LISOSOMAS, DEGRADACION Y

MUERTE CELULAR
Biol. Luis Guevara

Biología Celular y Molecular

11/09/2017
Índice o tabla de contenidos
• 1º Lisosomas
• 2º Funciones
• 3º Fagocitosis
• 4º Proteínas mal plegadas
• 5º Muerte celular
• 7º Conclusiones
• 8º Fuentes de información
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lisosomas
• Organelas citoplasmáticas limitadas
por una sola membrana.
• Descubiertas por Christian de Duve.
• Presentes en todas las células
eucariotas.
• Contienen 50-60 enzimas hidrolíticas.
• Son los degradadores de residuos o
desechos de la célula.
• Su FUNCION catabólica es
complementada por organelas
asociadas a los lisosomas (LROs).
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lisosomas
• Matriz lisosomal ácida (PH 4,8)
favorable para actividad
enzimática.
• 2 clases de proteínas son
esenciales para su
funcionamiento:
• Hidrolasas lisosomales.
• Proteínas integrales de la
membrana lisosomal (LMPs)
 5

lisosomas
• Enzimas hidrolíticas son elaboradas
en el RE y modificadas en el aparato
de Golgi.
• 50-60 enzimas hidrolíticas.
• Degradan material procedente de:
• Endocitosis
• Fagocitosis
• Autofagia
• Participan en:
• Degradación en volumen
• Procesamiento pro-proteínas
• Procesamiento de antígenos
• Degradación de la matriz
extracelular
• Iniciación de apoptosis
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lisosomas
• Proteínas integrales de la
membrana lisosomal (LMPs), aprox.
25 en lisosomas de mamífero.
• Cumplen diversas funciones:
• Acidificación del lumen lisosomal.
• Importación de proteínas desde el
citosol.
• Fusión de membranas.
• Transporte de productos de
degradación al citoplasma.
• Las más abundantes:
• Proteína de membrana asociada al
lisosoma 1 (LAMP1).
• Proteína de membrana asociada al
lisosoma 2 (LAMP2).
• Proteína integral de membrana
lisosomal 2 (LIMP2).
• Tetraspanin CD63.
• Bomba de protones tipo vacuolar.
 USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 7

EVENTOS DURANTE LA FAGOCITOSIS: FORMACION DEL FAGOLISOSOMA

(M.E.)

CELULAS
ESPECIALIZADAS
EN FAGOCITOSIS
TIENEN GRAN
CANTIDAD DE
LISOSOMAS.
MACROFAGO DE
MEDULA OSEA
 8

ACTIVIDAD EN LOS FAGOLISOSOMAS

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 9

LAS ENZIMAS DESTRUYEN

EL CONTENIDO DEL
FAGOLISOSOMA
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lisosomas
Biogénesis lisosomal:
• Requiere integración de
vías endocítica y
biosintética.
• Frecuentemente emerge
del aparato de Golgi.
• En algunos casos se
desarrolla gradualmente a
partir de endosomas
tardíos
For an animated look at lysosomal function.
http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/0072507470/student_view0/chap
ter3/animation__lysosomes.html
 11

LAS CÉLULAS CONTIENEN MÚLTIPLES

SISTEMA PARA
DEGRADAR PROTEÍNAS.

l El Sistema Ubiquitin-proteasoma
l El Sistema Lisosomal
l El Sistema Intra-mitochondria
l Calpains (Ca2+-dependiente de proteases)
l Caspasas
l Proteasas de membranas

9
 12

DEGRADACIÓN DE PROTEINAS
MAL PLEGADAS

• Mal plegada = no funcional.

Desnaturalizacion.
• Rompe enlaces covalentes,
no covalentes, disulfuro.
• Chaperona-n glucanasa-
ubiquitina.
• Proteosoma.
 13

IMPORTANCIA CLINICA
Muchas enfermedades neurológicas y otras son causadas por la
acumulación, mas que por la degradación de proteínas con
estructuras anormales.

Enfermedad de Alzheimer (b-amyloid, tau)

Enfermedad de Huntington (Huntingtin)
Enfermedad de Parkinson (a-synuclein)
Tau aggregates Enfermedad de ALS “Lou Gerhig’s” (SOD)
(Azheimer’s disease)

Enfermedad de la espina-Bulbar y atrofia muscular

(receptores de andrógenos). Enfermedad por Priones
“Mad Cow disease” (prion)

Lewy Bodies
(Parkinson’s Disease)
 14

ROL FISIOLÓGICO DE LA DEGRADACIÓN

INTRACELULAR DE PROTEÍNAS

Control de calidad

Procesamiento antigénico

Regulación en funciones celulares

Adaptación a estadios fisiológicos

o patológicos
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EL MODELO UBIQUITIN-PROTEASOMA
PARA LA DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS TIENE
DOS FASES.

