Práctica 1: Extracción de ADN y visualización del ADN

ZÚÑIGA CUELLAR, Daniela; BARANDICA GARCÍA, Diana

Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Laboratorio de Bioquímica.
Santiago de Cali, Colombia, Agosto 21 del 2018

RESUMEN: Se realizó la extracción de ADN a partir de células humanas de la mucosa bucal, a 2.5ml de la muestra de mucosa bucal
se le adiciono 2.5 ml de SDS y adicional a eso se le agregó 50µL NaCl 5M y 10 ml de etanol al 96% para visualizar y separar las
hebras de ADN, con una punta de micropipeta se transfirio el ADN en un tubo eppendorf y este se secó a 55 grados durante 10
minutos. Al botón se le adiciono 1 ml de buffer. Se extrae 5µL de la solución y se pasa a un pozo en la caja de petri que contiene
agarosa al 1%.El resto de la solución se llevó al espectrofotómetro para la medición de la absorción de luz por la muestra, este valor
junto con la longitud de onda utilizada, miden la concentración de ADN presente en la muestra. Se concluyó que la concentración
obtenida en la muestra fue de 0….. y que posiblemente se incurrió en algún error debido a que en el pozo en la caja de petri no se
observó ninguna banda.

1. INTRODUCCIÓN Cuando se produce la neutralización de la

Una titulación o valoración es el estudio
cuantitativo de las reacciones de neutralización
ácido-base. Se realiza adicionando una disolución
con una concentración conocida (sustancia
titulante) a otra con concentración desconocida
(sustancia a titular) hasta que ambas disoluciones
reaccionan por completo, con el fin de hallar la
concentración desconocida de manera precisa. Al
momento de realizar titulaciones se requiere de un
montaje específico como el que se muestra en la
figura 1. Este montaje consta de un erlenmeyer,
que contiene la sustancia a titular, y de una bureta
que tiene en su interior el agente titulante.
Bureta graduada
Agente titulante
Sustancia a titular
Erlenmeyer
Indicador acido-base
Figura 1.
sustancia que contiene el erlenmeyer se alcanza el
punto de equivalencia, es decir, el punto en donde
se añadieron tantos equivalentes o moles de base
como de ácido a la disolución que se está
titulando. Este punto es teórico, por ello el punto
que se calcula experimentalmente se conoce como
punto final de una valoración o titulación.
Para determinar el punto final de una titulación, se
usa un indicador acido-base o indicador de pH,
que es una sustancia orgánica, la cual exhibe
coloraciones diferentes en su forma ionizada y no
ionizada. Estas variaciones de color se relacionan
directamente con el pH de la disolución en la que
se disuelve el indicador. El punto final de una
valoración se consigue cuando el indicador
cambia de color, cuando esto ocurre es importante
registrar el volumen consumido de agente
titulante.
Las titulaciones tienen diversas aplicaciones, ya
que arrojan datos muy exactos que se utilizan en
investigación y determinación de pureza de
sustancias que son usadas en la industria de
producción en masa de textiles, fármacos y
alimentos.
Durante esta práctica se valoraron tres
disoluciones, la primera de HCl con NaOH 0.100 De la ecuación 2 se despejo la normalidad de HCl
N, la segunda de H2SO4 con NaOH 0.100 N y la (𝐻𝐻𝐻𝐻 ), que es una unidad de concentración muy
tercera de CH3OOH disuelto en vinagre con utilizada en reacciones acido-base, sus unidades
NaOH 0.250 M; para ello se utilizó la fenolftaleína son eq/ L.
(C20H14O4) como indicador pH, pues esta se 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻
mantiene incolora en medio ácido y se torna de 𝐻𝐻𝐻𝐻 = (3)
𝐻𝐻𝐻𝐻
color rosado intenso en medio básico. Se evaluó el Se obtuvo la concentración de la disolución de
éxito de las titulaciones y las posibles fuentes de HCl aplicando la ecuación 3, así:
error de valoración. 6.5 𝐻𝐻 ×0.100𝐻
𝐻𝐻𝐻𝐻 = (4)
5𝐻𝐻
2. RESULTADOS Y CALCULOS
Para realizar la valoración de los tres ácidos
anteriormente mencionados fue necesario: realizar 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 0.13 (4.1)
el montaje de la figura 1, hacer uso de la pipeta
aforada para medir las alícuotas de cada ácido y Tabla 1. Datos obtenidos de la valoración de HCl
purgar la bureta graduada y la pipeta aforada cada con NaOH 0.100 N
vez que se fuera a valorar un ácido diferente. Resultad
Parámetro
o
Procedimiento 1: Valoración de disolución de HCl Volumen de HCl (ml) 5
con NaOH 0.100 N Volumen inicial de NaOH 0.100 N(ml) 25
Se realizó la valoración de una disolución de HCl, Gotas de fenolftaleína (indicador) añadidas a la
3
un ácido fuerte monoprótico, para ello se empleó disolución
una disolución de NaOH 0.100 N como agente Color de la disolución después de añadir el
incolora
titulante. indicador
Volumen consumido de NaOH 0.100 N (ml) 6.5

