Rev Cubana Farm 2002;36(1):28-34

Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos

VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS ANALÍTICOS

PARA LA IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN
DEL DEXTROMETORFANO JARABE
Alfredo Fernández Serret,1 Yeni Aguilera Cabrera,2 Iván Morales Lacarrere3 y Esther Alonso
Jiménez4

RESUMEN
Para realizar el control de la calidad del dextrometorfano jarabe, se aplicó la técnica
descrita en la USP 23, y se comprobó la fiabilidad de esta mediante la evaluación de la
precisión, exactitud, linealidad y especificidad. Se incluyen además, la determinación
de las características organolépticas, pH y contenido por frasco como ensayos propios
de medicamentos líquidos de administración oral o de uso externo.

DeCS: DEXTROMETORFANO/análisis; DEXTROMETORFANO/farmacología;

CONTROL DE CALIDAD; CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION;
CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; TOS/quimioterapia; QUIMICA
FARMACEUTICA.

La validación es el proceso esta- La validación proporciona un alto

blecido para la obtención de pruebas
documentadas y demostrativas de que un
método de análisis es lo suficiente fiable
y reproducible para producir el resultado
previsto dentro de intervalos definidos
(Validación de métodos analíticos.
Monografía. Sección catalana de la AEFI.
Comisión de normas de buena fabricación
y control de calidad. Sept., 1989:1-94).
grado de confianza y seguridad del método
analítico y se realiza con carácter obli-
gatorio cuando se desarrolla un nuevo
procedimiento, ya que permite asegurar
que el método propuesto hace lo que tiene
que hacer.1
Es necesario señalar que los métodos
descritos en farmacopeas u otros textos
oficiales se consideran validados, aunque

1
Master en Ciencias. Licenciado en Química. Investigador Auxiliar.
2
Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Hospital Clinicoquirúrgico "Enrique Cabrera."
3
Licenciado en Ciencias Farmacéuticas. Investigador Agregado.
4
Técnica en Tecnología Farmacéutica.

