INTRODUCCIÓN

La enzima glucosa oxidasa es una oxidorreductasa que cataliza la oxidación de la

glucosa para formar peróxido de hidrógeno y D-glucono-δ-
lactona. En las célulascontribuye a degradar los azúcares hacia sus metabolitos. La
glucosa oxidasa es ampliamente utilizada para la determinación y cuantificación de
glucosa libre en los fluidos biológico, tales como sangre y orina, en materia prima vegetal
y en la industria de los alimentos. Tiene además muchas aplicaciones en biotecnología y
se utiliza para la fabricación de biosensores sensibles a glucosa. La glucosa oxidasa es
ampliamente utilizada acoplada a una reacción mediada por la peroxidasa que permite
visualizar colorimétricamente el H2O formado, de este tipo son los ensayos para la
determinación de glucosa libre en el suero o plasma
sanguíneoutilizados con finalidades diagnósticos. La reacción es adaptable a procedimie
ntos manuales utilizando un espectrofotómetro o a técnicas automatizadas, e incluso para
su utilización en ensayos rápidos como los de las tiras reactivas de orina. Ensayos
similares permiten monitorear los niveles de glucosa en procesos de fermentación,
biorreactores, y el control de niveles de glucosa en materia prima vegetal y productos
alimentarios.
 EFECTO DEL PH SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA
I.-OBJETIVO
 Determinar si los valores del pH influyen en la concentración de glucosa oxidasa

II.-FUNDAMENTO TEORICO
Toda enzima tiene un pH óptimo, puesto que en las reacciones catalíticas participan
aminoácidos ionizables (como histidina, glutamato y cisteína). Las enzimas citosólicas
tienen un pH óptimo en el intervalo de pH 7-8. La pepsina, secretada por las células
gástricas y que actúa en el jugo gástrico, tiene un pH óptimo de 1.5 a-2.0; la tripsina y la
quimio tripsina tienen un pH óptimo alcalino, compatible con su actividad digestiva en la
juga pancreático alcalino; las enzimas lisosomales tienen un pH óptimo ácido. La
sensibilidad al pH de las enzimas se debe al efecto del pH sobre la carga iónica de las
cadenas laterales de aminoácidos de las enzimas. Diversos solutos, como sustratos,
productos, iones metálicos y moléculas reguladoras, también afectan a la velocidad de las
reacciones enzimáticas. (Baynes & Dominiczack, 2011,)

III.-MATERIALES Y METODOS.

Materiales:
 Tubos de ensayo
 Espectrofotómetro
 Propipeta
 Cocina eléctrica
 Termómetro

REACTIVOS DE TRABAJO
 Glucosa oxidasa
 Peroxidasa
 Indicador oxido-reducción(cromógeno)
 Ácido clorhídrico (HCl)
 Hidróxido de sodio (NaOH)
 glucosa
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 Encender la cocina eléctrica y ponemos un vaso precipitado con agua a una
temperatura de 70°C midiendo con un termómetro.

 En 2 tubos de ensayo ponemos en uno HCL y en otro NaOH, llevar los tubos
a una temperatura de 70°C por 10 minutos, luego agregar glucosa.
 luego encubar nuevamente por 10 minutos a 70°C; para luego llevar al
espectrofotómetro y medir su absorbancia.

 finalmente se sacan los cálculos que nos dio el espectrofotómetro.

IV.- CALCULOS Y RESULTADOS DE LA EXPERIMENTACION.

[Glucosa]= F*absorbancia del tubo problema

(𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎)
F=
𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑣𝑖𝑑. 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟

I II III

Reactivo de trabajo (ml) 1 1 1

Agregar Hcl 0,01 M (ml) 0,1

Agregar NaOH 0,01 M (ml) 0,1

Agregar glucosa 1% (ml) 10 10 10

Incubar x 10´ 37°

Absorbancia 1,134 0,138 1,467 1,072

Glucosa 425,25 51,75 550,13 402

 Las observaciones más visibles fueron con los ensayos del reactivo de trabajo
cuando se le modifico el pH (agregando NaOH), cambiando de color la muestra.
A comparación de los ensayos en la cual solo se agregó glucosa no se modificó
el color de la muestra.

GLUCOSA OXIDASA
 V.-DISCUSION EFECTOS DEL PH SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA.

OPTIMIZACION
DEL PH
IONIZACION
DE LOS
GRUPOS
DADOS.