A) Reacción química que se presenta en la
valoración de la disolución de HCl
La reacción acido-base que se presentó en la
valoración de este acido, se describe en la
siguiente ecuación:
𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) + 𝐻𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) → 𝐻𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) + 𝐻2 𝐻(𝐻)
(1)
B) Calculo de la concentración de la disolución de
HCl valorada
La disolución de NaOH 0.100 N produjo la
neutralización de HCl, por lo que en la disolución
hay igual número de equivalentes o moles de ácido
y base. Por ello:
𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 (2)
Donde:
𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻
𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 0.100 𝐻
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 0.100𝐻
Volumen final de NaOH 0.100 N (ml) 18.5
Rosado
Color de disolución después de la valoración
muy claro
Concentración de disolución HCl eq/L 0.13
Procedimiento 2: Valoración de disolución de
H2SO4con NaOH 0.100 N
Se realizó la valoración de una disolución de
H2SO4, un ácido fuerte diprótico, para ello se
empleó una disolución de NaOH 0.100 N como
agente titulante.
A) Reacción química que se presenta en la
valoración de la disolución de H2SO4
La reacción acido-base que se presentó en la
valoración de este acido, se describe en la
siguiente ecuación:
𝐻2 𝐻𝐻4 (𝐻𝐻) + 2𝐻𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) → 𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 (𝐻𝐻) +
2𝐻2 𝐻(𝐻) (5)
B) Calculo de la concentración de la disolución de
HCl valorada
La disolución de NaOH 0.100 N produjo la
neutralización de H2SO4, por lo que en la
disolución hay igual número de equivalentes o
moles de ácido y base. Por ello:
𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 (6)
Donde:
𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻2 𝐻𝐻4
𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻2 𝐻𝐻4
empleó una disolución de NaOH 0.250 M como
agente titulante.
A) Reacción química que se presenta en la
valoración de la disolución de CH3OOH
La reacción acido-base que se presenta en la
valoración de este acido, se describe en la
siguiente ecuación:
𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) + 𝐻𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) →
𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻(𝐻𝐻) + 𝐻2 𝐻(𝐻) (9)

𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 0.100 𝐻 B) Calculo de la masa de vinagre correspondiente

𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 0.100𝐻 a 5 ml (alícuota que se empleó para titular este
acido).
De la ecuación 6 se despejo la normalidad de Se calculó la masa de vinagre equivalente a 5 ml
𝐻2 𝐻𝐻4 (𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 ), que es una unidad de
de este, se empleó la densidad de este acido, así:
concentración muy utilizada en reacciones acido- 𝐻𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 5 𝐻𝐻
base, sus unidades son eq/ L.
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻
𝐻
𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 = (7) 𝜌𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 1.0056
𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 𝐻𝐻
Se obtuvo la concentración de la disolución de
𝐻2 𝐻𝐻4 aplicando la ecuación 7, así: 𝐻𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻
10.5 𝐻𝐻 ×0.100𝐻 𝜌𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻 = (10)
𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 = (8) 𝐻𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻
5𝐻𝐻