28
debe aclararse que ellos se refieren sola-
mente a métodos generales y a materias
primas. Estos no precisan de validación,
aunque deben ser comprobados antes de
su utilización rutinaria con la verificación
de la idoneidad en las condiciones de
laboratorio. Sin embargo, para el caso de
las formas farmacéuticas terminadas, que
pueden variar su composición cualitativa o
cuantitativa según el fabricante, habrá que
proceder en cada caso a la validación del
método analítico. Para demostrar la
aplicabilidad de estos métodos que no
tienen en cuenta todos los posibles
excipientes de una forma farmacéutica, será
necesario, por lo menos, efectuar una
validación abreviada que evalúe que la
especificidad, exactitud y precisión son
adecuadas (Validación de métodos
analíticos. Monografía. Sección catalana de
la AEFI. Comisión de normas de buena
fabricación y control de calidad. Sept.,
1989:1-94).
El presente trabajo tuvo como objetivo
la validación del método analítico reporta-
do en la USP 232 para el control de la calidad
del dextrometorfano jarabe, medicamen-
to antitusivo de gran eficacia empleado
ampliamente para combatir los accesos de
tos.3
MÉTODOS
• Para el desarrollo de este estudio se
empleó como materia prima el bromhidrato
de dextrometorfano (C18H25NO HBr H2O),
• •
perteneciente al lote 910156 del fabricante La
Roche, y muestras de los lotes 31, 32 y 33
para evaluar las especificaciones de calidad
del dextrometorfano jarabe.
Métodos analíticos para el control
de calidad
Se empleó la técnica analítica descrita
en la monografía para el control de la calidad
29
del jarabe de dextrometorfano según la USP
232 que incluye los ensayos siguientes:
Identificación. Se basa en la compro-
bación de la propiedad dextrorrotatoria de
la solución de bromhidrato de dextrome-
torfano obtenida después de un tratamiento
de extracción al jarabe. Las mediciones se
realizaron en un polarímetro Carl Zeiss. Este
ensayo se fundamenta en una reacción
química de coloración la cual permite
identificar compuestos que contienen el
grupo O- alquil unido a un anillo bencénico o
a un anillo en una estructura policíclica que
contiene un anillo bencénico.
Cuantificación. Se basa en la separación
selectiva del bromhidrato de dextrometorfano,
mediante la cromatografía líquida de alta
resolución de fase reversa por formación de
par iónico y la cuantificación de este, frente a
una muestra de referencia que emplea el
método de comparación absoluta o patrón
externo. Se empleó un cromatógrafo líquido
equipado con un detector UV, y se esta-
blecieron las condiciones operacionales
siguientes:
− Flujo de la fase móvil: 1,0 mL/min.
− Detector UV a longitud de onda: 280 nm.
− Sensibilidad del detector: 0,08 AUFS.
− Volumen inyectado: 20 µL.
Se incluyen además, la determinación
de las características organolépticas, pH y
contenido por frasco como ensayos
propios para el control de la calidad de los
medicamentos líquidos de administración
oral o de uso externo.4
Validación de los métodos de identificación
del principio activo
Especificidad. Se comprobó la especifi-
cidad de los métodos de identificación,
mediante la aplicación de las metodologías
descritas en la monografía a una muestra
placebo de la formulación.
Validación del método de cuantificación
del principio activo
Linealidad del sistema. Para el
estudio de la linealidad del sistema se
preparó una curva de calibración en un
intervalo de concentración desde 24,0 has-
ta 192,0 µg/mL (20-160 % de la cantidad
teórica declarada), que incluyó 7 concen-
traciones diferentes. El análisis se realizó
por triplicado.
Precisión del método. En el caso de
la repetibilidad, este estudio se realizó por
quintuplicado a una muestra de con-
centración única que representó el 100,0 %
de la cantidad teórica declarada; mientras
que para la reproducibilidad, se analizó con
la misma muestra homogénea de con-
centración única, y se efectuaron las valora-
ciones por 2 analistas en 2 d diferentes. Para
su evaluación se realizó un análisis de
varianza.
Exactitud, linealidad del método e
intervalo. Para el estudio de la exactitud
se empleó el método de recuperación, me-
diante la preparación de muestras con dife-
rentes niveles de bromhidrato de dextrometor-
fano, que representan el 80, 90, 100, 110 y
120 % de la concentración teórica del
principio activo en el jarabe, según la
formulación propuesta. Simultáneamente,
se analizaron la linealidad del método y el
intervalo. El análisis se realizó por triplicado.
Especificidad. Con el objetivo de
evaluar la especificidad del método
cromatográfico, se sometió el placebo de
la formulación seleccionada y el medi-
camento a hidrólisis ácida con ácido
clorhídrico 3 M, alcalina con hidróxido de
sodio 3 M y oxidación con peróxido de
hidrógeno a una temperatura de 100 °C por
3 h. Además, el placebo fue sometido a
calentamiento a 70 °C por 30 d.
Todos los resultados obtenidos fueron
evaluados estadísticamente con la ayuda
del programa Origin Versión 5.0 para
Windows.
30
RESULTADOS
Validación del método de identificación
del principio activo
La solución obtenida al someter el
placebo al proceso de extracción no
presentó actividad óptica. De igual forma
no se desarrolló coloración alguna
indicativa de la presencia de este tipo de
compuesto en la muestra de placebo
ensayada.
Validación del método de cuantificación
del principio activo
Linealidad del sistema. La curva de
calibración a 280 nm resultó ser lineal en
el intervalo de concentraciones compren-
didos entre 24,0 y 192,0 µg/mL. Al aplicar
el método de los mínimos cuadrados a los
resultados registrados se obtuvo la
ecuación de la recta que se expresó según
y = 11 019,41 x – 2 909,67. El coeficiente
de correlación lineal fue de 0,9998.
Al aplicar la prueba de linealidad se
obtuvo un valor de desviación estándar
relativa del 0,22 % y al aplicar la prueba
de proporcionalidad los límites de con-
fianza del término independiente incluyen
el cero.
Precisión del método. En la tabla 1 se
exponen los resultados correspondientes
a este estudio. Para el caso específico de
la repetibilidad, los coeficientes de varia-
ción fueron menores que 1,5 % y el
coeficiente de variación total menor que
2 %. Las F experimentales de Fisher resul-
taron ser menores que las tabuladas.
Exactitud, linealidad del método e intervalo
Los resultados obtenidos en el estudio
de la linealidad del método se muestran en
la tabla 2, donde la pendiente de la curva de
TABLA 1. Estudio de la precisión del método. Repetibilidad y reproducibilidad

Analista Día 1. Repetibilidad Día 2. Repetibilidad Reproducibilidad

Analista 1 1. 104,2 % 6. 103,7 %

2. 103,9 % 7. 104,4 %
3. 103,8 % 8. 104,1 % Xmedia= 104,1 %
4. 104,0 % 9. 103,1 %
5. 104,6 % 10. 104,3 % s = 0,39
Xmedia = 104,1 % Xmedia = 103,9 %
CV = 0,30 % CV = 0,51 %
11. 104,4 % 16. 104,2 % n = 20
Analista 2 12. 104,0 % 17. 103,8 %
13. 104,5 % 18. 104,0 %
14. 104,0 % 19. 103,9 % CV= 0,38 %
15. 104,7 % 20. 104,8 %
X media = 104,2 % Xmedia = 104,1 %
CV= 0,30 % CV = 0,38 %

