MARCO TEÓRICO

Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por Fisión Binaria. Dicho proceso
consiste en la auto duplicación del ADN seguida de la división de citoplasma.

Basado en el concepto que una célula se divide dando dos células hijas, y éstas a su vez, se vuelven
a dividir dando dos más cada una, se puede modelar el crecimiento bacteriano como una curva de
tipo exponencial.

Las poblaciones microbianas raramente mantienen un crecimiento exponencial prolongado. Si ello

ocurriera en poco tiempo la tierra estaría tapada de una masa microbiana mayor que la de la tierra
misma. El crecimiento está normalmente limitado por el agotamiento de nutrientes o por la
acumulación de productos del mismo metabolismo microbiano, que les son tóxicos a la población.
La consecuencia es que el crecimiento al cabo de un cierto tiempo llega a disminuir hasta detenerse.
En la figura 1 se presenta la gráfica de una curva típica de crecimiento bacteriana en la que se
pueden distinguir 4 fases; 1) fase de latencia o de retardo 2) fase exponencial 3) fase estacionaria 4)
fase de muerte

En la fase de latencia existe un aparente

reposo en el que las células sintetizan las
enzimas necesarias para la actividad
metabólica que deben llevar adelante.
Cuando se hacen mediciones del número de
células en distintos tiempos dentro de esta
fase, el valor no cambia sustancialmente. En
cambio, interiormente las células trabajan
activamente adaptando el equipo
enzimático al medio de cultivo. La bacteria
se prepara para hacer uso de los nutrientes que este medio le aporta, por lo tanto, es la fase de
adaptación al medio, con aumento de la masa celular pero no del número de células. La edad del
inóculo va a influir en el tiempo de latencia en el medio fresco debido a la acumulación de materiales
tóxicos y a la falta de nutrientes esenciales dentro de la célula durante el crecimiento anterior. En
general, inóculos viejos alargan la fase de latencia.

Pasado este período, el cultivo entra en la denominada fase de crecimiento exponencial, donde la
velocidad de crecimiento es máxima. La velocidad de crecimiento que alcanza un cultivo, depende
del tipo de microorganismo que se trate y diversos factores ambientales como son la temperatura,
el pH, oxigenación, etc.

La velocidad de crecimiento comenzará a disminuir hasta hacerse nula cuando alcance la fase
estacionaria, ya que cambios en la composición y concentración de nutrientes entre el cultivo del
inóculo y el medio fresco pueden desencadenar el control y la regulación de la actividad enzimática.
Esta fase se presenta por agotamiento del suministro de algún nutriente esencial o por acumulación
de productos metabólicos que sean tóxicos. También puede ser por la disminución de la oxigenación
o cambios en las condiciones de pH del medio de cultivo (acidificación o alcalinización): En esta fase
se equilibran el número de células nuevas con el número de células que mueren. Por último, el
cultivo entra en la fase de muerte, en la que el número de células que mueren se va haciendo mayor.
Métodos de medición del crecimiento

El crecimiento se evalúa haciendo mediciones sucesivas en tiempos determinados de la población

en estudio. En cada momento se evalúa cual es la población en ese instante. Existen diversas formas
de evaluar una población bacteriana.

Conteo microscópico directo: Es una técnica común, rápida y barata que utiliza un equipamiento
fácilmente disponible en un laboratorio de microbiología, ya que consiste en contar con un
microscopio la cantidad de células presentes en un volumen determinado. Para estos recuentos se
utilizan generalmente cámaras de recuentos. Una de las mayores ventajas del recuento
microscópico es brindar información adicional sobre el tamaño y la morfología de los objetos
contados

Conteo de células viables: El método se basa en la consideración que el crecimiento implica el

aumento de los microorganismos capaces de formar colonias. Este método puede hacerse con
medios sólidos o líquidos. El método más frecuentemente empleado es el conteo en placas (medios
sólidos) formando colonias. Por lo tanto, se determinan por este método sólo las células
microbianas VIABLES en las condiciones de trabajo (nutrientes, atmósfera, temperatura). Para ello
se siembra una cantidad conocida de la suspensión bacteriana cuyo número se desea conocer. En
un medio sólido cada bacteria se multiplicará formando una colonia visible a simple vista que puede
ser contada. Como las colonias pueden originarse tanto de una célula como de un grupo de células,
se utiliza el término: UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (u.f.c.), y esto puede constituir una
desventaja ya que si dos bacterias no se separan darán una sola colonia, subestimando de esta
forma el número de microorganismos en la suspensión. Además, a los efectos de que todas las
células que queden en una placa tengan una adecuada disponibilidad de nutrientes, y que los
errores del método sean menores, se establece que las condiciones óptimas de conteo se dan
cuando desarrollan entre 30 y 300 colonias.

Medición de la densidad bacteriana: Es una técnica en la que se mide la masa de microorganismos

en una suspensión. Para ello se utiliza un espectrofotómetro y se mide la cantidad de luz que
atraviesa en una suspensión de microorganismos, en comparación con un blanco que es el medio
esterilizado y sin sembrar. Cuanto mayor es el número de células en suspensión, tanto menor es el
porcentaje de luz que atraviesa el medio.

