es el procedimiento de Duncan de
comparaciones múltiples. Con este método, hay un 5,0% de riesgo de
considerar uno o más pares como significativamente diferentes cuando
su diferencia real es igual a 0.
39
Análisis de la Varianza para Staphylococcus aureus salvaje - Sumas de Cuadrados de Tipo
III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Tiempo 4,50407 2 2,25203 2,55 0,1578
RESIDUOS 5,29493 6 0,882489

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de Staphy salvaje en las
Staphy salvaje para un nivel de confianza del 95,0%.
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para Staphylococcus aureus salvaje

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Media Total 9 4,61
Tiempo
5 3 5,24667 0,542368 3,91954 6,5738
10 3 4,96 0,542368 3,63287 6,28713
15 3 3,62333 0,542368 2,2962 4,95046
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la Staphy salvaje media para cada nivel de
Contraste Múltiple de Rangos para Staphylococcus aureus salvaje según Tiempo
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
15 3 3,62333 0,542368 X
10 3 4,96 0,542368 X
5 3 5,24667 0,542368 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
5 - 10 0,286667
5 - 15 1,62333
10 - 15 1,33667
--------------------------------------------------------------------------------
40
El StatAdvisor
--------------
a 0.

Análisis de la Varianza para Staphylococcus aureus salvaje - Sumas de Cuadrados de Tipo
III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Concentración 3,86987 2 1,93493 1,96 0,2215
RESIDUOS 5,92913 6 0,988189

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de Staphy salvaje en las
Staphy salvaje para un nivel de confianza del 95,0%.
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para Staphylococcus aureus salvaje

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Media Total 9 4,61
Concentración
300 3 5,49 0,573931 4,08564 6,89436
400 3 4,42333 0,573931 3,01897 5,82769
500 3 3,91667 0,573931 2,51231 5,32103
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la Staphy salvaje media para cada nivel de
41
Contraste Múltiple de Rangos para Staphylococcus aureus salvaje según Concentración
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
500 3 3,91667 0,573931 X
400 3 4,42333 0,573931 X
300 3 5,49 0,573931 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
300 - 400 1,06667
300 - 500 1,57333
400 - 500 0,506667
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
a 0.
Escherichia Coli ATCC 25922

Análisis de la Varianza paracoli colección - Sumas de Cuadrados de Tipo III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Tiempo 1,13076 2 0,565378 0,55 0,6024
RESIDUOS 6,14427 6 1,02404

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de coli colección en las
coli colección para un nivel de confianza del 95,0%.
42
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para E.coli colección
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Tiempo
5 3 1,86 0,58425 0,430388 3,28961
10 3 1,53333 0,58425 0,103721 2,96295
15 3 1,0 0,58425 -0,429612 2,42961
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la coli colección media para cada nivel de
Contraste Múltiple de Rangos para E.coli colección según Tiempo

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
15 3 1,0 0,58425 X
10 3 1,53333 0,58425 X
5 3 1,86 0,58425 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
5 - 10 0,326667
5 - 15 0,86
10 - 15 0,533333
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
a 0.
43
Escherichia coli ATCC 25922
Análisis de la Varianza para E.coli colección - Sumas de Cuadrados de Tipo III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Concentración 3,88276 2 1,94138 3,43 0,1014
RESIDUOS 3,39227 6 0,565378

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de coli colección en las
coli colección para un nivel de confianza del 95,0%.
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para E.coli colección

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Concentración
300 3 2,39333 0,434119 1,33108 3,45559
400 3 1,0 0,434119 -0,0622536 2,06225
500 3 1,0 0,434119 -0,0622536 2,06225
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la coli colección media para cada nivel de
Contraste Múltiple de Rangos para E.coli colección según Concentración
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
400 3 1,0 0,434119 X
500 3 1,0 0,434119 X
300 3 2,39333 0,434119 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
300 - 400 1,39333
300 - 500 1,39333
400 - 500 0,0
--------------------------------------------------------------------------------
44
El StatAdvisor
--------------
a 0.
Análisis de la Varianza paraStaphy colección - Sumas de Cuadrados de Tipo III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Tiempo 16,3291 2 8,16454 17,36 0,0032
RESIDUOS 2,822 6 0,470333

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de Staphy colección en
las contribuciones debidas a varios factores. Puesto que se ha
elegido la suma de cuadrados Tipo III (valor por defecto), se ha
medido la contribución de cada factor eliminando los efectos del resto
de los factores. Los P-valores comprueban la importancia estadística
de cada uno de los factores. Dado que un p-valor es inferior a 0,05,
este factor tiene efecto estadísticamente significativo en Staphy
colección para un 95,0%.
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para Staphylococcus aureus colección

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Tiempo
5 3 4,89333 0,395952 3,92447 5,86219
10 3 3,87667 0,395952 2,90781 4,84553
15 3 1,66667 0,395952 0,697805 2,63553
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la Staphy colección media para cada nivel de
45
Contraste Múltiple de Rangos para Staphylococcus aureus colección según Tiempo
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
15 3 1,66667 0,395952 X
10 3 3,87667 0,395952 X
5 3 4,89333 0,395952 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
5 - 10 1,01667
5 - 15 *3,22667
10 - 15 *2,21
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
entre cada para de medias. El asterisco que se encuentra al lado de
los 2 pares, indica que éstos muestran diferencias estadísticamente
significativas a un nivel de confianza 95,0%. En la parte superior de
la página, se identifican 2 grupos homogéneos según la alineación del
signo X en la columna. Dentro de cada columna, los niveles que tienen
signo X forman un grupo de medias entre las cuales no hay diferencias
estadísticamente significativas. El método actualmente utilizado para
discernir entre las medias es el procedimiento de Duncan de
comparaciones múltiples. Con este método, hay un 5,0% de riesgo de
considerar uno o más pares como significativamente diferentes cuando
su diferencia real es igual a 0.