Intervalo de confianza = 104,1 ± 0,2

Límites de aceptación: Repetibilidad CV ± 1,5 %
Reproducibilidad CV ≤ 2,0 %

Fuente de Grados de Suma de Medias de

variación libertad (gl) cuadrados cuadrados Fcal Ftab

Analista 1 0,242 0,242 Fa Fgla/Fgld

(a) 2,9876 38,51
Día 2 0,162 0,081 Fd Fgld/Fgle
(d) 0,5087 4,69
Error 16 2,548 0,1592
(e)

F = F de Fisher; gla = grados de libertad para los analistas; gld = grados de libertad para los días; gle = grados
de libertad del error.
Fa < Fgla/gld; Fd < Fgld/gle.

recuperación presentó un valor de 0,9972. TABLA 2. Exactitud del método. Curva de recuperación
La curva de recuperación mostró un mg % de
comportamiento lineal dado por la ecuación mg añadidos recuperados recuperación Precisión
de la línea recta y el coeficiente de 96,0 94,5 98,4 X media = 99,0 %
correlación de 0,9993. La recuperación media 95,4 99,4 S2 = 0,30
fue del 98,7 %. Al aplicar la prueba de 95,3 99,3 CV = 0,56 %
108,0 105,6 97,8 Xmedia = 98,1 %
linealidad se obtuvo un valor de desviación 106,8 98,9 S2 = 0,49
estándar relativa igual al 1,0 % y el intervalo 105,4 97,6 CV= 0,71 %
120,0 118,6 98,8 Xmedia = 98,5 %
de confianza del término independiente 118,2 98,5 S2 = 0,062
incluyó el cero. 118,0 98,3 CV= 0,52 %
132,0 130,7 99,0 Xmedia = 99,1 %
Especificidad. En la figura 1 se presen- 130,3 98,7 S2 = 0,26
tan los cromatogramas de las muestras 131,6 99,7 CV = 0,52 %
144,0 142,5 98,9 Xmedia = 98,9 %
placebos sometidas a condiciones drásticas. 141,9 98,5 S2 = 0,123
En todos los casos se observa la aparición 142,9 99,2 CV = 0,36 %

de picos secundarios que eluyen a tiempos Límites de aceptación: Rmedia = 98,7 %

de retención pequeños, los cuales R media 98,0 – 102,0 % CV = 0,58 %
CV ≤ 2,0 %
modifican el cromatograma de la muestra Ecuación de la curva de recuperación:
y = 0,9972 x – 1,1533.
placebo. r = 0,9993.