Para diseñar un experimento en el cual se pueda obtener la curva de la cinética de crecimiento se

deben tener en cuenta dos partes, la primera consiste en la incubación del cultivo bacteriano en
diferentes tiempos, es decir a cada cultivo incubado le corresponden una cantidad de horas de
crecimiento. Posterior a esto se debe hacer un recuento de células, el cual se puede conseguir
creciendo una cantidad de volumen específico de los cultivos obtenidos en la primera parte, para
así obtener el número unidades formadoras de colonias por volumen en un tiempo de específico de
incubación. Para tener valores más confiables y exactos se deben hacer diferentes diluciones de
cada muestra y así debe disminuir el número de UFC obtenidas proporcionalmente al factor de
dilución, además al contar las colonias formadas en algunos tiempos se puede obtener confluencia,
debido a que el crecimiento de de una colonia se efectuó muy cerca de otra célula por lo que se
pueden confundir visualmente y generar errores en el conteo, consecuentemente gracias a la
dilución de la muestra se puede realizar un mejor conteo.
Resultados y Analisis

Tiempo 7
Dilución -6 (1/1e6) Dilución -7 (1/1e7) Dilución -8 (1/1e8)

Imagen 7. Resultados curva de crecimiento Tiempo 7

Grupo Tiempo Dilución Conteo Dilución Conteo Dilución Conteo

Mayor a Mayor a
11 0 -1 300 -2 300 -3 53
Mayor a
1 1 -1 300 -2 29 -3 42
Mayor a
2 2 -2 300 -3 182 -4 32
3 3 -3 29 -4 2 -5 0
Mayor a
4 4 -4 300 -5 52 -6 3
5 5 -5 53 -6 8 -7 2
6 6 -6 4 -7 3 -8 1
mayor a mayor a mayor a
7 7 -6 300 -7 300 -8 300
8 8 -6 4 -7 1 -8 0
9 9 -6 6 -7 1 -8 0
10 10 -6 135 -7 11 -8 0
11 24 -6 202 -7 9 -8 4
Tabla 1. Resultados curva de crecimiento para todos los grupos
 Tiempo
(horas) Dilucion Conteo
ufc/ml
0 -3 53 53000
1 -3 42 42000
2 -4 32 320000
4 -6 3 3000000
5 -7 2 20000000
6 -8 3 30000000
8 -7 1 10000000
9 -7 1 10000000
Tabla 3. Tiempo y diluciones seleccionados para realizar la curva de crecimiento

Curva de Crecimiento E.coli

4.E+07
3.E+07
3.E+07
ufc/ml

2.E+07
2.E+07
1.E+07
5.E+06
4.E+04
0 1 2 4 5 6 8
Horas

Grafica 1. Curva de Crecimiento E.coli

Linealizacion Fase exponencial

19

18

17
Ln(ufc/ml)

16

15 y = 1.5519x + 11.525
R² = 0.93
14

13

12
2 4 5 6
Horas

Grafica 1. Linealizacion fase exponencial curva de Crecimiento E.coli

 Escherichia coli
pH 3 pH 5 pH 7 pH 9

Tabla 4. Crecimiento E.coli en varios pH

En la tabla 2 se logra evidenciar crecimiento de la bacteria E.coli para pHs 7 y 9, seleccionando al ph

7 como el más óptimo dentro de los 4 evaluados, dicha selección se basó en el crecimiento de
biomasa reflejado en la turbidez de la solución observada a ojo humano. Los resultados encontrados
concuerdan medianamente con lo reportados en literatura, dado que el crecimiento de E.coli va
desde ph 4,4 a 10 , por lo que se esperaría crecimiento también a ph 5. El ph optimo reportado
oscila de 6-7, de manera que experimentalmente se halló un resultado acorde.

Enterococcus Faecalis

pH 3 pH 5 pH 7 pH 9

Tabla 4. Crecimiento Enterococcus Faecalis en varios pH

Por su parte en la Tabla 4 se presentan los resultados de crecimiento en los 4 distintos pH para la
bacteria Enterococcus Faecalis. En base a estos se permite establecer la capacidad de crecimiento
de la bacteria a ph superiores a 3 hasta 9, siendo también el de ph 7 el óptimo experimental como
en el caso del E.coli. La literatura reporta a este microorganismo altamente resistente a pHs
bastantes alcalino, logrando crecimiento hasta valores de 9,6 por lo que la información experimental
está dentro de los rangos establecidos. El pH optimo en literatura es igualmente de 7
 LEVADURA
pH 3 pH 5 pH 7 pH 9

Analisis de Resultados

Escherichia coli a 37 °C se puede dividir una vez cada 20 minutos; repitiendo este proceso durante
11 horas se obtiene una colonia con casi diez mil millones de individuos. Si hubiera nutrientes
suficientes en dos días la masa de esta colonia excedería la masa de la Tierra.

BLIBIOGRAFIA

http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento84/3.Ecoli.pdf

file:///C:/Users/Usuario/Downloads/LevaduraS.cerevisiaeylaproduccindealcohol.pdf

https://aapt.scitation.org/doi/10.1119/1.348327

https://s3.amazonaws.com/academia.edu.documents/43169930/MorfologiayEstructuraBacterian
a.pdf?AWSAccessKeyId=AKIAIWOWYYGZ2Y53UL3A&Expires=1550433674&Signature=y50U76k8Ps
B0MvZ0vdjZAyF6mqk%3D&response-content-
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