De la ecuación 10 que equivale a la densidad del

𝐻𝐻2 𝐻𝐻4 = 0.21 (8.1) vinagre, se despejo la masa (𝐻𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻𝐻 ),así:
Tabla 2. Datos obtenidos de la valoración de 𝐻𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻 × 𝐻𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻 (11)
𝐻2 𝐻𝐻4 con NaOH 0.100 N
Se obtuvo la masa de la disolución de CH3OOH
Parámetro Resultado aplicando la ecuación 11 así:
Volumen de 𝐻2 𝐻𝐻4 (ml) 𝐻
5 𝐻𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻𝐻 = 5 𝐻𝐻 × 1.0056 𝐻𝐻
(12)
Volumen inicial de NaOH 0.100 N(ml) 25 𝐻𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻𝐻 = 5.026 𝐻 (12.1)
Gotas de fenolftaleína (indicador) añadidas a la
3
disolución
Color de la disolución después de añadir el C) Calculo de la concentración de la disolución
indicador
incolora CH3OOH de valorada
Volumen consumido de NaOH 0.100 N (ml) 10.5 Se halló la concentración de la disolución de ácido
acético mediante un factor estequiométrico entre
Volumen final de NaOH 0.100 N (ml) 14.5
NaOH 0.250 M y las moles de CH3OOH, el factor
rosado
Color de disolución después de la valoración estequiométrico se hace basándose en la ecuación
muy claro
9, así:
Concentración de disolución 𝐻2 𝐻𝐻4 eq/L 0.21
Procedimiento 3: Valoración de disolución de 0.250𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 1𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻 1
1𝐻
× 0.0171 𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 ×
1𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻
×
5 × 10−3 𝐻 𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻
(13)
vinagre (CH3OOH) con NaOH 0.250 M = 0.855 𝐻𝐻3 𝐻𝐻𝐻𝐻

