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1. Resumen
Los aminoácidos son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino, un grupo acido carboxílico
y son parte esencial para los seres humanos; además de formar los péptidos, polipéptidos y
posteriormente las proteínas, tienen funciones específicas que ayudan a que nuestro organismo
funcione a la perfección. Hay algunos que nuestro sistema puede crear por sí mismo, pero hay otros
que no y por ello es necesario consumirlos de alimentos externos, como el huevo y diferentes
vegetales. Para identificarlos, resulta necesario acudir a varias pruebas en el laboratorio con las
cuales se puede deducir con que tipos de aminoácidos nos encontramos en determinados alimentos
o compuestos químicos. En nuestra prueba pudimos observar con que características cuentan los
diferentes aminoácidos analizados y también se pudo analizar el huevo el cual se puede decir que
es rico en aminoácidos y proteínas.
Abstract:
Amino acids are organic molecules that contain an amino group, a carboxylic acid group and they
are very important for humans; also they form the peptides, polypeptides and proteins, they have
a lot of specific functions for helping our body works perfectly. There are some of them that our
body creates for itself, as others that can not be created for this reason it is important eat them in
food, like eggs and others vegetables. To identify this it is necessary have a lot of lab tests that help
us to deduct what kind of amino acids we can find in food or chemical compounds. In our test we
saw some features that the amino acids have and also we can analyze the egg and we can say that
this has a lot of amino acids and proteins.
2. Introducción:
¿Qué es un aminoácido?:
Los aminoácidos son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino (NH2) en uno de los
extremos de la molécula y un grupo ácido carboxílico (COOH) en el otro extremo. Los aminoácidos
son las unidades que forman a las proteínas, sin embargo tanto estos como sus derivados participan
en funciones celulares tan diversas como la transmisión nerviosa y la biosíntesis de porfirinas,
purinas, pirimidinas y urea. Los polímeros cortos de aminoácidos (péptidos) tienen funciones
importantes en el sistema neuroendocrino como hormonas, factores que liberan hormonas,
neuromoduladores o neurotransmisores. (Gutiérrez, S/F)
En general los aminoácidos están constituidos por un carbono alfa al cual se unen un grupo funcional
amino, uno carboxilo, un hidrógeno y un grupo R o lateral. Las diferencias entre los aminoácidos se
deben a la estructura de sus grupos laterales o R (residuo o resto de la molécula). Figura 1.
Existen dos tipos principales de aminoácidos que están agrupados según su procedencia y
características. Estos grupos son aminoácidos esenciales y aminoácidos no esenciales.
Los aminoácidos que se obtienen de los alimentos se llaman "Aminoácidos esenciales". Y por otro
lado, los aminoácidos que puede fabricar nuestro organismo a partir de otras fuentes, son llamados
"Aminoácidos no esenciales".
Aminoácidos esenciales:
Aminoácidos no esenciales:
-Arginina: Este aminoácido está considerado como "El Viagra Natural" por el aumento del
flujo sanguíneo hacia el miembro viril, retrasa el crecimiento de los tumores y el cáncer
mediante el refuerzo del sistema inmunológico, aumenta el tamaño y la actividad de la
glándula del timo, que fabrica las células T, componentes cruciales del sistema
inmunológico.
- Acido aspártico: Aumenta la resistencia y es bueno para la fatiga crónica y la depresión,
rejuvenece la actividad celular, la formación de células y el metabolismo.
- Cisteína: Funciona como un antioxidante de gran alcance en la desintoxicación de toxinas
dañinas.
- Acido glutámico: Actúa como un neurotransmisor excitatorio del sistema nervioso central,
el cerebro y la médula espinal.
- Glutamina: Ayuda a construir y mantener el tejido muscular, ayuda a prevenir el desgaste
muscular que puede acompañar a reposo prolongado en cama o enfermedades como el
cáncer y el SIDA.
- Glicina: Retarda la degeneración muscular, mejora el almacenamiento de glucógeno,
liberando así a la glucosa para las necesidades de energía.
