Determinación del contenido de nitrógeno por el método de Microkjeldahl

Yulieth Paja Trujillo1, Yariza Montenegro Ruiz2, Steban Moreno Marín3

Laboratorio de química analítica, Departamento de Química, Universidad del Valle, Calle 13 # 100-00, Cali.

Fecha de realización: Abril 07 del 2018

Fecha de entrega: Abril 18 del 2018

Resumen. Se utilizó el método de microkjeldahl para determinar Nitrógeno en una muestra orgánica el cual consistió en digestar
(oxidar) 0,0387g de leche en polvo marca el rodeo con ácido sulfúrico concentrado, posteriormente se adicionó un exceso de
base fuerte para obtener un pH alcalino el cual formó amoniaco gaseoso que se condensó y se recibió en una solución de ácido
para posteriormente titularlo y obtener la cuantificación de Nitrógeno en la muestra. El resultado experimental de la titulación
fue de 13,2 mL de HCl 0,015 M, dándonos un porcentaje de 7,65% de Nitrógeno en la muestra y un 48,80% de proteína con
un error relativo del 34,41%.

Palabras clave: Digestión, valoración, titulación.

1.METODOLOGÍA. 2. DATOS Y RESULTADOS.

Se pesaron 0.0300 g de muestra aproximadamente y se
depositaron en un matraz micro Kjeldahl, se le adiciono a Se determinó el contenido de nitrógeno y proteína de una
la muestra 0.1 g de una mezcla 3:1 de 𝐶𝑢𝑆𝑂4 − 𝑀𝑔𝑂 y muestra (leche en polvo) por el método de microkjeldahl,
2.0 g de 𝑁𝑎2 𝑆𝑂4 . en la tabla 1 se muestran las medidas tomadas en el
laboratorio.
Luego se le agrego a la muestra 2.5 ml de 𝐻2 𝑆𝑂4
concentrado y se colocó en el digestor a un ángulo de 45 Tabla 1. Datos obtenidos en la práctica.
grados dentro de la campana de extracción. Se calienta la
muestra hasta que el 𝐻2 𝑆𝑂4 hierva, vigilando que la Medidas de lo reactivos usados en el método de
microkjeldahl
muestra no se suba al cuello del matraz y se pierda.
Peso de la muestra 0,0387 g
Se calienta suavemente la muestra hasta que el líquido sea Peso de 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 0,0106 g
incoloro o verde claro y no se observen partículas en Volumen de 𝐻𝐶𝑙 para la muestra 14,1 mL
suspensión. Se deja enfriar la muestra y se trasvasa a un Volumen de 𝐻𝐶𝑙 para la
13,2 mL
equipo de micro destilación, realizando lavados al matraz estandarización
que contenía la muestra, con un valor máximo de 10 ml
de agua destilada y depositando los lavados en el equipo Las reacciones involucradas en el proceso de determinar
de micro destilación. el contenido de Nitrógeno y proteína en una muestra
Se conecta el equipo de destilación a la llave y se habré la problema son las siguientes:
llave, suministrando agua al condensador. La manguera  Reacción 1:
que se desprende del condensador se sumerge en un
Erlenmeyer con 10 ml de 𝐻3 𝐵𝑂4 al 4% y 5 gotas de 𝐻2 𝑆𝑂4 + 𝐶𝑎 𝐻𝑏 𝑁𝑐 → 𝑎𝐶𝑂2 + 𝑏𝐻2 𝑂 + 𝑐𝑁𝐻4 𝑆𝑂4
indicador mixto.
Se le adiciona 15 ml de solución alcalina y se tapa  Reacción 2:
inmediatamente. Se procede a destilar, calentando con la 𝐻3 𝐵𝑂3 + 𝑁𝐻3(𝑔) → 𝐻2 𝐵03 − + 𝑁𝐻4 +
plancha suavemente y aumentando la temperatura
gradualmente para evitar una ebullición violenta. Se
espera el cambio de viraje del indicador y se destila
 Reacción 3:
durante 10 minutos. Después se retira el Erlenmeyer y se
titula con HCl 0.02M estandarizado. 𝐻2 𝐵03 − + 𝐻𝐶𝑙 → 𝐻3 𝐵𝑂3 + 𝐶𝑙 −
 |𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜−𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙|
%Error relativo: 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜
𝑥100%
Estandarización del HCl:
|7,44 𝑥 10−3 − 0,00488|
𝑥100% = 34,41%
Por estequiometria hallamos la concentración de HCl: 7,44 𝑥 10−3