FORMACION
DE CENTROS
CATALITICOS

Análisis.
 Según la teoría de glucosa oxidasa
representa una enzima con diversas
aplicaciones. En la que en su mayoría son
visualizaciones y/o absorción.
 Una determinación visible fue en el ensayo
del reactivo de trabajo cuando se le modifico
el pH (agregando NaOH), cambiando de
color la muestra.
 La mayoría de los enzimas son muy
sensibles a los cambios de pH. Desviaciones
de pocas décimas por encima o por debajo
del pH óptimo pueden afectar drásticamente
su actividad.
Interpretación
 Una vez formados los productos el
enzima puede comenzar un nuevo ciclo
de reacción.
 Una de las propiedades más
sobresalientes de las enzimas es el de
su especificidad de actuación, de suerte
que tan solo ciertos sustratos
experimentan su acción y únicamente
tiene lugar a un tipo de reacción sin
que se produzca reacciones laterales o
sus productos. Sin embargo, al
modificar el pH de una enzima puede
modificar así también su naturaleza (el
pH desnaturaliza las enzimas).
VI.- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
 EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBBRE LA GLUCOSA OXIDASA

1. OBJETIVOS
 Demostrar el efecto de la temperatura sobre la glucosa oxidasa

2. FUNDAMENTO TEORICO
La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. La temperatura
óptima para la acción de enzimas es la temperatura del cuerpo de los animales que oscilan
en el intervalo de 36 a 41 °C. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre
aceleración de la reacción a consecuencia de la activación de las moléculas del sustrato.
A la vez, incluso un aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los
enlaces que mantienen la conformación de las moléculas de las enzimas, necesaria para
la manifestación de su actividad catalítica.
Empieza gradualmente, la desnaturalización de la enzima cuando se acelera bruscamente
la temperatura y esta sobrepasa los 50 °C. La inactivación de la enzima con aumento de
la temperatura del medio es irreversible. Al bajar la temperatura la actividad de la enzima
disminuye. El mecanismo de este proceso no está claro. Sin embargo, el enfriamiento no
causa desnaturalización de la enzima por lo tanto su inactivación puede ser reversible.
3. REACTIVOS DE TRABAJO
 Glucosa oxidasa
 Peroxidasa
 Indicador oxido-reducción(cromógeno)
 Ácido clorhídrico (HCl)
 Hidróxido de sodio (NaOH)
 Glucosa
 Agua destilada

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa, llevar los tubos a una
temperatura de 0°C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar nuevamente
por 10 minutos a 0°C; para luego llevar al espectrofotómetro y medir su
absorbancia.
 En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa, llevar los tubos a una
temperatura de 37°C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar
nuevamente por 10 minutos a 37°C; para luego llevar al espectrofotómetro y
medir su absorbancia.
 En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa, llevar los tubos a una
temperatura de 70°C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar
nuevamente por 10 minutos a 70°C; para luego llevar al espectrofotómetro y
medir su absorbancia.
5.- CALCULOS Y RESULTADOS.
TEMPERATURA:

I II III

Reactivo de trabajo (ml) 1 1 1

Incubar x 10´ 37° 0° 70°

Agregar glucosa (ml) 10 10 10

Incubar x 10´ 37° 0° 70°

Absorbancia O,166 1,334 0,152 0,147

Resultados 437,25 500,25 57 55,13

(glucosa) =F x abs. (Tubo del problema)

F= 375
 6.-DISCUSION EFECTOS DE LA TEMPERATURA SOBRE LA GLUCOSA
OXIDASA.
ANALISIS.
 En general, los aumentos de temperatura
aceleran las reacciones químicas: por
cada 10ºC de incremento, la velocidad
de reacción se duplica.
 Las reacciones catalizadas por enzimas
siguen esta ley general. Sin embargo, al
ser proteínas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a  Las reacciones denotarían y bajarían a
desnaturalizar por el calor.
 La temperatura a la cual la actividad
catalítica es máxima se
llama temperatura óptima.
 Por encima de esta temperatura, el
aumento de velocidad de la reacción
debido a la temperatura es contrarrestado
por la pérdida de actividad catalítica
debida a la desnaturalización térmica, y
la actividad enzimática decrece
rápidamente hasta anularse.
ACELERACION
DE REACCIONES
QUIMICAS Y
EFECTOS DE LA
TEMPERATURA.
INTERPRETACION.
 En los puntos dichos en el análisis
reiteraremos que las enzimas al recibir o
experimentar un cambio simple de una
temperatura esta se naturaliza.
 Se rompería su enlace químico por
exceso de calor en este caso puente de
hidrogeno.
temperaturas bajas
 En este caso de temperatura haríamos
una comparación con el cuerpo humano
que oscilando su temperatura en 40
grados amenazan el poder enzimático y
causa algunos desperfectos físicos,