- Ornitina: Ayuda a pedir la liberación de hormonas de crecimiento, lo cual ayuda al
metabolismo de la grasa corporal.
- Prolina: Mejorar la textura de la piel, ayudando a la producción de colágeno y reducir la
pérdida del mismo a través del proceso de envejecimiento.
- Serina: Es necesario para el correcto metabolismo de las grasas y ácidos grasos, el
crecimiento del músculo, y el mantenimiento de un sistema inmunológico saludable.
- Taurina: Fortalece el músculo cardíaco, mejora la visión, y ayuda a prevenir la
degeneración muscular, es el componente clave de la bilis, la cual es necesaria para la
digestión de las grasas.
- Tirosina: Es un precursor de la adrenalina y la dopamina, que regulan el estado de ánimo.
Estimula el metabolismo y el sistema nervioso, actúa como un elevador del humor, suprime
el apetito y ayuda a reducir la grasa corporal. (Anónimo, S/F).
La síntesis de proteína a partir de aminoácidos se lleva a cabo al unirse los aminoácidos individuales
hasta formar cadenas largas. La unión de un aminoácido con otro se denomina un enlace peptídico.
Para llevarse a cabo este tipo de enlace el extremo amino de uno de los aminoácidos (el cual pierde
un hidrógeno) se combina con el extremo carboxílico del otro aminoácido (quien pierde un grupo
hidroxilo) creándose un enlace covalente entre ellos y formándose al mismo tiempo una molécula
de agua. El compuesto formado recibe el nombre de péptido. En la figura 2 se puede observar cómo
se realiza este proceso
Dos aminoácidos unidos forman un dipéptido, tres reciben el nombre tripéptido y una cadena más
larga de aminoácidos recibe el nombre de polipéptido. Cuando la cadena polipeptidica tiene más de
100 aminoácidos se denomina proteína. (Olvera, 2007).
3. Reactivos:
-Patrón de aminoácidos 1 g/L: Tirosina, Triptófano, Arginina, Cisteína, Histidina, Acido aspártico,
Isoleucina, Fenilalanina, Serina y Prolina.
-Reactivo de Millon
- Nitrito de Sodio al 5%
- Reactivo de Erlich
- Na2Co3 10 g/L
4. Materiales:
- 15 tubos de ensayo
- 1 Espátula
- 1 Pipeteador
- Termómetro
- Placa de calentamiento
- Papel tornasol, azul y rojo
Material de prueba: Solución problema de aminoácidos. Clara de huevo 1:6 con agua destilada.
Aminoácidos de venta libre.
5. Procedimiento:
Reacción de Ninhidrina:
En un tubo de ensayo calenté suavemente 1 mL de ácido aspártico, realicé el mismo
procedimiento con uno que contenía 1 ml de solución problema y otro que contenía clara
de huevo. A cada tubo agregué 0.5 mL de Ninhidrina. Calenté al baño de María por 10
minutos. Por ultimo observé el cambio de coloración.
Reacción Xantoproteica:
Calenté hasta 2 mL de Triptófano, en 2 mL de Ácido nítrico concentrado hasta que se hirvió.
Repetí el procedimiento con 2 mL de la solución problema. Dejé enfriar y observé el cambio
de color. Posteriormente agregué cuidadosamente gota a gota Hidróxido de Sodio al 40%
hasta que alcanizó. Observé el cambio de coloración y anote mis resultados.
Reacción de Millon:
En tres tubos de ensayo agregué por separado 3 mL de Tirosina, 3mL de huevo y 3mL de la
solución problema respectivamente, agregué 5 gotas de Millon a cada uno de los tubos con
cuidado de que dicho reactivo no quedara en las paredes; posteriormente calenté en un
baño de María durante 10 minutos. Por ultimo dejé enfriar y agregué 5 gotas de Nitrito de
Sodio (NaNO2).