1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2 𝐶𝑜3 2 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙 1

0,0106 𝑔 𝑁𝑎2 𝐶𝑜3 ∗ ∗ ∗ =
106 𝑔 𝑁𝑎2 𝐶𝑜3 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2 𝐶𝑜3 0,0132 𝐿
3. DISCUSION DE RESULTADOS.
𝟎, 𝟎𝟏𝟓 𝑴

Porcentaje de nitrógeno en la muestra:

El Nitrógeno es el elemento más abundante en nuestra
𝐿 𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜∗𝑀𝑎𝑐𝑖𝑑𝑜∗𝑃𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑁
%𝑁(𝑝/𝑝) = 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
∗ 100 Ec.1 atmósfera, en ella se encuentra en forma de 𝑁2 y forma
casi el 78% de la misma, es un elemento muy estable, y
por esa razón no es propenso a intervenir en reacciones
𝟎,𝟎𝟏𝟓 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟒,𝟎𝟏𝒈
14,1𝒎𝒍∗ ∗ químicas, es por esto que su aprovechamiento
𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒎𝒐𝒍
%𝑁 = 0,0387𝑔
∗ 100 = 𝟕, 𝟔𝟓 % 𝑵
directamente de la atmósfera, está limitado [2].
El método Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones,
Porcentaje de proteína en la muestra. originalmente se utilizó permanganato de potasio
(𝐾𝑀𝑛𝑂4 ) para llevar a cabo el proceso de oxidación
%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = %𝑁 ∗ 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑖𝑜𝑛 Ec.2 (digestión), sin embargo, los resultados no fueron
satisfactorios, de manera que este reactivo se descartó. En
El factor de conversión para la leche en polvo es de 6,38%
1885 Wilforth encontró que se podía acelerar la digestión
[1].
utilizando ácido sulfúrico y añadiendo un
6,38% 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 catalizador. Gunning en 1889 propuso añadir sulfato de
%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 7,65% 𝑁 ∗ = 48,80 % Proteína.
%𝑁 potasio que eleva el punto de ebullición del ácido
sulfúrico utilizado en la digestión para disminuir el
Observando la tabla nutricional de la bolsa de leche “El
tiempo de la reacción y en la actualidad se utiliza
Rodeo” de la cual sacamos la muestra e hicimos la
principalmente Sulfato de Cobre pentahidratrado
respectiva práctica, procedemos a calcular el porcentaje
𝑪𝒖𝑺𝑶𝟒 . 𝟓𝑯𝟐 𝑶 como catalizador [3].
de error relativo de la proteína:
El análisis de utilizado se aplica a compuestos orgánicos
en los cuales hay presencia de proteína, la cual contiene
aminoácidos, por consiguiente contiene grupos amino,
que son convertidos a 𝑁𝐻3(𝑔) mediante digestión en
𝐻2 𝑆𝑂4 concentrado, al cual se le adiciona una sal de
sulfato de cobre 𝐶𝑢𝑆𝑂4 , oxido de magnesio 𝑀𝑔𝑂 y
sulfato de potasio 𝐾2 𝑆𝑂4 , con el fin de aumentar el punto
de ebullición del 𝐻2 𝑆𝑂4 concentrado, ya que el matraz de
microkjeldahl donde se encuentra esta solución, se coloca
en un digestor que aumenta la temperatura de la solución
hasta hervirla, la reacción de importancia es la Reacción
1, en la cual ocurre la destrucción de la materia orgánica
para producir el sulfato ácido de amonio.
En la práctica realizada uno de los errores al momento de
realizar el método fue que cuando se digirió con ácido y
Imagen 1. Datos de nutrición leche el rodeo. se procedió a calentar no se tuvo el debido cuidado y este
al entrar en ebullición empezó a expandirse en todo el
Nos dice que hay 5g por cada 26g de proteína y nosotros espacio posible y de esta manera hubo residuos adheridos
sacamos 0,0387g de muestra, por tanto: a las paredes, razón por la cual atribuimos error
sistemático en este proceso, otra posible causa de error
0,0387𝑔 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 5𝑔 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
𝑋= = 7,442 𝑥 10−3 sistemático fue debida a un mal montaje en el sistema de
26,0𝑔 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎
destilación ya que no se contaba con los instrumentos y
condiciones de trabajo adecuadas con las cuales se
pudiera tener un proceso y resultado exitoso, atribuimos a
ello pérdida de amoníaco en estado gaseoso.
Retomando lo dicho en el párrafo anterior, al momento de
calentar la muestra esta se encontraba de color negro y
después al entrar en ebullición tratando de controlar su
temperatura para que se llevara a cabo la reacción una
parte de ella quedó adherida a las paredes del recipiente,
se evidenció una gran cantidad de gas carbónico el cual se
mantuvo en flujo constante en la muestra y después de ello
tomó un color azul verdoso, en el momento de retirarla
tenía un color azul casi traslucido, para realizar la
cuantificación se agregó la solución de 𝑂𝐻 − para que
reaccionara con el nitrógeno formando amoníaco el cual
se cuantificó con el ácido brómico. La titulación final se
realiza con base en lo siguiente: El amoniaco gaseoso
destilado es la base conjugada del amonio por lo cual es
una base fuerte que va a reaccionar con el ácido bórico,
un ácido débil según la reacción 2, cuando estas dos
especies reaccionan se forma además de amonio, el
borato, que es la base conjugada del ácido bórico, es la
primera disociación del ácido bórico. El borato formado
se puede titular con un ácido fuerte en este caso el HCl,
para formar de nuevo el ácido bórico y como todas las
relaciones son 1:1 razón por la cual se puede determinar
fácilmente el contenido de nitrógeno en la muestra.
Sí el amoníaco proveniente de 1,50 g de una muestra que
contiene 8,5% p/p de N, se recibe en HCl 0,1 M, el
mínimo volumen de ácido a utilizarse para garantizar que
el análisis sea correcto es de 91,07 mL, esto es debido a la
siguiente relación estequiométrica utilizando las
reacciones descritas anteriormente:
8,5𝑔𝑁 1𝑚𝑜𝑙 𝑁 1𝑚𝑜𝑙𝐻𝐶𝑙 103 𝑚𝑙 𝑆𝑙𝑛 𝐻𝐶𝑙
1,50𝑔𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 𝑥 𝑥 𝑥
100𝑔𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 14𝑔𝑁 1𝑚𝑜𝑙𝑁 0,1𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙
= 91,07 𝑚𝐿 de ácido.
4. CONCLUSIONES.
La principal fuente de error en la práctica fue sistemática,
ocasionada por la incertidumbre de los instrumentos. La
pérdida de nitrógeno durante la digestión y la digestión
incompleta de la muestra. En la destilación la
neutralización incompleta de la mezcla digerida, Perdida
de amoníaco por fugas en el circuito de destilación,
Perdida de amoniaco por refrigeración insuficiente en el
condensador.
Los tiempos para las etapas de digestión y destilación
sean los adecuados, ya que se puede dar una pérdida de
muestra.
5. BIBLIOGRAFÍA.
[1] Factor conversión lácteos.
Página web.
https://www.alceingenieria.net/nutricion/manual/tabl
adealimentos.htm Visitada 17/04/2018.
[2] Importancia del Nitrógeno.
Página web.
https://quimica.laguia2000.com/conceptos-
basicos/importancia-del-nitrogeno Visitada
17/04/2018.
[3] Método Microkjeldahl.
Página web.
http://www.grupo-
selecta.com/notasdeaplicaciones/analisis-
alimentarios-y-de-aguas-nutritional-and-water-
analysis/determinacion-de-proteinas-por-el-
metodo-de-kjeldahl-kjeldahl-method-for-protein-
determination/ Visitada 17/04/2018.

Teniendo en cuenta el valor reportado en la bolsa de leche

el rodeo, hallamos el % de error, el cual resulta ser muy
alto (34,41%), los errores cometidos en el análisis pueden
ser por múltiples factores, como por ejemplo
contaminaciones en el material volumétrico o que la
muestra no se digesto por completo, debido a que los
datos no fueron tomados por nosotros, la determinación
del error es incierta. En nuestro caso particular estábamos
realizando el blanco, pero no nos dio, debido a que el
material volumétrico no funcionó correctamente, la
presión del agua era muy mínima y las condiciones de los
instrumentos no eran las adecuadas para este tipo de
análisis.