Proteina

ATP Modificación del substrato

ADP por ubiquitin

Ub
ATP Degradación del substrato
ADP Por el proteasoma

Péptdos y
amino ácidos
 16

UBIQUITINA

O 76 amino acids
=
Gly-C-OH
Carboxyl terminus
Mr = 8,000
(glycine 76)

Altamente conservada
Ampliamente distribuida

(glycine 76)
 17

Proteínas Ubiquitinadas son degradadas

Por el proteasoma.

Proteolisis

Peptides and
ATP ADP amino acids

Not degraded
Proteasome
Reconoce la cadena
Poliubiquitin y no la proteina Monoubiquitin
 18

LA ESPECIFICIDAD PARA UBIQUITINACION SE LLEVA A

CABO CON MÚLTIPLES ENZIMAS DE CONJUGACIÓN.
degron
E3(n)

Ubiquitin E3(n)
O E1 E2(n)
E2(n)
=

-C-OH
ATP

G76
E1 E2(n)

PREMIO NOBEL 2004

 19

ESTRUCTURA DE UN
PROTEOSOMA

a) Imagen de microscopía
electrónica del
proteosoma 26 S de
levadura S. cerevisae

b) Representación
esquemática de la
estructura y función del
proteosoma 26 S
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Apoptosis
muerte celular
Autofagia
Cornificación
Necrosis
• Modalidades atípicas (en
estudio):
• Catástrofe mitótica (muerte celular
precedida por multinucleación o
muerte celular durante metafase)
• Anoikis
• Excitotoxicidad
• Degeneración Walleriana
• Paraoptosis
• Piroptosis
• Pironecrosis
• Entosis
 21

Muerte celular
Hotchkiss R et all. Cell death. N Engl J Med 2009; 361: 1570-83 .
 22

APOPTOSIS
• Primera denominación: necrosis por
contracción (shrinkage necrosis).
• 1972 Ker la denominó apoptosis.
• “caer o morir como caen los pétalos o las
hojas en otoño” (griego).
• Ocurre durante toda la vida.
• Fundamental en la homeostasis.
• De crucial importancia durante el desarrollo.
 23

APOPTOSIS
• H. Robert Horvitz (1986) investigo el modelo genético implicado
en la muerte celular programada.
• Usando un sistema modelo conocido y caracterizado, el
nematodo Caenorhabditis elegans.

• La apoptosis, a diferencia de la necrosis, consume ATP, cuya

energía es utilizada para la activación de unas enzimas

llamados caspasas, cuya activación en cascada producen los

efectos que podemos ver en la célula.

24
 25

Mechanisms of caspase activation

a. Proteolytic cleavage e.g.
pro-caspase 3

b. Induced proximity, e.g.

pro-caspase 8

c. Oligomerization, e.g. cyt c,

Apaf-1 & caspase 9
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APOPTOSIS
• No induce respuesta inflamatoria.
• Cambios morfológicos:
• Pérdida de adhesión celular
• Contracción celular por pérdida de agua y Na+
• Condensación de cromatina a nivel nuclear
(estructuras en media luna)
• Núcleo se rompe en múltiples fragmentos
• Fragmentación del DNA (piezas de 180-200 pb)
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APOPTOSIS
Cambios morfológicos:
• Se mantiene integridad de la membrana
plasmática
• Formación de cuerpos apoptóticos que son
rápidamente reconocidos y fagocitados por
macrófagos o por células vecinas sin pérdida
de su contenido.
• MORFOLÓGICA: ENCOGIMIENTO NUCLEAR Y CELULAR, CONDENSACIÓN
DE CROMATINA (PICNOSIS), FORMACIÓN DE YEMAS, FRAGMENTACIÓN
NUCLEAR (CARIORREXIS) Y FORMACIÓN DE CUERPOS APOPTÓTICOS.
• BIOQUÍMICA: PERMEABILIZACIÓN DE LA MEMBRANA MITOCONDRIAL (PMM)
Y/O ACTIVACIÓN MASIVA DE LA CASPASAS.
 28

PROCESOS EN LOS QUE INTERVIENE

LA APOPTOSIS
1.- En toda etapa del desarrollo o
reparación tisular en donde se produzcan
células en exceso.
2.- Eliminación de linfocitos.
3.- Eliminación de células infectadas y
tumorales
 29

ETAPAS DE LA APOPTOSIS:
1.- Activación (inducción negativa/positiva)

*Receptores
a.- de muerte (Fas, TNF)
b.- normales (glutamato)
*Rutas de transducción celular (mensajeros: Ca2+,
radicales libres, proteínas codificadas por genes
supresores)

2.- Decisión (mitocondria)