Reacción de Sakaguchi:
Enfrié en agua helada tres tubos de ensayo que contenían 5 mL de la solución de Arginina,
5 mL de la clara de huevo y 5 mL de la solución problema respectivamente. Añadí a cada
uno 1 mL de Hidróxido de Sodio al 10% y 1 mL de Alfa- Naftol al 5%; Mezclé y dejé 3 minutos
en baño de hielo. Posteriormente añadí 20 gotas de Hipoclorito de Sodio. Agité bien y
pasados 20 segundos, agregué 1 mL de urea. Finalmente mezclé bien y anoté los resultados.
Prueba de Nitroprusiato:
Tomé tres tubos de ensayo limpios y les agregué 2 mL de Cisteína, 2mL de clara de huevo y
2mL de la solución problema respectivamente. Añadí 0.5 mL de Nitroprusiato de Sodio
recién preparado a cada tubo. Mezclé bien y agregué a los tres 0.5 mL de NH4OH. Agité y
observé los resultados.
Prueba de Ehrlich:
Mezclé 1 mL de Ácido Sulfanilico con 1 mL de Nitrito de Sodio al 0.5%, dejé reposar la mezcla
durante 15 minutos. Posteriormente añadí 1 mL de Tirosina, alcalinicé con una gota de
Hidróxido de Amonio. Observé el cambio de coloración. Repetí la prueba con la solución
problema y con la clara de huevo.
Prueba de Pauly:
Mezclé 1 mL de Ácido sulfanilico con 2 mL de Triptófano; Enfrié con agua helada, agregué 1
mL de solución de Nitrito de Sodio y lo volví a dejar en frio durante 3 minutos. Por ultimo
alcalinicé agregando 2 mL de Na2CO3. Observé el cambio de coloración y anoté los
resultados. Realicé el mismo procedimiento con la clara de huevo y con la solución
problema.
Prueba de Biuret:
A 2 mL de la solución de la proteína añadí 3 mL del reactivo de Biuret, mezclé y calenté a
37°C durante 10 minutos. Dejé enfriar y observé la reacción.
6. Resultados.
Observaciones:
1 Ninhidrina:
Patrón: Serina
La serina toma primero un color azul intenso que posteriormente se convierte en purpura,
dando positivo a la prueba.
2 Xantoproteica:
Patrón: Tirosina
3 Millon:
Patrón: Tirosina
Tirosina: Todo el contenido se torna de color rojo que con el tiempo se va intensificando
hacia color rojo sangre.
Muestra Problema: Se formó un precipitado color rojo que presentó turbiedad en la parte
superior. El Color rojo se desplaza por todo el tubo dando un color rosado traslucido en el
tubo. Al agregar el NaNO2, se observa la coloración naranja.
4. Hopkins Cole:
Patrón: Triptófano
Huevo: Se presentó una coloración naranja, no se presentó el anillo violeta, hubo una
interfase de color naranja y en la parte superior un color blanco espumoso.
Sustancia problema: Color transparente con una coloración amarillenta en la parte superior.
Triptófano: Coloración amarillenta en la parte inferior, una coloración naranja en la parte
media y transparente e la parte superior, no se presentó la coloración violeta.
5 Sakaguchi:
Patrón: Arginina
Arginina: Junto al color rojo intenso, se presentó un precipitado transparente.
Solución problema: Presentó un color naranja translucido junto con un precipitado
transparente
6 Nitroprusiato de Sodio:
Patrón: Cisteína
7 Acetato de Plomo:
Patrón: Cisteína
Cisteína: primero, presenta un precipitado de color amarillo, mientras que la parte superior
presenta turbiedad; cuando se le agrega el acetato de plomo, se forma una fase en la parte
superior de color rosa, el precipitado permanece y en el medio hay turbiedad. Al someterse
a baño de María, la parte superior toma coloración gris/ negra.
Huevo: Al agregar el acetato de Plomo, se puede notar la formación de fibras de color rojo/
naranja en la parte superior del tubo y en la parte inferior hay turbiedad. Al someterlo al
baño de María, la fase superior toma coloración negra.