31
 2,158
2,51
FIG. 1. Cromatogramas de las muestras placebos
sometidas a condiciones drásticas: a) placebo sin
degradar, b) placebo degradado a 70 °C, c) hidrólisis
ácida del placebo, d) hidrólisis básica del placebo y
e) oxidación con peróxido de hidrógeno.
Los cromatogramas de las muestras de
medicamento sometidas a hidrólisis ácida,
básica y oxidación con peróxido de
hidrógeno se presentan en la figura 2.
No se observó una hidrólisis apreciable
en medio ácido ya que al término de 3 h con
tratamiento con ácido clorhídrico (b) se
obtuvo una concentración del 97,8 % de
principio activo. Sin embargo, la hidrólisis en
medio básico (c) mostró una degradación
más acentuada, para una concentración del
76,0 % de dextrometorfano. De igual forma,
se obtuvo la degradación del medicamento
en medio oxidante (d), con el 66,0 % de este
después de sometida la muestra al tratamiento.
Los resultados del control de la calidad
de los lotes estudiados se presentan en la
tabla 3.
32
FIG. 2. Cromatogramas de las muestras del
medicamento sometidas a condiciones drásticas: a)
medicamento sin degradar, b) hidrólisis ácida de la
muestra, c) hidrólisis básica de la muestra y d)
oxidación con peróxido de hidrógeno.
DISCUSIÓN
Los ensayos realizados para el estudio
de especificidad en la muestra placebo,
comprobaron que los métodos descritos
resultaron ser específicos. Para ambos
casos, ninguno de los excipientes
presentes en la formulación interfieren en
los ensayos de identificación propuestos
en la monografía.
Se comprobó el cumplimiento de la
linealidad del sistema en el intervalo de
concentraciones estudiado por el elevado
valor del coeficiente de correlación
alcanzado. El valor de la desviación estándar
relativa resultó adecuado si se tiene en
cuenta que el valor aceptable debe ser
 TABLA 3. Resultados analíticos del control de la calidad
Ensayos Lote 31 Lote 32
Características Responde Responde
organolépticas
Identificación A) Responde A) Responde A) Responde
B) Responde B) Responde B) Responde
Contenido del 119,0 mL 118,0 mL
frasco
pH 3,88 3,88
Valoración 102,3 % 103,1 %
menor o igual que 2 %. De igual forma el
intercepto de la curva no fue significativo.
Los coeficientes de variación
resultaron ser menores que 1,5 %, lo cual
demuestra la buena repetibilidad del méto-
do de cuantificación. No se observaron
diferencias significativas entre las medias
de ambos analistas, ya que Fa<Fgla/gld, por
tanto el método analítico fue reproducible
por ambos analistas. De igual forma, no se
detectaron diferencias significativas entre
ambos días (Fd<Fgld/ /gle), y el método
analítico fue reproducible en distintos días
por un mismo analista. El coeficiente de
variación total menor que 2 % demostró que
el método presenta buena reproducibilidad.
La curva de recuperación mostró un
comportamiento lineal debido al valor del
coeficiente de correlación cercano a la
unidad. La exactitud y linealidad del método
se comprobaron mediante las pruebas
estadísticas realizadas, ya que el valor de la
pendiente no difiere significativamente del
valor unitario y el valor del intercepto no
difiere significativamente de cero. La
recuperación media cumplió con el criterio
de aceptación para este tipo de análisis, lo
cual coincide con los trabajos publicados
por otros autores.5,6 Los resultados permi-
33
Lote 33 Especificaciones
Responde Líquido ligeramente
siruposo, incoloro, olor
característico y sabor
dulce-amargo
A)Solución
dextrorrotatoria
B) Coloración amarilla
que torna a rojo.
119,0 mL No menor de 118,0 mL
3,90 3,8-4,20
103,4 % 95,0-105,0 %
tieron concluir que el método es preciso,
exacto y lineal en el intervalo de
concentración estudiado.
De la figura 1 se puede concluir que
no existe interferencia ni de los excipientes
ni de sus productos de degradación, ya que
estos eluyen a menores tiempos de reten-
ción que el dextrometorfano, por lo que el
método resultó ser específico con respecto
al placebo y a sus productos de degra-
dación.
El dextrometorfano resultó ser estable
en medio ácido; sin embargo, la hidrólisis
en medio básico mostró una degradación
acentuada, lo cual permite concluir que el
principio activo se degrada fácilmente en
esta condición. De igual forma se observó
la degradación del medicamento en medio
oxidante. Por lo tanto, el método cromato-
gráfico resultó ser específico para cuantificar
el principio activo después de la degra-
dación de este.
Los ensayos de identificación y valo-
ración cumplieron con los requisitos de
calidad establecidos según USP 23 para el
medicamento estudiado. Se incluyen ade-
más, el cumplimiento de las características
organolépticas, contenido por frasco y pH,
según los límites establecidos para medica-
mentos de administración oral o de uso externo.
 SUMMARY
The technique described in the USP 23 was applied to carry out the quality control of
the dextrometorphan syrup . The reliability of this method was proved by evaluating
the accuracy, exactitude, lineality and specificity. The determination of the organoleptic
characteristics, pH and content per bottle were also included as own trials of liquid
drugs for oral adminstration or for external use.

Subject headings: DEXTROMETORPHAN/pharmacology; QUALITY CONTROL;

HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY; DRUGS QUALITY; COUGH/drug
therapy; CHEMISTRY, PHARMACEUTICAL.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1 . Calpena AC, Escribano E, Fernández C. Validación de métodos analíticos. Farm Clin 1990;17(9):749-58.
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generales de calidad. La Habana, 1984.
5. Lau O, Cheung Y. Simultaneous determination of some actives ingredients in cough-cold syrups by gas-liquid
chromatography. Analyst 1990;115(10):1349-53.
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simultaneous determination of antihistamines, sympathomimetic amines and dextromethorphan in bulk drug
material and dosage forms. Anal Lett 1991;23(5):883-91.

Recibido: 13 de noviembre del 2001. Aprobado: 20 de diciembre del 2001.

M.Sc. Alfredo Fernández Serret. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave. 26 No. 1605
entre Boyeros y Puentes Grandes, municipio Plaza de la Revolución, Ciudad de La Habana, CP 10600, Cuba.

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