Análisis de la Varianza para Staphylococcus aureus colección - Sumas de Cuadrados de Tipo
III
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
EFECTOS PRINCIPALES
A:Concentración 2,66196 2 1,33098 0,48 0,6383
RESIDUOS 16,4891 6 2,74819

--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
La tabla ANOVA descompone la variabilidad de Staphy colección en
las contribuciones debidas a varios factores. Puesto que se ha
elegido la suma de cuadrados Tipo III (valor por defecto), se ha
medido la contribución de cada factor eliminando los efectos del resto
de los factores. Los P-valores comprueban la importancia estadística
de cada uno de los factores. Dado que ningún P-valor es inferior a
0,05, ninguno de los factores tiene efecto estadísticamente
significativo en Staphy colección para un nivel de confianza del
95,0%.
46
Tabla de Medias por mínimos cuadrados para Staphylococcus aureus colección
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
Concentración
300 3 4,24333 0,957112 1,90136 6,58531
400 3 3,17 0,957112 0,828026 5,51197
500 3 3,02333 0,957112 0,681359 5,36531
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
Esta tabla muestra la Staphy colección media para cada nivel de
Contraste Múltiple de Rangos para Staphylococcus aureus colección según Concentración
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
500 3 3,02333 0,957112 X
400 3 3,17 0,957112 X
300 3 4,24333 0,957112 X
--------------------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------------------
300 - 400 1,07333
300 - 500 1,22
400 - 500 0,146667
--------------------------------------------------------------------------------
El StatAdvisor
--------------
a 0.
47
48

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UNIVERSIDAD DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS

“Acción antimicrobiana de un desinfectante de uso industrial y doméstico sobre

Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos

MARÍA DANIELA GALLARDO TRONCOSO

4.1 Objetivo general 8

4.2 Objetivos específicos 8

5.2.1 Recuento inicial de cepas 10

5.2.2 Determinación de la actividad antimicrobiana 10

5.2.3 Control del neutralizante 12

6.1 Control del neutralizante 13

6.2 Actividad antimicrobiana 13

6.2.1 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre 13

6.2.2 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre 15

6.2.4 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre 20

7.3 Valores de coeficiente de dilución (η) 30

7.4 Análisis estadístico 31

La desinfección de verduras y frutas es un tratamiento, destinado a reducir la

Las pruebas se realizaron frente a cepas de Staphylococcus aureus salvaje y

La eficiencia germicida in vitro del desinfectante a 400 ppm fue de 99,999%,

Staphylococcus aureus salvaje y ATCC 29213 resultó más resistente que

The disinfection of vegetables and fruits is a treatment aimed to reduce the

In this study, an in vitro comparative study of the germicide activity of a disinfectant

La contaminación microbiológica de los alimentos, es un problema permanente

Los desinfectantes se utilizan tanto en los alimentos como también en las

Un reporte del FDA revela que en el 70% de restaurantes monitoreados durante

Se ha difundido el uso de productos naturales y biodegradables, en la industria

Escherichia coli es un microorganismo que se encuentra generalmente en el

Otro microorganismo de importancia en alimentos es Staphylococcus aureus el

En el presente estudio se determinará la acción biocida de dicho producto de

4.1 Objetivo General

4.2 Objetivos específicos

5.2.2 Determinación de la actividad antimicrobiana.

Donde: No = número de microorganismos iniciales.

Donde: No = número de microorganismos iniciales.

Como criterio de eficacia, se utilizó el test de Chambers, el cual señala que se

Luego, el coeficiente de dilución se obtiene a partir de la siguiente expresión:

5.2.3 Control del neutralizante.

6.1 Control del Neutralizante

La tabla 1 muestra los valores promedios del recuento de microorganismos

6.2 Actividad antimicrobiana.

Figura 1: Efecto in vitro del desinfectante a 300, 400 y 500 ppm,

6.2.2 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Staphylococcus

300ppm 400 pm 500 ppm

Figura 2: Efecto in vitro del desinfectante a 300, 400 y 500 ppm,

La Figura 2 presenta el efecto in vitro del desinfectante sobre Staphylococcus

∗ Tiempo recomendado por el fabricante: 15 minutos.

De acuerdo a los resultados que se presentan en las tablas 2 y 3, se observa

6.2.3 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Escherichia

300 ppm 400ppm 500ppm

6.2.4 Acción del desinfectante a distintas concentraciones sobre Staphylococcus

300 ppm 400 ppm 500 ppm

La Figura 4 presenta el efecto in vitro del producto desinfectante sobre ATCC

Se observan diferencias con respecto a los valores de E(%), k y TRD obtenidos

Con respecto a la velocidad específica de muerte, se observa que a los 5

De acuerdo a los resultados que se presentan en las Tablas 4 y 5, se observa

7.1 Velocidad específica de muerte (k).

Según Tabla 6 se observa que ambas cepas de Escherichia coli, salvaje y

Finalmente se presenta en orden decreciente, la resistencia de las cuatro cepas

Concentración Tiempo Escherichia Staphylococcus Escherichia Staphylococcus

5 99,812 84,402 99,982 98,281

Para una concentración de 300 ppm y 15 minutos de acción del desinfectante,

Cabe mencionar otra investigación sobre la inactivación de Listeria