8 Ehrlich:
Patrón: Tirosina
Tirosina: Se disuelve y al alcalinizarse, presenta una coloración amarilla con un aro rojo.
Huevo: Solo presenta un precipitado
Sustancia problema: Presenta coloración amarillenta sin el aro rojo
9 Pauly:
Patrón: Triptófano
Prueba de Biuret:
Adiciones Resultado
3 mL de Biuret+ calor Solución azul celeste
Baño de María 1 Minuto Solución azul oscuro
Baño de María 3 minutos Solución color azul rey
Baño de María 10 minutos Se inicia la formación de una capa superficial
densa y espesa de color verde
Tabla 2: Resultados para la prueba de Biuret teniendo como muestra la clara de huevo.
7. Análisis de resultados:
A. Prueba de la Ninhidrina:
La Ninhidrina reacciona con los Alfa- L- Aminoácidos libres a un pH entre 4 y 8, formando CO2, NH3
y un aldehído. El amoniaco producido en la reacción se combina con una molécula de Ninhidrina
reducida y en otra forma reducida y en otra forma oxidada, formando un compuesto de color azul.
Los aminoácidos Prolina e Hidroxiprolina también reaccionan con la Ninhidrina, pero en este caso,
se obtiene un color amarillo en vez del característico azul.
La Ninhidrina es un oxidante energético que por una desaminación oxidativa de los aminoácidos
conduce a la formación del aldehído correspondiente, con liberación de amoniaco y gas carbónico
y formación de la Ninhidrina reducida o hidridantina. La molécula de hidridantina, en presencia de
otra de Ninhidrina, condensa a través del amoniaco produciendo una estructura denominada
indanona o púrpura de Ruhemann, manifestando un color rojizo, excepto para la prolina,
Hidroxiprolina y en menor medida para la histidina. Presenta su máximo de absorbancia a los 570
nm. En la figura 3 podemos observar cómo se lleva a cabo la reacción.
-Serina: El resultado fue positivo debido a que la serina es un aminoácido Alfa- L- Aminoácido, más
sin embargo, no se produjo la estructura denominada purpura de Ruhemann, ya que en ningún
momento se formó un color rojo en la reacción.
- Clara de huevo: El color amarillo podría indicar que la clara de huevo en su composición presente
Prolina, o Hidroxiprolina corroborando lo que dice la teoría.
-Solución problema: Es notable que hubo una reacción con la Ninhidrina ya que se presentó la
coloración purpura, característica de esta prueba.
B. Prueba Xantoproteica:
Es característica de los aminoácidos que contienen un núcleo aromático, como lo son la tirosina,
fenilalanina, y triptófano. Los anillos aromáticos se someten a nitración lo cual conlleva a la
formación de derivados nitro de color amarillo, el cual se vuelve naranja por la adición de álcalis. La
mayoría de las proteínas también dan positivo a esta reacción.
La reacción Xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofilia aromática de los
residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico que reacciona. (Pazo, 2012)
C. Reacción de Millon:
Esta prueba dará positiva cuando los compuestos poseen grupos fenólicos como la tirosina, que de
positivo, indica la presencia de este aminoácido en la estructura del compuesto. Al calentar el
reactivo de Millon (mezcla nitrato y nitritos mercúricos disueltos en ácido nítrico concentrado), con
el ácido forma un precipitado rojo.
Cabe resaltar, que los únicos aminoácidos que darán positivo a esta prueba son la tirosina o sus
derivados. Si este no está presente, resulta imposible que este funcione. (Plummer, S/F)
- Probablemente la solución problema de esta prueba es también la tirosina o uno de sus derivados.
Cuando una solución contiene una proteína con triptófano o cuando este aminoácido se encuentra
libre, el grupo indolico presente en el radical reacciona con el ácido glioxilico (Ácido acético más
ácido Sulfúrico), dando lugar a la aparición de un anillo color violeta en la interfase de los líquidos
como prueba positiva para el ensayo. El ácido Acético glacial que ha sido expuesto a la luz contiene
ácido glioxilico. (Plummer, S/F).