Se realizó la valoración de una disolución de

vinagre, un ácido débil monoprotico, para ello se
D)Calculo de las moles de NaOH 0.250 M
empleadas en la titulación del vinagre
Se obtuvo las moles de NaOH empleadas en la
titulación del vinagre utilizando un factor
estequiométrico, en donde:
M de NaOH= 0.250 M (14)
𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻 + 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 (15)
𝐻𝐻𝐻𝐻 = 5.0 × 10−3 + 0.0175 (15.1)
𝐻𝐻𝐻𝐻 = 0.0225 (15.2)
Se realizó el factor estequiométrico teniendo en
cuenta los datos anteriores, así:
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 ×
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 (16)
𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 0.250 × 0.0225 𝐻
𝐻 de pH, por lo tanto se requiere de una mayor
(16.1)
𝐻𝐻𝐻𝐻𝐻 𝐻𝐻𝐻𝐻 = 5.625 × 10−3 (16.2)
Tabla 3. Datos obtenidos de la valoración de
𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻 con NaOH 0.250 M
Parámetro
Peso del erlenmeyer de 125 ml vacío (g)
Volumen de 𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻 (ml)
Peso del erlenmeyer de 125 ml con 𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻
Masa de 𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻 correspondiente a 5 ml
de 𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻
Volumen inicial de NaOH 0.250 M (ml)
Gotas de fenolftaleína (indicador) añadidas a la
disolución
Color de la disolución después de añadir el
indicador
Volumen consumido de NaOH 0.250 M (ml)
Volumen final de NaOH 0.100 N (ml)
Color de disolución después de la valoración
Moles de NaOH empleadas en la valoración de
𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻
Concentración de disolución 𝐻𝐻3𝐻𝐻𝐻 mol/L
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
La titulación se fundamente gracias a las
relaciones proporcionales entre concentraciones y
volúmenes de las disoluciones, es un
procedimiento que requiere de una gran destreza
porque es muy sencillo cometer un equivocación.
Por ello la causa de error que es más probable es
traspasar el punto de equivalencia, esto se puede
conseguir gracias al exceso de una sola gota de
agente titulante. De igual manera se necesita de
precisión a la hora de medir las proporciones de
las soluciones que se van a utilizar, por ello se
utilizaron pipetas aforadas de 5ml para medir el
volumen de la sustancia a titular.
Para todos los casos, lo resultados arrojaron que
el volumen consumido de base, es directamente
proporcional a la concentración presente del ácido,
ya sea expresada en normalidad(N) o molaridad
(M). Entre más alta sea la concentración de un
ácido, su pH será más cercano a uno en la escala
concentración de base para poder neutralizar dicho
ácido.
Durante la primera valoración se utiliza un ácido
monoprótico que se disocia completamente
participando en reacciones irreversibles. Esta es
una reacción 1 a 1, tal como se muestra en la
ecuación 1, lo que quiere decir que cada mol de
Resultado
ácido clorhídrico reacciona con cada mol de
82.71 hidróxido de sodio presente, por esto y debido a
5 que el agente titulante es una base fuerte se espera
que el volumen empleado en el proceso no
87.73
discrepe en gran medida si el ácido tiene una
5.026 concentración parecida a la de la base, es decir, si
el ácido tiene una concentración similar a la de la
25 base, se espera que el volumen empleado de base
3 sea muy cercano al del ácido.
Tal análisis fue corroborado en la praxis. Del
incolora agente titulante, cuya concentración se conoce
(0.100N), se emplearon 6.5ml en la valoración. La
17.1
concentración difiere en tan solo 0.03N de la
7.9 concentración de la sustancia a titular, que es
rosado 0.130N. De igual manera las concentraciones
muy claro difieren en 1.5ml, pues se titularon 5ml. Tal como
5.625
se esperaba, al ser volúmenes similares, las
× 10−3
concentraciones eran similares. De igual manera
0.855 se evidencio la proporcionalidad dividiendo los
volúmenes entre sí, obteniendo un valor de 1.3, el
mismo valor que se obtiene al dividir las
concentraciones entre sí.
En el procedimiento con ácido sulfúrico, se espera
que si la concentración de este es similar a la del
hidróxido de sodio, entonces se consumirá
aproximadamente el doble de volumen de
hidróxido para titular los 5ml de ácido sulfúrico
debido a que es una relación 1 a 2 tal como se
muestra en la ecuación 5. Este ácido es diprótico,
por lo tanto sufre una disociación más que el ácido
clorhídrico y se necesitan el doble de moles de
hidróxido para poder neutralizarlo
Cuando se realizó la valoración se utilizaron
10.5ml de base, casi el doble del volumen del
ácido. Por lo tanto se esperaba que la
concentración del ácido se acercara a la de la base,
pero al realizar los cálculos se obtuvo que esa
concentración era de 0.21N, valor que duplicaba
lo esperado. Curiosamente, a pesar de no obtener
el resultado esperado se podía evidencia la
proporcionalidad. Si se divide 10.5ml entre 5ml se
obtiene un resultado de 2.1. El mismo resultado
que surge de la división de 0.21M entre 0.100M.
Esto puede ser producto de las dos disociaciones
que sufre en ácido sulfúrico y su pH, errores al
momento de traspasar los 5 ml del Beaker al
Erlenmeyer o errores producidos por una mala
purga y limpieza de los instrumentos de
laboratorio.
Al utilizar vinagre, se pretende titular al ácido
acético, uno de sus principales componentes. Este
es un ácido monoprótico débil, su pH es más
cercano a 7 y su relación es 1 a 1 con el hidróxido
de sodio tal como se muestre en la ecuación 9, por
lo tanto si su concentración es similar a la de la
base, se espera que se consuma un volumen
similar en la titulación.
En el procedimiento se consumió un volumen de
base de no más del triple que el del ácido. Por ello
se esperaba que la concentración fuera de
aproximadamente de 0.750M. Al realizar los
cálculos se obtuvo un valor de 0.855M. Una
diferencia de 0.105M mucho mayor de lo esperado
que al igual que en las ocasiones anteriores
evidenciaba proporcionalidad. Al dividir el
volumen consumido de hidróxido (17.1ml) con el
volumen del ácido (5ml) se obtiene un valor de
3.42. El mismo valor se obtiene de la división de
las concentraciones (0.855M entre 0.250M). Esto
puede deberse a la debilidad del ácido, en otras
palabras a su pH, a los mismos factores que
produjeron los resultados inesperados en la
titulación del ácido sulfúrico o adicionalmente a la
contaminación de los reactivos, pues es
indispensable que estos se encuentren
completamente limpios para poder realizar una
correcta experimentación.
5. CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFÍA
Fernández G., A. A., Falcón D., J. E., Del Toro G., G., & Pozo D., A.
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Ferreira-Dos Santos, G. A. CAMBIOS ASOCIADOS A
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PROTONES: ASPECTOS
EXPERIMENTALES. Didáctica de la Física y la Química
en los distintos niveles educativos, 93.