Identificación y medición de la

respuesta inmune

PRUEBAS SECUNDARIAS
 La prueba a realizar depende de las
características del Ag

§ SOLUBLE PRECIPITACIÓN

§ PARTICULADO AGLUTINACIÓN

§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO FIJACIÓN DE

COMPLEMENTO
 Comparación precipitación - aglutinación

Y Y
Y

Y
Antígeno Anticuerpo Antígeno
SOLUBLE PARTICULADO

Y Formación de “retículo” “Amontonamiento”

Y
Y Y
Y PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN Y
 PRECIPITACIÓN

Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en

contacto con su anticuerpo específico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en
proporciones óptimas se insolubilizan dando una
reacción de precipitación
 Precipitación
Exceso de AC Exceso de Ag
Proporciones
óptimas
AC ESPECÍFICO MEDIO

Ag SOLUBLE PROPORCIÓN

Y Y Y Ag/mg
Y
Y YY

Y
Y

Y
Y
YY Y
Y Y Y
Y Y Y
Y
Y

Y
Y
Y

Y
Y
Y Y
RETÍCULO
SOLUBLE
 MEDIO

LÍQUIDO SÓLIDO

Test de Ascoli - Valente

CARBUNCLO

• DIFUSIÓN DOBLE
• INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
• INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
• CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)
DIFUSIÓN DOBLE Inmunodifusión en Gel de Agar

Fundamento: empleando el medio adecuado (agar

gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag
como Ac (difusión “doble”), de modo que al
encontrarse en proporciones óptimas,
interaccionen, produciendo una banda de
precipitado visible

Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

Test de Coggins para AIE

Placa de Petri

7
1 3 5 2 4 6 5. Antígeno específico
4. Suero testigo (+) (reactivo)
3. Suero problema
(reactivo)

1. Agar gel 1 1
6 2 6 2
6 2 6 2 7
7 7 7
5 3 5 3 4
4 4 4
2.Sacabocados
6.Cámara húmeda
48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
A
D. NEGATIVO

6 2 E. Fuertemente POSITIVO
7
F. POSITIVO
4 C B
D G
A. NEGATIVO
B. POSITIVO
C. Débilmente POSITIVO
F E I H

G. POSITIVO
H. Banda INESPECÍFICA
I. Banda INESPECÍFICA
APLICACIONES EN VETERINARIA

§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

§ PIROPLASMOSIS EQUINA

§ LEUCOSIS BOVINA

§ BRUCELOSIS OVINA

§ BRUCELOSIS CANINA
 AGLUTINACIÓN

Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:

bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su
anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une
por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión
agruma, produciendo una reacción de aglutinación.
FENÓMENO DE ZONA O PROZONA

Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con

respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de
tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión
de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de
dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la
aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de
sueros muy positivos.
A
G
L AGLUTINACIÓN
U
T AGLUTINACIÓN PASIVA
I
N COAGLUTINACIÓN
A
C HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.
I
Ó
N
 Y Y
Proporción
YY Y
+ YY Y YY
Antígeno
particulado Suero problema AGLUTINACIÓN
(reactivo)
Medio
 AGLUTINACIÓN

En PLACA En TUBO

Salmonella Brucella Micoplasma Brucella

BPA
SAT+2-ME PAL
 Aglutinación en placa: BPA
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado

1. Suero problema 2. Antígeno específico

(reactivo)

Aglutinoscopio + placa de
vidrio
 8 MINUTOS

3. Mezclar LECTURA E
INTERPRETACIÓN

Con GRUMOS Sin GRUMOS

AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME

SAT (Seroaglutinación en Tubo)

Se realizan en
Ig M Ig G simultáneo

2- ME (2- Mercaptoetanol)
 En TUBO: SAT + 2- ME

2. Solución fisiológica fenicada (SFF)

1. Suero problema 3. Antígeno

60 MINUTOS
SUERO
BPA (+) SAT

1/25 1/50 1/100 1/200 Título 37ºC-48 hs

2-ME
2. Solución 2-ME
 LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-48 hs

POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA

 Aglutinación en tubo: PAL
PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE

Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra

un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno
particulado coloreado, ambos se unirán, formando un
complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y
asciende con la nata
PAL

2. Antígeno (reactivo)

1. Leche problema

LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-1 hora

+ ++ +++ ++++
 APLICACIONES EN R. A.

BRUCELOSIS BOVINA

Prueba
TAMIZ BPA – ELISA I

COMPLEMENTARIAS SAT + 2-ME – FPA

ELISA C
DEFINITORIA FC

VIGILANCIA PAL - ELISA I

EPIDEMIOLÓGICA
PRUEBAS TERCIARIAS

v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN

v IN VIVO PROTECCIÓN
 NEUTRALIZACIÓN

Fundamento: estimación de la capacidad de una

anticuerpo de neutralizar la actividad biológica
de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro
 PROTECCIÓN

Fundamento: forma de análisis de neutralización

que se realiza totalmente in vivo para determinar
la capacidad protectora de un anticuerpo
específico frente a su antígeno
 RESPUESTA INMUNE CELULAR

v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS

v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T

v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B

v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS