Revista Internacional de Investigación de la Energía

En t. J. Res Energía. 2009; 33: 164-172

Publicado en línea el 9 de julio de 2008 Wiley InterScience
(www.interscience.wiley.com). DOI: 10.1002 / er.1432

La hidrólisis enzimática de los residuos de alimentos y fermentación de etanol

Hee Cheon Luna 1, Il Seok 1, Chan Kim Jong 1, Yoshihito Shirai 2, Dong Hoon Lee 3
Jung Kwon Kim 4, Oh Sung Chung 5, Du Hyun Kim 5, Kwang Keun Oh 6 Hijo y Young Cho 7, , y

1 Departamento de Investigación del Medio Ambiente, Gyeonggi-do Instituto de Salud y Medio Ambiente, Suwon 440-290, Corea
2 Departamento de funciones biológicas e Ingeniería, Facultad de Ciencias de la Vida y de Ingeniería de Sistemas,

Instituto de Tecnología de Kyushu, Kitakyushu 808-0196, Japón

3 Departamento de Ingeniería Ambiental de la Universidad de Seúl, Seúl 130-743, Corea
4 Departamento de Ingeniería Ambiental de la Universidad Dong-Eui, Busan 614-714, Corea
5 Industrial and Academic Cooperation Division, Korea Bio Polytechnic, Nonsan 320-905, Korea
6 Department of Bioprocess Technology, Korea Bio Polytechnic, Nonsan 320-905, Korea
7 National Institute of Crop Science, Rural Development Administration, Suwon 441-707, Korea

SUMMARY

Although food waste (FW) can serve as a valuable substrate containing large amounts of organic materials such as soluble sugar, starch, and cellulose, it is
recognized as an environmental pollutant, and the hydrolysis of solids in FW still serves as a rate-limiting step in its biological processes. To evaluate a new
potential application of FW as an alternative substrate for ethanol production through laboratory experiments, we investigated FW hydrolysis by using individual
commercial enzymes and their mixtures; batch ethanol fermentation by Saccharomyces cerevisiae; y el efecto de la sal, que es inherentemente incluido en FW,
sobre la fermentación del etanol. Una comparación de los rendimientos de glucosa del caldo de FW pretratado con amiloglucosidasa, carbohidrasa, y una
mezcla de ambas enzimas reveló que se obtuvo un rendimiento de glucosa más alto cuando se utilizó la mezcla de enzimas (0,46 gg 1 de FW seco) que cuando
se utilizaron amiloglucosidasa (0.41) o carbohidrasas (0,35) a las 3 h desde el inicio de la reacción. Un alto rendimiento de etanol (0,23 gg 1 FW de seco) se
obtuvo después de 15 h de fermentación por S. cerevisiae by using the FW broth hydrolyzed by the enzyme mixture and was estimated to be nearly equivalent
to the ethanol yields of lignocellulose biomasses. With regard to the effect of salt on ethanol fermentation, no alteration in the fermentation parameters was
observed up to a salt content of 3%w/v. At a salt content of over 4%, however, substrate uptake and cell growth dramatically decreased, and a slight reduction in
ethanol yield was observed. FW utilization for ethanol production by enzymatic hydrolysis and ethanol fermentation by S. cerevisiae suggests a promising
practical approach to prevent environmental pollution and obtain a product of high value, ethanol. Copyright r 2008 John Wiley & Sons, Ltd.

KEY WORDS: food waste; enzyme; hydrolysis; ethanol fermentation; salt effect

1. INTRODUCTION and motor-fuel industries, and its important role in reduction of

greenhouse gas emissions. However, most of ethanol production is
The global demand for ethanol has been increasing in recent years fermented using hexose sugars present in cane syrup and
because of its wide use in chemical

* Correspondence to: Y. S. Cho, National Institute of Crop Science, Rural Development Administration, Suwon 441-707, Korea.
y E-mail: ycho@rda.go.kr

Received 20 September 2007

Copyright r 2008 John Wiley & Sons, Ltd. Accepted 27 December 2007
 ENZIMATICO hidrólisis de desperdicios de alimentos y la fermentación del etanol
corn, which results in driving up the crop price [1]. Therefore, it is
essential to research alternative and inexpensive substrate for
ethanol production at a reduced cost.
Los residuos de alimentos (FW) dado de casas, restaurantes, y se
niegan a partir de las cuentas de la industria de alimentos para
aproximadamente el 23% de los residuos sólidos municipales (TSM) en
Corea; en 2004, se generaron aproximadamente 11.400 toneladas de
FW por día [2]. FW se descompone fácilmente, genera olor y algunas
veces causa la enfermedad en condiciones naturales debido a su alto
contenido de compuestos orgánicos biodegradables y humedad
(75-85%). TSM, incluyendo FW, suelen ser incinerados o fi tierra llena,
pero estos procesos generan muchos problemas. instalaciones de
incineración pueden ser dañados por las fluctuaciones de temperatura
cuando FW con alto contenido de agua se quema en un proceso
semicontinuo. Además, el espacio de tierra fi ll es limitada, y la
fermentación controlada de desechos orgánicos en tierra fi ll provoca
emisión de gases de efecto invernadero, tales como metano y dióxido
de carbono [3]. El principal método de reciclado convencional para FW
ha sido emplear como alimento para animales y fertilizante. Sin
embargo, es difícil de reciclar fi ef FW suficientemente debido a la
incertidumbre con respecto a la seguridad de su utilización como
alimento para animales y una disminución en su demanda como un
fertilizante debido a un alto contenido de sal resultante de la cultura
tradicional comida coreana. Por otra parte, la tierra fi ll directa de FW
prima fue prohibido por completo por el gobierno de Corea en 2005. Por
lo tanto,
eso es imprescindible para superar la
dilema tecnológico y sistemática de lo convencional
método de reciclaje para FW y
simultáneamente desarrollar un método de reciclaje con el medio
ambiente que puede convertir FW a un producto de alto valor tales
como bioetanol.
Por otro lado, FW se caracteriza por un alto contenido orgánico,
ya que contiene azúcares solubles, almidones, lípidos, proteínas,
celulosa, y otros compuestos que hacen que sea una fuente de
potenciales sustratos fermentativos. Con el objetivo de desarrollar
un nuevo sistema de reciclaje de FW, Wang et al. [ 4] realizado un
estudio sobre la preservación, desodorización, y supresión del
crecimiento de bacterias de putrefacción y-intoxicación alimentaria
por fermentación espontánea. Por otra parte, ha habido diversos
procesos biológicos que emplean FW como sustrato para la
producción
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165
of methane [5], hydrogen [6], lactic acid [7], and succinic acid [8]
and biorefinery technologies to develop the purification of lactic and
succinic acids
[7,9] from FW fermentation broth.
However, there are very few reports in the literature on the
utilization of FW for ethanol production.
However, the hydrolysis of solids in FW still serves as a
rate-limiting step in its application for biological processes.
Nakamura and Sawada [10] investigated the effect of steam
explosion on the physical and chemical changes
in artificial
household wastes. They reported that the
explosion treatment beyond a specified stream pressure enhances
the ethanol yield since the highly extractable components and low
viscosity of the exploded products provide a high contact frequency
of enzymes or cells with the substrate.
It was well known that NaCl affects ethanol fermentation by
decreasing the cell growth and substrate uptake of Saccharomyces
cerevisiae.
Trainotti and Stambuk [11] reported that
increasing the NaCl concentration significantly decreased the
growth of S. cerevisiae in glucose and maltose media, and that
particularly in case of maltose fermentation, the ethanol yield was
significantly low at 0.7M NaCl.
In the present study, the enzymatic hydrolysis of FW, batch
ethanol fermentation by S.
cerevisiae, and the effect of NaCl on each factor of ethanol
fermentation were examined to estimate the feasibility of using FW
as a substrate for ethanol production.
2. MATERIALS AND METHODS
2.1. Pretreatment of FW
El FW utilizado en el presente experimento se recogió de una
cafetería en Gyeonggi Pequeñas y Medianas Empresas (Suwon,
Corea) durante el verano. Se dividió en cuatro categorías:
hortalizas (51% (w / w FW húmedo)), granos (22%), pescado y
carne (10%), y frutas (17%), aproximadamente siguientes la
composición de Corea FW generada a partir de diversos tipos de
cocinas domésticas y comerciales. FW húmeda fue aplastado en
un mezclador de laboratorio (AM-11; ACE, Nissei, Japón) y
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166 HC LUNA ET AL.

Tabla I. Composición de los residuos de alimentos se utiliza en este estudio.

pH 4.2 Azúcares reductores (w % Dm) 17.6

Contenido de humedad (w%) 81.9 La proteína cruda (w % Dm) 21.1
Masa seca (w%) 18.1 lípido crudo (w % Dm) 8.3
Sal (w % Dm) 1.7 ber crudo fi (w % Dm) 14.9
almidón sólido (w % Dm) 30.1 Ash (w % Dm) 5.0

porcentaje en peso basado en la masa seca de los residuos de alimentos.

Tabla II. Características de cada enzima usada en este estudio.

características amiloglucosidasa carbohidrasa

Origen Aspergillus niger Aspergillus aculeatus

Nombre del producto Spirizyme s además FG Viscozyme s L
Actividad 400AGUg 1 100FBGUg 1
Aplicación y observaciones La hidrólisis de almidón Industria cervecera
La licuefacción de almidón tratamiento de agua de la fruta

La hidrólisis de los granos enzima degradante de la pared celular

Las unidades de las actividades enzimáticas de amiloglucosidasa y carbohidrasa que producen 1 metro mol de glucosa durante 1 minuto a partir de maltosa y
segundo- glucano, respectivamente.

tamizó a través de una malla de alambre (2 2 mm). Sus
características se dan en la Tabla I en detalle. El pH de la FW
recogido era muy baja, debido a una cantidad considerable de
acidificó o residuos de alimentos en adobo tales como kimchi y la
generación de ácidos grasos volátiles durante el almacenamiento.
La masa seca de FW contiene diversos tipos de materiales
orgánicos tales como almidón sólido (30.1w%), azúcar reductor
(17.6w%), proteína (21w%), fibra (14,9 w%), y sal (1.7W%).
2.2. Las enzimas
Se emplearon dos tipos de enzimas comerciales adquiridos de
Novozyme (Novozymes Corea, Seúl, Corea) para la hidrólisis
enzimática de la FW. Sus características se muestran en la Tabla
II. Amiloglucosidasa (EC 3.2.1.3) extraído de genéticamente modi fi
ed Aspergillus niger se utiliza comúnmente para la hidrólisis de
almidón. Carbohidrasa, un complejo multi-enzima que contiene
arabinasa, celulasa, segundo- glucanasa, hemicelulasa y xilanasa
extrae de A. aculeatus, se utiliza en la industria cervecera y para el
tratamiento de agua de la fruta y la degradación de la pared celular.
2.3. La hidrólisis enzimática de FW
Cien gramos de FW picada y 50 g de agua destilada se mezclaron
en un Erlenmeyer de 250 ml matraz. El pH se ajustó a 4,5 usando
NaOH 3N. Esta mezcla se usó como una muestra para la hidrólisis
enzimática de FW. En primer lugar, la hidrólisis de FW usando cada
enzima por separado se realizó en 50 1 C y 150 rpm durante 3 h en
un incubador con agitación (DSK 512; Daeil Ingeniería, Corea)
mediante la adición de diferentes volúmenes de dos enzimas
comerciales; para amiloglucosidasa, se utilizó el control de 0,0, 1,0,
2,0, 5,0, y 10,0 unidades de amiloglucosidasa (AGU) g 1 FW de
seca, y para carbohidrasa, control 0.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0, y 40.0
fúngica segundo- unidades glucanasa (FBGU) g 1 FW de seco.
En segundo lugar, basándose en el resultado de la actuación de la
hidrólisis catalizada por enzimas individuales,
2.0AGU de amiloglucosidasa y 20.0FBGU de carbohidrasas por 1 g
de FW seco se seleccionaron como las cantidades óptimas para la
mezcla de enzimas. hidrólisis FW usando esta mezcla de enzimas
se llevó a cabo bajo las mismas condiciones que las utilizadas para
la hidrólisis usando enzimas individuales. Todas

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experimentos se repitieron tres veces, y se evaluaron los valores
promedio. El rendimiento de la hidrólisis enzimática se evaluó
basándose en el rendimiento de glucosa ( Y G) ( gg 1 de seco FW); Y GRAMO
se calculó utilizando la ecuación (1), donde GRAMO indica la
concentración de glucosa:
Y GRAMO ¼ Ð GRAMO final GRAMO inicial Þ ð gramo Þ
sustrato re gramo Þ
2.4. La levadura y etanol fermentación
los S. cerevisiae cepa KCTC 7107 adquirido de KCTC (Korean
Collection for Type Cultures, Daejeon, Corea) se utilizó para las
fermentaciones de etanol. Stock cultivo se mantuvo en extracto de
levadura-peptona-dextrosa (YPD) cultivos inclinados de agar
(Difco), que contenían 1% de extracto de levadura, 2% de peptona,
y 2% de dextrosa y se almacenó a 4 1 cultura C. semilla se prepara
inoculando un bucle de cultivo madre a 30 ml de caldo YPD en un
100 ml Erlenmeyer matraz a 30 1 C en una incubadora estática
durante 24 h. El caldo FW hidrolizado por la mezcla de enzimas se
esterilizó a 121 1 C durante 15 min y luego se usa para la
fermentación de etanol por lotes. S. cerevisiae de suspensión (2% v
/ v; aproximadamente 1E 1 07 cellsmL 1) se inoculó en 150 ml de
caldo de FW en un Erlenmeyer de 250 ml matraz con un tapón de
goma; se incubó a 30 1 C a un pH inicial de 4,5 y con agitación
suave (100 rpm). La fermentación de etanol se estimó en base al
rendimiento de etanol ( Y E / S) ( gg 1 de FW seco) obtenido por la
Ecuación (2) [12]:
Y E = S ¼ El etanol producido re gramo Þ
sustrato re gramo Þ
El efecto de la sal sobre la fermentación del etanol se investigó usando
diferentes muestras FW que se prepararon mediante la adición de
cantidades variables de NaCl al caldo y el control FW, que contenía
originalmente aproximadamente 1,1% (w / v) de NaCl. El efecto de la sal
se estimó mediante la comparación de parámetros de la fermentación
tales como captación de sustrato, el crecimiento celular, y el rendimiento
de etanol de cada muestra FW bajo las mismas condiciones
experimentales como los utilizados en la fermentación de etanol
anteriormente.
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2.5. Análisis
Crude protein, lipid, and fiber contents were determined following
the methods of AOAC [13]. Suspended solids in minced FW were
washed twice with distilled water and filtered using a GFC filter. It
was pretreated continuously according to the method used by
Chandler et al.
re 1 Þ
[14], and the solid starch was determined by the phenol sulfuric acid
method [15]. Samples obtained from enzymatic hydrolysis and
ethanol fermentation were centrifuged at 4000 rpm for 5min and the
supernatant was filtered through a chromato-disc filter (pore size 5 0.45
m m); the reducing sugar was then analyzed by the
3,5dinitrosalicylic acid method [16]. The glucose concentration was
determined using a highperformance
liquid chromatography system
equipped with evaporative light-scattering detector (PL-ELS 2100;
England). A 75% acetonitrile buffer solution was used as the mobile
phase at an elution speed of 1.0mLmin 1 at 30 1 C. Ethanol
concentration was measured using a gas chromatography-flame
ionization detector (6890N system; Agilent Technologies,
Hewlett-Packard,
U.S.A.) equipped with an OPTIMA-624 column (50m 0.25mm 1.4 m m).
The temperatures of the injector and detector were maintained at
220 and 200 1 C, respectively, and the column oven was
isothermally operated at 50 1 C. Cell growth was measured using the
dilution and plating method. After thorough dispersion, a 1-mL
sample was serially diluted and plated (two plates per dilution) on
YPD agar plates to obtain colonyforming units (CFUs). The plates
were incubated at 30 1 C for 48 h, and the final colony count was
calculated as the average of the CFUs of the two plates for the
dilution containing 30–300 colonies per plate.
re 2 Þ
3. RESULTS AND DISCUSSION
3.1. FW hydrolysis by individual enzymes
FW normally consists of various polysaccharides,
i.e. starch and cellulose, produced from grains and vegetables,
respectively. A key factor in achieving high ethanol production is to
convert
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70.0 70.0

60.0 60.0

50.0 50.0

Glucose, Reducing sugar

Glucose, Reducing sugar

concentration (g/L)
concentration (g/L) 40.0 40.0

30.0 30.0

20.0 20.0

10.0 10.0

0.0 0.0
0 1.0 2.0 5,0 10,0 20,0 0 2,5 5,0 10,0 20,0 40,0 60,0 dosificación

Amyloglucosidase dosificación (AGU / g Carbohidrasas (residuos de alimentos FBGU /

(un) en seco de residuos de alimentos) (segundo) g en seco)

Figura 1. Pro fi le de la glucosa y la reducción de la concentración de azúcar en los productos obtenidos por hidrólisis de residuos de comida por la amiloglucosidasa (a) y
carbohidrasa (b) después de 3 h de incubación. Símbolos: Y, lo que reduce el azúcar; Y, glucosa. El bar
representa la desviación estándar ( norte 5 3).

polysaccharides into high monosaccharide content; patrón de ambos azúcares obtenidos utilizando carbohidrasas fue
monosaccharides are also fermentative sugars, e.g. glucose. We similar a la obtenida usando amiloglucosidasa. Aproximadamente el
used amyloglucosidase and carbohydrase for the hydrolysis of 44 y 63gL 1 de glucosa y azúcar reductor, respectivamente, fueron
starch and cellulose in FW, respectively. producidas a niveles de más de 20.0FBGUg 1 of dry FW. The
difference in the amount of extractable glucose generated from FW
La Figura 1 (a) y (b) muestra el contenido de glucosa y azúcar hydrolysis by amyloglucosidase and carbohydrase may be
reductor extraídos a partir del caldo FW hidrolizado por diversas attributed to the composition of FW, which contains a higher amount
unidades de amiloglucosidasa y carbohidrasa, respectivamente, of starch (30.1w% in dry FW) than of fiber (14.9w%), as given in
después de 3 h de incubación. En las muestras de control, en los Table I.
que no se añadió enzima, la cantidad de glucosa aumentó a
aproximadamente 4,0 gL 1 después de la reacción. Esto parece ser
el resultado de la hidrólisis parcial por el NaOH añadido para
ajustar el pH a 4,5. Una cantidad considerable de azúcar reductor
3.2. FW hydrolysis by enzyme mixture and glucose yield
inicial, es decir, aproximadamente 23 gL 1, se detectó en el control.
Esto indica que en sí FW contiene una cantidad significativa de
azúcar soluble en agua, es decir, disacáridos comparativamente de Based on the release of both sugars from the hydrolysis of FW
bajo peso molecular, oligosacáridos, etc., que se extrae de la FW catalyzed by individual enzymes,
picada (17.6w% en FW seco), como se da en la Tabla I. En caso de 2.0AGU de amiloglucosidasa y 20.0FBGU de carbohidrasa por 1 g
amiloglucosidasa, la concentración de glucosa y azúcar reductor de FW seco se seleccionaron y se empleó para el experimento de
notablemente aumentaron con el aumento en la actividad FW hidrólisis usando la mezcla de enzimas. La Figura 2 muestra un
enzimática hasta 2.0AGUg 1 esquema de la glucosa y la reducción de contenido de azúcar de
acuerdo con el transcurso de tiempo durante FW hidrólisis
catalizada por la mezcla de enzimas. La concentración de azúcares
aumentó dramáticamente hasta 2 h de incubación y alcanzó
valores casi constantes, de aproximadamente 58 y 71 gL 1,
valores casi constantes de secas FW y alcanzó de 52 y 61 gL 1, respectivamente,
en más de 2.0AGUg 1 FW de seco (Figura 1 (a)).
respectivamente, después de 3 h de incubación. Sobre la base de
Figura 1 (b) también indica que tanto los azúcares fueron puestos en estos resultados, se seleccionó el procedimiento que implica 3 h de
libertad en varias dosis de carbohidrasas. los incubación utilizando 2.0AGU de

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80.0
70
2,0x10 8

Glucose, reducing sugar and ethanol

60
70.0

50 1,5x10 8

60.0
Glucose, Reducing sugar contentration (g/L)

Cells/mL
40

concentration (g/L)
1.0x10 8
30
50.0

20
5.0x10 7
40.0
10

0 0.0
30.0
0 5 10 15 20
Tiempo (h)

20.0
Figura 4. El etanol fermentación de residuos de alimentos hidrolizado por la
mezcla de enzimas. Símbolos: Y, reduciendo
10.0
azúcar; Y, la glucosa; J, UFC; , Etanol.

0.0
0 1 2 3 4 5 6 La Figura 3 presenta los rendimientos de glucosa evaluados de
Tiempo (h) la hidrólisis FW por 2.0AGU de amiloglucosidasa, 20.0FBGU de
Figura 2. La glucosa y la reducción de la concentración de azúcar en los carbohidrasa, y la mezcla de enzimas que contiene 2.0AGU y
productos obtenidos de la hidrólisis de residuos de alimentos por la mezcla de 20FBGU después de una reacción de 3 h bajo el mismo
enzimas (amiloglucosidasa, 2.0AGU y carbohidrasa, 20,0 FBGU por gramo de experimental
residuos de alimentos en seco) de acuerdo con la evolución en el tiempo.
condiciones. El rendimiento de glucosa
Símbolos: Y, lo que reduce el azúcar; Y, glucosa. La barra representa
(0,46 gg 1 FW de seco) obtenido usando la mezcla de enzimas fue
desviación estándar ( norte 5 3). significativamente más alto que los obtenidos utilizando
amiloglucosidasa y carbohidrasa (0,41 y 0,35 gg 1 de peso en seco
0.50 de FW, respectivamente).
0.45

0.40

3.3. la fermentación del etanol y el potencial de rendimiento de etanol de FW

Glucose yield (g/g of dry food waste)

0.35

0.30

0.25 Lotes etanol fermentación utilizando S. cerevisiae se llevó a cabo

0.20 durante 24 horas utilizando el caldo FW tratado por la mezcla de

0.15
enzimas. Los cambios en el crecimiento celular, el consumo de glucosa
y azúcar reductor, y el rendimiento de etanol de acuerdo con el curso de
0.10
tiempo eran completamente determinado como se ilustra en la figura
0.05

0.00 4. Después de unas pocas horas de fase de retardo, el crecimiento

amiloglucosidasa
Figura 3. rendimientos de glucosa obtenidos a partir de la hidrólisis por la
amiloglucosidasa, carbohidrasa, y la mezcla de enzimas (2.0AGU, 20.0FBGU, y
2.0AGU 1 20.0FBGU por gramo de residuos de alimentos secos,
respectivamente) después de 3 h de la reacción. La barra representa la
desviación estándar ( norte 5 3).
amiloglucosidasa y 20.0FBGU de carbohidrasa por 1 g de FW seco
como el más adecuado para la hidrólisis enzimática de la FW y lo
utilizaron en lo sucesivo como un pretratamiento antes de etanol
fermentación.
carbohidrasa amiloglucosidasa +
carbohidrasa celular de S. cerevisiae continuó hasta la fase exponencial y llegó a
la fase estacionaria
(2 10 8 CFUmL 1). Después de la fase estacionaria (que se supone a las
15h), se observó una ligera reducción en la densidad celular, lo que
indica agotamiento de los nutrientes en el caldo de fermentación. El
final de la fermentación se indicó por la asimilación rápida y el
consumo completo de la glucosa acompañado por un aumento
concomitante en el crecimiento celular después de 15h y el contenido
casi constante de azúcar reductor a partir de entonces. El mayor
rendimiento de etanol (en total

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170 H. C. MOON ET AL.

Tabla III. Comparación de los potenciales rendimientos de etanol, la temperatura de procesamiento, y la hidrólisis enzimática de los residuos de alimentos
y biomasas primas [17].

Temperatura ( 1 C) que se utiliza para el tratamiento previo /

Materia prima hidrólisis enzimática Las enzimas (tipo) potencial de etanol (gg 1)

Sacarosa y almidón

Melaza Ninguna Ninguna 0.32

Caña de azúcar Ninguna Ninguna 0.28
Maíz 130-160 / 52 amilasas 0.32
Trigo 130-160 / 52 amilasas 0.31
Arroz 130-160 / 52 amilasas 0.34
Centeno 130-160 / 52 amilasas 0.30
Cebada 130-160 / 52 amilasas 0.31
Patata 130-160 / 52 amilasas 0.24

lignocelulósico

El bagazo 190-210 / 50 celulasas 0.26

rastrojo de maíz 190-210 / 50 celulasas 0.25
Paja de trigo 190-210 / 50 celulasas 0.23
Álamo temblón 190-210 / 50 celulasas 0.26
Sauce 190-210 / 50 celulasas 0,19
Picea 190-210 / 50 celulasas 0.25

Desechos alimentarios Ninguno / 50 mezcla de enzimas y 0.23

Our results.
y The mixture of amyloglucosidase and carbohydrase.

contenido de etanol, 29,1 gL 1) was achieved at this time. Ethanol
yield is defined as the ratio of the amount of ethanol produced to the
amount of the mass of dry FW (according to Equation (2)); the
ethanol yield in this experiment was approximately 0.23g g 1 of dry
FW, which was slightly higher than that obtained by Nakamura and
Sawada [10]. They reported that an ethanol yield of 0.20g g 1 of dry
artificial household waste was obtained through simultaneous
saccharification and fermentation of artificial domestic household
waste pretreated by steam explosion.
The potential ethanol yield (0.23 g g 1 of dry FW) of FW is lower
than that (approximately
0.30g g 1 of dry starchy substrates) of starchy biomass, i.e. molasses,
sugar cane, corn, wheat, rice, rye, barley, and potato, but
comparable to those (approximately 0.23g g 1 sustratos
lignocelulósicos de seco) de biomasa de lignocelulosa, es decir,
bagazo, rastrojo de maíz, paja de trigo, álamo temblón, sauce, y el
abeto (Tabla III)
[17]. Dependiendo de
La tecnología empleada, biomasas con almidón y lignocelulosa
requieren más rigurosa física o
pretratamientos químicos antes a enzimático
reacción, es decir alta temperatura, tratamiento ácido, y / o alta
presión, con el fin de aumentar la sacchari fi cación e fi ciencia y
alcanzar un alto nivel de la fermentación del etanol [1]. Como se
muestra en la Tabla III, alta temperatura de cocción de varias
materias primas para la producción de bioetanol implica un alto
consumo de energía y da como resultado mayores costes de
producción de etanol. En este sentido, el uso de FW es más
ventajoso que el uso de almidón y biomasas de lignocelulosa ya que
se deriva principalmente de los restos de comidas normalmente
cocinados en cocinas; por lo tanto, no se requerirá ningún
tratamiento adicional de FW excepto para la hidrólisis enzimática.
Casi todo etanol combustible es producido por
fermentación de la glucosa de maíz o sacarosa desde el proceso de
conversión de biomasas lignocelulósicas en etanol requiere todavía alto
costo, lo que resulta en el aumento del precio de los cultivos. En este
sentido, la utilización de FW, residuos orgánicos, como materia prima
para los recursos de energía alternativa podría ser una estrategia
prometedora para
signi fi cativamente reductores etanol
costo de producción.

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 ENZYMATIC HYDROLYSIS OF FOOD WASTE AND ETHANOL FERMENTATION 171

Table IV. Effect of salt on ethanol fermentation of food waste by S. cerevisiae.

Salt (% w/v) Residual glucose (gL 1) Ethanol yield (%) CellsmL 1

Control y 0.0 0.47 2E 1 08

2 0.0 0.47 2E 1 08
3 8.8 0.47 1E 1 08
4 16.7 0.45 6E 1 07
5 30.7 0.41 4E 1 07
6 40.4 0.39 2E 1 07

Based on glucose consumption. All results were obtained for ethanol fermentation for 24 h by using a food-waste hydrolysate containing 58 gL 1 of initial glucose concentration.

y Control medium had a salt content of 1.1% that was originally present in food waste.

3.4. Effect of salt on ethanol fermentation of FW
The influence of NaCl on ethanol fermentation was investigated by
adding varying predetermined amounts of NaCl to the FW broth that
initially contained approximately 1.1%w/v of NaCl and 58 gL 1 of
glucose. The effect of salt on ethanol fermentation was evaluated
by comparing the amount of residual glucose, degree of cell growth,
and ethanol yield after 24 h of incubation. No alterations in the level
of glucose uptake, cell growth of S. cerevisiae, and ethanol yield
were observed up to salt content of 3%w/v. At salt content of more
than 4%w/v, however, the growth of S. cerevisiae se vio
gravemente inhibida y disminuido gradualmente; el consumo de
glucosa se redujo drásticamente, de acuerdo con el contenido de
sal en aumento. Por lo tanto, el contenido residual de glucosa a las
4, 5, y 6% de NaCl fue del 16,7, 30,7, y
40,4 gL 1, respectivamente. rendimiento de etanol reduce ligeramente,
como se muestra en la Tabla IV. Trainotti y Stambuk [11] también
reportaron que mientras que el estrés sal afectada drásticamente la tasa
de crecimiento específico fi y masa celular de S. cerevisiae, rendimiento
de etanol no era significativamente reducida en los medios peptona
extracto de levadura que contienen 2% w / v de glucosa a 0,7 o 1,4 M
NaCl. Hirasawa et al. [ 18] observado que cuando S. cerevisiae se expuso
a diferentes concentraciones de NaCl durante su crecimiento
exponencial, la tasa de crecimiento fi específica disminuyó radicalmente
con el contenido de sal en aumento. Estos hechos implican que aunque
la presencia de NaCl no afecta drásticamente el rendimiento de etanol,
inhibe el crecimiento celular y la captación de sustrato de modo que,
finalmente, se extiende el período de fermentación de etanol. Por lo
tanto, nuestra
resultados sugieren que cuando caldo FW contiene más de 4% w /
v de NaCl, se requiere dilución para lograr una mayor e fi ciencia de
fermentación de etanol.
4. CONCLUSIÓN
La hidrólisis enzimática de los residuos de alimentos (FW), la
fermentación de etanol por lotes, y los efectos de la sal en la
fermentación de etanol se investigaron experimentalmente para la
estimación de la viabilidad de utilizar FW como un sustrato alternativo
para la producción de etanol. Se obtuvieron los siguientes hallazgos.
The experiments on FW hydrolysis by individual enzymes
revealed that amyloglucosidase was more effective than
carbohydrase for producing glucose (52 and 44gL 1, respectively).
The hydrolysis performed by using 2.0AGU of amyloglucosidase
and 20.0FBGU of carbohydrase per gram of dry FW for 3 h of
incubation was found to be the most appropriate for FW hydrolysis
in view of producing large amounts of fermentable sugars, glucose
(58 gL 1) and reducing sugars (71 gL 1), and high glucose yield (0.46 g
g 1 of dry FW).
High ethanol content (29.1 gL 1) was obtained from batch ethanol
fermentation by S. cerevisiae
using the FW broth pretreated with the enzyme mixture; the ethanol
yield estimated based on the mass of dry FW corresponded to 0.23
g g 1 of dry FW. This value is lower than that of starchy biomass
(approximately 0.30 g g 1 of dry mass) but
is equivalent to that of lignocellulose
substrates (approximately 0.23 g g 1 of dry
mass). However, considering that starchy and

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lignocellulose feedstocks require further processing at high
temperatures prior to enzymatic reaction for ethanol production,
using FW would be more economical than using other biomasses
since no additional treatment except for the enzymatic hydrolysis is
required for FW.
The cell growth and substrate uptake of S.
cerevisiae were drastically hindered, and the ethanol yield slightly
decreased at an NaCl content of over 4%w/v. This result indicates
that when FW broth has a salt content of more than 4%w/v, it
should be appropriately diluted for efficient ethanol fermentation.
In conclusion, FWwas revealed to be a promising substrate for
ethanol production via enzymatic hydrolysis and batch ethanol
fermentation.
Moreover, the environmental benefits of employing FW as an
alternative energy resource for ethanol production could be
significant driving force encouraging expanded use of biomass for
energy production. The fundamental environmental reasons for
employing FW, as ethanol production will be global greenhouse gas
control and local or regional solid waste and water quality control. In
addition, recycling FW for ethanol production could be a beneficial
alternative to conventional incineration and landfill disposals of FW,
which generated second environmental problems such as toxic or
greenhouse gas emission, and underground-water contamination
by leachate, respectively.
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