Universidad Santo Tomás
Departamento de Ciencias Básicas
Laboratorio de Bioquímica
LABORATORIO: “CINÉTICA
ENZIMÁTICA, EFECTO DE T° Y
pH”
Ariel Bravo, Marcela Cubillos, Patricia Fuentes.
Marcelacubillosg@gmail.com
RESUMEN:
En el practico se realizaron dos experiencias para
evaluar el efecto de la temperatura y el pH en la
actividad catalítica de la enzima fosfatasa alcalina, en
la primera parte se prepararon cinco tubos, uno de
ellos actuó como blanco y a los demás se les agregó la
enzima, agua destilada y distintos pH, se realizaron
cierto procedimientos para luego medir la absorbancia
de cada solución.
En la segunda actividad se prepararon cuatro tubos con
la misma cantidad de enzima, agua destilada y pH,
pero se sometieron a diferentes temperaturas,
posteriormente se realizaron diferentes
procedimientos para medir su absorbancia.
Palabras claves: Enzima, Fosfatasa alcalina, absorbancia.
INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS:
“Los enzimas son proteínas que catalizan reacciones
químicas en los seres vivos, son catalizadores, es
decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción,
aumentan notablemente su velocidad. No hacen
factibles las reacciones imposibles, sino que
solamente aceleran las que espontáneamente podrían
producirse. Ello hace posible que en condiciones
fisiológicas tengan lugar reacciones que sin
catalizador requerirían condiciones extremas de
presión, temperatura o pH.”. [1]
“El método más antiguo para estudiar mecanismos de
reacción enzimáticos consiste en la determinación de
la velocidad de la reacción y de modo en que esta
cambia en respuesta a cambios en los parámetros
experimentales, una disciplina conocida como
Cinética Enzimática”. [2]
En este práctico se trabajó con dos factores que afectan
la actividad de la enzima, el pH y la Temperatura.
“Para cada enzima existe un pH óptimo en relación
con la actividad, el cual varía según la región celular
en que se encuentre dicha enzima.
Las velocidades iniciales de muchas reacciones
enzimáticas exhiben formas de curvas en forma de
campana en función del pH.
Por otro lado, el factor temperatura aumenta la energía
cinética de las moléculas reaccionantes. La velocidad
aumenta con la temperatura, pero cuando la
temperatura llega a cierto valor, variable según la
enzima de que se trate, esta comienza a
desnaturalizarse y a su vez la velocidad de reacción
empieza a disminuir. Refiriéndose a temperatura
optima a aquella en que la velocidad de reacción sea
mayor”. [3]
La fórmula A Utilizar para medir la velocidad de la
Reacción por efecto del pH y Temperatura, será:
𝐴 1 𝑉
V= * * * fd *fe
𝜀∗𝑙 𝑡 𝑣
OBJETIVOS:
 Reconocer y Observar el efecto del pH y
temperatura en la actividad enzimática de la
fosfatasa alcalina.
 Obtener la velocidad por medio de la
absorbancia obtenida de la reacción
SECCIÓN EXPERIMENTAL
Para esta experiencia nos tocó dividirnos el trabajo en
grupos, en este caso se realizo el experimento de
efecto de pH en la actividad enzimática de la Fosfatasa
Alcalina, se prepararon y rotularon 5 tubos de ensayo,
en los cuales se agregó 0.4 ml de p-NPP de Sodio
0.02M y 1.6 ml de agua destilada, a todos los tubos por
igual, luego en el tubo 1 se le agregó 2.0 ml de Tampón
citrato 0.3 M a pH: 3.0, en el tubo 2 se le agregó 2.0
ml de Tampón citrato 0.3 M a pH: 6.0, al tubo 3 se le
agregó 2.0 ml de Tampón citrato 0.3 M a pH: 8.0, al
tubo 4 se le agregó 2.0 ml de Tampón citrato 0.3 M a
pH: 11.0 y por último al tubo número 5 (blanco) se le
 Universidad Santo Tomás
Departamento de Ciencias Básicas
Laboratorio de Bioquímica

agregó 2.0 ml de tampón fosfato.

Una vez realizado esto se le agregó 0,1 ml de la
enzima, se dejó a temperatura ambiente (20°C) por 15
min y se le agregó 3.0 ml de la solución 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3 1M
a cada tubo, un vez terminado esto se prosiguió a  De acuerdo con el efecto de la T°
medir absorbancia al espectrofotómetro.
 Efecto de la T° en la actividad enzimática - Tubo 1
de la Fosfatasa Alcalina. V = 0,243 x 0,066 x 40 x 40
V = 24,92
RESULTADOS: - Tubo 2
V = 0,236 x 0,066 x 40 x 40
 Calculos de velocidad de reacción de V = 24,92
acuerdo a la absorbancia obtenida - Tubo 3
Formula: V = A – G x 1 x V x fd fe V = 1,410 x 0,066 x 40 x 40
V = 148,8
E*I t v - Tubo 4
A = Absorbancia V = 1,895 x 0,066 x 40 x 40
V = 200,11
E = 18.5 M-1 Cm -1
 Gráfico de velocidad de reacción vs efecto
T = 15 minutos
de PH
V = 4 ml
V = 0,1 Velocidad de reaccion vs efecto
fd fe = 40 PH
400
 Cálculos efectos según el pH
200
- Tubo 1
0
V = 0,353 x 0,066 x 40 x 40
1 2 3 4 5
V = 37,27
Velocidad de Reaccion Temperatura
- Tubo 2
V = 0,243 x 0,066 x 40 x 40
V = 25,66

