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Post Lab No.1 Bioqui
Post Lab No.1 Bioqui
Los Rf obtenidos para la Cisteina, lisina , Acido Glutamico, metionina y muestra problema
fueron 0.485,0.151, 0.288, 0.454, 0.424 respectivamente. Y se determinó que el aminoácido
presente en la muestra problema fue cisteína, con una variación en su Rf de 14.38%.
Resultados
Mediante la técnica de cromatografía en capa fina permite separar los distintos compuestos
presentes en una muestra en base a su polaridad. En base a Kurman (2001) el adsorbente
(fase estacionaria) utilizado en la práctica, silica gel, posee propiedades polares que
permiten fijar moléculas polares en su superficie al darse interacciones dipolo-dipolo entre
la superficie de la placa y las moléculas, de manera que los aminoácidos que se quedan
retenidas con mayor facilidad y rapidez en la placa son aquellas que presenten un dipolo en
su cadena lateral R (es decir un enlace entre un átomo más electronegativo a otro).
En la cromatografía de capa fina el eluyente (fase móvil) que se utiliza suele ser menos polar
que la fase móvil. Para la practica el eluyente utilizado fue una solución de n-butanol: agua:
ácido acético, dicha solución presenta solventes polares (agua, acido acitico) y un solvente
relativamente polar (n-butanol).
En base a Casares (2006) el eluyente a utilizar debe de ser lo suficientemente polar para
poder desplazar los componentes polares presentes en las muestras a analizar, pero
también debe tener cierto carácter polar para poder desplazar aquellos compuestos no
polares presentes en la muestra; en el caso de utilizar un eluyente muy polar aquellos
solutos presentes en las muestras que sean apolares no serán transportados a lo largo de
la placa cromatográfica, por otro lado en el caso de utilizar un eluyente que sea
completamente apolar únicamente los solutos no polares serán transportados a lo largo de
la placa cromatográfica. El eluyente seleccionado para la práctica tiene la característica de
tener una propiedad polar por parte del agua y el ácido acético, pero también permite
movilizar y separar los compuestos no polares gracias a las ligeras propiedades no polares
que posee el n butanol, como consecuencia de su cadena de hidrocarburos.
En base a Skoog (2015) en la cromatografía de capa fina se presenta una separación de los
solutos presentes en una muestra como consecuencia de un equilibrio producido por la
afinidad del soluto tanto con la fase móvil (eluyente) como con la fase estacionaria
(eluyente). La atracción del soluto con respecto a la fase estacionaria o la fase móvil se
producirá por efecto de interacciones intermoleculares que se producen entre el soluto y
cada una de las fases.
En la práctica la fase móvil se desplazaba a través de la fase estacionaria por efecto de la
capilaridad, la cual depende de dos fuerzas principales la cohesión entre moléculas
semejantes y fuerzas de adhesión entre moléculas distintas.
A medida que la fase estacionaria se desplazó por la fase estacionaria y pasaba por la parte
de la placa en que se encontraban colocadas las soluciones de aminoácidos, estos fueron
separándose y movilizándose a lo largo de la palca a medida que lo hacia la fase móvil
(eluyente). Entre más polares fueron los aminoácidos estos tenían una mayor capacidad de
formar interacciones dipolo-dipolo con la placa cromatográfica, haciendo que estos se
retuvieran más rápido en la fase estacionaria y que no se desplazaran una distancia a lo
largo de la placa cromatográfica, mientras que aquellos aminoácidos menos polares
tendrán una mayor atracción a la fase móvil (la cual es menos polar que la estacionaria) y
recorrerán una mayor distancia respecto a la placa cromatográfica. Esta afinidad y
distribución de los aminoácidos entre las dos fases viene determinada por las cadenas
laterales (grupos R) de los mismos.
En base a Horton (2008) y como se puede esperar por sus estructuras (referirse a Tabla
no.12)los aminoácidos Lisina y acido glutámico son aminoácidos polares con carga, por
dicha razón, y como se puede confirmar con los resultados de la práctica (consultar tabla
no.9) se esperaría que estos aminoácidos tengan los valores de Rf más bajos debido que
además del hecho de ser polares, la presencia de carga conduce a que se produzcan
interacciones dipolo- dipolo e interacciones ion-dipolo más intensas, lo cual produciría a
que estos aminoácidos se retengan con mayor facilidad en la fase móvil más polar y que su
valor de Rf sea menor en comparación a los demás. Por otro lado los otros dos aminoácidos,
Cisteina y Metionina, son clasificados como aminoácidos polares neutros, los cuales debido
a que no presentan una carga no son retenidos con la misma facilidad que los otros dos
aminoácidos, dicha razón permite que se muevan una distancia mayor a lo largo de la placa.
Como se puede observar por su estructura y por lo que dice la teoría, La cisteína presenta
un Rf menor a la metionina debido a que la cisteína puede formar enlaces puentes de
hidrogeno, lo cual le hace tener una mayor interacción con un compuesto polar (en este
caso la placa de silica gel) y que se retenga dicho aminoácido con mayor rapidez que la
metionina. A pesar que valores teóricos de Rf no serán iguales a los obtenidos en la práctica,
se pueden tomar como referencia para comparar si dichos valores se encuentra en un
resultado aceptable para el experimento, lo cual se puede decir que si entran en un valor
considerablemente aceptable al evaluar la variación que tienen con respecto a los valores
teóricos (referirse a la tabla no.9)
Conclusiones
Los Rfs obtenidos para la Cisteina, lisina , Acido Glutamico, metionina y muestra
problema fueron 0.485,0.151, 0.288, 0.454, 0.424 respectivamente.
Referencias
Bibliográficas
En Línea
Jorrin, J. (S.f.) Separación de aminoácidos por cromatografía en capa fina. Departamento
de Bioquímica y Biología Molecular. Universidad de Rabanales, Cordoba. Disponible en:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/11%20CROMATOGRAFOA%20DE%20CAPA%20FINA%20DE%20AAs.pdf
Apéndice
Diagrama de equipo
Imagen no.1
Datos Originales
Tabla no.7 Distancia recorrida por el eluyente y los aminoácidos sobre la cromatoplaca
Compuesto Distancia recorrida
Eluyente (solución n-butanol: agua :ácido 6.6 ± 0.05 cm
acético)
Cisteína 3.2 ± 0.05 cm
Lisina 1 ± 0.05 cm
Ácido Glutámico 1.9 ± 0.05 cm
Metionina 3 ± 0.05 cm
Muestra no.2 2.8 ± 0.05 cm
Tabla no.8 Valores teóricos de Rf para aminoácidos
Aminoácido Valor de Rf
Cisteína 0.37
Lisina 0.12
Acido Glutámico 0.31
Metionina 0.51
Valores obtenidos de: Reach Devices USA (2010-2017)
Datos calculados
Tabla no.9 Valores de Rf determinados para cada aminoácido y la muestra, y porcentajes de error
Aminoácido Rf Calculado % de error respecto al
valor teórico
Cisteína 0.485 31.1%
Lisina 0.151 25.8%
Acido Glutamico 0.288 7.1%
Metionina 0.454 10.9%
Muestra no.2 0.424 --------------------------
Muestra de cálculos
Tabla no.11 Muestra de cálculos
Valor Formula Descripción Ejemplo
calculado
Relación de 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 Esta ecuación 3.2
𝑅𝑓: 𝑅𝑓:
frentes 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟𝑒𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒 presenta la 6.6
relación entre la = 0.485.
distancia
recorrida por la
fase móvil y la
distancia
recorrida por la
muestra.