La estructura exacta del compuesto violeta no se conoce, pero parece estar relacionado con el
producto de condensación del aldehído del ácido Glioxilico con los nitrógenos de dos anillos
indólicos, ya que también se pueden formar complejos con otros aldehídos. ( Velazquez, S/F)
La reacción de Hopkins Cole es positiva sólo para las proteínas que contienen Triptófano. Se supone
que el ácido concentrado hidroliza las proteínas en la interfase liberando el Triptófano para dar el
producto violeta. Sin embargo, el Triptófano puro en solución no da positiva la reacción, a menos
que se agreguen agentes oxidantes, por lo que es de suponer que el Triptófano de las proteínas no
se libera como tal, por lo cual la reacción presentada es sólo parcialmente correcta. (Velázquez, S/F)
-Triptófano: Hay dos posibles explicaciones para que nuestra prueba haya dado negativa. La primera
es que nuestro triptófano se haya encontrado puro en solución y no se le hayan agregado otros
agentes como lo explica Velázquez o que se haya realizado mal la prueba; es más probable la
segunda opción ya que no se tuvo el cuidado suficiente al realizarse y no se fue tan minucioso con
las medidas.
- Huevo: Presenta triptófano en su estructura, pudo dar negativo debido a la poca cantidad que se
presenta de este aminoácido en el huevo, o también cabe la posibilidad de que no se haya realizado
muy bien el experimento.
-Solución problema: Al dar un resultado tan diferente a las otras dos reacciones en las cuales las
muestras si contenían triptófano, podemos inferir que no tiene triptófano en su composición.
E. Reacción de Sakaguchi:
Esta reacción es específica para el aminoácido Arginina, el cual posee en la estructura del radical el
grupo guanidino; este en presencia de Alfa- Naftol se oxida con Hipoclorito alcalino perdiendo a su
vez un grupo amino. La arginina se oxida al combinarse Alfa- Naftol, forma una sustancia de color
rojo que se intensifica con el tiempo.
-Arginina: Dio positivo con un rojo intenso como resultado, comprobando la teoría.
-Huevo: No se realizó la prueba con este material más sin embargo, podemos deducir que hubiera
dado positivo, ya que el huevo tiene en su composición 755 mg de este aminoácido. Siendo este
uno de los que más contiene.
-Solución problema: El resultado fue un naranja traslucido, por lo tanto podemos afirmar que dicha
solución no tenía en su composición Arginina.
Los aminoácidos que contienen Azufre al mezclarse con NH4OH desprenden el Azufre en forma de
Sulfuro de Sodio el cual al combinarse con el Nitroprusiato de Sodio forman un complejo de color
carmesí.
Los grupos tioles reaccionan con Nitroprusiato de Sodio (Na, Fe (CN)5 NO) en presencia de un exceso
de Amoniaco para dar un color rojo. (Plummer, 1981). Figura 5.
- Cisteína: La prueba dio positivo debido a que en su composición la Cisteína contiene grupos tioles
(formula química, HS-CH2-CHNH2-COOH).
- Huevo: La clara de huevo, presenta el aminoácido cisteína en su composición, y por lo tanto existen
grupos tioles en él; sin embargo, estos se encuentran en muy poca cantidad (236 mg) siendo el
segundo aminoácido con menor cantidad.
- Solución problema: Es muy probable que este aminoácido no contenga grupos tiol ni Azufre en su
composición.
Los aminoácidos (Cisteína, Metionina, y la cistina) por tener grupos azufrados, el primero mercapto,
el segundo metiltiol y el ultimo un puente disulfuro; producen precipitados al tratarlos con acetato
de Plomo después de la reducción.
- La Cisteína: Nuestra prueba va acorde con la teoría ya que la cisteína contiene grupos azufrados.
