Ministerio del poder popular

para la Agricultura y Tierras

Instituto Nacional de Investigaciones

Agrícolas del Estado Lara

DESPISTAJE DE CANDIDATUS Liberibacter spp en

muestras de Cítricos

Barquisimeto 2017
Huanglongbing o Likubin (en chino: 黃龍病, pinyin: huánglóngbìng, literalmente
«enfermedad del Dragón amarillo» por la apariencia como quedan las plantas),
también conocida por el acrónimo HLB y también por el nombre inglés de Greening o
Ex-Greening, es una enfermedad provocada por bacterias del género Candidatus que
son Gram negativas y restringen el flujo floemático. Han sido reportadas 3 variantes:
"Candidatus Liberibacter asiaticus”, "Candidatus Liberibacter africanus" y "Candidatus
Liberibacter americanus". Principalmente su propagación: Diaphorina citri que
transmite las variantes asiática y americana de la enfermedad y Trioza erytreae que
transmite la africana. La enfermedad fue descrita por primera vez en China en 1943.
La enfermedad ha afectado seriamente a Taiwan desde 1951. La forma africana de la
enfermedad fue descrita por primera vez en 1947 en Sudáfrica, donde actualmente
está muy extendida. Afecta diversas especies de plantas del género Citrus entre los
más importantes están, limón, naranja y mandarina. (Chiou-Nan, 1998; Costa, 2005).

Síntomas

Los daños que producen son deformaciones en los brotes, coloraciones variadas en
los frutos y otros. La enfermedad reduce la producción y en casos avanzados puede
llegar a matar a los árboles. En los estados avanzados de la enfermedad pueden
observarse hojas de color amarillo pálido con áreas de color verde irregulares
(moteado) asimétricas, defoliación, engrosamiento y aclaración de las nervaduras,
asimetría y difusión de colores en las nervaduras y foliolos, hojas pequeñas, rectas
(Cohelo y Marques, 2002). A veces puede confundirse con deficiencias minerales
(zinc, hierro, magnesio, calcio y cobre) u otras enfermedades como la gomosis; se
afecta el desarrollo del sistema radicular; en el floema se observan lesiones
necróticas, acumulación de almidón y efecto sinergístico con otras enfermedades;
caída prematura de los frutos, deformación y asimetría de los mismos, reducción del
tamaño, aparición de manchas verde claras que contrastan con el verde normal del
fruto (coloración irregular). La deformación de los frutos aparece donde hay síntomas
en las hojas. La parte blanca de la cáscara (albedo) en algunos casos se presenta con
un espesor mayor de lo normal. En un corte longitudinal del fruto, se observa una
coloración amarilla anaranjada en los filamentos de la columela, tienen elevada acidez,
baja proporción de jugo y bajo contenido de azúcar, por lo que resultan no aptos para
el consumo (García, 2006. Infecciones muy severas, ocurre la muerte regresiva de la
planta (Coelho y Marques, 2002).

Diagnóstico

Actualmente son los métodos más usados:

Métodos basados en la detección del patógeno o en la producción de anticuerpos.

Métodos basados en los cambios histológicos producidos en el hospedante ante la

presencia de la enfermedad.
Epidemiología

El vector pica la planta y transmite la enfermedad. La bacteria circula por el floema y al

tapar los vasos floemáticos impide la circulación de los nutrientes. El periodo de
incubación de la enfermedad es de aproximadamente seis meses (García, 2006).

Procesamiento de las muestras

Metodología utilizada.

Descripción de la sintomatología:

Se describieron los síntomas empezando por la coloración y forma de las hojas,

seguido de los frutos, los cuales fueron disectados transversal y longitudinalmente y se
observó la estructura interna, la disposición y forma de las semillas.

Cortes histológicos para observar el desarrollo del floema:

Se realizaron cortes transversales a mano alzada a nivel de la nervadura central de

las hojas con síntomas característicos. Para ello, las hojas fueron rehidratadas en
agua hasta alcanzar turgidez. Los cortes fueron realizados con hojillas planas y los
mismos fueron colocados en agua hasta alcanzar 20 cortes por hoja, posteriormente
se seleccionaron 6 cortes y fueron montados en láminas portaobjetos con una
solución de lactofenol y cubiertos con láminas cubreobjetos. Inmediatamente fueron
observados al microscopio óptico con aumentos de 100 y 40x. Se observó el
desarrollo del floema y se comparó con imágenes referenciadas y un testigo negativo
que consistió de una planta de naranja dulce asintomática aparentemente sana
proveniente del estado Lara de un sector donde no se han reportado los insectos
vectores.
Tinción de almidones con una solución de iodo-ioduro de potasio:

De la misma forma descrita anteriormente las hojas se rehidrataron y se realizaron

cortes tranversales de la lámina foliar y se tiñó con yodo-yoduro de potasio durante 15
min (Curtis-Patiño, 1986) y se observó en un microscopio compuesto (Carl Zeiss). En
cada imagen se identificó el área de tejido parenquimatoso con reacción positiva al
lugol y se compararon con imágenes referenciadas por consideradas como positivas y
con cortes transversales de lámina foliar de hojas de una planta de naranja dulce
asintomática aparentemente sana proveniente del estado Lara de un sector donde no
se han reportado los insectos vectores. Como testigo sobrepositivo de la tinción se
usaron cortes transversales de papa que se conoce por poseer altísimas cantidades
de almidón en sus tejidos.