3.- Ejecución (degradación de proteínas y ácidos nucleicos)
Caspasas
 30

Vías que conducen a la apoptosis

• Vía intrínseca (mitocondrial)
• Vía extrínseca (receptor de muerte)
 31

Vías que conducen a la apoptosis

Vía intrínseca (mitocondrial)
• Controlada por la interacción de proteínas pro-
apoptóticas y anti-apoptóticas de la familia BCL2.
• Regulada por la caspasa 9 (daño celular abrumador).
• Iniciadores de la vía:
• Incremento intracelular de ROS
• DNA dañado
• Respuesta de proteínas no plegadas
• Deprivación de factores de crecimiento
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Familia de proteínas BCL2

Anti-apoptótico Pro-apoptótico
• BCL2 • BAX
• BCL-XL • BAK
• BCLW • BIM
• MCL1 • BID
• A1 • PUMA
• BOO/DIVA
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Vías que conducen a la apoptosis

Vía extrínseca (receptor muerte):
Inicia cuando miembros de la superfamilia TNF se unen a
receptores muerte de la superficie celular.
Receptores de membrana de superfamilia de receptores
TNF (CD95, DR3 y DR4), inducen el reclutamiento proximal
del complejo activador de caspasa.
Se activa la caspasa-8.

• CASPASA 8 Y CASPASA 9 ACTIVADAS MOVILIZAN A SU VEZ A LAS

CASPASAS 3, 6 Y 7, PROTEASAS QUE INICIAN LA DEMOLICIÓN DE
LA CÉLULA A TRAVÉS DE LA DEGRADACIÓN DE NUMEROSAS
PROTEÍNAS Y LA ACTIVACIÓN DE DNASAS.
Vías de la
apoptosis

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 35

Apoptosis signal to kill infected cells

Cytolytic lymphocyte/CTL (& natural killer lymphocyte) presents Fas
ligand/CD178 on its surface to tell the infected cell to die

Fas ligand

Externally driven
Apoptotic signals
Cytochrome c

Initiator caspases
The immunological
synapse holds the cells
Execution caspases
much tighter together
than shown here

Apoptosis events
Fas/ CD95 is the
‘death receptor’
 36

NECROSIS
• Cuando las células sufren daños tales como quemaduras,
accidentes, radiaciones, traumas, infecciones, etc. se
produce necrosis.
• La muerte no ocurre de forma ordenada, de manera
general el núcleo no presenta cambios aparentes, las
mitocondrias aparecen dañadas, el agua y iones fluyen
hacia el citoplasma y la célula se hincha, con lo que
termina por romperse liberando el contenido celular
quedando en el medio proteasas y señales que atraen
células del sistema inmunitario, por lo que tiene lugar una
reacción inflamatoria en la zona.
 37

NECROSIS
Características morfológicas:
 Edema nuclear y mitocondrial.
 Formación de prolongaciones en la superficie
celular.
 Desagregación de ribosomas.

Características morfológicas (si persiste la noxa):

Se acentúan más los cambios.
“Burbujeo” extremo en la superficie celular.
Gran dilatación mitocondrial.
Ruptura de la membrana.
Disolución de las organelas y núcleo.
Degeneración lisosomal
 Necrosis
• “Cadaver” (griego).
• Respuesta a una noxa.
• El estímulo de la muerte
es la causa directa de la
defunción celular.

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• Muerte celular por
Necrosis
agresión externa (física,
química o biológica).

• Gran respuesta
inflamatoria en el lugar
de la injuria.

• Cambios generalmente
desde parte externa
hacia la interna.

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40
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Autofagia
• “comerse uno mismo” (griego).
• Proceso por el cual la célula recicla sus propias
organelas y componentes macromoleculares no
esenciales, redundantes o dañados.
• Respuesta adaptativa al stress sub-letal.
• Participa en:
• Supresión del crecimiento del tumor.
• Supresión de proteínas tóxicas mal plegadas.
• Eliminación de microorganismos intracelulares.
• Presentación de antígenos.
• A lo largo del desarrollo cualquier organismo necesita la
deshacerse de ciertas estructuras y crear otras
• Durante un proceso de metamorfosis.

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 45

Autofagia
Tres formas:
1. Macroautofagia
2. Microautofagia
3. Autofagia mediada por
chaperonas

Regula formación de
autofagosoma:
• Fosfatidilinositol 3 kinasa (PI3K)
• Beclin-1 (BECN1)
• mTOR (sirolimus)
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Aspectos fisiológicos y moleculares

Estadios:
1. Vesículas nucleares
2. Elongación vesicular
3. Fusión de una doble membrana
(auto-fagosoma/lisosoma)
formación del auto-lysosoma.
Fuentes de Información
• Alberts, J. Jhonson,; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K. and
Walter “Biología Molecular de La Célula”. 2010.
5ªEdición. Ed. Omega
• Karp, G. “Biología Celular y Molecular, Conceptos y
Experimentos”. 2009. Ed. McGraw-Hill –
Interamericana. México.
• http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/0072507470/student_view0/chapter3/animation__lysoso
mes.html
Gracias.
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