H. Prueba de Ehrlich:
El reactivo de Ehrlich (p- dimetillamino- Benzaldehido), reacciona con compuestos orgánicos tales
como el indol, aminas aromáticas y compuestos ureicos para originar soluciones coloreadas.
También resulta positiva para la histidina y la tirosina aminoácidos que no pertenecen a un mismo
grupo químico. En la figura 6 se puede observar como es la reacción con este reactivo.
- Huevo: El huevo contiene tirosina y otros aminoácidos con aminas aromáticas, la posible razón
de que nuestra prueba haya dado negativo es que se haya realizado mal el experimento.
- Solución problema: Dio un resultado negativo por lo cual podemos inducir que esta solución no
contenía aminoácidos como la tirosina o la histidina, los cuales tienen aminas aromáticas en su
composición.
I. Prueba de Pauly
Esta prueba es específica para detectar grupos imidazoles, fenoles y aminas de ciertos aminoácidos.
En esta prueba el ácido sulfanilico disuelto en ácido clorhídrico se mezcla con el nitrito de sodio se
produce Acido nitroso, el cual reacciona con la sal produciendo sal de diazonio. En la segunda etapa
de esta prueba se le incorpora un compuesto fenólico, imidazol o amina y un ácido o base débil para
que la sal de diazonio se asocie con el compuesto generando un compuesto azo de color rojo. En
esta prueba la muestra problema fue negativa descartando así posibles grupos fenoles, imidazoles
o aminas en su grupo R. (Teijon, 2006).
- Huevo: El triptófano es un aminoácido que abunda en el huevo, por ello acorde a la teoría, la
prueba debió haber dado positiva. La razón por la cual el resultado fue negativo puede que sea la
mala realización del experimento.
-Solución problema: Prueba negativa, indica la no aparición de grupos fenoles, aminas ni grupos
imidazoles. Posiblemente no sea un aminoácido.
J. Prueba de Biuret.
En esta reacción no se utilizó muestra problema, se tomó como referencia la prueba control. Según
la teoría la reacción de Biuret detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos
con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Esta hecho de
hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con un tratado de sodio y potasio
(KNaC4h4O6-4H2O) en reactivo de color azul cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a
rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta el hidróxido de potasio no participa en la
reacción pero proporciona medio alcalino necesario para que tenga lugar.
En nuestra reacción se presentaron unas coloraciones azules oscuras intensas lo cual se puede
tomar como un resultado positivo. Esto debido a que el huevo contiene gran cantidad de cadenas
de aminoácidos, de péptidos y por ende de proteínas. En la figura 7 podemos observar el proceso
de esta reacción.
8. Cuestionario:
A. Consultar otras reacciones con las cuales se puedan identificar aminoácidos por la presencia de
grupos funcionales en el radical.
Rta:
B. Consultar las ecuaciones químicas de las reacciones que no aparecen en las guías:
Rta:
Sanger:
(Pinto. S/F)
Desaminación oxidativa: Su reacción química se da de la siguiente manera.
(Velazquez. S/F)
Sorensen: Reacción química.
(Pinto. S/F)
Base de Schiff:
Tomado de:
http://www.uib.cat/facultat/ciencies/prof/josefa.donoso/campus/modulos/modul
o4/modulo4_9.htm
Acido nitroso:
(Pinto. S/F)
Bromuro de cianógeno:
(Pinto. S/F)
Cloruro de Dansilo:
CO2:
(Pinto. S/F)
9. Conclusiones:
El huevo contiene gran cantidad de aminoácidos esenciales, es por ello que es considerado
uno de los alimentos más nutritivos para el organismo.
Existe gran cantidad de pruebas que permiten identificar aminoácidos dependiendo de sus
grupos funcionales en las cadenas laterales.
En nuestros resultados, el aminoácido con más resultados positivos fue la tirosina, esto
debido a que es el aminoácido más fácil de identificar.
10 Bibliografía:
http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_5.pdf