- Tubo 3
Fosfata alcalina estándar
V = 0,218 x 0,066 x 40 x 40
V = 23,02

- Tubo 4
Fosfata alcalina estándar
V = 0,243 x 0,066 x 40 x40
V = 25,66
 Universidad Santo Tomás
Departamento de Ciencias Básicas
Laboratorio de Bioquímica
 Gráfico de velocidad de reacción vs efecto
de temperatura
Velocidad de reaccion vs efecto
de temperatura
400
200
0 enzimática.
1 2 3 4 5
Velocidad de Reaccion Temperatura
DISCUSIÓN:
Velocidad de reaccion vs efecto
PH
400
200
0 Como se puede reflejar en nuestro grafico 2 en
1 2 3 4 5
Velocidad de Reaccion Temperatura
Se puede inferir del grafico 1, que la actividad
enzimática de la fosfatasa alcalina aumenta
exponencialmente hasta un tope por lo que se
deduce que el pH óptimo se obtiene a un pH 6 a
una velocidad de 0,577 UI/mL; por ende, por
debajo del pH mínimo y por encima del pH
máximo, la enzima se desnaturaliza según se
visualiza en el grafico 1.
En la mayoría de las enzimas biológicas, el pH
esta próximo o en pH neutro en donde predomina
la forma iónica activa, a valores de pH menores
y mayores su proporción disminuye, aumentando
la proporción de formas iónicas no activas [4].
aunque hay excepciones; a causa de ello la curva
de velocidad versus pH tiene aproximadamente la
forma de una campana como se refleja en nuestro
gráfico. El pH no solo afecta la actividad de las
enzimas, sino que también la estabilidad de ellas,
lo que contribuye a la disminución de la actividad
generalmente a valores extremos de pH. Es por
ellos la importancia biológica de los sistemas
tampón que mantienen en parámetros favorables
a las enzimas que se encargan de la catálisis en
nuestro organismo.
Por otro lado, el efecto de la temperatura en la
mayoría de la reacción química es favorable
siempre y cuando esta temperatura se mantenga en
rangos óptimos para que se produzca la catálisis
“El efecto de la temperatura en la actividad
enzimática de la fosfatasa alcalina al igual que en
pH, aumenta exponencialmente hasta un tope, en
donde va disminuyendo gradualmente luego de que
alcanzara su temperatura optima, aumentando por
ende la velocidad de la reacción, sin embargo, si la
temperatura aumentara o disminuyera
bruscamente se produciría una inactivación de la
encima fosfatasa alcalina llevando así, una
disminución de la velocidad” [5]
donde la velocidad de la reacción desciende
gradualmente pasados los 40 °C, por el contrario,
ocurre a los 38°C en donde la actividad enzimática
está en su pico, alcanzado su T° Optima y su
velocidad de 0,090 UI/mL.
CONCLUSIÓN
Podemos concluir que las enzimas presentan actividad
catalítica especifica aumentando la velocidad de las
reacciones, consumiendo sustratos para formar
productos requeridos en nuestros metabolismos. En
este práctico determinamos con valores cuantitativos
y comprobando a su vez que estas actividades
enzimáticas pueden afectarse por diferentes factores
que alteran a su vez su función como lo es, en este
caso, los cambios bruscos de pH Y T°, entre otros
factores.
Se trabajó de manera práctica y teórica para la correcta
realización y obtención de resultados que se
interpretan en los gráficos.
 Universidad Santo Tomás
Departamento de Ciencias Básicas
Laboratorio de Bioquímica

Se comprobó teóricamente que la

temperatura tiene un efecto en la actividad enzimática
inactivando la enzima cuando se generan cambios
bruscos de temperatura o su vez, disminuyendo la
velocidad de la reacción, en otras palabras, la perdida
de la temperatura optima en donde se presenta mayor
actividad enzimática puede disminuir su actividad o
función en nuestro organismo.

REFERENCIAS:

[1] Juan Manuel G. (s.a). Enzimas, de Curso de

Biomoléculas, Sitio web:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz1.htm
[2] David L. Nelson – Michael M. Cox . (s.a).
Enzimas. En Lehninger, Principios de Bioquímica
(pág. 194). Estados Unidos: Editorial Omega,
7°Edicion.
[3] Voet D (2004). Bioquímica. Panamericana (ed).
Velocidad de las reacciones enzimáticas (pp 502).
Monvideo, Uruguay.
[4] Laboratorio de Bioquímica, (2016), UST,
Departamento de Ciencias Básicas, Guía de
laboratorio: “Cinética Enzimática, efecto del pH y
Temperatura”, (pag.2)
[5] Pin,G.L - Guzmán C. J.. (s.a). DETERMINACIÓN
DE LOS NIVELES DE FOSFATASA ALCALINA
SÉRICA, de PDF Sitio
web:http://webcache.googleusercontent.com/searc
h?q=cache:http://www.fcv.uagrm.edu.bo/sistemab
ibliotecario/doc_tesis/PIN,%2520LEDA-
20101118-155347.pdf
Universidad Santo Tomás
Departamento de Ciencias Básicas
Laboratorio de Bioquímica
Universidad Santo Tomás
Departamento de Ciencias Básicas
Laboratorio de Bioquímica