6.

Centrifugar durante 10 minutos a 2500 RPM

7. Preparar solución A1 mas SDS AL O.5% y EDTA a 25mM

SDS 0.5%: es un detergente que rompe las membranas bacterianas y desnaturaliza

proteínas. El NaOH desnaturaliza el ADN. (Alberto Checa Rojas. 2017).

http://conogasi.org/articulos/metodo-extraccion-de-adn-plasmidico-lisis-alcalina-modificado/

EDTA evita la degradación del DNA durante la preparación y la electroforesis.

(Reactivos empleados en la electroforesis G.Claros Edición 2017)

http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/reactivos.htm

Mezclar bien hasta que que haya desintegración de las células

incubar la muestra homogenizada durante 10 min a temperatura ambiente.

8. adicionar 2 ml de fenol, suspender e incubar 10 min a temperatura ambiente agitando

frecuentemente.

Este proceso se realiza con la intecion de generar una precipitación de la proteínas e

homogenizar y quede todo de la misma uniformidad.

Fenol: ocasionado una purificación y precipitación de las proteínas de la sangre.

(Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) / Laboratorio de Genética Molecular)

9. centrifugar durante 10 min a 2500 rpm y recoger la fase acuosa superior en un tubo nuevo
de 1.5ml

En la fase acuosa queda el ADN, y en la fase organica quedan proteinas y otros

componentes contaminantes. ( alondra bravo 12 de dic. de 2016)

https://es.slideshare.net/Werwita/extraccin-de-adn-70065140

10. repetir nuevamente el paso 8.

11. en la fase acuosa recogida después de la segunda centrifugación añadir el mismo

volumen de cloroformo, para el iminar posibles restos de fenol, agitar fuertemente durante 15
segundos e incubar a temperatura ambiente por 3 min.

El Cloroformo: permite la separación de2f ases; el ADN queda enla fase acuosa y en la fase
orgánica quedan las proteínas y otros contaminantes. El Alcohol Isoamilico actua como
antioxidante. Reduce o imposibilita la formación de interfases durante la extracción de ADN.

(18 Jun. 2019 Universidad Industrial de Santander)

p=Aplicacion_AN_Purificacion&opc=tecnicas&idap=34

12. centrigufar a 16.000xg durnte 10 minutos y recoger la fase acuosa superior en un tubo
nuevo.

13. precipitar de 2-3 volumunes de etanol absoluto frio durante un minimo de 2 horas a 70
°C.

El DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol absoluto a muy baja
temperatura que hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un
precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto.

El DNA es el único componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace

visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la
acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota
sobre la capa del extracto. ( Laura Martínez Martín- 1º Grado Genética – UAB abril 2015)
http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart%
C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf

14. centrigugar 16000 por 5 min y lavar con etalon al 70 %

etanol al 70%: Es utilizado para eliminar el exceso de sal.( Abyntek, Jun 29, 2017)
http://www.abyntek.com/precipitacion-de-dna-con-etanol-vs-isopropanol/

15. resuspender en 50 UL de agua libre de RNAsas

conclusión.

Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, por procesos extenso pero que generan con
seguridad la estraccion de la hebra de ADN , para lo que es necesaria toda la atención y concentración para este
proceso.